早期治疗对晚期,但不是,通道间充质干细胞对疼痛行为在骨关节炎的动物模型

文摘

背景。间充质干细胞(msc)治疗的潜在治疗骨关节炎(OA)联合病理和痛苦。本研究的目的是确定一段数的影响在msc对疼痛的影响行为和软骨和骨骼特性在OA的啮齿动物模型。方法。老鼠接受要么内侧半月板横断(MNX)或虚假的手术麻醉。老鼠收到内注入1.5×10的⁶后期通过msc贴上了10μg / ml SiMAG, 1.5×10⁶通道间充质干细胞,类固醇Kenalog后期(200μg / 20μL), 1.5×10⁶早期通过msc、或无血清媒体(SFM)。Sham-operated老鼠收到SFM关节内注射。疼痛行为量化直到天42 postmodel感应。磁共振成像(MRI)被用来本土化膝关节内标记细胞。结果。后期通过msc和Kenalog减毒建立疼痛MNX老鼠的行为,但没有改变MNX-induced联合病理研究结束的时期。早期通过msc加剧MNX-induced疼痛行为长达一个星期接受,没有关节病理改变。结论。我们的数据首次演示一段数的作用影响疗效的msc OA疼痛模型。

1。介绍

骨关节炎(OA)是最常见的关节疾病的成年人,和当前的患病率是12%人口> 60年,这将加剧未来20年(1,2]。虽然有争议,这是承认广泛的炎性通路和异化的因素导致OA的起始,既影响关节软骨、滑膜和骨(1]。疼痛是膝关节OA的第一个症状;它可以进步是连续的,减少运动和生活质量(1]。

OA疼痛的机制涉及结构性变化和改变外围转导和中央处理痛苦的感觉输入。目前治疗OA疼痛疗效[有限3),和全关节置换手术(TJR)是一种常见的结果(1]。TJR手术通常逆转中枢敏感化,表明疼痛的关节是基本的输出在推动中枢疼痛机制(4]。然而,手术不适合病人< 55岁(5),它仍然是至关重要的,人与OA疼痛依赖关节置换治疗是减少。

另一种方法是更有效的细胞疗法的发展限制联合病理和减少滑膜炎症,与OA疼痛显著相关(6]。

间充质干细胞(msc)有可能作为治疗OA (7- - - - - -10]。msc容易分化为骨、软骨、脂肪细胞并释放可溶性因子(如生长因子和趋化因子),港口再生环境通过各种机制(9,11]。动物模型模拟病理和痛苦组件OA被广泛使用的12- - - - - -14];内注入大鼠骨骨髓来源的msc可以减轻疼痛的行为没有影响的共同病理OA的碘乙酸味精模型大鼠(15),重大chondroprotective和OA的鼠手术模型中的抗炎作用,但疼痛不是评估(16]。同样,当地的成人msc与半月板组织的再生和减少关节破坏在OA的山羊的模型(17]。通道数量从4个增加至9个人类脂肪中提取成人干细胞增加chondrogenic潜在的细胞(18];这是否转化为效益的改善在活的有机体内尚未解决。

细胞疗法的治疗潜力最大化治疗OA的痛苦需要进一步的理解条件的潜在疗效最大化msc、和他们的网站和行动机制的知识,这需要监测移植细胞在关节。本研究的目的是比较早期和晚期通过msc对疼痛的影响行为,膝关节结构性变化,循环的肿瘤坏死因子-α(TNF水平α)和白介素10 (il - 10)在手术模型OA的老鼠。跟踪和成像的msc在联合通过使用磁共振成像(MRI)的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPION)内化msc在研究组织的一个子集。

2。材料和方法

2.1。细胞分离、扩张和描述

早期通过小鼠骨髓msc (P3)隔绝Balb / c小鼠,和后期通过细胞(P9)隔绝C57Bl / 6小鼠如前所述[19]。两组细胞被完全描述膜受体的表达CD31, CD44, CD11b、CD45、CD105,和Ly-6A(本来)PE、三个谱系分化,纤维母细胞克隆形成单位化验(CFU-F)(见补充信息)。

2.2。磁性纳米颗粒(基于)标签

msc与SiMAG标签(1000海里;粒子大小)(Chemicell,德国)。这些都是商用和基于磁赤铁矿铁氧化物组成的核心(Fe₂O₃与终端)和一个普通的硅表面带负电荷的硅醇组。细胞被标记使用被动孵化方法描述·马凯兹et al。20.]。总之,基于在无血清悬浮CIM(细胞隔离媒体)和直接添加细胞文化。24小时的潜伏期后,细胞被洗了三次与磷酸缓冲盐(PBS)删除noninternalised和基于。

2.3。CellTracker™CM-DiI荧光染料标记

1毫克/毫升原液的红色荧光CellTracker CM-DiI(英国分子探针)制备二甲亚砜(DMSO)。msc使胰蛋白酶化,用PBS和孵化CM-DiI (2.5μl股票每1毫升的PBS) 5分钟37°C,然后额外的15分钟4°C,在黑暗中。

非公司染料是300年然后被离心分离5分钟和2在PBS耐洗。采用无血清细胞resuspended IMDM (Iscove修改杜尔贝科的介质)和维持在4°,直到注入。

2.4。MSC-Conditioned媒介研究

用于细胞条件培养基研究以前隔绝C57Bl / 6和Balb / c小鼠和扩展在体外。对测试条件培养基制备使用小鼠骨骨髓来源在P3和P10 MSC。使用无血清条件培养基制备IMDM (SF-IMDM) (GIBCO,生活技术)没有补充添加如前所述[21]。简单,细胞被扩展到媒介融合使用细胞扩张(CEM,包括IMDM 9%的边后卫,马血清,9%和1%笔/喉炎的症状)。烧瓶然后冲洗三次与DPBS一旦SF-IMDM之前添加12毫升SF-IMDM。这之后,烧瓶在37°C,孵化有限公司5%₂有SF-IMDM没有细胞用于控制。48小时孵化后,介质被离心5分钟,享年1200岁去除细胞碎片。11毫升上层清液然后通过3 kDa离心过滤器(amicon超15离心过滤管,默克密理博,赫特福德郡,英国),享年4000岁在4°C 40分钟,剩余上层清液被撤过滤器和立即冻结−80°C到测试。

2.5。大鼠模型,骨关节炎疼痛

男性的雄性sd大鼠中(重160 - 190克)是购自英国查尔斯河。依照英国内政部进行研究动物(科学过程)法案》(1986)和准则的国际研究协会的痛苦。进一步说,内政部项目下的所有作品进行牌照号码40 - 3647。研究都是蒙蔽的方式进行的。老鼠接受了内侧半月板横断(MNX),或虚假的手术,如前所述22]。手术MNX OA的老鼠模型已被证实能诱发症状与人类OA疼痛行为,负重不对称,和疾病的病理学、滑膜炎、病理学的软骨下骨,和chondropathology以及骨刺的发展(13,22- - - - - -24]。老鼠犀牛与异氟烷(3%感应,2 - 2.5%的维护;1 L / min O₂),局部麻醉EMLA奶油应用于左后肢。一个完整的切割厚度的内侧半月板左膝。Sham-operated老鼠半月板暴露,但不切断。从麻醉复苏是监控,体重增加和一般行为监控整个postinjury时期。

2.6。干预研究和痛苦的行为

基线测量被手术前(0)和从第三天开始。行为评估重量分布的变化和对机械刺激的敏感性进行了应用于hindpaw 42天参与(见补充信息)。两个独立的干预研究进行14天(MNX和虚假的)时间均。在治疗之前,老鼠分层根据负重和爪子撤军阈值(佩恩表的编制者)(3 - 14天),以确保平衡组。在短暂的异氟烷麻醉(3% 1 L / min O₂),收到一个关节内注射的老鼠。

2.6.1。研究1:后期通过msc (P.10)

MNX老鼠收到内注入1.5×10的⁶间充质干细胞标记与10μg / ml SiMAG (MSC-MNP; 老鼠),1.5×10⁶间充质干细胞(MSC-VEH; 老鼠),或无血清媒体(SFM; 老鼠)。Sham-operated老鼠收到关节内注射血清媒体(SFM; 老鼠)。

2.6.2。研究2:早期通过msc (P.3)与类固醇治疗

200年MNX老鼠收到内注入μg / 20μL Kenalog ( ),1.5×10⁶MSC ( 老鼠),或无血清媒体( 老鼠)。Sham-operated老鼠收到无血清媒体(SFM; 老鼠)。

关节内注射后,老鼠从麻醉中恢复过来,回到笼子里。负重和佩恩表的编制者评估在天21日28日,31岁,35岁,和38发布虚假/ MNX手术。实验终止在42天。

2.7。磁共振成像(MRI)

的在活的有机体内MRI可见性阈值确定之前通过关节内注射1×10⁶或2×10⁶msc贴上0 1、5、10μ联合的g / ml SiMAG nonarthritic尸体18-week-old Wistar鼠。老鼠先生成像使用布鲁克2.3 T动物扫描仪使用以下序列参数;t2加权序列GEFI TR = 700毫秒,TE = 5.5毫秒,翻转= 30°角和视场= 7.9×7.9厘米,和矩阵大小= 256×192确定的位置和基于。图像和信号丢失资料比较先生之间的未经处理的对照组和治疗组。研究1老鼠牺牲了42天,立即先生成像使用上面描述的相同的系统。信号丢失资料获得,而在所有的组。在数据分析的详细信息,请参见补充信息。

2.8。组织学

在牺牲,股胫关节被移除和后缀中性缓冲福尔马林(甲醛4%)脱钙的乙二胺四乙酸(EDTA) [24]。Histomorphometry是由观察者盲目治疗。冠状组织部分(骨关节炎研究学会国际(OARSI)组织学评估准则的OA鼠)被削减时5μ米(25]。

苏木精和伊红染色部分(圆))得分为联合形态(26]。验证研究1的核磁共振结果,矢串行部分(4μ得到了m)和染色)和荧光染料DAPI(1: 200稀释准备在PBS)为了想象植入CM-DiI-labelled msc(见补充信息)。

2.9。ELISA

在牺牲,血液通过心脏穿刺,被整除纺20分钟在1000 ,和血清上层清液收集。血清样本稀释2倍,TNFα使用75μl与校准器稀释剂(研发系统,RD5-17),使用50 il - 10μl与测定稀释剂(研发系统,RD1-21)β神经生长因子通过测定稀释剂使用10%热灭活的边后卫(生命科技有限公司10500 - 064年)。血清肿瘤坏死因子水平α使用商用和IL - 10测定酶联immunosorbant试验(ELISA)试剂盒(RnD系统,明尼阿波利斯MN)按照制造商的指示。每个血清样本重复测试 在450 nm,吸收读校正在540海里。专用测量工具β神经生长因子在大鼠血清中没有可用的,所以组件采购使用Duoset ELISA分别与基本应用程序开发工具包(欧洲研发系统有限公司,DY556)和推荐组件按设备指令(欧洲所有研发系统有限公司)除了DPBS (GIBCO,生活技术,14190 - 169)。

2.10。统计数据

5.0数据分析使用GraphPad棱镜。所有数据是检测正常和非参数测试;Kruskall-Wallis单向方差分析邓恩的事后测试或双向方差分析与图基的事后测试应用在适当的地方,用概率值被认为是重要的 , , 。

3所示。结果和讨论结果

3.1。MSC选择和描述

小鼠msc是新鲜的孤立和扩展在体外通道3(早期通道)或通过10(段末),使融合发生在80 - 90%。干细胞属性被证实与流式细胞术的MSC (CD105标记的承认⁺,本来就⁺、CD31⁻,CD11b⁻、CD45⁻,CD44⁺,CD34⁻)(补充信息图1),选择使用。对脂肪形成的细胞成功地分化,成骨,chondrogenic血统后21天在媒体文化与有关分化(补充信息图2)。CFU-F试验被用来评估细胞的增殖能力扩大在文化、和结果表明,后期通过细胞保留高增殖率在文化(早期通过49±18%晚期通道51.5±12%)。早期和晚期通过细胞培养的条件培养基收集,和关键细胞因子(il - 10, TNF水平α,β神经生长因子)测量(补充信息图3)。il - 10水平条件培养液中最小的,没有不同早期和晚期通道细胞。水平的β条件培养基中神经生长因子显著高于后期通过MSC,相比早期通过MSC(学生的t以及, , )。肿瘤坏死因子α没有检测到的条件培养基两种条件下(补充信息图3)。

3.2。MRI与SiMAG msc贴上标签在活的有机体内

氧化铁的存在和基于检测信号强度下降当使用t2加权MRI序列成像先生。这个信号损失是视觉描绘成黑色区域灰度图像,称为hypointense地区。最佳的细胞数量和SiMAG比率来确保良好MRI可见性长期的时间被确定为1.5×10⁶细胞标记和10μ图g / ml SiMAG(补充信息4)。这个标签的组合允许提高可见度阈值在1×10⁶同时最小化过度盛开如2×10⁶细胞和随后采取了在活的有机体内MRI跟踪研究。

3.3。MSC和类固醇治疗对疼痛的影响行为OA的典范

虚假的手术和MNX手术导致早期变化操作下肢负重。白天14时间均有明显区别负重不对称的程度之间的虚假和MNX组,表明疼痛行为MNX组。在天28-38,负重不对称依然MNX组显著增加,但回到基线虚假的组(图1(一))。曲线下的面积分析,最后三个时间点测试(天31-38)显示一个大大大负重不对称MNX组相比,虚假的对照组。与我们组的研究一致,hindpaw撤军阈值(佩恩表的编制者)降低了虚假和MNX老鼠手术后(图1 (c))。没有明显的差异之间的佩恩表的编制者两组老鼠(图1 (d))。

关节内注射1.5×10的效果⁶近来通过msc在MNX疼痛行为建立模型确定。本周MSC治疗并没有改变负重不对称的程度(天)后立即治疗(数据未显示)。相比之下,有一个显著减少负重不对称在以后时间点(35天31日,和38)MNX组治疗晚期msc(图2(一个))。佩恩表的编制者没有改变的内注入通过msc(图2 (b))。早期关节内注射的影响通过msc和类固醇治疗疼痛行为MNX模型被确定在不同组的老鼠。早期通过MSC 14天内注入导致了一个健壮的和显著增加负重不对称在天感应(图17和21 post模型3(一个))。在以后时间点(天第29 ~),负重不对称之间可比性MNX-MSC组和MNX-SFM组(图3)。在第14天的关节内注射类固醇Kenalog MNX老鼠的负重不对称导致一个完整的逆转天17和21(图3)。在以后时间点(天第29 ~),Kenalog不再抑制负重不对称和MNX-SFM对照组没有差异和MNX Kenalog治疗组(图3 (b))。

3.4。关节病理炎症和疼痛相关细胞因子

分析联合组织学的研究显示,MNX手术导致重大chondropathy分数(图4(一)),滑膜的炎症评分(图4 (b))和骨赘的数量增加(图4 (c))。在这最后的计算,没有治疗联合chondropathy或炎症(数据而发生明显改变4(一),4 (b),4 (c))。血清水平的三个细胞因子测定在不同治疗组的研究(42天)时间均。没有治疗组il - 10表达差异(图4 (d))。血清肿瘤坏死因子有显著增加αMNX-MSC早期通过治疗组相比sham-SFM控制和MNX-MSC晚期治疗组(图4 (e))。血清中没有明显差异β神经生长因子组(图之间的表达式4 (f))。

3.5。MRI跟踪

老鼠收到的一个子集内注入SiMAG-labelled msc (MSC-MNP)终端核磁共振成像在29天细胞植入。MRI显示的区域增加hypointensity(黑色区域)的滑膜腔局部老鼠MSC-MNP处理(图5)。相比之下,没有明显hypointense地区与msc (MSC-VEH)或治疗组血清媒体(SFM)。进一步验证这些数据,信号损失资料绘制了不同的治疗组和揭示了一个重要的信号丢失MSC-MNP组相比未标记的msc (MSC-VEH)和SFM相对高信号强度在联合(图5)。在老鼠的一个子集,确认没有差异的影响SiMAG-labelled msc和未标记的msc在疼痛行为(数据未显示)。)染色法是用于识别的关键结构特点膝关节同时识别荧光标记的msc的位置。CM-DiI-labelled msc的滑膜中确定所有MSC-treated组(MSC-MNP和MSC-VEH)但不是SFM-treated组(图5)。

4所示。讨论

这项研究提供了新的证据,通过msc数量明显影响这些细胞的影响疼痛行为后注入手术模型的膝关节OA的痛苦。我们报告,后期通过msc显著减少负重差异,代孕痛苦指数加载,而早期通过msc加剧了不同负重一段MNX 7天接受的模型。尽管末的有利影响通过msc在MNX疼痛行为模型中,没有证据表明关节病理过程的变更或炎症的研究。然而,msc的外围网站的行动得到了证明SiMAG-labelled msc滑膜腔内被发现在29天接受。

随着关节退行性变的发展,各种各样的手术可以重建退化软骨病变,但不一定减少普遍关节炎症过程。软骨细胞作为细胞疗法(自体软骨细胞移植(ACI))被成功开发和广泛应用在过去的10年,但这种治疗依赖于损害健康的软骨提供细胞来源。替代的治疗潜力的细胞来源,如来自骨髓msc、抗炎和免疫抑制特性,已被调查。我们发现后期通过msc减毒建立负重MNX模型中的不对称与报告一致,msc扭转关节内注射疼痛行为相比,预处理的价值观,但没有改变结构损伤或滑膜炎症化学碘乙酸味精OA疼痛模型(27]。OA的临床动物模型的有效性仍然是辩论,无论是关节损伤的病因学和时间进程的结构性变化在这些模型中所看到的,而患者的疾病进展。OA的MNX模型被认为是复制的一些关键生物力学事件导致临床关节病理,以及显示的许多特性与OA关节病理有关(见参考文献[28])。我们的证据表明,早期关节内注射通过msc加剧疼痛行为OA的模型提供了重要的新知识的治疗潜力的条件可以利用msc OA疼痛。

我们的数据是建立在先前的研究,关注潜在的msc调解联合修复。的确,治疗关节内注射自体msc的好处已经被报道在手术模型的OA山羊(17),和最近的研究报告从骨髓msc的有利影响和脂肪在OA的模型和扩展的初步证据证明修复软骨细胞的影响(29日,30.]。MNX-induced联合病理学的发展不是由内注入了MSC的通道,这表明至少在这个模型的影响MSC治疗疼痛行为不增加关节修复。尽管缺乏影响关节病理,我们研究并提供依据系统性炎症变化。有一个趋势血清肿瘤坏死因子的增加αOA MNX模型的疼痛,虚假的对照组相比,在42天参与。有趣的是,MNX老鼠接受早期通过msc明显增加血清TNFα虚假的组相比,符合这种治疗疼痛行为的恶化。相比之下,血清TNFα在MNX显著降低大鼠msc、后期处理通道相比,早期通过msc。这些数据符合末通道的能力,但不是通过早期,msc减少疼痛的行为。药理研究使用类似的方法表现出显著增加血浆肿瘤坏死因子α在米娅OA疼痛控制大鼠相比,模型与这些变化逆转的镇痛治疗(31日]。尽管血清il - 10和神经生长因子都发现,治疗组之间没有显著差异,表明TNF的变化α不能反映出一个普遍的炎症变化。

早期和晚期的理解的差异属性通过MSC导致行为的结果将有助于改进MSC治疗策略。长时间的在体外文化来源于MSC的骨头导致失去MSC表型,多能——减少伤口归航属性(32,自我更新约15 - 20,通过与细胞衰老的发生(33- - - - - -36]。因此,早期通过细胞的使用建议;但是,早期的通道细胞数量增加了异质性而迟到的可能性通过细胞保留为MSC表型特征标记有选择地同质人口(36,37]。msc的免疫调节特性已报告在一个长期的文化。后期通过msc脐原产地(15)通过显示抗炎介质的重要upregulation HMOX-1,调制器的il - 10和任何活动(38,39];downregulation促炎的il - 1α,il - 1β和干扰素-γ;减少扩散PHA-stimulated外周血单核细胞,与促炎细胞因子的表达;并在表达式TGF -没有变化β,一个细胞因子的免疫抑制功能的关键输血MSC (39]。因此可能遵循干扰素-在我们的研究中γ生产受损和巨噬细胞平衡变化从M1, M2,正如前面看到的在活的有机体内MSC移植(40]。il - 6的生产会增加后期通过人类骨骨髓来源MSC与早期通过细胞相比,虽然CXCL8水平下降(41]。il - 6反和促炎的活动和可能函数激活il - 10和绑定到toll样受体抑制促炎细胞因子的生产,例如,TNF -α防止细菌扩散和il - 1,同时也提供保护(42,43]。需要更多的细胞因子的分析定义的路径之间的潜在的免疫调节的变化早期和晚期通过msc在我们的模型中OA的痛苦。

有证据表明其他的表型变化msc与长时间的文化可能提供洞察力。例如,长时间的文化msc减少STRO-1 BMP7表达式,碱性磷酸酶活性变化,降低成骨的能力(36,44,45]。早期的研究,考察passage-dependent差异chondrogenic msc的潜力,产生了不同的结果,一些研究报告的维护chondrogenic 20(潜在的细胞通道46),或P4的COL2A1和AGC1表达增加票数在人类脂肪中提取成人干细胞(18]。另一项研究报道减少chondrogenic msc在段末的功能33,35,47]。增加通道,MSC与滑膜显示迁徙行为类似于软骨细胞,而在低段( ),经过观察软骨形成能力下降(48]。我们的研究结果显示,后期通过msc减毒建立疼痛行为(负重不对称)MNX老鼠,但并未改变MNX-induced关节病理。这表明,更高的细胞可能通过增加潜在的治疗应用。很明显,选择数量的细胞治疗取决于preculture水平显著的表型的变化和潜在的治疗活动长期文化的结果。之间的权衡疗效和细胞数量扩大所产生的细胞数量将治疗设计时要考虑的一个重要因素。未来的研究早期的实验时间点会阐明治疗的影响减轻的痛苦和适度的MSC治疗后炎症反应。

使翻译的关键MSC治疗OA的诊所后跟踪的细胞注入膝关节最初展示有效的细胞和交付监控细胞保留和biodistribution之后。以前,我们已经表明,SiMAG,商用超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIONs),可以用来追踪msc在7天内的迁移和本土化膝关节类风湿性关节炎(RA)的小鼠模型(20.]。同样重要的是,研究证明没有副作用的在体外MSC属性,细胞生存、增殖SiMAG标签的结果。此外,交付SiMAG-labelled msc也能很好地耐受小鼠从而鼓励使用SiMAG作为成像和跟踪代理在当前的研究中。尽管许多非侵入性成像技术可以应用于跟踪细胞植入后,SPION——和mri跟踪技术受益于相对长期和纵向监测移植细胞的数量。在最近的一项研究由范Buul et al。27监控),移植MSC种群生物发光和MRI MSC转染萤火虫荧光素酶并贴上了一个特定的SPION称为Endorem。逐渐和完全丧失生物发光信号观察三周时间。相比之下,这个系统有潜力的SPION-based组件允许SPION-labelled细胞监测长达12周,证明了2所独立研究京et al。49和陈等。50]。在这些研究中,Endorem-labelled msc和软骨细胞被监控在活的有机体内膝关节内长达12周(49,50]。然而,与生物发光,植入细胞的生存能力不能由mri模式决定的。在我们的研究中,SiMAG-labelled细胞成功地观察到29天植入。

5。结论

我们演示了疼痛反应的差异在OA的鼠手术模型细胞疗法使用msc在早期和晚期通道隔离种群的骨髓。后期通过msc显著减少负重差异,代孕痛苦指数加载(35天31日,38),而早期通过msc加剧了不同负重一段MNX 7天接受的模型。炎症治疗改变的病理过程和量化的研究。我们的数据进一步证明需要描述的细胞类型临床使用前由于其多功能性质和表型的变化从修复免疫调节与次文化。

伦理批准

所有的研究都是由当地伦理委员会批准。依照英国内政部进行实验动物(科学程序)法案》(1986)和准则的国际研究协会的痛苦。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。

确认

作者感谢英国关节炎研究资助这项工作,感谢吉玛·特纳(基尔大学)帮助格式化手稿。这项工作是由英国关节炎研究(批准号18769和19429年)。工作部分资助通过阿中心组织工程和再生医学的制造业EPSRC IRC。

补充材料

补充图1:细胞标记概要MSC对早期和晚期通道,通过CD105特征⁺,本来就⁺、CD31^{- - - - - -},CD11b^{- - - - - -}、CD45^{- - - - - -},CD44⁺,CD34^{- - - - - -}。CD105表达小鼠不同MSC。在这项研究中,细胞通过后期表达低水平的CD105在其他所有标记都表达。补充图2:Tri-lineage分化早期(A)和(B)段末细胞脂肪形成的(1),成骨的(2)和chondrogenic(3)血统。积极的分化检测对早期和晚期MSC。比例尺条= 200μm。补充图3:测量早期和晚期的细胞因子条件媒体培养的msc。没有IL10水平差异的两个条件。肿瘤坏死因子α没有条件培养液中发现。的表达β神经生长因子明显高于年末通过MSC相比,早期通过MSC(学生的t以及, )( 对所有样本)。补充图4:体内剂量反应:信号丢失资料和相应的矢状图像先生(A)植入后1×10⁶和(B) 2×10⁶msc标签(我)10μ5 g / ml, (ii)μg / ml,和(3)1μg / ml SiMAG膝关节的尸体(iv)相比,老鼠和未经处理的控制。SiMAG位置标记细胞被描绘成hypointense信号损失和由红色突出显示滑膜腔环。(补充材料)

引用

1. s . Glyn-Jones a·j·r·帕尔默r·阿格里科拉et al .,“骨关节炎、”《柳叶刀》,卷386,不。9991年,第387 - 376页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. t公司和张y”,骨关节炎的流行病学风湿性疾病诊所北美,39卷,不。1 - 2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. p·g .客纳罕,p . m . Peloso美国诉埃弗雷特et al .,“不充分的缓解疼痛和大型功能损失在膝骨关节炎患者:证据来自未来的跨国骨关节炎的纵向研究现实世界的疗法,”风湿病学,54卷,不。2、270 - 277年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. t . Graven-Nielsen t·沃德豪斯·r·m·朗格弗德l . Arendt-Nielsen b·l·基德,”正常化普遍感觉过敏和促进深层的空间总和痛苦在膝骨关节炎患者膝关节置换后,“关节炎与风湿病,卷64,不。9日,第2916 - 2907页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. 罗伯茨,p .日内瓦,a . McCaskie和c·德·巴里“干细胞治疗骨关节炎的前景。”再生医学》第六卷,没有。3、351 - 366年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b . j . de Lange-Brokaar a . Ioan-Facsinay e·优素福et al .,”协会在膝关节骨关节炎的疼痛与不同模式的滑膜炎,“关节炎与风湿病学,卷67,不。3、733 - 740年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. c . Bouffi f . Djouad m·马蒂厄·d·诺埃尔,和c·约根森,“多功能间充质基质细胞和类风湿性关节炎:风险或益处呢?”风湿病学,48卷,不。10日,1185 - 1189年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. m . c . Kastrinaki p . Sidiropoulos美国罗氏et al .,”功能,确定分子和蛋白质组的骨髓间充质干细胞在类风湿性关节炎,“风湿性疾病上,卷67,不。6,741 - 749年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 吊环和m .坐”,组织工程在风湿性疾病,”关节炎研究和治疗,11卷,不。1,p。211年,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. t·d·亨宁·r·Gawande的话,khuran a . et al .,“磁共振成像的ferumoxide-labeled间充质干细胞软骨缺陷:体外和体内的调查,“分子成像,11卷,不。3、197 - 209年,2012页。视图:谷歌学术搜索
11. l·达席尔瓦Meirelles a . m .丰特斯·d·t·cova和人工智能Caplan”机制在间充质干细胞的治疗特性,”细胞因子和生长因子的评论,20卷,不。5 - 6,419 - 427年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. A . m . Malfait c . b .小j·j·麦克杜格尔,”评论在小动物模型骨关节炎疼痛,”骨关节炎和软骨,21卷,不。9日,第1326 - 1316页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. p . i Mapp d·r·Sagar美国阿什拉夫et al .,“结构性的差异和痛苦表型monoiodoacetate钠和半月板的横断模型骨关节炎,“骨关节炎和软骨,21卷,不。9日,第1345 - 1336页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. t·l·文森特·r·o·威廉姆斯,r . Maciewicz a . Silman和p .加赛德”通过小动物模型映射关节炎的发病机制,”风湿病学,51卷,不。11日,第1941 - 1931页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. a . m . Suhaeb乃文,a . Mansor和t . Kamarul“透明质酸有或没有骨髓derived-mesenchymal干细胞改善骨关节炎的膝盖鼠模型:变化的初步报告,“印度实验生物学杂志》上,50卷,不。6,383 - 390年,2012页。视图:谷歌学术搜索
16. s . m . j . e . Kim Lee s h . Kim et al .,“自组装效应peptide-mesenchymal干细胞在骨关节炎的进展在老鼠模型中,“国际期刊的纳米补充1卷。9日,第157 - 141页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j . m . Murphy d·j·芬克e·b·亨泽尔和f·p·巴里,“干细胞疗法在山羊的骨关节炎模型”关节炎与风湿病,48卷,不。12日,第3474 - 3464页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. r·w·b·t·埃斯蒂斯,a . w . Wu风暴,和f . Guilak”扩展使,但不是醛脱氢酶的活动,增加了chondrogenic人类脂肪中提取成人干细胞的潜力,”细胞生理学杂志,卷209,不。3、987 - 995年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. a . Peister j . a . Mellad b·l·拉森b . m .大厅,l·f·吉布森和d . j . Prockop“成人干细胞从骨髓(msc)从不同菌株的分离纯系小鼠不同表面抗原表位,增殖,分化的潜力,”血,卷103,不。5,1662 - 1668年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. h·马凯兹,o .凯赫,r·h·莫里斯和a . j . El麦加朝圣,“全身跟踪的超顺磁性氧化铁nanoparticle-labelled电路风湿性关节炎小鼠模型,”干细胞研究与治疗,4卷,不。5,126年,页2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m . Gnecchi l·g·梅洛,“骨骨髓来源间充质干细胞:隔离,扩张,表征,病毒转导,和生产条件培养基,”分子生物学方法卷,482年,第294 - 281页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 美国阿什拉夫,p . i Mapp j .人民a·j·班尼特诉查普曼和d·a·沃尔什,“痛行为反应增强关节内注射神经生长因子在两骨关节炎动物模型,”风湿性疾病上,卷73,不。9日,第1718 - 1710页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. c·l·克里斯琴森和j . e . Stevens-Lapsley负重不对称与损伤的措施和功能移动膝骨关节炎患者,”物理医学与康复档案,卷91,不。10日,1524 - 1528年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. d·r·Sagar阿什拉夫,徐l . et al .,“Osteoprotegerin减少疼痛的开发行为和关节骨关节炎的病理模型中,“风湿性疾病上,卷73,不。8,1558 - 1565年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. n . Gerwin a . m . Bendele美国康涅狄格州和c·s·卡尔森”的OARSI组织病理学initiative-recommendations组织学评估骨关节炎的老鼠,”骨关节炎和软骨补充3卷。18日,S24-S34, 2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. h . j . Mankin h·多尔夫曼l . Lippiello和a . Zarins生化和代谢异常在关节软骨osteo-arthritic人类臀部:II。形态与生化和代谢数据表现出相关性。”《骨与关节外科杂志》上,53卷,不。3、523 - 537年,1971页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. g . m . van Buul m . Siebelt m . j . c . Leijs et al .,“间充质干细胞减少疼痛但不退行性变化mono-iodoacetate骨关节炎大鼠模型,”骨科研究期刊》的研究,32卷,不。9日,第1174 - 1167页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 美国阿什拉夫、p i Mapp和d·a·沃尔什”贡献的血管生成炎症、关节损伤和骨关节炎的疼痛一只老鼠模型,”关节炎和风湿病,卷63,不。9日,第2710 - 2700页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. a . n . Mokbel o . s . el Tookhy a . a . Shamaa l·a·拉希德d . Sabry和a . m . el赛义德,“归巢和修复效果的关节内注射自体间充质干细胞在骨关节炎的动物模型中,片”BMC肌肉骨骼疾病,12卷,不。1,p。259年,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m . ter Huurne, r . Schelbergen r .蜚蠊et al .,“抗炎和chondroprotective效果intraarticular注射脂肪中提取干细胞的实验性骨关节炎,“关节炎与风湿病,卷64,不。11日,第3613 - 3604页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. j。j人民对话,d . r . Sagar, p .邵et al .,“大麻素CB₂受体调节中枢敏感化和疼痛反应与膝关节骨关节炎,“《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。11篇文章e80440 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. w . j . c . Rombouts和r . e . Ploemacher”主要鼠骨髓MSC展示高效归航但丧失自导能力文化后,“白血病,17卷,不。1,第170 - 160页,2003。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. 班菲a, a . Muraglia b . Dozin m .极端r . Cancedda r .四开,“体外的增殖动力学和分化潜力扩大人类骨髓基质细胞:影响了它们在细胞疗法的使用,“实验血液学,28卷,不。6,707 - 715年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. Somasundaram, r . Mishra h . Radhakrishnan r . Sankaran v . n . s . Garikipati和d . Marappagounder“人类成体干细胞维持一个恒定的表现型简介无论他们起源、基底媒体,和长期的文化中,“干细胞国际ID 146051条,卷。2015年,29页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. m . Bonab k . Alimoghaddam f . Talebian s Ghaffari a . Ghavamzadeh和b .(“衰老的间充质干细胞在体外,”BMC细胞生物学,7卷,不。1,p。2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. t . Tondreau l . Lagneaux m . Dejeneffe et al .,“隔离BM由塑料附着力或消极的选择:间充质干细胞表型,增殖动力学和分化潜能,”Cytotherapy》第六卷,没有。4、372 - 379年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. p . Tropel d·诺尔n . Platet p .罗格朗,a . l . Benabid f·伯杰,“隔离和描述从成年小鼠骨髓间充质干细胞,”实验细胞研究,卷295,不。2、395 - 406年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. f·h·巴赫,“血红素oxygenase-1:治疗放大漏斗,”美国实验生物学学会联合会杂志,19卷,不。10日,1216 - 1219年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. y壮族,d . Li j .傅问:施,y, x居,“比较生物学性质的脐带-间充质干细胞来自早期和晚期的段落:免疫调节能力增强的老化细胞,”分子医学报告,11卷,不。1,第174 - 166页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. m . Hajkova e . Javorkova A . Zajicova p . Trosan诉Holan和m . Krulova“本地应用程序间充质干细胞和环孢霉素开关变弱的免疫反应的巨噬细胞表型,”组织工程和再生医学杂志》上,11卷,不。5,1456 - 1465年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. a .煤砖Dubois,贝卡尔特,m . Dolhet y Beguin,和a . Gothot”长期体外培养的人类骨髓间充质干细胞的影响他们的支持性活动向点头/ SCID-repopulating细胞和B淋巴祖细胞和骨髓血统,”Haematologica,卷95,不。1,47-56,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. n Nishimoto“白细胞介素- 6在类风湿性关节炎”,当前舆论风湿病学,18卷,不。3、277 - 281年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. t . van der民意调查,c . v .基奥x Guirao, w·a . Buurman m·科夫,s . f .洛瑞,“小鼠白细胞介素- 6 gene-deficient显示削弱防御肺炎球菌肺炎,“《传染病杂志》上,卷176,不。2、439 - 444年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. h·j·陈,s . Sotome j . Wang Orii, t . Uemura和k . Shinomiya”相关的体内骨形成能力和人类骨髓基质细胞的体外分化,“医疗和牙科科学杂志》上,52卷,不。1,27-34,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. 诉文森提,大肠,铃木g . k .佐藤j . m .快活的,t·李,“成人猪间充质干细胞表型变化引起的长期使文化”细胞生理学杂志,卷205,不。2、194 - 201年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. j .柳,t . s . Barthel k西村et al .,“人类的chondrogenic潜力从骨髓间叶细胞祖细胞,”骨与关节外科杂志》上,卷80,不。12日,第1757 - 1745页,1998年。视图:谷歌学术搜索
47. z z, c . Liu谢et al .,“表观遗传失调在间充质干细胞衰老和自发分化,“《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。6篇文章e20526 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. a . r . Tan e . Alegre-Aguaron g·d·奥康奈尔et al .,“Passage-dependent关系间充质干细胞动员和chondrogenic潜力,”骨关节炎和软骨,23卷,不。2、319 - 327年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. X.-H。精,l .杨x j .段et al .,“先生体内成像跟踪的磁性氧化铁纳米颗粒标记,工程,自体骨髓间充质干细胞内注入后,“关节,骨骼,脊柱,卷75,不。4、432 - 438年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. f . j . Chen, y . Zhang et al .,“体内跟踪的超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记软骨细胞在大型动物模型中,“《生物医学工程,40卷,不。12日,第2578 - 2568页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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