间充质基质细胞免疫抑制在体外如果他们是来自比从内膜异位病灶

文摘

子宫内膜异位症是一种炎症性疾病与免疫抑制M2巨噬细胞在骨盆腔的优势可以通过支持参与病理和免疫逃逸的异位病灶。间充质基质细胞(MSC)中发现异位病变,和MSC nonendometriosis来源诱导M2巨噬细胞。因此,MSC被假设在子宫内膜异位症的病理中发挥作用。目的是描述的功能表型MSC在异位和女性的子宫内膜异位内膜。基质细胞异位卵巢囊肿(ESC_囊肿)和子宫内膜(ESC_endo如果他们表现出MSC表型)检查。然后,ESC表型研究蛋白质和基因表达的免疫抑制和免疫刺激性分子。最后,ESC功能检查对单核细胞分化成巨噬细胞的影响。ESC_囊肿和ESC_endo表达了MSC标记,形成殖民地,分化为成骨细胞和脂肪细胞。表型,ESC_囊肿更多的免疫抑制,明显高于免疫抑制分子的表达。功能,ESC_囊肿诱导更多的纺锤状巨噬细胞,CD14和CD163表达显著升高,M2巨噬细胞的功能。结果表明,ESC_囊肿可能更比ESC免疫抑制吗_endo并可能促进免疫抑制M2巨噬细胞可能支持经济增长和减少异位病灶的免疫监视。

1。介绍

子宫内膜异位症是一种炎症性疾病,子宫内膜生长在异位网站,最常见的盆腔(1]。子宫内膜异位症的主要症状是慢性骨盆疼痛和不孕2]。虽然医疗和手术治疗,他们不是足够的异位病变和症状的复发是很常见的(3]。疾病发展背后的机制、进展和复发是不完全清楚。因此,有必要提高对子宫内膜异位症的病理。

桑普森的月经逆行是最被广泛接受的理论对异位子宫内膜病理生理学的理论(2),回流的月经月经期间碎片植入盆腔,引起子宫内膜异位症(4]。几乎所有的女性月经逆行,但只有大约10%发展这种疾病(5),这表明子宫内膜异位的多因子的发病机制与其他因素,如减少免疫监视作用在女性的盆腔子宫内膜异位和阀杆/基质细胞的参与2,6]。后者因素指的是干细胞理论,假定一个假定的阀杆/基质细胞群,如间充质基质细胞(MSC)是通过月经逆行回流到盆腔,然后产生异位病变(6]。

MSC是已知存在的多功能细胞在子宫内膜异位病变和(6]。他们吸引了太多的关注在过去十年里主要的调节免疫反应的能力(7]。因此,他们被认为是一个潜在的治疗炎性疾病如移植物抗宿主病、多发性硬化和1型糖尿病等(8]。此外,可以预见,MSC在异位病灶通过月经逆行。

高水平的促炎细胞因子,如干扰素-γ(IFN -γ)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)在女性的盆腔子宫内膜异位症(9]。此外,在月经周期的像内膜异位病变刺激增长,然后摆脱类固醇激素水平波动的而且促进炎症(2,10]。MSC可以感知和应对炎症微环境中(11- - - - - -13]。事实上,它已经表明,高水平的两极分化成一个炎症免疫抑制表型表达高水平的免疫抑制分子如吲哚胺2,3-dioxygenase 1 (IDO1),环氧酶2 (COX2),血红素加氧酶1 (HO-1)主要通过促进免疫抑制M2巨噬细胞(免疫抑制13]。相比之下,低水平的炎症已经提出极化成一种免疫刺激性表型表达高水平的促炎细胞因子和趋化因子,如白介素8和C-X-C主题趋化因子12 (CXCL12)导致immunostimulation通过免疫细胞招聘和促进免疫刺激性M1巨噬细胞(13]。研究表明,M2巨噬细胞未成熟树突状细胞,辅助T 2 (TH2)在异位病灶反应占主导地位14- - - - - -16]。此外,细胞毒性自然杀伤细胞、CD8 T细胞功能活动抑制和诱导调节性T细胞活动17- - - - - -19]。此外,MSC nonendometriosis来源已知促进这些过程(20.- - - - - -25)表明,MSC在异位病变可能是免疫抑制。

因此,本研究的目的是描述的功能表型MSC在异位内膜孤立的女性的子宫内膜异位。我们假设雄踞在异位病变导致免疫抑制MSC可能减少免疫监视和增长。基质细胞异位(ESC_囊肿)和正位的(ESC_endo如果他们表现出MSC特征)子宫内膜接受了检查。他们的表型被确定了的表达一些免疫抑制和免疫刺激性标记,最后,他们的单核细胞分化成巨噬细胞功能的影响。两种来源的基质细胞被发现是MSC,但ESC_囊肿显示更多的表型和功能免疫抑制特性。数据表明,ESC_囊肿可以促进免疫抑制M2巨噬细胞可能支持和减少异位病灶的immunosurveilance允许其增长。

2。材料和方法

2.1。人类组织样本

两种类型的组织收集:异位卵巢囊肿(异位子宫内膜)(i)和(ii)子宫内膜女性的子宫内膜异位内膜。异位卵巢囊肿和子宫内膜收集的女性年龄在31 - 42年(平均±标准差,36.3±5.8年, 进行腹腔镜手术的)确认或治疗子宫内膜异位。所有女性被组织学证实子宫内膜异位病理学家。只有一个女人接受激素治疗。此外,两个活检是增殖的阶段:一个是未知的和一个有闭经。通知从每个参与者获得了口头和书面同意,和伦理批准了在斯德哥尔摩地区伦理审查委员会(2013/1094-31/2)。

2.2。隔离从正位的和异位子宫内膜基质细胞

人类子宫内膜异位卵巢囊肿组织被消化和单个细胞悬液使用1毫克/毫升胶原酶I型(σ,密苏里州,美国)稀释在汉克的平衡盐溶液(英国生活技术,佩斯利)(子宫内膜异位组织90分钟和30分钟组织)在37°C用颤抖的每10分钟。组织消化被过滤到100年的两倍μm细胞过滤器(康宁,纽约,美国),并最终基质细胞是透过40μm细胞过滤器(康宁),未消化的组织和上皮细胞被删除的每个步骤。细胞悬液是洗两次磷酸盐(PBS)(生命技术),通过在500×g离心10分钟。最后,细胞颗粒resuspended完全生长介质包含杜尔贝科修改基本介质低葡萄糖(DMEM-LG)(技术)+ 10% MSC认证胎牛血清(FCS)(技术)+ 1%的抗生素和抗真菌的(技术)。可行的细胞数在1%伊红(默克公司,达姆施塔特,德国)和培养在4000个细胞/厘米²在组织培养瓶37°C公司为5%₂。两天之后,生长介质改变,此后每三到四天。confluency当细胞达到70 - 90%,他们用0.05%胰蛋白酶/ trypsinised EDTA(技术)和培养如上所述。在通道2,基质细胞冻存10%二甲亚砜(DMSO)(σ)完成生长介质。以确保我们使用纯的细胞,ESC_endo和ESC_囊肿在段落使用三到六,早些时候段落可能感染其他细胞类型。

2.3。使用流式细胞仪MSC描述

ESC_endo和ESC_囊肿与抗体染色CD73 PE (becton dickinson,新泽西,美国),CD90 PerCP Cy5 (BioLegend,加利福尼亚,美国),CD105 FITC (Ancell,明尼苏达州,美国),HLA类我PE(安捷伦,斯德哥尔摩,瑞典),HLA二类FITC(安捷伦),CD14 FITC(正)、CD45 APC (BioLegend)和CD31 APC (BioLegend)在室温下20分钟(RT)。然后,他们用PBS洗两次在500×g离心10分钟。最后,细胞在PBS resuspended 0.1%牛血清白蛋白(σ),分析了BD FACSCalibur(正)。无污点的控制被用来设置盖茨和电压。使用软件对数据分析Flow-Jo(树星公司,亚什兰,美国)。当细胞表达一个特定的标志的比例≥95%或≤5%,然后他们被称为积极或消极的标记,分别。

2.4。菌落成纤维细胞(CFU-F)

克隆形成ESC的效率_endo和ESC_囊肿细胞被播种的是评估使用CFU-F six-well板块在200细胞/优化密度在完成DMEM-LG生长介质。生长培养基是改变每4天。37°C和5%后21天文化有限公司₂,增长中被和细胞与PBS洗两次。细胞被固定和permeabilized 100%冷甲醇5分钟在RT与PBS洗细胞两次后,他们沾1%伊红在RT PBS 20分钟,然后用milliQ水冲洗两次,可视化在4 x放大一个奥林巴斯CKX41倒置显微镜(奥林巴斯、东京、日本)。殖民地的细胞聚集≥50细胞在整个井。

2.5。成骨分化

分化为成骨细胞、基质细胞的密度5×10³细胞/厘米²被播种在12-well盘子和培养37°C和5%的公司₂直到他们到达confluency 50 - 70%。去除生长培养基后,细胞与PBS洗两次,然后使用成骨细胞诱导分化成成骨细胞分化中包含完整的DMEM-LG 10 nM地塞米松(σ),10毫米β抗坏血酸甘油磷酸酯(σ),0.05毫米(σ)。程度天后文化,增长中被细胞然后用PBS洗两次,并与4%多聚甲醛固定(PFA)(σ)30分钟在RT,然后用PBS细胞被洗两次,沾2%茜素红S(σ)pH值4.1 - -4.3 10分钟RT与温和的旋转。洗后细胞与milliQ 5倍的水,然后用PBS 15分钟,他们可视化在奥林巴斯CKX41倒置显微镜下观察,然后图像捕获。为定量的钙盐染色茜素红S,茜素红S染料筛选了与10%氯化十六烷吡啶(CPC)(σ)milliQ水15分钟在RT温柔旋转。吸光度测量使用无限F200 PRO Tecan分光光度计(Tecan、Mannedorf、瑞士)在570海里。中国共产党作为一个空白的10%。

2.6。脂肪形成的分化

脂肪细胞的分化,基质细胞的密度2×10⁴细胞/厘米²被播种在12-well盘子和培养37°C和5%的公司₂直到他们confluency达到100%。删除后生长培养基,细胞与PBS洗两次,然后是向脂肪细胞分化诱导使用感应中包含DMEM完全生长介质的高葡萄糖(DMEM-HG)(生命技术),10% FCS, 1% / 1μ地塞米松,0.2毫米消炎痛(σ),0.5毫米3-isobutyl-1-methylxanthine(σ)和0.01毫克/毫升胰岛素(生命技术)。3天后,支持中包含DMEM-HG 10% FCS MSC, /一个1%,0.01毫克/毫升胰岛素添加1 - 3天。这种感应和支持介质循环重复了3次,然后7天的细胞培养介质的支持。分化后,细胞被洗两次与PBS和固定4% PFA 60分钟rt,然后,这些细胞被milliQ水清洗两次,和60%异丙醇(σ)添加了5分钟在rt,之后,这些细胞被沾油红O(σ)10分钟rt,最后,这些细胞被洗4次milliQ水,可视化在奥林巴斯CKX41倒置显微镜下观察,图像被抓获。定量的脂质空泡染色,油红O染色和100%异丙醇筛选了。吸光度测量使用无限F200 PRO Tecan分光光度计在492海里。100%异丙醇作为一个空白。

2.7。表型特征ESC的流式细胞术

IDO1的蛋白表达,COX2、HO-1 CXCL12由流式细胞术。ESC_endo和ESC_囊肿在培养1×10吗⁴细胞/厘米²直到~ 90% confluency,然后他们用0.05%胰蛋白酶/ EDTA收获。CXCL12,年底前5小时文化和收获,细胞治疗与高尔基体插头(正)。然后用4% PFA细胞被固定在RT 10分钟,洗两次与PBS和permeabilized使用0.1%皂苷(USB,白金汉郡,英国)15分钟沿细胞然后用PBS、沾油洗两次PE (Bio-Techne,明尼苏达州,美国),COX2 Alexa萤石488(细胞信号技术,麻萨诸塞州,美国),HO-1 APC(我们生物,麻萨诸塞州,美国),和CXCL12 Alexa萤石488(罗福斯生物制品,科罗拉多州,美国)在20分钟在黑暗中皂苷0.1% RT,之后,这些细胞被洗两次皂苷为0.1%,在PBS resuspended 0.1% BSA,然后运行在BD LSR Fortessa(正)。无污点的细胞用于设置盖茨和电压。使用软件Flow-Jo数据进行了分析。

2.8。ESC的表型特征定量聚合酶链反应(qPCR)

确定IDO1的基因表达,COX2 HO-1, CXCL12(基因表中列出1),qPCR执行。Beta-actin (β肌动蛋白)作为看家基因控制。正向和反向引物设计所指示的欧陆坊基因组学和使用根据制造商的指示。细胞以前存储在RNA晚些时候(美国马萨诸塞州ThermoFisher科学)−80°C被解冻,与同等容积的PBS稀释,在500×g离心10分钟,然后上层清液是小心地删除。由此产生的细胞球被用来分离总RNA使用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)根据制造商的指示。然后,RNA纯度和浓度测量使用nanodrop 2000 c分光光度计(ThermoFisher科学)。100 ng /μL RNA被用来合成cDNA使用高容量cDNA逆转录工具包(应用生物系统公司,维尔纽斯,立陶宛)根据制造商的指示。最后,基因表达量化使用快速SYBR绿色主人混合(应用生物系统公司)根据制造商的指示,和反应进行了一式三份qPCR CFX384实时系统C1000触摸热循环(Bio-Rad,斯德哥尔摩,瑞典)。然后,使用软件对数据分析排名经理(Bio-Rad)。管家基因的相对表达水平β肌动蛋白用于规范化目标基因表达和基因表达在ESC之间_endo和ESC_囊肿分析了使用比较Ct方法(∆∆Ct方法),用ESC吗_endo校准器。

2.9。孤立的人类单核细胞

外周血单核细胞(PBMCs)分离出淡黄色的外套从健康的捐赠者使用SepMate管(干细胞技术,剑桥,英国)和Lymphoprep梯度分离根据制造商的指示(Axis-Shield)。然后,单核细胞分离( 二)使用单核细胞隔离设备(Miltenyi生物技术,隆德,瑞典)和磁性细胞分离系统(Miltenyi生物技术)如前所述26]。PBMCs是磁标记的鸡尾酒biotin-conjugated CD3抗体,CD7, CD16, CD19、CD56、CD123, Glyocophorin antibiotin微。然后,没有单核细胞分离通过PBMCs通过列放置在一个磁性细胞分选机根据制造商的指示和消耗磁性标记细胞。孤立的单核细胞的纯度进行流式细胞仪使用anti-CD14单克隆抗体(正);被用于实验和样品纯度≥95%。

2.10。ESC的功能描述

当confluency ESC_endo和ESC_囊肿~ 70%,增长中被移除,PBS的细胞被洗两次,和新鲜的生长培养基添加。三天之后,条件培养液(CM)收集,离心机在500 g×10分钟去除细胞碎片,整除,冻结在−80°C。CM是用于后续实验(60%厘米和40%生长培养基如下所述)。没有人类单核细胞培养在罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)(技术)1640生长介质,10% FCS,谷酰胺1%,青霉素和链霉素1%,从ESC厘米_endo或ESC_囊肿从天0 7天。然后,图像与奥林巴斯收购CKX41倒置显微镜在20 x放大,和流式细胞术分析细胞收获。单核细胞与CD14 FITC染色(正),CD163 PE(正),和CD206 FITC (becton dickinson) 20分钟在rt,然后在黑暗中,这些细胞被洗两次在500×g与PBS离心10分钟,最后在PBS resuspended 0.1% BSA与BD FACSCalibur和分析。无污点的细胞用于设置盖茨和电压。使用软件Flow-Jo数据进行了分析。

2.11。统计分析

所有统计分析使用GraphPad棱镜6。数据是正态分布时,意味着与学生进行了分析t以及,当它不是正态分布,分析了中位数Mann-Whitney测试。所有的值显示为均值±标准差(SD)。在这项研究中,n是指生物复制的数量。结果被认为是具有统计学意义 。

3所示。结果

3.1。MSC存在异位和位置正常的子宫内膜组织

验证ESC_endo和ESC_囊肿MSC的表型,我们通过流式细胞仪检测细胞,化验CFU-F,分化为成骨细胞和脂肪细胞。ESC_endo和ESC_囊肿表达了MSC标记CD73 CD90、CD105和HLA类我,但没有表达non-MSC标记CD14、CD45、CD31、HLA二类(数字1(一)和1 (b))。ESC_endo和ESC_囊肿都能够形成菌落,尽管显著降低( )效率ESC_囊肿(数据2(一个)和2 (b))。此外,从两个来源基质细胞能够分化成成骨细胞和脂肪细胞显著( )比未经处理的控制( )(数据2 (c),2 (d),2 (e),2 (f))。总的来说,结果表明,ESC_endo和ESC_囊肿MSC。

3.2。ESC_囊肿有免疫抑制表型比ESC吗_endo

描述ESC_endo和ESC_囊肿表型、基因和蛋白质表达的免疫抑制酶IDO1, COX2、HO-1和促炎趋化因子CXCL12被流式细胞术和qPCR检查,分别。通过流式细胞术,ESC_囊肿表达了更高水平的IDO1、COX2和HO-1 ESC_endo。ESC的百分比表达这些免疫抑制酶的表达水平或平均荧光强度(MFI)阳性细胞明显高于( )ESC_囊肿ESC相比_endo(图3)。此外,基因表达分析的qPCR显示IDO1, COX2, HO-1表达显著高于( 在ESC)_囊肿ESC相比_endo(图3)。

流式细胞仪分析显示,ESC_囊肿更高水平的表达比ESC CXCL12_endo;基质细胞表达CXCL12和MFI的比例明显高于( )ESC_囊肿ESC相比_endo(图3)。然而,基因表达CXCL12显著降低( )ESC_囊肿ESC相比_endo由qPCR(图3)。

3.3。ESC_囊肿有免疫抑制作用比ESC吗_endo

对功能描述ESC_endo和ESC_囊肿,他们的影响在单核细胞分化成巨噬细胞检查。具体来说,单核细胞的形态学和CD14的蛋白表达,CD163, CD206检查后7天文化从ESC CM_endo和ESC_囊肿。形态学,ESC_囊肿诱导比ESC纺锤状巨噬细胞_endo(图4(一))。同时,巨噬细胞的百分比表达CD14和CD163和小额信贷机构在这些积极的巨噬细胞明显高于( )ESC_囊肿ESC相比_endo(图4 (b))。巨噬细胞的百分比表达CD206和这些积极的MFI巨噬细胞没有明显不同( ESC之间)_囊肿和ESC_endo(图4 (b))。

总的来说,结果表明,ESC_囊肿可能是免疫抑制功能比ESC吗_endo根据他们的能力产生更多的纺锤状M2巨噬细胞显著提高( )的表达水平CD14和CD163,特色的免疫抑制M2巨噬细胞(20.]。

4所示。讨论

目前,尚不清楚盆腔异位损伤如何逃避免疫监视,和盆腔免疫监视作用下降的原因是未知的。此外,内膜异位损伤MSC的表型和功能尚不完全清楚。内膜异位卵巢囊肿,ESC从显示MSC的所有特征。我们已经表明,ESC更免疫抑制表型如果异位卵巢囊肿位于内膜相比,他们直接单核细胞分化成巨噬细胞免疫抑制M2。综上所述,异位MSC可能有助于减少盆腔允许免疫逃避免疫监视的异位子宫内膜异位病变和支持他们的增长。

与之前的研究相一致,ESC_endo和ESC_囊肿独立女性的子宫内膜异位符合被分类的标准尽可能MSC显示成纤维细胞的形态、适当的表面标记物的表达,并分化为成骨细胞和脂肪细胞(27,28]。此外,如图所示,ESC_endo形成CFU-F比ESC在更大程度上_囊肿(29日]。这可能是因为ESC_囊肿生长在一个缺血性微环境在活的有机体内在盆腔,这可能影响他们的扩散,因此克隆形成能力。

已经提出免疫抑制MSC表达高水平的免疫抑制和低水平的免疫刺激性分子,分别。因此,我们研究了由ESC这类分子的表达_endo和ESC_囊肿。COX2蛋白和基因表达IDO1,并在ESC HO1明显更高_囊肿,这表明他们可能更多的免疫抑制表型。其他研究也得出类似结果,更高的基因表达的COX2和HO-1 ESC_囊肿和基质细胞异位组织腹膜ESC_endo(30.,31日]。与这些结果相比,两项研究报道,ESC_囊肿表达了类似的基因和蛋白质水平的IDO1 ESC_endo(32,33]。它也发现异位基质细胞可能更比ESC免疫刺激性_endo从健康对照组34]。然而,ESC_endo从健康对照组可能引入个人个体变异的免疫微环境和内分泌因素(34]。此外,目前还不清楚如果异位基质细胞异位组织腹膜或异位卵巢囊肿,这是两种不同类型的子宫内膜异位病变(34]。有趣的是,在一个不同的设计研究中,IDO1和COX2基因表达被发现在月经血液基质细胞与健康对照组相比,女性的子宫内膜异位与PBMCs[文化transwell系统后35]。后者研究相比,在此,我们使用如果ESC来反映在活的有机体内环境更紧密。如果ESC,我们下一个检查_囊肿不如ESC免疫刺激性表型吗_endo通过研究CXCL12的表达式。类似于以前的报告(36),我们发现蛋白表达的ESC CXCL12明显更高_囊肿ESC相比_endo,但与此相反,他们刺激雌激素和孕ESC (36]。然而,在ESC CXCL12的基因表达降低_囊肿。这种差异可能是由于转录后的和转译后的流程,从弱信使rna和蛋白质丰度之间的相关性描述之前(37]。蛋白质,而不是基因,给细胞功能,因此ESC_囊肿似乎比ESC免疫刺激性表型_endo(37]。CXCL12 C-X-C趋化因子受体的配体类型(CXCR) 4,并通过它,ESC_囊肿可能会进一步增加盆腔的炎症通过招募CXCR4-positive免疫细胞(38]。有趣的是,ESC_endo表达趋化因子受体CXCR4和因此可能招募CXCL12异位病变,也可能拥有在子宫内膜异位症多发地功能,如促进组织修复、血管生成、迁移、入侵,抑制细胞凋亡的1,38,39)、流程提出参与异位病灶的增长。ESC_囊肿可能更比ESC免疫刺激性表型_endo响应的波动水平的病理性盆腔炎症的发生。总之,这些结果暗示盆腔发炎可能诱导ESC_囊肿更让他们减少炎症和免疫抑制表型促进组织内稳态。

IDO1, COX2通过分泌前列腺素E2 (PGE2)和HO-1建议能够诱导免疫抑制M2巨噬细胞(13,40- - - - - -44]。有趣的是,子宫内膜异位是一种疾病与深刻的巨噬细胞参与,M2的优势在异位组织腹膜巨噬细胞,和异位卵巢囊肿建议在病理中发挥作用(14,45- - - - - -47]。因此,我们研究了ESC的影响_endo和ESC_囊肿在单核细胞分化成巨噬细胞。形态学,ESC_囊肿发现诱导比ESC纺锤状巨噬细胞吗_endo。此外,ESC_囊肿诱导显著增加巨噬细胞表达清道夫受体CD14和CD163 ESC_endo。CD14参与细胞凋亡的吸收,CD163参与haptoglobin-hemoglobin复合物的吸收,并都有至关重要的作用在清理的盆腔凋亡细胞和亚铁血红素积累的垂死的血红细胞,分别为(45,48]。高架CD163表达式被建议M2c的标志,M2亚型的巨噬细胞参与免疫抑制,矩阵沉积和组织重构(20.,49- - - - - -51]。因此,增加M2c水平可以解释广泛纤维化,内膜异位损伤发生在52]。巨噬细胞表达了类似的的清道夫受体水平治疗后CD206 ESC厘米_endo和ESC_囊肿。CD206参与灭活炎症信号和可能有一个核心作用在骨盆腔发炎45]。总之,这些数据表明,ESC_囊肿可能更多的免疫抑制功能ESC相比吗_endo。

两个先前的研究表明,异位基质细胞(53]或ESC_endo(47)极化人类巨噬细胞或U937单核细胞和脂多糖刺激到M2巨噬细胞,分别。在以前的研究中,巨噬细胞表达CD163和CD209及其胞内表达和细胞外转化生长因子的分泌1 (TGF -β1)和白细胞介素- 10”(il - 10)相比,增加巨噬细胞ESC对待_endo从健康对照组53]。然而,正如上面所讨论的,ESC_endo从健康对照组可能不是一个适当的控制,因为它可能会引入个人个体变异的免疫微环境和内分泌因素(53]。此外,目前还不清楚如果异位基质细胞异位组织腹膜或异位卵巢囊肿,这是两种不同类型的子宫内膜异位病变(53]。在后者中,有免疫抑制细胞因子il - 10的增加和减少costimulatory分子CD86的表达的M2巨噬细胞(47]。这些研究表明,通过IL-33 IDO1 [53由异位分泌基质细胞或ESC_endo派生fractalkine (FKN) [47),分别是驾驶M2巨噬细胞极化。此外,M2-polarized巨噬细胞显著增加ESC的可行性和扩散,减少细胞凋亡ESC (54),和增强ESC的侵袭性_endo(47),这表明他们可能支持在子宫内膜异位症异位病变的发展。与上述研究中,我们调查了ESC的影响_囊肿主要的能力如果人类单核细胞分化成巨噬细胞相比,ESC_endo。据我们所知,这是第一次,这已经完成。

有趣的是,如果ESC CM溶性因素_囊肿M2巨噬细胞诱导分化,表明ESC的刺激_囊肿单核细胞通过旁分泌机制和不需要直接接触。IDO1和HO1可以通过MSC分泌,分泌通过COX2 PGE2,可能参与了ESC_囊肿促进M2巨噬细胞分化[55,56]。已经提出M2巨噬细胞发挥作用,由识别最初的异位子宫内膜异位病变的病理伤口和启动“愈合”45]。伤口愈合性能的M2巨噬细胞可能是重要的在皮肤伤口;然而,他们可能在子宫内膜异位症(有害57]。此外,M2巨噬细胞分泌il - 10和TGF -β可能抑制其他免疫细胞减少导致盆腔免疫监视作用,因此保护异位病灶从免疫清除58]。因此,有人建议,重定向的M2巨噬细胞M1巨噬细胞可能是一个策略来刺激免疫反应对异位病变(45]。一个原理图说明我们提出的假设角色的异位MSC在子宫内膜异位症的发病机制如图5。

数量有限的捐赠者和激素治疗的存在并不影响的四个女人之间数据的一致性与子宫内膜异位症被研究。显著差异观察,可以作出有意义的结论。类似的患者数量已经被使用在其他的研究(35,59]。这里所列的基质细胞是如果和修改的,但讲究的,这可能会改变他们的功能表型。因此,它将会是很有趣的学习当地的基质细胞。然而,据我们所知,这是第一个在体外研究表明,ESC_囊肿可能比ESC免疫抑制特性吗_endo。这是一个重要的发现,将会提高我们的知识对子宫内膜异位症的发病机制和可能受益新疗法的发展。

5。结论

总之,免疫抑制异位MSC可能有助于减少盆腔免疫监视作用。这可能是部分通过M2巨噬细胞免疫抑制的影响,随后可能支持在子宫内膜异位症异位卵巢囊肿的生长。这一发现支持了逆行月经和干细胞理论通过添加一个免疫抑制异位MSC组件。最后,我们推测,减少异位MSC的免疫抑制效应促进M1巨噬细胞和T辅助1反应可能提供必要的immunostimulation消除盆腔异位病灶和潜在的治疗子宫内膜异位症。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

塞巴斯蒂安Fawaz Abomaray Gidlof,塞西莉亚Gotherstrom导致的想法和设计。Fawaz Abomaray导致了数据采集。塞巴斯蒂安Fawaz Abomaray Gidlof,塞西莉亚Gotherstrom导致了数据分析和解释。Fawaz Abomaray执行实验室化验。塞巴斯蒂安Fawaz Abomaray Gidlof,塞西莉亚Gotherstrom写批判性的纸和修订。所有作者阅读和批准了期末论文。

确认

作者感谢妇女诊所的医护人员及患者的卡罗琳斯卡大学医院在获得他们的帮助,捐赠子宫内膜异位卵巢囊肿和组织。本研究在阿卜杜拉国王国际医学研究中心的支持下,斯德哥尔摩郡议会,卡罗林斯卡医学院。

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