比较生理动力学在初级衍生成人组织的不同来源的干细胞

文摘

优化细胞/组织结构,这样他们可以成功地接受并集成在一个宿主的身体在现代组织工程是至关重要的。要做到这一点,经常利用成体干细胞,但有很多方面的环境在活的有机体内不完全理解。有证据表明,昼夜节律和日常生理时间线索产生实质性的影响干细胞激活,细胞周期和分化。提出,昼夜节律在人类成体干细胞根据不同组织和不同的夹带信号的来源根据解剖源起到微分作用。地塞米松和有节奏的机械拉伸是用来同步干细胞来源于骨髓,牙齿牙髓,和腹部皮下脂肪组织,实验证明,这些不同的干细胞不同在他们的生物钟属性以应对不同的同步机制。更原始的牙科pulp-derived干细胞没有回应化学同步但显示时间生物钟基因振荡有节奏的机械拉伸后,建议将时间昼夜信息不同的人类成体干细胞将产生深远的影响在优化组织工程方法和干细胞疗法。

1。介绍

没有成人干细胞(对asc),哺乳动物组织将无法保持其自然的体内平衡,当这些细胞补充和修复过程中起着至关重要的作用,即旧的或受损的细胞成为取代。干细胞具有非凡的自我更新能力通过细胞分裂在很长一段时间,能够分化和产生器官或组织细胞内部或外部刺激的反应。正是这些稳态和再生能力,这让他们能够定期维修和更换损坏或受伤的组织。在活的有机体内的组合化学、生物和物理信号出现在干细胞利基为方向的间充质干细胞(MSC)的命运,它允许他们如此广泛multilineage分化潜能。

最近,有开车去调查使用Oct-4表达牙科pulp-derived mesenchymal-like干细胞在组织工程(DPSCs), msc分化能力的可能限制他们起源的组织。这些新发现的细胞提供了一个替代骨骨髓来源msc(综合),因为他们已经被证明有一个更强大的比bmsc的分化潜能。DPSCs已被证明有一个快速的增殖率以及可能分化成不仅多种间充质细胞类型,而且神经源性细胞,作为高度有利的可访问性(1]。DPSCs能够分化成神经细胞,因为它们起源于神经嵴细胞在胚胎发生迁移。牙髓因此由间充质元素组成,含有神经嵴细胞,具有可塑性和multipotency [2]。牙髓内的干细胞存在极其免受外部刺激他们的“封闭的利基。“胚胎组织发现仍有未分化在下巴直到出生后唯一的器官发生的事件发生。

另一个更容易的成体干细胞来源,目前正在调查来自于脂肪组织(ADSCs);脂肪组织提供了一个丰富的msc可以获得大量以最少的病人不适。DPSCs和ADSCs也更有利的bmsc,导致网站的发病率要低得多。所有三个方面研究了其分化能力;例如,戴维斯et al。3]发现DPSCs表现出最高的潜力产生矿化矩阵,但ADSCs bmsc显示增强dentinogenic和矿物体积。Stanko et al。4]发现,这三种类型的细胞没有表现出不同的细胞形态学或MSC表面标记表达式。然而,他们确实发现关于几个多能性基因的表达显著差异;bmsc和ADSCs相似的几个多能性标记的蛋白质含量但DPSCs显示显著差异的蛋白质产品,包括较低的Oct3/4表达式。这些差异提出反映DPSCs的混合胚胎干细胞起源。

一个时间提示最近发现调节间充质干细胞的潜力和分化能力是由昼夜节律(5- - - - - -7]。哺乳动物的昼夜节律是策划的一个自我维持的组织层次结构振荡器。在下丘脑视交叉上核(SCN)大脑的坐标的外围组织振荡器来调节一个连贯的节奏的大量输出调节新陈代谢、生理、和行为(8]。调节昼夜发条的分子机制的进化和细胞自动,自动调整的网络transcriptional-translational反馈回路驱动时钟昼夜表达模式的核心组件(9]。主transcriptional-translational反馈回路(TTFL)是由基本helix-loop-helix转录因子控制的时钟和BMAL1(即。ARNTL)。当这两个蛋白质二聚化,他们能够结合独联体监管在目标核心生物钟基因增强子元素以及许多clock-controlled基因(20)10,11]。生物钟基因的核心包括时期(Per1 Per2,Per3)和隐花色素(Cry1和Cry2);这两种蛋白质也二聚化和压制自己的负调节时钟转录:BMAL1复杂(12,13]。钟:BMAL1也形成调节视黄acid-related孤儿核受体的转录,REV-ERBs(即。NR1D1 NR1D2)和ror,形成稳定循环的一部分。这些被绑定到视黄acid-related孤儿受体反应元素(ror)中Bmal1(例如,ARNTL)启动子。REV-ERBs抑制转录的Bmal1,而ror激活转录(14]。正面和负面自身调节的循环构成生理分子钟和需要大约24小时才能完成。

最近的调查显示,时钟基因可以直接影响ASC和祖细胞激活和分化,在他们的组织。例如,扰乱生物钟基因Bmal1导致增加脂肪形成,因此Bmal1表达式的衰减在体外在preadipocytes Wnt信号通路的差别导致了对这些和增加脂肪形成15]。然而,在成熟的脂肪细胞,人们已经发现,BMAL1高度分化细胞中表达;当BMAL1拆装的RNA干扰,成熟3 t3-l1细胞只能积累最低数量的细胞中脂滴。此外,adenovirus-mediated BMAL1表达归纳了几个因素参与脂肪生成,其中许多表现出明显的昼夜节律小鼠脂肪组织(16]。这矛盾的研究表明,昼夜节律有一个明确的角色在细胞分化和微分作用可能分化的不同阶段,但是这仍然需要广泛的进一步的研究。

参与调节生物钟的成人干细胞的激活不仅niche-specific,但同时也在细胞群的水平。Janich和他的同事们发现,生物钟调节激活一个微分作用共存的表皮干细胞数量。作者发现的基因调节干细胞利基休眠,激活和分化包含几个公认的BMAL1 /时钟- - - - - -结合位点。删除Bmal1导致昼夜心律失常,Wnt-related基因的表达减少,TGF -β抑制剂,导致渐进积累休眠的干细胞。删除Per1/2,反过来,导致逐步枯竭休眠的干细胞(5]。随后的研究表明,干细胞回应不同分化信号在特定时间的一天。有趣的是,不同的扩散或differentiation-related基因表达在一天的不同时刻;例如,DNA复制和细胞分裂相关通路在黑暗中高度表达阶段,而不是在光阶段,当分化途径更有高度表达(6]。

内生哺乳动物生物钟有一段大约24小时,由外部信号,复位每日称为授时因子。其中最有效的是每天光提示,乘火车时钟在视交叉上核通过reticulo-hypothalamic信号机制在哺乳动物中。SCN继电器这些信息外围组织时钟通过扩散神经内分泌信号(17]。另一个重要的定时信号的能力使我们日常节奏是通过系统性的生长因子和激素等因素。糖皮质激素,是一种类固醇激素,糖皮质激素受体(GR)绑定到出现在几乎所有脊椎动物的细胞,与同步外周昼夜节律。最近发现夹带时钟机制,需要基础研究是机械刺激,即体内的细胞在不同的组织受到不同的机械应变水平。机械振动重置时钟的功能黑腹果蝇;它已经表明,有节奏的机械刺激的弦音的器官可以同步果蝇生物钟。果蝇与基因丧失功能的突变期没有表现出这种能力的同步振动,强调功能的时钟系统机械夹带的重要性(18]。

以前在msc表明显著影响广泛的工作机械部队在体外可以对其增殖和分化特性。例如,Tirkkonen et al。19)使用振动加载导致人类ADSCs向成骨细胞的分化和抑制脂肪形成。作者发现hADSCs培养的成骨的对振动加载条件敏感,和他们的成骨分化增强高频振动。也是最近发表的机械环境上皮干细胞利基在哺乳动物的乳腺组织控制分子时钟振荡的振幅,这是改变环境(如老化)和基因时钟中断(7]。

有趣的是,不像成人干细胞如bmsc ADSCs,能够昼夜同步的激素和生长因子信号如地塞米松(20.)和血清休克(21]。胚胎干细胞(ES)细胞缺乏~ 24小时昼夜节律和不显示所需的核心TTFL生物钟基因的表达。然而,分化,ES细胞培养可以获得分子昼夜节律,也可以逆转细胞重新编程的Oct3/4,Sox2, Klf4,原癌基因(22]。然而,在胚胎干细胞研究昼夜节律提出了许多挑战,我们进行实验的方法可能会导致中断的内生振荡(s) (23];因此,这种缺乏昼夜节律在胚胎干细胞可能不是那么严格之前出现。

正是在这里提出成人不同的人体组织来源的间充质干细胞在体内不同解剖位置可能会表现出不同的生理动态和响应时间不同的线索,更原始的成体干细胞如DPSCs会减少响应bmsc或ADSCs相比生理同步信号。除了完善的化学同步使用人工合成的糖皮质激素,地塞米松(24),机械刺激也用于昼夜模式调查不同的人类成体干细胞是否可以使用机械携入的暗示。应用方法研究机械刺激,使用单轴拉伸装置组成的柔性硅胶基质径向膨胀和1赫兹的频率6.66%,曾被选为这些参数在生理范围内。公布的数据曾显示,5 - 15%之间的单轴应变与1赫兹的频率比msc和显示了积极的对增殖和胶原合成的影响25]。此外,O 'Cearbhaill et al。26)发现,5%的径向膨胀和频率1 Hz mechanosensitive影响包括引起细胞的重新定位与方向的流动和改编形态,强调这是一个重要的细胞骨架重组在这些机械刺激msc相比静态控件。

如果可行,这机械拉伸模式可以提供一个同步方法,排除了需要使用化学或热生物钟同步方法,这将是非常有利的组织工程和再生医学。在这个研究中,成体干细胞的生理差异来自不同的成人组织对他们的几个核心生物钟基因的表达,稳定生物钟基因和干细胞标记在动态和静态条件已经确定和比较。结果揭示了微分生理基因表达模式在人类成体干细胞来自不同组织对糖皮质激素同步源。它也表明,有节奏的机械刺激有能力使我们一些人类干细胞,它提供了一种新颖的时钟同步方法独立的化学或温度信号。这样一个时钟同步协议可能更有利的未来组织工程应用,导致重大进展与年龄相关的疾病和组织工程和同步干细胞疗法。

2。材料和方法

2.1。脂肪基质细胞的隔离

人类lipoaspirate收获期间乳房肿瘤切除后注脂术过程。Lipoaspirate(5克)被添加血清DMEM培养基(英国Gibco)和离心机为3分钟,享年500岁 。洗脂肪层被调到一个新的一个消化管解决方案包含10毫升的DMEM培养基(英国Gibco)和20μL(胶原酶2型(英国σ)补充道。这是放置在一个滚子混合器为30分钟37°C。10毫升的DMEM培养基含有10%的边后卫和青霉素和链霉素(英国σ)添加和管是5分钟,享年1000岁 。石油层被丢弃,未消化的脂肪部分放入T25猎鹰烧瓶,添加完成后增长DMEM培养基。剩下的上层清液都被丢弃和颗粒resuspended和放置在一个单独的T25烧瓶,添加完成后增长DMEM培养基。这两个分数都培养直到confluency和用于通道2。

2.2。细胞培养的bmsc和DPSCs

主要人类bmsc DPSCs获得商业(Lonza和BioEden有限、职责)和扩大在杜尔贝科修改鹰介质(GlutaMAX;英国Gibco)补充1%青霉素、链霉素和10%的边后卫和孵化37°C的5%的二氧化碳。细胞被trypsinised confluency达到70 - 80%,使用之前通过7。

2.3。时钟同步与地塞米松

细胞被播种到6-well板完全生长介质直到confluency如上所述。他们同步使用100 nM地塞米松和总RNA收集每四小时后在以下时间点在生理周期同步(h): 16日,20日,24日,28日,32岁的36岁,40岁,44岁,48岁,52岁。细胞暴露在1 h然后孵化的地塞米松完成生长介质,直到样本集合。消极的控制没有得到地塞米松但被暴露于相同的媒体变化和条件。

2.4。机械刺激

柔性硅胶室之前涂在纤连蛋白1 h细胞被播种进毒气室,允许至少24小时解决并附上。一旦支流,钱伯斯被加载到一个独特的单轴拉伸装置,连续3天有节奏的方式(频率1赫兹,6.66%,12 h / 12 h)。后第三天有节奏的刺激,细胞被允许休息和收集在以下时间超过1.5后昼夜天机械刺激(h): 16日,20日,24日,28日,32岁的36岁,40岁,44岁,48岁,52岁。

2.5。定量RT-qPCR

总RNA提取使用TRI-reagent(σ)根据制造商的规格。之前使用nanodrop分光光度法测定总RNA互补脱氧核糖核酸合成使用上标三世逆转录酶(表达载体),与低聚糖dT 50°C 20 40分钟μl反应。进行实时rt - PCR cDNA SYBR绿色样品PCR Supermix (Bio-Rad)使用它连接™实时PCR检测系统(Bio-Rad)以下循环条件下:95°C 3分钟;40的周期为10 95°C;30年代和60°C。结果正常相对看家基因GAPDH表达式。引物设计与以下基因:甘油醛3 -磷酸脱氢酶(GAPDH)、芳基碳氢化合物核translocator-like受体(ARNTL或Bmal1),第二时期(Per21)、时间(Per1),核受体亚科1 (1 D组的成员NR1D1或Rev-ErbAα),SRY(性别决定区域Y)框2 (Sox2)(引物序列表中列出1)。

2.6。统计分析

数据表示为平均值±标准错误。统计分析,遵循正态分布的测定,用单向方差分析(方差分析),与图基HSD事后,或者是独立的t以及在95%的置信水平(24 SPSS软件)。为了确定生理基因韵律性及其意义,cosinor周期图分析,提供在线的Refinetti教授昼夜生物组博伊西州立大学(http://www.circadian.org/softwar.html)。值≤0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。人类干细胞来自不同来源的成年组织显示微分生物钟基因表达谱

异步文化bmsc, ADSCs DPSCs被允许长到confluency完全生长介质,在RNA提取和PCR基因的“时钟面板”被用来分析它们的相对mRNA的表达。正如预期的那样,不同的人类成体干细胞并表现出显著不同的时钟基因表达,与bmsc DPSCs似乎表现出截然不同的表情Bmal1,组件的积极分子钟的手臂,和Per2(图,组件的负面的手臂1)。有趣的是,Bmal1明显高于在DPSCs bmsc, ADSCs相比,虽然Per2明显高于相比,bmsc DPSCs ADSCs。Per1和Rev-ErbA在DPSCs均显著高于ADSCs和综合。相比之下,Bmal1,Per1,Rev-ErbA表达水平没有显著不同的bmsc和ADSCs之间。

3.2。糖皮质激素刺激使用地塞米松导致生理同步bmsc和ADSCs但不是DPSCs

接下来,三种类型的成人干细胞种植confluency和时钟同步使用人工合成的糖皮质激素,100 nM地塞米松一段1 h,之后,他们的媒体取代完整的生长介质。最初RNA样本在两个相反的生理阶段在20 h或32 h后同步检查任何初始差异相反的阶段。的antiphasic关系Bmal1和Per2可以清楚地看到这两个基因的峰值和电缆走线架在相反的生理时期,分别。例如,在ADSCs DPSCs,Bmal1表达式是在32 h远高于20 h时Per2相比要高得多在20 h 32 h(图2)。有趣的是,相反似乎bmsc的观察,显示更高Bmal1和更低的Per2分别表现在20 h和32 h。组件的mRNA表达稳定循环的生理机制也被检查。结果发现,Rev-ErbAα表达式显示暂时在两个不同的表情昼夜时间点在不同的成人干细胞类型和有趣的是似乎达到32 h类似Per2在bmsc,同时在同一昼夜时间点,它类似于达到顶峰Bmal1在ADSCs DPSCs。

两者之间的显著差异被观察到初始时间点,时间时钟基因表达谱在1.5昼夜天然后相比为了得到更清晰的理解时钟基因表达,省略第0.5天昼夜(0-15 h)为了排除地塞米松的瞬态效应,正如前面发表(7]。样本收集每四小时16 h postdexamethasone同步开始和结束在52 h,以更紧密地调查生理基因动力学之间的三种不同的成人干细胞类型(图3)。ADSCs和bmsc显示强劲的振荡时钟基因表达的特点antiphasic时间同步的细胞之前报道的模式。例如,在bmsc,Bmal1槽形而Per2达到32 h postdexamethasone同步。相比之下,在ADSCs,Bmal1见顶,Per2槽形在16 - 20 h,展示一个清晰antiphasic关系。另一方面,原始DPSCs越多,然而,并没有表现出振荡生物钟基因的表达,并没有明确的时间的时钟基因表达模式可以观察地塞米松后同步。

当分析cosinor周期图(表2),Bmal1表达了在bmsc表现出明显的昼夜节律性( ),而Per2只是短的意义( ),所有三个生物钟基因(Bmal1, Per2,Rev-ErbAα)显示,ADSCs昼夜节律性( , , 、职责)。但是,没有核心生物钟基因被发现在DPSCs表现出明显的昼夜节律性,除了Rev-ErbAα几乎达到意义( )。

为了证实细胞同步地塞米松和排除这种可能性,改变细胞培养生长介质本身地塞米松同步有同步对细胞的影响后,对各国bmsc被用作消极不同步控制和收集暂时没有收到刺激除了上述timecourse一样的媒体变化的实验。正如预期的那样,没有核心的昼夜节律生物钟基因Bmal1或Per2在对各国bmsc不同步(补充图。可以在网上https://doi.org/10.1155/2017/2057168)。

3.3。DPSCs可以携入的有节奏的机械拉伸同步

为了找到一个小说DPSCs同步方法,提出,这些干细胞是封装在一个紧在牙齿但仍然受到大量的机械刺激,他们可能携入的使用机械设备,如果没有化学。因此,bmsc,作为一个积极的控制是这些细胞之前报道应对机械拉伸,和DPSCs被播种到fibronectin-coated,灵活的硅胶钱伯斯(图4(一))和接受3天的有节奏的周期性机械拉伸,接受12 h的周期性拉伸紧随其后12 h的放松。完成了这个政权之后,样本收集在缺乏机械刺激在两个相反的时间阶段20 h或32 h最后接触后拉伸(省略第一个12 h排除任何瞬态效应)和时钟基因表达分析(图4 (b)),以类似的方式暴露于地塞米松后的实验设计。在鲜明的对比与地塞米松同步,时钟基因水平DPSCs antiphasic特点的方式似乎高峰和低谷Bmal1和Per2,分别;bmsc和DPSCsBmal1在表达式在20 h达到顶峰,形成鲜明对比Per2在对面的昼夜时间点达到高峰,被更高的表达在32 h,相比20 h。

样品被收集在一个长时间的课程,进一步研究这些基因表达的显著差异和获得更好的时间分辨率在1.5昼夜周期中,时钟基因表达式分析了每四小时16 h(图52 h postrhythmic机械刺激5(一个))。从这些时间昼夜机械时间的课程,很明显,DPSCs和bmsc可能产生振荡核心生物钟基因的表达用有节奏的机械刺激。DPSCs,Bmal1表情显然是在其槽在32 h,昼夜时间点Per2似乎最初峰(图5 (b))。当分析cosinor周期图(表3),Bmal1表达了在DPSCs表现出明显的昼夜节律性( )。令人惊讶的是,没有生物钟基因被发现在bmsc显示明显的昼夜节律性。

3.4。多能性标记Sox2显示初始周期性基因表达后糖皮质激素和机械同步

使用同步机制,这是下一个决定如果有多能性干细胞标记显示最初的生理基因表达模式后糖皮质激素或有节奏的机械刺激。为此,Sox2分析及其时间表达式决定每四小时在一天昼夜在相同的同步条件下如上所述的三个干细胞类型(图6)。Sox2显示初始周期性表达bmsc和ADSCs但不是DPSCs地塞米松同步。引人注目的是,它发现Sox2表现出非常相似的基因表达的模式Rev-ErbAα(补充图。)。

当分析cosinor周期图(表4),Sox2表达了表现出显著的初始ADSCs昼夜节律性( 当暴露于地塞米松同步,而这只是缺乏意义DPSCs地塞米松( )和周期性的机械拉伸( )。然而,没有明显的昼夜节律性Sox2可以观察到在bmsc,尽管它表现出类似的模式。

4所示。讨论

在这个研究中,它已经表明,人类干细胞来源于不同的成人组织并表现出不同的水平和时间核心生物钟基因的表达模式,稳定循环基因和干细胞标记。它也观察到,不同来源的成体干细胞生理同步信号的反应确实有很大的不同预测;例如,bmsc似乎更容易同步的反应比机械刺激的化学刺激,但是DPSCs通过机械方式更适应夹带。实验结果证明等更原始的人类干细胞DPSCs有不同的分子生理节奏的时钟基因表达的相对水平和振荡时间同步后的基因表达模式(即化学手段。地塞米松曝光)。似乎DPSCs地塞米松同步不太对,这可能是由于欠发达昼夜组件传递这些信号。事实上,他们的相对反应迟钝,地塞米松可能是由于早期发育起源从神经嵴细胞迁移及其产生的间充质成分。因此,在DPSC分化,它是可能的,他们将获得生理响应同步和/或接受成熟的生理基因振荡所需的设备。这是符合Yagita等人的研究表明,胚胎干细胞没有生理能力同步使用forskolin通过化学手段;但在分化和成熟,这种能力可以得到22]。相反,我们的结果证实先前的发现,更成熟的msc来源于骨髓和脂肪组织表现出强劲的时钟对糖皮质激素的节奏同步,显示清晰的antiphasic关系核心TTFLs的正面和负面的武器。例如,吴等人同样显示振荡生物钟基因的表达在小鼠和人类文化bmsc对地塞米松(19]虽然黄等人证明了人类bmsc和ADSCs生理振荡引起的血清冲击(20.]。

随着DPSCs不能同步通过化学手段,小说同步机制,他们可能是寻求回应。昼夜mechanosensory夹带被西摩尼此前调查et al .,他发现12 h: 12 h周期振动和沉默,分别是足以同步每日运动的活动黑腹果蝇(18]。此外,它最近发表的机械环境上皮干细胞利基在哺乳动物的乳腺组织控制分子时钟振荡的振幅(7]。因此,有节奏的机械拉伸利用成人干细胞作为吸入因素使用单轴机械拉伸装置。拉伸后夹带和随后的分析cosinor周期图,分阶段和时期的不同观察时钟基因相同的干细胞类型,强调如何诱导作用机制导致不同的影响。观察,DPSCs可以通过有节奏的机械拉伸和携入的出现比bmsc响应;的Bmal1基因有节奏的机械刺激引起的振荡DPSCs类似颞时钟基因表达模式的bmsc对地塞米松的回应。这可能是由于这一事实在活的有机体内DPSCs经验显著机械刺激下颌运动的形式,闭塞部队,静水压力和为数不多的干细胞利基市场也经历热冲击和极端温度的波动,因此更容易应对这种形式的刺激。此外,当最初的多能性标记的表达谱Sox2比较稳定的循环基因Rev-ErbAα后,惊人地相似模式同步与地塞米松bmsc ADSCs。相比之下,有节奏的机械刺激在DPSCs能够引发周期性的核心生物钟基因的表达以及多能性标记Sox2。因此这些结果暗示小说的监管Sox2基因可能在生理和机械控制不同的干细胞类型。

生物钟在哺乳动物中已被广泛证明有一个关键的管理角色在不同的组织系统,包括肌肉骨骼组织。因此,至关重要的这样的时间规定是考虑当任何细胞/组织结构优化和集成到身体,如果一个人希望成功的组织工程策略。例如,以往的经验显示,生理调节显著参与建立骨整合在维生素D的监管。在这里,KEGG通路分析显示潜在的协会昼夜节律与移植骨整合的成功(27]。生理节奏也已被证明能够调节共存的表皮干细胞在时钟的相反的阶段,容易激活不同的外部刺激(5]。此外,研究表明,表皮干细胞不同反应扩散和差异像线索在24小时周期(6),在组织工程可能产生巨大影响,一个细胞的状态可能会支持鼓励成功植入集成。

总的来说,这些发现表明,吸入干细胞时钟机制通过使用每一个独特的干细胞最优同步方法提供了一个深刻的干细胞可以启动响应所需的组织工程应用。有鉴于此,机械夹带的人类成体干细胞允许非侵入性手段生物钟在人类成体干细胞可以指导和控制而保持适当的时钟计时,这样就避免了需要额外的外源性化学或热刺激。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢的支持分析生物科学组皇家化学学会的,MRC-ARUK综合研究中心在肌肉骨骼老化(Vanja Pekovic-Vaughan和约翰·a·亨特),并欢迎信托机构战略基金奖学金(Vanja Pekovic-Vaughan)。此外,作者感谢BioEden有限牙髓干细胞的慷慨的捐赠用于这项研究。这些干细胞生成使用相同的技术用于处理他们的客户的样品。

补充材料

引用

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