文摘
我们的目标是识别信号因素由msc分泌水平在2 d层(2 d-mscs)培养,球状体(msc)球状体和微泡cocultures (MVs)来源于2 d-mscs或球体msc和视网膜光感受器神经元。我们播种2 d-mscs、球体msc和细胞来源于msc在等量球状体。MVs隔绝所有3培养条件与661 w细胞孵化。51信号水平因素条件培养基与培养条件与bead-based量化分析。我们发现引发,il - 6, GROα是三大最丰富的信号的因素。此外,2 d-mscs相比,水平的细胞因子和IL-2R 11α在条件培养基从球体msc显著增加。最后,为了测试增强表达这些因素反映出改变immunomodulating活动,我们评估的影响2 d-msc-mvs chemoattraction和3 d-msc-mvs CD14 +细胞。2 d-msc-mvs相比,显著3 d-msc-mvs CD14 +细胞的趋化指数下降。我们的研究结果表明,球体培养条件改善骨髓间充质选择性地分泌信号的能力因素。此外,3 d-msc-mvs也拥有一个增强的能力,促进分泌信号因素2 d-msc-mvs相比,可能具有增强immunomodulating活动和可能是一个更好的再生治疗视网膜退行性疾病。
1。介绍
已经有相当大的兴趣在疗效的人类间充质干细胞(msc)源自成人组织如脐带血液,骨髓和脂肪组织(1- - - - - -3]。msc相对方便从捐赠者被孤立,他们可以保持一个活跃的增殖能力在多个通道的文化。由于这些原因,msc对疾病治疗有很大的疗效,证明了从多个实验和临床研究结果(4- - - - - -6]。除了multidifferentiation潜力,msc是众所周知的分泌能力旁分泌因子和调节炎症和免疫(7,8]。有趣的是,治疗效果往往达到没有令人信服的证据的细胞分化或移植体内(9]。相反,msc为组织修复通过分泌某些有限的旁分泌因子组织破坏,因此显示出广阔的应用前景在治疗多种疾病包括那些涉及视网膜变性(10,11]。先前研究神经保护治疗退行性视网膜光感受器神经元,如年龄相关性黄斑变性(AMD)和视网膜色素变性(RP)包括intravitreal MSC移植,MSC条件培养基注入和神经营养因子的交付(12,13]。然而,确切的治疗机制和因素确定疗效仍有待阐明。增加注意力都集中在如何提高MSC治疗效率和识别MSC-derived元素赋予强大的神经保护(14]。
传统上,msc在二维培养的单层膜(2 d-mscs) (15]。最近,msc的聚合成三维球状体(球体msc)据报道,显示增加比2 d-mscs治疗潜力,在某种程度上,因为他们更好地模仿一个真正的组织的结构和安排(16,17]。同样,微泡(MVs)源自msc (MSC-MVs),这对细胞因子函数作为航天飞机,受体配体,消息rna (mrna),小分子核糖核酸(microrna)和脂质18,19),被证明是细胞间通讯的介质(20.]。MSC-MVs不仅仅被认为是一种有效的治疗方法,因为他们是稳定的和可保存的,但也因为他们有更少的免疫排斥反应的潜在风险21,22]。然而,大多数的研究到目前为止只有利用MVs来源于2 d-mscs (2 d-msc-mvs),并使用MVs的优势来源于球体msc (3 d-msc-mvs)在治疗疾病还没有被充分研究。
我们的研究旨在系统地分析信号因子分泌2 d-mscs球体msc和2 d-msc-mvs和3 d-msc-mvs对信号的影响因子分泌cocultured时视网膜光感受器神经元。我们的研究结果表明,三维文化模型骨髓间充质分泌信号增强的能力因素负责抗炎、细胞分化和细胞生存和3 d-msc-mvs拥有增强的能力促进分泌信号因素和可能具有增强immunomodulating活动相比,2 d-msc-mvs和可能是一个更好的选择视网膜光感受器神经元的神经保护。
2。材料和方法
2.1。MSC细胞培养
通道2 msc源自人类脐带血来自Cyagen生物科学公司(广州)。msc是杜尔贝科修改鹰的培养基培养(DMEM) (Cyagen)补充10%胎牛血清的边后卫(Cyagen)、谷酰胺青霉素、链霉素的1%,和1%。细胞培养在37°C公司为5%2在湿润孵化器。
2.2。球体的生成和分解
悬滴协议是用于生成球体msc描述Bartosh et al。16]。短暂,msc镀在倒置的培养皿盖悬滴在35 ul的条件培养基在四个不同的细胞密度(2.5×103,6.25×10325×103,50×103细胞/下降,以下简称sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k Sph-50k resp。)(图1)。盖子然后翻转并放入一个培养皿,PBS注入防止蒸发。悬滴培养生长在37°C公司为5%272 h生成球状体。MSC球状体与细胞收获升降机和PBS转移到15毫升离心管,离心收集的1000 rpm为5分钟。为了获得球体派生msc、球状体与0.25%胰蛋白酶和孵化1毫米EDTA(美国加州Gibco-Invitrogen) 37°C不同时期根据球体的大小(1、2、10和15分钟的sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k, Sph-50k,职责)。球体派生msc被收集在1000转离心5分钟之前被用于后续的分析。以后,球体派生msc被称为sph - 2.5 k, sph - 6.25 - k, Sph-25k特区Sph-50k直流,分别根据原始球状体(图的大小2)。
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2.3。收集的条件培养基
等于总数2 d-mscs,球体msc,球体派生msc (50×103细胞/)被播种到six-well菜2毫升无血清培养基。从不同形式的条件培养基msc在24小时后收集文化。
2.4。隔离MSC-MVs
MSC-MVs从不同形式的从无血清条件培养基分离MSC文化(图2标准的连续离心协议(后)23]。简单,条件培养基是离心机在2000 g×20分钟在4°C摆脱细胞和细胞碎片。上层清液被离心机在100000×g(贝克曼库尔特最适条件l - 100 XP超离心机,贝克曼库尔特,加州,美国)1 h在4°C,和球团在PBS洗一次。得到的上层清液再次离心器在100000 g×1小时在4°C收集MSC-MVs。MSC-MVs收集的1×106细胞在100年被停职μL PBS然后悬浮在1毫升无血清培养基。
2.5。电子显微镜
MSC-MVs超速离心法纯化的碳涂层网格和沾1%醋酸双氧铀。网格被Tecnai G2检查精神双透射电子显微镜(范)的加速电压80 kV。照片拍摄的AMT 2 k CCD相机。
2.6。总蛋白量化
在100年的总蛋白浓度MSC-MVs暂停μL使用发现了PBS皮尔斯TM BCA蛋白质化验设备(23225)(美国罗克福德热科学™)根据制造商的协议。数据是使用时代™多卷分光光度计系统(美国加州BioTek)。
2.7。Coculture 661 w的细胞和MSC-MVs
661 w细胞株是一个礼物从中山眼科中心,中山大学。661年w-mv coculture实验,1×105661 w细胞治疗2毫升的2 d-msc-mvs, 2毫升的sph - 2.5 - k mvs 2毫升的sph - 2.5 - k DC-MVs 2毫升的sph - 6.25 - k mvs 2毫升的sph - 6.25 - k DC-MVs 2毫升Sph-25k-MVs 2毫升Sph-25k DC-MVs, 2毫升Sph-50k-MVs,和2毫升Sph-50k DC-MVs,分别(图2),培养在37°C公司为5%2对不同时间点(24小时、48小时、72小时和96小时)在6-well盘子。661 w的细胞无血清培养系统处理2毫升没有MSC-MVs被用作控制。每个文化的条件培养基条件然后收集和分析信号的因素。
2.8。Bead-Based分析
信号量化因素进行使用Bio-Plex Pro™TGFβ化验设备(171 w4001 M), Bio-Plex Pro™人类细胞因子27-Plex化验工具包(M500KCAF0Y),和人类细胞因子Bio-Plex Pro™21-Plex化验用品(MF0005KMII)(美国加州Bio-Rad)根据制造商的指示。条件培养基收集来自不同文化和coculture条件分析了上述信号因素表S1网上(见补充材料中列出https://doi.org/10.1155/2017/2730472)。每个样本一式三份。数据获得使用Bio-Plex 200系统(美国加州Bio-Rad)和标准曲线是由5-parametric曲线拟合使用OriginPro 8.5.0软件(美国马萨诸塞州OriginLab)。
2.9。CD14 +细胞隔离
新鲜的外周血样本收集的5卫生保健工作者。所有科目提供书面知情同意和批准的研究是人类道德委员会的第二个中南大学湘雅医院,之前学习的开始。外周血单核细胞(PBMC)被使用从肝素化静脉分离外周血Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(通用电气医疗、瑞士)30分钟500 g。CD14 +从PBMC细胞选择积极的选择使用anti-CD14共轭微(Miltenyi研究,圣地亚哥,美国)在endotoxin-free条件下,根据制造商的指示。这些孤立的细胞群的纯度由流式细胞仪检测。孤立的细胞CD14使抗体孵育(美国圣地亚哥BioLegend) 30分钟在黑暗4°C。流收购进行FACSCantoTM II分析仪(BD、钙、美国)。数据分析使用FlowJo 7.6软件(树明星Inc .)、钙、美国),这些孤立的细胞群的纯度高于90%(图6 (f))。
2.10。迁移分析
CD14 +细胞的迁移试验执行使用8μ米孔隙大小聚碳酸酯膜(美国康宁公司,CA)。二百毫升的CD14 +细胞在无血清rpmi - 1640中(美国Gibco,卡尔斯巴德,CA) (5×104细胞)放在上面的插入和4种不同的介质被添加到较低的房间,分别为:600μL无血清rpmi - 1640中,500年μL无血清rpmi - 1640中补充了100μL保利(我:C)解决方案(1毫克/毫升PBS;美国纽约恩佐,法明岱尔),400年μL无血清rpmi - 1640中补充了100μL(保利(我:C)解决方案和Sph-25k-MVs收集从1×106细胞悬浮在100μL PBS, 400μL无血清rpmi - 1640中补充了100μL保利(我:C)的解决方案,和2 d-msc-mvs收集从1×106细胞悬浮在100μL PBS。培养后湿润有限公司2孵化器在37°C 2 h,细胞顶部被移除和CD14 +细胞跨膜迁移与甲醇固定,沾0.5%结晶紫。6个随机领域的细胞被量化,并从这些字段计算平均值。实验重复三次,结果趋化指数(CI),定义为迁移细胞的数量除以数量的迁移细胞无血清培养系统应对rpmi - 1640中。每个决定使用的光学密度离心超滤(美国Billerica微孔)设置为450海里。
2.11。ELISA试验
条件媒体从不同形式的msc和661 w-msc-mvs coculture系统分析了VEGF和TGFβ3使用人类VEGF Quantikine酶联免疫试剂盒(DVE00)和人类的TGFβ3 DuoSet酶联免疫试剂盒(DY243)(研发系统,明尼阿波利斯,美国)根据制造商的指示,分别。样本一式三份。
2.12。统计分析
热图生成通过采取平均每组(),策划符合预定的颜色代码使用半1.0 (24]。单向方差分析是用来分析差异的样本2 d和3 d组,然后事后进行了测试比较两组之间的差异。分析不同表达水平不同时间点的样本中,independent-samples测试和应用值小于0.05被认为是具有统计学意义。数据表示为均值±标准差的意思是,除非另有说明。这些分析使用棱镜软件5.0(美国拉霍亚GraphPad软件)。
3所示。结果
3.1。引发、il - 6和格罗α是三大细胞因子浓度分泌2 d-mscs
msc分泌已知旁分泌作用的信号因子如白细胞介素、趋化因子、生长因子。分析信号因子分泌2 d-mscs条件媒体收集2 d-mscs和51信号因素(表S1)条件培养基被多路复用bead-based量化分析。这些信号因素可能参与调节炎症、分化、和经济增长,他们很可能影响的发展和治疗退行性疾病(25,26]。在2 d文化条件,总共有15个因素由msc分泌信号检测(表1)和引发,il - 6, GROα三大信号因素浓度。此外,我们发现TGFβ1、bFGF SCGF -β、高度表达,胶质瘤细胞因子参与再生、增殖和分化。相比之下,促炎MIP-1等因素α,MIP-1β肿瘤坏死因子-α、TNF-b和干扰素-γ和某些趋化因子如咆哮、米格和IP-10没有检测到。有趣的是,除了一系列的细胞因子,条件2 d-mscs媒体也包含一个细胞因子受体IL-2Rα受体- 2,这是一个积分。
3.2。球体msc显示增强的11分泌细胞因子和细胞因子受体1比2 d-mscs
球体msc已被证明有改善治疗效果相比单层文化由于其增强的抗炎作用,分化能力,和细胞生存16,27,28]。了解潜在的机制,我们还调查了从球体msc分泌信号的因素。因为文化条件如球体大小可以影响(MSC的行为29日),我们准备球体MSC文化不同大小(sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k,和Sph-50k播种2.5×10组细胞3,6.25×10325×103,50×103细胞/下降,职责)。此外,据报道,各msc与更小的规模和增加了球状体抗炎能力相比2 d-mscs从未形成聚合或球状体,因此作为一个有吸引力的治疗工具(16]。因此,我们也调查的球体派生msc分泌释放通过胰蛋白酶化球状体(sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k特区和Sph-50k DC组相应的球体大小2.5×103,6.25×10325×103,50×103细胞/下降,resp)。在这项研究中。51信号因素分析中,共有21个信号因素bead-based试验检测了包括15个信号因素2 d-mscs文化(表中也被检测到2)。六个信号因素、IL-1Ra IL-7 IL-16, MCP-3 TGFβ3,VEGF,发现只有在三维培养条件。
接下来,我们比较的信号水平因素都可检测条件培养基从球体msc和2 d-mscs(图3)。我们发现5水平信号因子,il - 6, MCP-1,制药业,g - csf和SDF-1α更高的条件培养基从所有3 d文化条件相比,二维文化条件。除了增加分泌这些11信号参与炎症调节因子,细胞分化,和生存,msc聚合成3 d增强球状体分泌的细胞因子受体IL-2Rα。此外,我们发现,细胞密度在球状体和文化水平的某些信号因素影响的方法。最高水平的IL-7 IL-16, MCP-3, IL-2Rα发现了sph - 6.25 k组。同样,最高水平的MCP-1、生活和g - csf Sph-25k组发现,最高水平的IL-1Ra TGFβ3,SDF-1αSph-50k组中,VEGF检测。此外,这些信号因素水平往往是在球体MSC组高于相应的球体派生MSC组,表明3 d内的微环境促进某些信号因子分泌球状体。此外,TGF和VEGF的表达β3在上层清液2 d-mscs / 3 d-mscs也评估ELISA(图S1。A, C)与bead-based化验的结果一致,VEGF和TGFβ3只发现三维培养条件下,被检测到的最高水平Sph-50k组和Sph-25k组,分别。
3.3。3 d-msc-mvs具有促进信号的增强能力因素分泌2 d-msc-mvs相比
自MSC-MVs可以作为有效的生物活性分子,航天飞机因此调停MSC收据细胞影响和调节活动,我们cocultured MSC-MVs 661 w细胞和评估MSC-MVs对661 w的影响细胞。为此,我们从条件培养基分离出MVs d-msc 2和3 d-msc文化(包括球体msc和球体派生msc与4种不同的细胞密度,即sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k, Sph-50k和sph - 2.5 k, sph - 6.25 - k, Sph-25k特区和Sph-50k DC组)含有等量的总蛋白质,孵化661 w不同时期的细胞。通过电子显微镜分析,2 d-msc-mvs和3 d-msc-mvs显示大小从100纳米到400纳米(数字4(一)- - - - - -4 (d))。此外,无论是2 d-msc-mvs还是3 d-msc-mvs 661 w细胞形态学的影响(数据4 (e)- - - - - -4 (g))。我们下一个量化的信号水平因素的条件培养基收集coculture系统24小时,48 h, 72 h和96 h后使用bead-based测定孵化。总共有20个信号因素检测至少一个coculture条件下(图5(一个))。类似于我们观察到的结果从msc、MVs从3 d-mscs往往有更强的分泌对信号的影响因素。20个信号因素中,11日被发现有更高的水平在所有661 w-3d-msc-mvs 661 w-2d-msc-mvs coculture条件。其余9信号因素,其浓度高至少1的8 661 w-3d-msc-mvs coculture条件比661年w-2d-msc-mvs coculture条件。此外,细胞密度的球状体分泌的信号因素的影响。20中信号因子,11个信号因子被发现661 w-sph-25k-mvs组和6中的最高水平是最高的661 w - sph - 6.5 - k - mvs组。同样的,其余3信号因素,人最高水平在661 w - sph - 2.5 - k - 661 w-sph-50k-mvs mvs组和2组。有趣的是,这些信号水平因素显示模式随着培养时间的增加或减少。三个信号因素,SCGF -β、VEGF和制药业显示661年共培养时间增加w-3d-msc-mvs coculture系统(数据5 (b)- - - - - -5 (d))。另一方面,不同的行为观察il - 1β、MCP-3 TGFβ1、TGFβ3,HGF的与时间有关的降低在所有9 coculture系统探测到。其他11个细胞因子水平条件培养基从661年cocultured w-msc-mvs没有一个明显的随时间变化的趋势。有趣的是,随着共培养时间的增加,g - csf水平在661年w-2d-msc-mvs组持续下降;然而,其含量随时间逐渐增加在所有661 w-3d-msc-mvs cocultured团体,支持不同来源的MSC-MVs可能影响MSC-MVs和661 w细胞之间的相互作用。此外,661年w-3d-msc-mvs coculture条件,MVs sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k, Sph-50k SCGF——往往有更强的影响β、VEGF、制药业和g - csf分泌比MVs sph - 2.5 k, sph - 6.25 - k, Sph-25k特区和Sph-50k DC组相应,表明微环境中的三维球状体促进某些信号因子的分泌。VEGF的表达和TGFβ3 661年w-sph-25k-mvs coculture系统也测试了ELISA(图S1。B, D)。类似于bead-based化验的结果,TGFβ3水平在661年w-sph-25k-mvs组持续下降,但VEGF水平在661年随时间逐渐增加w-sph-25k-mvs组。最后,评估如果这些信号MVs诱发因素可能在具有免疫调节活动,我们测试了影响CD14 +细胞使用transwell chemoattraction细胞试验(图6)。CD14 +细胞可以对促炎的物质,如dsDNA [30.]。因此,我们首先诱导细胞CD14 + chemoattraction通过添加一个dsDNA模拟,保利(我:C) transwells的下议院。正如所料,聚(我:C)治疗显著增加的数量通过transwell膜CD14 +细胞迁移。我们下一个测试的影响MSC-MVs CD14 +移民通过添加MSC-MVs一起聚在下议院(我:C)。我们发现两个2 d-msc-mvs和3 d-msc-mvs抑制CD14 +细胞迁移,更重要的是,3比2 d-msc-mvs d-msc-mvs了antimigration走强的影响。
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4所示。讨论
干细胞疗法已被优化用于治疗视网膜疾病的免疫反应和改善局部微环境(31日,32]。除了已知的刺激和神经营养作用,msc调制有很大潜力的炎症、免疫、和再生通过旁分泌和juxtacrine行动(28,33]。此外,条件媒体MSC文化曾是可行的和有效的材料来减弱损伤和促进视网膜神经元生存在体外和体内都表明MSC-MVs可以是一个有效的治疗方法(34- - - - - -36]。据报道,msc聚集成球状体可以提高抗炎能力增加分泌抗炎因子(16]。然而,详细分析比较信号因子资料2 d-mscs和球体之间msc尚未报道。在这项研究中,我们系统地分析和比较信号由2 d-mscs和球体msc分泌的因素。此外,我们分析了MVs的影响来自于2 d或球体MSC文化在信号因子分泌cocultured 661 w时细胞。我们的研究结果显示,球体文化模型提高了msc的秘密信号能力因素负责抗炎,细胞分化,细胞生存。此外,MVs源自msc可以刺激信号因子分泌和3 d-msc-mvs优于2 d-msc-mvs在刺激信号因子的分泌。
2 d-mscs和球体msc、浓度、三大信号因素引发,il - 6, GROα炎症,起着关键作用的调制(37]。此外,引发一种强有力的血管生成因子(38),总α与某些肿瘤的发生和发展39]。这三个信号因素代表MSC分泌的重要组成部分,强调MSC的免疫调节特性。此外,球体msc是优于2 d-mscs增强抗炎作用[40),提高差异化能力(41],提高细胞存活率(27]。有趣的是,这些增强功能的球体msc与信号因素球体msc分泌增加(16,42]。符合这个概念,我们有检测信号只由球体msc分泌的因素,包括IL-1Ra IL-7, IL-16, MCP-3 TGFβ3,VEGF。正如之前报道的那样,这些炎症和免疫因素是重要的监管机构。通过抑制促炎因子il - 1α和il - 1β,增加IL-1Ra水平可以发挥重要作用在抗炎43]。IL-7是T细胞的生长因子,有效proangiogenic效应(44]。IL-16函数作为一个调制器的T细胞活化,可以抑制HIV复制(45),结果表明:IL-16能阻止或延缓下丘脑和抑制病毒的病毒感染蔓延到视神经和视网膜46]。MCP-3可以吸引巨噬细胞在炎症和转移和增加单核细胞抗肿瘤活性(47]。VEGF是促进血管生成和血管生成,也可以导致炎症通过促进lymphangiogenesis [48,49]。TGFβ3参与细胞分化和细胞生存50),结果表明,低氧环境内MSC提升TGF球状体β3表达,导致增强chondrogenic msc和软骨的分化形成(51]。值得一提的是,与转化生长因子β3,其他两个成员的转化生长因子β总科,TGFβ1、TGFβ2,减少分泌的条件培养基从3 d文化条件相比,二维文化条件。因此,我们的研究结果表明,,而不是增强分泌的信号因子,3 d文化模型可以有选择地增加分泌的某些因素。最后,我们的结果表明,msc性质很大程度上取决于文化条件。水平的这些增加信号的因素往往是在球体MSC组高于相应的球体派生MSC组,表明3 d内的微环境可以促进信号因子分泌球状体。此外,球体msc和球体派生msc分泌增加的信号因子2 d-mscs相比,这表明他们可能是更有效的疾病治疗。总之,我们的研究结果支持了这样的观点,即有选择地增加分泌信号因素可能的原因之一球体msc比2 d-mscs更有利。
的介质之间的双向通信msc和目标细胞,MSC-MVs已经被证明能够极大地促进组织修复和再生52- - - - - -54]。此外,信号因素中扮演着至关重要的角色MSC-MVs介导细胞/组织再生过程。例如,通过RNA转移到管状上皮细胞受损,MSC-MVs能刺激肝细胞生长因子(HGF)分泌,促进细胞生长和再生55]。同样,在我们66年w-msc-mvs coculture系统,分泌的三个信号因素,SCGF -β共培养时间、VEGF和生活增加。SCGF -β、生活和VEGF信号很重要因素在某些组织修复和再生。SCGF -β细胞因子c型凝集素家族的,最初发现作为生长因子刺激原始造血祖细胞增殖(56]。后来的研究证实,SCGF -β能促进骨髓和红色的殖民地的发展,与其他可溶性介质相互作用,VEGF和自洽场等促进愈合过程(57,58]。生活主要是公认为可以维持胚胎干细胞的发育潜能(59]。最近有报道称,生活,通过移植超氧化物dismutase-3,可以保护神经元免受缺血性损伤(60]。除了它在血管生成中的作用和抗炎、分泌VEGF的成人海马神经干细胞和祖细胞最近被证明是需要维护一个神经性的利基(61年]。因此,尽管进一步的工作是需要验证的有效性SCGF -β、VEGF和生活在治疗视网膜疾病,持续分泌的增加这些因素在我们coculture系统表明他们是潜在的目标再生治疗视网膜光感受器神经元。
MVs的特点可以影响他们的细胞起源62年,63年]。例如,MVs源自msc和肝脏居民干细胞(HLSCs)可以有选择地航天飞机microrna的不同模式,因此有不同的biofunctionality [64年]。结果显示,MVs sph - 2.5 - k, sph - 6.25 - k, Sph-25k, Sph-50k SCGF——往往有更强的影响β、VEGF、制药业和g - csf分泌比MVs sph - 2.5 k, sph - 6.25 - k, Sph-25k特区和Sph-50k DC组相应,表明微环境中的三维球状体促进某些信号因子的分泌。我们还发现,那些3 d-msc-mvs具有促进信号的增强能力因素分泌2 d-msc-mvs相比,一致的差异之间的信号因子分泌细胞的起源。
慢性炎症是各种影响感光细胞(视网膜退行性疾病65年]。例如,AMD的特点是细胞外存款(称为黄斑)包含一些促炎的物质,如双链rna(极)和脂蛋白(66年]。dsrna作为toll样受体的配体3 (TLR3)介导炎症和先天免疫反应(67年]。以前的研究已经表明MSC-MVs可以系统地改善视网膜损伤通过部分抑制单核细胞的表达化学引诱物蛋白质起着至关重要的作用在单核细胞动员和迁移(慢性炎症68年,69年]。同样地,我们发现MSC-MVs可以抑制CD14 +细胞迁移和2 d-msc-mvs相比,3 d-msc-mvs antimigration走强的影响。antimigratory效应可能是由于抗炎因子的分泌增加,从而可能会更有可能减少慢性炎症,构成各种退化性视网膜光感受器神经元。因此,我们的研究结果表明,一个更好的再生治疗视网膜疾病可以通过使用3 d-msc-mvs代替2 d-msc-mvs。
除了细胞因子,我们的研究结果表明,msc聚集成球状体可以提高细胞因子受体的表达水平,IL-2Rα,也是由2 d-msc-mvs和3 d-msc-mvs穿梭。与我们的结果一致,这是最近报道,MSC-MVs显示存在的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R) mRNA的配体igf - 1 mRNA (70年]。与包含MSC-MVs IGF-1R cocultured之后,一个拥有IGF-1R空成纤维细胞系表达IGF-1R蛋白质的能力,这意味着IGF-1R信使rna从MSC-MVs穿梭到目标细胞,转化为相应的蛋白质(70年]。因此,细胞因子之外,更多的还应该注意为更好的理解细胞因子受体msc的可能机制。
的潜在限制我们的结果是,而不是使用自体msc和集成光感受器神经元,我们使用不同的集成msc,光感受器神经元。然而,随着免疫特权细胞,msc被认为异种移植,这可能降低异构的影响。应该注意的是,51信号因素的列表在我们的研究中并没有详尽的分析。应注意额外的趋化因子,生长因子,和细胞因子受体参与再生疗法,如脑源性神经营养因子(BDNF) (32在将来的研究中。然而,我们的研究是第一个报道,评估信号因子分泌在相对较大规模的在不同的培养条件。
5。结论
我们的研究结果显示,球体文化模型可以提高骨髓间充质秘密信号的能力因素负责抗炎,细胞分化,细胞生存。此外,MVs源自msc可以刺激信号因子分泌和3 d-msc-mvs优于2 d-msc-mvs在刺激信号因子的分泌。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者感谢免疫学,中南大学提供的平台bead-based分析。他们感谢中山眼科中心提供661 w细胞。这项工作是由中国自然科学基金会(国家自然科学基金委81271004,国家自然科学基金委81371012江Bing和81371012周梁)和专门研究高等教育的博士项目基金(SRFDP 20120162120093周梁)和基础研究基金中央大学中南大学。