文摘

Adult-derived人类肝脏干细胞/祖细胞(ADHLSCs),如今,作为治疗药品开发治疗肝脏的缺陷。在这项研究中,肝原性的分化和炎症的影响启动ADHLSCs的体外免疫档案评估和比较成熟的肝细胞。本构免疫档案ADHLSCs大大不同于肝细胞。不同基质标记CD90和CD105的表达,粘附分子CD44和CD49e,免疫调节分子CD73 HO-1, NK配体CD112和CD155指出。当他们在全球范围内保存他们的免疫资料未分化的同行相比,分化ADHLSCs显示CD200表达差别明显对这些肝细胞。这主要是由信号发出EGF和OSM。另一方面,炎症的影响很相似的所有研究细胞群CD54的表达水平增加和CD106 CD40和CD274的感应。总之,我们的免疫分析研究表明CD200作为调节分化ADHLSCs的免疫生物学的关键因素。更好的理解相关的分子和生理事件这样的标记可以帮助设计一个高效的最优条件治疗ADHLSCs的使用。

1。介绍

迄今为止,细胞治疗代谢性肝病及肝损伤主要依赖于使用的各种类型的细胞,包括肝细胞,肝正弦内皮细胞、间充质干细胞(msc),内皮祖细胞,巨噬细胞(1]。然而,一些限制和问题与这些细胞最终将产生至关重要影响肝细胞治疗的效率(1]。Adult-derived人类肝脏干细胞/祖细胞(ADHLSCs),在体外,在健康成人肝实质细胞的主要文化分数(2]。这些细胞具有成纤维细胞的形态和hepatomesenchymal表型(2]。尽管视为MSC-like,更了解ADHLSCs相比古典msc。据报道,ADHLSCs,基底状态,展示不同的表达和分泌的概要文件(3,4]。当暴露在体外肝原性的分化,ADHLSCs能够区分,在体外或体内,成hepatocyte-like细胞(4]。在描述ADHLSCs的免疫状况,最近我们组显示,除了他们的力量抑制T细胞增殖,ADHLSCs nonimmunogenic因为他们负HLA-DR以及costimulatory分子表达(5]。总的说来,他们的自我更新潜能,能够获得肝细胞功能,及其hypoimmunogenicity突出ADHLSCs作为潜在的替代肝细胞移植的细胞来源。然而,实现这些目标需要解决不同方面相关的安全性和有效性。例如,跟踪ADHLSCs免疫学的概要文件的更改后肝原性的分化,暴露于炎症后失踪。

因此,目前的工作是为了了解更多关于ADHLSC免疫轮廓调制后体外肝原性的分化和发炎的环境。流式细胞仪分析显示肝细胞之间的不同和未分化ADHLSCs如图所示通过基质标记CD90和CD105的表达,粘附分子CD44和CD49e CD73免疫调节分子和HO-1 NK配体CD112 CD155。我们也确认分化ADHLSCs不能获得完整的、类似肝细胞的免疫表型,而是保持概要文件与未分化的细胞。然而,一个特定的和CD200表达的差别主要对这些到达基底肝细胞表现出的水平。炎症的影响很相似的所有研究细胞群CD54的表达水平的增加和CD106和CD40和CD274感应。

Downregulation CD200表达在体外hepatocytic分化过程中发生早期,表皮生长因子(EGF)的调制。制瘤素M也抑制CD200 mRNA表达的成熟期后期肝原性的分化过程。除了识别CD200表达水平作为一个重要的标记来区分肝分化和未分化的ADHLSCs,我们的观察表明CD200的潜在作用调节ADHLSCs的免疫生物学。CD200的损失可能有关键影响的免疫生物学分化ADHLSCs,专门为肝脏免疫学。

2。材料和方法

2.1。隔离和肝细胞和ADHLSC的文化

本研究机构伦理审查委员会接受使用来自人体的组织,在适当的知情同意组织捐助者。来自比利时卫生部达成协议是对肝细胞和肝干细胞隔离和银行业。

肝细胞悬浮液后被恢复了两步胶原酶灌注技术的肝脏健康的尸体的捐助者。过滤和低速离心后,实质分数,主要由肝细胞,恢复和播种为主的文化。ADHLSCs然后获得如前所述(Najimi et al。2])。这些细胞被培养使用含有4.5 g / l的DMEM葡萄糖(生命技术)补充10%胎牛血清(FCS)(技术)和1%青霉素和链霉素(技术),在37°C充分湿润大气二氧化碳(5%)。当达到80%融合,细胞被取消0.05% Trypsin-EDTA(技术)和播种密度的5000细胞/厘米²。恢复细胞的生存能力评估利用台盼蓝排斥试验在每个通道。

2.2。肝原性的分化ADHLSC

播种后10⁴细胞/厘米²在six-well板涂有鼠尾胶原蛋白I型,ADHLSCs维持扩张中48 h。顺序之后,细胞被孵化与肝原性的分化鸡尾酒包含特定生长因子和细胞因子如前所述(Najimi et al。2])。除了步骤1(一个媒介变化),分化培养基是改变了细胞显微镜下每3天,之后在一个定期。在成熟的最后一步,细胞收获分析欣赏水平的表型和功能分化。控制的未分化细胞在分化的整个过程IMDM中补充FCS为1%。

2.3。炎症启动

贴壁细胞在一夜之间被试使用促炎细胞因子的鸡尾酒:25 ng / ml il - 1β(Peprotech落基山,新泽西,美国),10³U /毫升IFN -γ,50 ng / ml TNF -α,3×10³U /毫升IFN -α以色列Rehovot(所有从ProSpec Inc .)。

2.4。流式细胞术

一组共轭单克隆抗体(表1)被用来评估不同培养条件下细胞的表型研究。标签后,获得的结果进行了分析通过使用MACSQuant分析仪(Miltenyi研究)(5]。

2.5。RT-qPCR

ADHLSCs总RNA提取使用TriPure隔离试剂(罗氏、比利时)。使用高容量cDNA逆转录合成第一链cDNA装备根据制造商的指示(应用生物系统公司),随后用nuclease-free水稀释10 ng /(表达载体)μl的互补。rt - pcr扩增混合物(25μl)包含25 ng模板cDNA、掌握混合缓冲(12日5μl)(应用生物系统公司),和相应的TaqMan试验运行在复制和StepOnePlus实时PCR机器上执行(应用生物系统公司)。循环条件由10分钟聚合酶激活在95°C和40周期在95°C 1分钟15秒和60°C。相对量化基因PPIA对内务工作规范化。当前使用的应用生物系统公司化验研究CD200 (Hs01033303_m1),还有(PPIA) (Hs99999904_m1)。

2.6。免疫荧光

ADHLSCs从三种不同的捐赠者通过6生长在玻璃labtek与4%多聚甲醛固定(σ)在室温下15分钟。非特异性免疫染色阻止了30分钟孵化在PBS含有3% (w/v牛血清白蛋白(BSA)。细胞培养1小时多克隆山羊anti-CD200主要抗体(AF2724研发系统)在室温下。洗后用PBS, ADHLSCs孵化为30分钟驴二级抗体抗体在室温下(A11055,生活技术)。核与DAPI染色5分钟(技术)。幻灯片是安装在fluoromount介质(σ)。荧光是评估使用成像仪A1荧光显微镜(卡尔蔡司),使用AxioVision软件和数字图像被收购。

2.7。免疫印迹分析

总蛋白溶菌产物通过溶解ADHLSC丸在里帕缓冲区(50毫米三基地,pH值8.0,150毫米氯化钠,特里同x - 100 0.5% 1%钠脱氧胆酸盐,0.1% SDS,蛋白质抑制剂鸡尾酒没有EDTA(罗氏)]。蛋白质样本用和孵化不久之前30分钟在4°C样品由离心澄清(15分钟最大速度)。随后,样本收集上层清液和血清总蛋白进行量化(BCA量化装备,Thermofisher)。二十μg总蛋白提取的溶解在加载缓冲区(Tris-HCl (pH值6.8),甘油,SDS,德勤,和溴酚蓝),变性在95°C 5分钟和加载Tris-glycine 10% SDS - page凝胶对蛋白质分离和转移一夜之间在4°C到PVDF膜。膜是孵化5% BSA屏蔽解决方案在室温下90分钟。CD200抗体[0.1μg / ml)是孵化90分钟在室温下,彻底和膜清洗3×PBS-T,孵化与荧光标记的第二抗体(Biotium) 40分钟在室温下,和被Li-cor扫描器(《奥德赛》)。量化分析是由图像工作室Lite软件(《奥德赛》)。

2.8。CD200 (PPI)蛋白质间交互作用网络的建设

我们使用字符串v10数据库(检索的搜索工具相互作用的基因,在可用http://string-db.org)[6)与CD200种子(PPI)蛋白质相互作用网络的建设。

2.9。统计分析

结果表示为平均值±标准平均误差(SEM)。分析在GraphPad棱镜完成的软件程序(美国加州圣地亚哥)。是由学生的统计差异t以及两组的比较或单向方差分析其次是图基事后测试多个比较两组以上。差异被认为是重要的时候值是,,。

3所示。结果

3.1。流式细胞仪鉴定ADHLSCs的肝原性的分化和炎症启动后免疫档案

流式细胞术分析最初确定的免疫状况进行ADHLSCs低扩散条件下,描述肝原性的分化的影响。肝原性的分化的质量评价系统是在形态、表达和功能水平(见附加图可以在网上https://doi.org/10.1155/2017/2679518)。炎症启动的影响等资料也赞赏。肝细胞之前孤立从同一个捐赠者ADHLSC被用于比较作为黄金标准参考这些实验条件。代表流式细胞仪直方图(图1immunopositivity百分比(表)和相关2)表明,ADHLSC表达大量的属于几个不同的免疫分子的家庭。这样的独立分析证实ADHLSC及其维护的间充质剖面低增殖和分化情况。事实上,CD90高度和相对表达无差别ADHLSCs (82±24%), inflammation-primed无差别ADHLSCs(84±52%),分化ADHLSC(75、20±7 80%),和inflammation-primed肝分化ADHLSCs(50±8, 78年36%)。CD105表达水平表现为分化ADHLSCs(31日83±63%)没有明显改变后炎症启动后(26±63%)或分化(29日45±3,46%)。炎症启动分化不显著影响其表达ADHLSCs (66±3 47%)。内皮表达CD34和胚胎SSEA4标记最小的三个测试细胞类型(未分化和分化ADHLSCs以及肝细胞)不受炎症启动的影响。

相对最小的表达谱观察到肝细胞,细胞表面受体CD45, CD95, CD184, CD200R, CD210, CD229, CD271显示很弱,如果有的话,表达无差异以及hepatic-differentiated ADHLSCs。炎症启动不同的细胞类型没有明显改变这些受体的表达水平。

HLA抗原和costimulatory分子分析进行评估liver-derived细胞的免疫原性状态。作为肝细胞发现,未分化和分化ADHLSCs仍然nonimmunogenic HLA-DR和HLA-G和costimulatory分子的表达(CD27、CD40 CD70, CD80、CD86, CD134, CD154的,和CD252)显著诱导。另一方面,炎症启动,随后,CD40表达水平显著增加在未分化ADHLSCs(从8,33±0,88 - 70±5 70%)和分化ADHLSCs(从9日33±0,84年到68年,6±4,84)与肝细胞(3、5±0,65年到72年,8±5 22%)。HLA-ABC显示高和类似的表达式在所有细胞组(未分化ADHLSC(83±2, 92年61年和93年,9±2,88%后炎症启动),分化ADHLSC(96、16±1、47和98年2±0,34炎症启动后),和肝细胞(89±97%和88±5日02炎症启动后)。

细胞粘附分子的分析也是评估CD29、CD44, CD49e, CD54, CD58, CD62, CD102、CD106, CD146, CD166标记。所有展出一些相似之处未分化的ADHLSCs,分化ADHLSCs和肝细胞。例如,CD29,存在高表达而CD58 CD62, CD102, CD146弱表示在所有细胞类型分析肝原性的分化和炎症启动后没有显著的变化。另一方面,差异也被检测到。CD44标记更表达无差别ADHLSC(92、83±64%)比分化细胞(59岁、50±6 23%)和肝细胞(57 43±2 40%)。此外,CD44表达增加炎症启动后只分化ADHLSC(89、60±3 89%)相比,在未分化细胞(93、60±2 26%)和肝细胞(53,75±53%)。CD49e表达式,纤连蛋白受体的一部分,高分化(82±43%)以及分化ADHLSCs(92年,98±45%)相比,在肝细胞(75±7 22%)。然而,炎症启动没有施加任何显著的影响在这个整合素表达水平在所有细胞类型分析。CD54或细胞间粘附molecule-1 (ICAM-1)在未分化的表情相当ADHLSCs(69±53%),分化ADHLSCs(64、20±5 85%),和肝细胞(63年25±9%)。炎症启动的每一个细胞类型显示类似的高架CD54表达在所有分析细胞类型(80±0,97年67%,88年,80±92%,到85年,50±5 90%,职责)。 Although minimally expressed in hepatocytes and differentiated ADHLSC (0,43 ± 0,02% and 1,09 ± 0,82%, respectively) and weak in undifferentiated cells (8,08 ± 1,58%), CD106 expression was substantially induced following inflammation priming of either undifferentiated (48,75 ± 5,54%) or differentiated ADHLSCs (49,50 ± 5,10%) but to a lesser extent in hepatocytes (7,75 ± 4,70%).

NK细胞在肝脏病理学发挥关键作用,我们确定的表达的主要配体激活NK细胞溶解的活动。NK配体的表达模式CD112, CD155, ULBP-3显示肝原性的分化或炎症启动后没有明显的改变。例如,高和可比CD112 CD155表达水平在未分化ADHLSCs (CD112 50±5 82%;71年60±4,CD155为32%)和分化ADHLSC(46, 08年±3,CD112 35;72、80±4,CD155 41)没有调制炎症启动后未分化ADHLSCs (75±4, CD112 30%;70、50±2 63%,CD155)以及分化ADHLSCs (CD112 43岁60±5 24%;CD155 74±55%)。这个维护表达式也注意到在肝细胞(23日5±1,CD112 55%;33岁,CD155 75±43%)与inflammation-primed肝细胞(CD112 25日55±93%;37岁,CD155 25±3 01%)。 On the other hand, ULBP-3 was minimally expressed in all these three cell types without being influenced by inflammation.

免疫调节和它的底层机制是肝脏免疫的一个重要组成部分。免疫调节分子CD39和CD274既定的-在所有细胞类型而只有CD274强烈调节炎症启动后未分化ADHLSCs(82、40±5 94%),分化ADHLSC(64、80±2 26%)和肝细胞(25±2,66年98%)。CD73和HO-1分子表现出较高的组成型表达水平无差异ADHLSCs (88、8±3 99% CD73;65、83±2 21% HO-1)仍然是不变的肝原性的分化后(71、8±6 72% CD73;61、83±4 78% HO-1)和炎症启动后(90±33% CD73;66年,HO-1 25±3 10%)。另一方面,尽管HO-1大幅同样表达肝细胞(32、55±5 10%)和inflammation-primed肝细胞(66±02%),CD73显示只有在这些条件下最小的表达式。

有趣的是,CD200被高度表达无差别ADHLSCs(69、20±2 96%)大幅下调后肝原性的分化(2 43±1 19%)。同样,其成熟肝细胞的表达很低(0,14±0,08%)。在所有这些实验两组细胞,炎症启动CD200蛋白质表达水平有显著影响。

3.2。CD200表达的调制后肝原性的分化

首先,实时定量PCR (RT-qPCR)进行了估算CD200 mRNA水平天真ADHLSC培养条件(扩张)和肝细胞。在协议与流式细胞术结果,RT-qPCR分析表明CD200转录表达肝细胞(图中非常低2(一个))。这个观察也证实了利用免疫印迹(图2 (b))。CD200蛋白表达在ADHLSC也证实使用免疫荧光和同质分布在膜水平(图2 (c))。

经肝原性的分化,我们证明了CD200 mRNA表达水平显然是废除分化ADHLSCs相比(图的未分化细胞3(一个))。这样也差别CD200对这些观察MSC等其他组织的脐带,骨髓、脂肪组织和提交相同的分化肝原性的协议。免疫印迹分析进行进一步的评估,在蛋白质水平,改变CD200表达后发现肝原性的分化。持续与流式细胞术结果,CD200蛋白质表达水平表现出的未分化ADHLSCs后显著降低体外肝原性的分化。同样的结果在ADHLSCs和UCMSCs(图3 (b))。

的差别在肝原性的分化过程中,对这些CD200似乎依赖文化的步骤。鉴于肝原性的分化协议是一个多步骤的过程,我们调查了动能。差别CD200对这些我们的数据表明,CD200-decreased mRNA表达发生从第一步(图3 (c))。之后,我们对待ADHLSC分别与每一个生长因子用于鸡尾酒分化获得的见解关于背后的潜在信号事件戏剧性的关闭CD200表达式后肝原性的分化。如图3 (d),数据作为一个相对CD200 mRNA水平处理和未经处理的ADHLSC(无血清条件)清楚地表明,HFG和bFGF没有表露出任何效果和稍微无意义的效果,分别。然而,EGF和OSM治疗导致明显降低大约一半的CD200 mRNA水平。这种减少是符合减少CD200 mRNA水平观察后的第一个和最后一个步骤肝原性的分化协议。

最后,我们检查如果CD200 mRNA表达也是调制后炎症启动。如图4,这个参数是研究在未分化和分化ADHLSCs以及肝细胞。虽然没有在ADHLSCs观察(图的影响4(一))、肝细胞炎症启动强烈诱导CD200 mRNA水平(图4 (b))。

CD200及其相互作用的蛋白质的功能网络分析,以便更好地突出哪些途径可能会改变在肝原性的分化。由于其巨大的免疫重要性,CD200蛋白质网络使用字符串version10数据库进行了分析。分析被选为其许多优点其中大量的预先计算的交互来自各种数据源的数据,例如,高通量实验数据,文献数据,计算预测。这个工具是用来查询、检索和分析CD200蛋白质相互作用网络的交互局限于那些可用智人。使用CD200作为查询,选择预测方法,包括社区、基因融合,同现,coexpression,实验中,数据库和文本挖掘,十一个蛋白质交互网络构造(图5)。这种交互网络可视化图表的形式与蛋白质分子形成的节点图和交互形成的边缘。其中11个预测蛋白质相互作用,四人已经证实与CD200其中三个(CD200R1、HCRTR2和CD200R1L)实验确定,和一个从策划数据库(CD200R1)决心而其余七人预测,验证了基于文本挖掘和使用PubMed文献数据库。事实上,CD200R1和CD200R1L (CD200R2) CD200同时HCRTR2是食欲素受体(促食素)受体2与神经肽信号通路(7]。促食素和促食素受体,一个家庭的下丘脑神经肽和G protein-coupled受体参与摄食行为的规定(7除了他们通过激活Ca2触发磷脂酶C信号的能力⁺涌入(8]。

4所示。讨论

通过维护重要代谢体内平衡,充分发挥肝脏的功能对生存至关重要。由于其高的再生能力,其持续的肝外细胞供应,细胞疗法目前升值的潜力在补充外源性细胞悬浊液肝脏和纠正其功能和/或结构缺陷。大量的临床前工作进行了研究机械的通路管理《创世纪》主要的肝细胞,肝细胞。如今,不同干细胞被调查希望增加细胞池的多样性和可用性的细胞治疗产品的病人不能再改变肝组织再生(9]。除了成人骨骨髓来源和胚胎干细胞被描述为他们的潜力transdifferentiate成成熟hepatocyte-like细胞(9),ADHLSCs最近成为小说祖水库肝细胞(2,4,10]。ADHLSC体外和体内hepatocytic分化潜力(2,4)和hypoimmunogenic概要文件(5)支持其效用肝再生(2- - - - - -5,10]。

接受道ADHLSCs可能是由于周围的炎症状态传感以及宿主免疫反应的调制为其他msc所报道11,12]。基于有趣的表达和分泌的天真ADHLSC [3),目前的研究旨在升值肝原性的分化和炎症对这些特性的影响。同意我们的最近的观察(5),我们确认ADHLSCs负CD34和SSEA-4但CD90阳性和CD105没有炎症的影响,差异表达谱。值得注意的是,CD90缺席在成熟的肝细胞,仍然用差异化ADHLSCs表示。这个本构CD90表达式可以有利减少表达CD90以来报道损害MSC免疫抑制能力(13]。

与之前报道的一致ADHLSCs hypoimmunogenicity [2,5),我们观察到,不管炎症启动,未分化和分化ADHLSCs以及肝细胞为阴性HLA-DR, HLA-G, CD27和costimulatory分子,CD70, CD80、CD86, CD134 CD154和CD252,但阳性HLA-ABC分子。没有CD134和CD252分化ADHLSCs的特殊利益,因为这些分子的能力削弱调节性T细胞的抑制作用,从而引起宿主免疫反应(14]。增加CD40表达,因此,炎症启动后,可能不足以激活T细胞自激活涉及其他costimulatory分子似乎是负的(在我们的例子中15]。

此外,我们的数据显示,未分化和分化ADHLSCs以及肝细胞表面受体的所有负面CD45(标记用于识别和隔离人类肝祖细胞)(16),CD95(触发在肝细胞凋亡的一个标志)(17),CD184(参与修复肝损伤骨髓间充质迁移触发,transdifferentiate,和与肝细胞融合)(18),CD200R(参与调停抗炎肝反应)19),CD210(肝脏中扮演重要的抗炎和免疫抑制作用)(20.),CD229(参与肝细胞增殖的控制)21],CD271(人类肝星状细胞的标记)22]。这个表达谱不是炎症后启动的影响。

关于细胞粘附分子(摄像头),未分化的ADHLSCs,分化ADHLSCs,肝细胞为阴性CD31在肝脏(消炎)(23],CD58(建议增加细胞介导免疫对乙型肝炎病毒,从而导致肝细胞破坏)(24,CD62e CD102(肝脏淋巴细胞参与招聘)(25],CD146(虽然不好但是描述特征参与血管生成)(26]。然而,所有的细胞都是积极CD29(肝细胞生存所必需的)27)、CD49e和存在(肝细胞发挥抗凋亡作用)(28无论存在与否的炎症信号。我们观察CD102 CD146,存在表达水平未分化ADHLSCs符合我们的以前的观测(5]。CD44(参与调节肝脏炎症)29日)和CD54(参与招聘hepatic-natural杀伤细胞在肝脏)(30.)表现出高度未分化和分化ADHLSCs以及肝细胞。炎症信号加强CD54表达在这些不同的细胞,增加只在分化ADHLSCs CD44的表达。值得注意的是,最小CD106表达式(参与使中性粒细胞迁移在肝脏内)(31日)表现出由未分化和分化ADHLSCs炎症引起的强烈信号水平高于inflammation-primed展出的肝细胞。这些观察表明,检查摄像头不同类地表达在不同的测试细胞炎症类型,表现出不同的敏感性。

作为肝脏的先天免疫的重要组成部分,NK细胞主要是参与宿主防御也有监管的影响在他们的交互与其他类型的肝细胞(32]。不管炎症启动,分化ADHLSCs和肝细胞阳性CD112和ULBP-3 CD155但消极,在某种程度上与未分化ADHLSCs展出。NK细胞的溶解性活动可能会引发在交互CD112或具有相同NK-activating CD155受体DNAM-1 [33)或ULBP-3 NKG2D受体(34]。虽然没有ULBP-3似乎有利,CD112和CD155可能风险而言,允许NK-mediated liver-derived细胞裂解。

鉴于ADHLSCs可以表现出免疫调节特性,它是那么重要对表达式求值和调制的几个相关的免疫调节分子。未分化和分化ADHLSCs阳性CD73 HO-1但对CD39不利,不管炎症启动。有趣的是,尽管最初对CD274不利,炎症明显增加了表达的细胞进行了研究。CD274表达式是调节在应对促炎细胞因子产生costimulatory通路的抑制作用的T细胞(35]。CD274 upregulation可以补偿调节CD40表达的效果观察炎症启动后,从而抑制T细胞的活化作用。

本研究的主要输出CD200表达式的差别是对这些发生在肝原性的分化。这个受损CD200表达分化ADHLSCs符合CD200表达肝细胞的缺失。CD200跨膜表面糖蛋白,参与其受体(CD200R),提供抑制信号导致免疫抑制,抑制炎症,和宽容同种异体(33]。鉴于重要inflammation-inhibitory CD200的潜力,观察到的损失的表达式分化ADHLSCs可能会限制他们的抗炎能力,因此在实施不受欢迎的后果ADHLSC-based肝疗法的应用。CD200广泛表达在许多细胞类型,其中肝外msc。调这个表达式是不均匀的,可根据组织起源和生长条件。例如,CD200表达不等于在骨髓,脐带血,沃顿商学院的果冻,脂肪tissue-derived msc (36,37]。重视肝祖细胞(手持电脑)隔绝成人肝脏高度类似于他们的转录概况主要培养肝细胞细胞类型都为阴性CD200表达式(16]。CD146的表达几个MSC标记包括CD73,和CD200脂肪形成的和成骨分化后表达下调38]虽然只有CD200表达式完全废除chondrogenic分化后(38]。识别特定的标记评估multilineage分化潜能的干细胞是高度重要的干细胞为基础的治疗方法的改进。CD105表达被证明是脂肪形成的后显著下调,chondrogenic和成骨分化脐血msc (39]。此外,作为一个特定的标记确定细胞群或细胞分化状态的定义,研究中的观察可能建议CD200的标记免疫调节ADHLSCs的潜力。

蛋白质相互作用网络(PPI)透露,几个蛋白质可能与CD200交互。这些蛋白质可能表达的不同liver-derived细胞,也可能为环岛等各种细胞生物学特性的影响,轴突引导受体,同族体4 (Robo4)在内皮细胞迁移和血管炎症反应(40,41,胰岛素受体底物1 (IRS-1)可能调解各种细胞过程的控制与胰岛素和胰岛素样生长因子- 1 (igf - 1)受体(42]。CD200 CD200受体1的订婚后,肿瘤坏死因子受体超家族成员11 (TNFRSF11A)可以与TNF receptor-associated交互因素(TRAFs) [43)调节免疫和炎症反应特别是在T细胞和树突细胞之间的交互43]。CD200与转运蛋白的潜在相互作用蛋白质(TSPO)可能产生重要的后果ADHLSC治疗应用因其参与调节细胞能量代谢。TSPO线粒体外膜蛋白,属于一个家庭的tryptophan-rich感知、调节重要的生物功能,如细胞生物能学和新陈代谢、免疫调节和细胞凋亡44]。TSPO并列的胞质/线粒体接口和内源性配体的存在受到代谢表明TSPO功能适应线粒体细胞新陈代谢(45]。的确,TSPO已被证明影响线粒体脂肪酸氧化的能量通过调节体内平衡(FAO)。这样的积极作用与高水平的TSPO表达式中观察到细胞活跃在存储/脂质代谢46]。从药理学角度看,具体upregulation TSPO在炎症和损伤条件下使TSPO一个有趣的,线粒体代谢的制药靶点[47]。

CD200的潜在相互作用与麻木,细胞命运的决定因素,一个关键的角色在干细胞多能性的规定和部门(48),是重要的。的确,麻木的磷酸化pluripotency-associated转录因子NANOG和随后的p53退化驱动self-renewability和扩散的肿瘤起源细胞,从而导致更高的肝脏肿瘤形成(49]。第二,麻木通路抑制干细胞行为的关键调节器(50]。提出了几种机制的操作(50)包括Notch1受体和随后的泛素化降解的切口胞内域受体激活后51)和抑制切口endosomal贩运和回收52]。ADHLSC细胞疗法的上下文中,CD200和麻木的交互可能起到关键作用维持适当的未分化和分化细胞的体内平衡。

总之,我们建议的调制CD200途径可能参与分化ADHLSC免疫抑制的控制功能。虽然需要进一步调查,有助于解决当前数据的兴趣深入探索肝细胞移植的免疫生物学一个高效的管理较为肝脏疾病的细胞的方法。由于功能分化成hepatocyte-like细胞的能力和维护的主要免疫档案成熟肝细胞,分化ADHLSCs肝脏细胞疗法可能会支持他们的发展。

缩写

ADHLSC:	Adult-derived人类肝脏干细胞/祖细胞
bFGF:	碱性纤维母细胞生长因子
表皮生长因子:	表皮生长因子
HGF:	肝细胞生长因子
NK:	自然杀伤细胞
OSM:	制瘤素M。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

幕斯塔法Najimi和Mehdi Najar同样这项工作。

确认

这个项目被BRUSTEM支持,一个脉冲项目研究所的科研和创新的鼓励布鲁塞尔(ISRIB)。Hoda El-Kehdy从IREC博士后授予持有人(de Experimentale的研究和倩碧的研究所)。幕斯塔法Najimi IREC的首席研究员。Mehdi Najar比利时昏聩国家de la任职(FNRS)博士后研究员。

补充材料