间充质干细胞减弱Cisplatin-Induced iNOS-Dependent方式肾毒性

文摘

间充质干细胞(msc),由于其免疫调节特性,利用免疫介导性疾病的治疗。我们使用顺铂肾毒性的小鼠模型探讨msc对免疫细胞的影响参与这种疾病的发病机制。腹腔内应用msc明显减毒顺铂肾毒性,减少炎性细胞因子TNF -αIL-17,增加抗炎il - 10、il - 6在血清一氧化氮(NO)和犬尿氨酸cisplatin-treated的老鼠。MSC治疗显著减大量白细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc),中性粒细胞,CD4 + T辅助(Th),和CD8 +细胞毒性T淋巴细胞(ctl)受损的肾脏和减毒renal-infiltrated DCs的能力,CD4 +, CD8 + ctl产生TNF -α和IL-17。类似的效果观察腹腔内注射后MSC-conditioned介质(MSC-CM)表明msc以旁分泌的方式施加有益的影响。抑制诱导一氧化氮合酶(间接宾语)MSC-CM与数量的增加导致TNF -α第DCs和IL-17-producing ctl,减少数量的IL-10-producing耐受性DCs和监管CD4 + FoxP3 + T细胞,并完全MSC-CM renoprotective减弱的影响。总之,msc, iNOS-dependent方式,减毒炎症减少顺铂肾毒性的涌入和免疫细胞的能力,尤其是DCs和T淋巴细胞,产生炎性细胞因子。

1。介绍

急性肾损伤,表现为肾小管细胞损害和肾脏功能障碍,可能是发达国家由于药物引起的毒性(1]。作为最有效的化学疗法之一,顺铂已被用于广泛的实体肿瘤的治疗,包括肺癌、卵巢、膀胱、胃、睾丸癌(2]。然而,临床应用顺铂是有限的,因为肾毒性,严重的副作用,发生在近30%的cisplatin-treated患者(3]。顺铂,可以代谢有效nephrotoxin-reactive硫醇,选择性地积累在近端小管细胞更高程度的血清浓度和五倍赔偿近端小管上皮细胞,导致肾毒性(3]。急性cisplatin-induced肾毒性与一个健壮的炎症反应之后,免疫细胞的渗透,促进肾组织损伤的进一步进展导致肾功能衰竭的发展(4,5]。

在许多cisplatin-treated患者,肾损伤,通过增加血清肌酐和血尿素氮(BUN)水平和肾血流量减少,低镁症,低钙血症,蛋白尿3),是不可逆转的,需要替换,减少或中止顺铂治疗。因为目前没有兼容,方便与类似的强有力的化学治疗剂,顺铂抗癌功效,不能抛弃了顺铂的临床使用。因此,迫切需求存在衰减的研究人员开发新辅助治疗cisplatin-induced肾毒性和炎症。

间充质干细胞(msc)是成年人,self-renewable,多功能细胞,因其分化和免疫调节特性、临床前和临床研究中使用的退行性和免疫介导性疾病(6- - - - - -8]。

最近,MSC-based治疗方法的衰减cisplatin-induced肾毒性进行了广泛的调查,并提出了几种可能的机制。Ashour等人提出来的。9),renoprotective腹腔内注射msc的影响是基于MSC-mediated减少氧化应激。显著降低肾组织丙二醛,增加谷胱甘肽水平降低,超氧化物歧化酶活性也注意到在cisplatin-treated老鼠收到msc (9]。

此外,金正日et al。10和姚明et al。11)表明,msc显著改善cisplatin-induced肾功能衰竭以旁分泌和p53-dependent方式通过抑制细胞凋亡。缓解肾损伤是伴随着减少环氧酶cox - 2的表达和肿瘤坏死因子-α(TNF -α),炎症反应的重要中介由顺铂引起的,表明MSC减毒cisplatin-induced肾毒性,调节肾脏炎症。符合这些发现,公园等。12)最近表明,早但不晚msc治疗变弱cisplatin-induced肾毒性和调节炎症的肾脏受伤。

虽然在这些研究资料(9- - - - - -12)清楚地表明,MSC能够保护cisplatin-induced的肾毒性,MSC的影响免疫细胞介导机制诱导和进展cisplatin-caused肾脏炎症仍然未知。我们的研究的目的是探讨细胞机制msc对肾功能的保护作用,以显示新的通路,可用于调制MSC-dependent保护cisplatin-induced肾毒性。

在这里,我们表明,单一的msc及腹腔内注射MSC-conditioned介质(MSC-CM)减少大量免疫细胞(树突状细胞(dc)、巨噬细胞、中性粒细胞效应CD4 + T辅助,和细胞毒性CD8 +细胞毒性T淋巴细胞淋巴细胞)到cisplatin-injured肾脏和肾毒性减弱他们的生产能力和炎性细胞因子(TNF -α和白介素- 17 (IL))在诱导一氧化氮合酶-(间接宾语)相关的方式。

2。材料和方法

2.1。细胞

老鼠骨骨髓来源msc买来Gibco(目录号码s1502 - 100)。修改完成杜尔贝科的鹰的细胞培养介质(DMEM)包含heat-inactivated 10%胎牛血清的边后卫,100国际单位/毫升青霉素G和100μg / mL链霉素(Sigma-Aldrich,慕尼黑,德国),37°C的5%的股份有限公司₂孵化器。msc在通道4使用整个实验。

2.2。代MSC-Conditioned介质(MSC-CM)

msc被播种密度的10000细胞/厘米²。为了收集MSC-CM, msc第一次培养血清完全培养基和孵化37°C在潮湿的气氛中有5%的公司₂。80%的融合,细胞被洗两次1 x磷酸盐(PBS,英杰公司),和介质改为无血清培养基。48 h后,中收集,离心机在4°C 13000×g 10分钟,并存储在−80°C到使用(13]。

2.3。药物抑制伊诺和吲哚胺2,3-Dioxygenase (IDO)

阻止伊诺活动,mMSCs或hMSCs培养48 h的1毫米伊诺的抑制剂,L-N^G柠檬酸单甲精氨酸(L-NMMA Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)(14]。

msc在培养基培养48 h 1-methyltryptophan包含1毫米,(1-MT Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州),IDO酶活性的抑制剂(15]。

2.4。msc在体外激活

体外激活,msc培养48 h的10 ng / mL重组小鼠肿瘤坏死因子-α(美国圣地亚哥Ebioscience)。在上层的TNF -伊多活动α犬尿氨酸激活msc是由分光光度测量(下一节描述2.11),进气阀打开我的表达是由实时rt - pcr,所述下一节2.12。

2.5。动物

6-8-week-old雄性BALB / c小鼠随机分为实验组和对照组( 老鼠/组)。所有动物受到人类保健和所有的实验都通过,按照指南进行动物伦理委员会的医学科学学院Kragujevac大学的塞尔维亚。老鼠住在温度控制的环境中与12小时光暗周期和管理标准实验室食物和水随意。

2.6。诱导msc和MSC-CM顺铂肾毒性和应用

顺铂肾毒性是由顺铂腹腔注射诱导(16毫克/公斤体重)(16]。一小时后注射顺铂,MSC-treated小鼠腹腔内收到5×10⁵msc, 200年resuspendedμL的盐水,而MSC-CM-treated小鼠腹腔内收到200μL MSC-CM。只老鼠被随机分配接受顺铂、顺铂和msc、顺铂和MSC-CM、msc、MSC-CM或盐水只老鼠(控制)。后小鼠安乐死(顺铂治疗后72 h),这两个肾脏切除和血液样本来自于下腔静脉,如前所述[16]。

2.7。测定面包和肌酐水平

血清水平的包和肌酐测定评估肾功能。血液采集后,血清水平的这些毒性标记测量立即使用分析工具和血液化学分析仪、描述(17]。

2.8。组织病理学分析

孤立肾被固定在10%福尔马林和嵌入在石蜡,和连续5μm组织部分是安装在幻灯片。部分被苏木精和伊红染色())和低功耗(100 x)光学显微镜下检查——(德国蔡司Axioskop 40,耶拿)配备数码相机。组织学部分中使用的半定量的尺度,用来评估急性肾脏injury-associated管损伤(管状上皮细胞损失,坏死,管状上皮简化,intratubular碎片,和铸件)的病理学家不知道实验团体(使用> 5随机领域/节,4 - 5老鼠/组)。小管损伤分数(介于0和4)是基于小管影响的百分比如下:0≤10%,1 = 10 - 25%,2 = 26 - 50%,3 = 51 - 75%和4≥75%,如前所述18]。

周期性acid-Schiff (PAS)染色进行石蜡包埋肾组织部分使用不是工具包(Sigma-Aldrich、圣路易斯、钼)根据制造商的协议。

2.9。隔离Renal-Infiltrated免疫细胞

肾脏是用无菌磷酸盐(PBS)和放置在培养皿DMEM补充10%的边后卫。肾脏被切成小块(1 - 2毫米尺寸)使用常规的金属成型叶片并放置到胶原酶解30 - 45分钟的孵化器在37°C。这些细胞被过滤70μm细胞尼龙滤网清洁50毫升锥形管。然后,细胞颗粒状,使离心10分钟400×g,在4°C。颗粒在4毫升的40% Percoll resuspended溶液,轻轻覆盖在4毫升的80% Percoll解决方案。轻微的白色半透明层细胞收集接口的两个Percoll阶段在1500×g离心后30分钟,在室温下。这些细胞被收集和颗粒状,使离心10分钟400×g,在4°C。颗粒是resuspended 1毫升的DMEM和细胞的总数是由血细胞计数器使用台盼蓝排斥(19]。

2.10。流式细胞术分析细胞内染色Renal-Infiltrated免疫细胞

Renal-infiltrated免疫细胞筛选各种细胞表面和细胞内标记流式细胞术。简单地说,1×10⁶细胞被孵化与anti-mouse CD45 F4/80, CD4, CD8, CD11c, CD11b, Ly6G,与单克隆抗体结合异硫氰酸荧光素(FITC),藻红蛋白(PE), peridinin叶绿素蛋白质(PerCP),或allophycocyanin (APC)(都来自BD生物科学,圣何塞、钙、美国)遵循制造商的指示。免疫细胞来源于肾脏则同时染色的细胞内内容TNF -αIL-17, il - 10和forkhead盒P3 (FoxP3)通过使用固定/透化作用装备和anti-mouse单克隆抗体结合与异硫氰酸荧光素(FITC),藻红蛋白(PE), peridinin叶绿素蛋白质(PerCP)和allophycocyanin (APC) (BD生物科学)。细胞内细胞因子染色,细胞被刺激50 ng / mL PMA和500 ng / mL ionomycin 5 h,和GolgiStop (BD生物科学)补充道。细胞被固定在Cytofix / Cytoperm,洋溢着0.1%皂素,染上荧光Abs。流仪分析了BD生物科学FACSCalibur和使用流动分析软件分析程序。

2.11。细胞因子和生长因子的测量

水平的肿瘤坏死因子-αIL-17,血清il - 10、il - 6在鼠标使用ELISA试剂盒测定特定的老鼠细胞因子(研发系统,明尼阿波利斯,美国)根据制造商的指示。

血清一氧化氮(NO)浓度测定在格里斯试剂而活动血清TNF -浮层α刺激msc是被罩以来由犬尿氨酸的光度测量催化色氨酸的代谢犬尿氨酸(20.]。

2.12。基因的表达Cisplatin-Injured肾脏和TNF -α激活msc

总RNA提取冷冻老鼠肾脏(测定il - 6和TNF -α从培养的msc)或(无我)测定使用试剂盒(表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的指示。总RNA (2μg)是使用高容量反向转录cDNA cDNA逆转录工具包(应用生物系统公司,培育城市,加利福尼亚,美国)。执行中存在使用权力SYBR MasterMix(应用生物系统公司)和il - 6 miRNA-specific底漆,TNF -α,不,我,β肌动蛋白作为看家基因。qPCR反应发起了一个10分钟的孵化时间在95°C紧随其后40 95°C的周期15秒和60°C为60秒Mastercycler ep realplex(埃普多夫,汉堡,德国)。相关基因的表达是根据公式计算,在那里C_t是感兴趣的基因的循环阈值和C_tactin管家基因的循环阈值(β肌动蛋白)[21]。

2.13。统计分析

使用学生的结果进行了分析t以及。所有的数据都在本研究中被表示为平均值±标准平均误差(SEM)。的值 被视为具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。腹腔内应用msc明显变弱Cisplatin-Induced急性肾损伤

顺铂引起明显的肾功能不全由生化分析和组织学检查。

如图1(一)、顺铂管理了4倍增加面包和肌酐控制老鼠相比,表明严重肾毒性的感应。单身,腹腔内注射的msc没有改变血清水平的包子和肌酐cisplatin-untreated老鼠。然而,msc显著下调血清水平的包( )和肌酸酐( )cisplatin-treated动物显示仁慈的影响msc治疗cisplatin-induced肾毒性。

如图1 (c)、肾脏得到控制和MSC-only动物组织学正常的对待。部分肾小管细胞坏死与citoplasmatic空泡的转换的管状上皮水肿的变性和温和的间质水肿与离散的焦点在cisplatin-treated老鼠被发现单核细胞浸润。相反,顺铂+ MSC-treated显示显著减少小鼠肾损伤减少炎症细胞的浸润(图紧随其后1 (c))。组织学得分也显示增加管损伤分数顺铂治疗后,由msc(图明显逆转1 (b))。

按照生化和组织学分析,msc并不影响血清细胞因子水平cisplatin-untreated老鼠表明其浓度的差异,与顺铂+ MSC-treated cisplatin-treated老鼠(图1 (d))的结果MSC-mediated抑制免疫细胞产生这些介质。其肾毒性的浓度和炎性细胞因子TNF -α( )和IL-17 ( )的浓度显著降低,而抗炎il - 10 ( )和il - 6 ( )都明显高于血清cisplatin-treated老鼠收到msc(图1 (d))。符合这些发现,TNF的表达α显著降低( ),而il - 6的表达明显高于( 肾脏的顺铂+ MSC-treated老鼠相比,动物只接受顺铂(图1 (g))。免疫抑制犬尿氨酸( ,图1 (e))和( ,图1 (f))也被升高的血清中顺铂+ MSC-treated老鼠表明被罩的生产,没有通过msc可能是重要的影响。

3.2。涌入其肾毒性的免疫细胞及其生产能力和炎性细胞因子显著减弱了msc

评估的作用msc肾脏炎性细胞积累的顺铂注射后,不同人群的renal-infiltrated免疫细胞通过流式细胞术分析。msc没有改变的总数renal-infiltrated cisplatin-untreated动物的免疫细胞。然而,cisplatin-treated老鼠,涌入其肾毒性的免疫细胞及其生产能力和炎性细胞因子显著减毒msc。如图2(一个)72小时后注射顺铂,积累CD45 +白细胞更明显( )肾脏从顺铂+ MSC-treated cisplatin-only-treated相比,老鼠的动物。

肾脏的细胞组成(图2 (b))表明,MSC治疗显著减毒的涌入CD45 + CD11b +髓细胞( )、CD45 + F4/80 +巨噬细胞( )、CD45 + CD11c + DCs ( )、CD45 + CD11b + Ly6G +中性粒细胞( )、CD45 + CD4 +辅助T细胞( )、CD45 + CD8 +细胞毒性T细胞(ctl) ( )。

此外,msc减弱DCs的能力,CD4 + T辅助,CD8 + ctl在cisplatin-injured肾脏产生炎性细胞因子。细胞内染色显示显著降低TNF -的数量α第DCs(图2 (c), ),干扰素-γ- - - IL-17-producing CD4 + T细胞(图2 (d), )和干扰素-γ- - - IL-17-producing CD8 + ctl(图2 (e), )的肾脏cisplatin-injured老鼠收到msc cisplatin-only-treated动物相比。

3.3。以旁分泌的方式msc减弱Cisplatin-Induced肾毒性

探讨可溶性因子是否负责MSC-mediated衰减cisplatin-induced肾毒性,cisplatin-treated小鼠腹腔内收到MSC-CM。

生化分析表明,MSC-CM没有改变cisplatin-untreated小鼠的血清水平的包和肌酐明显但设法减少面包和肌酐cisplatin-treated动物(图3(一个))。

组织学分析显示减少坏死、空泡形成和脱落的肾小管上皮细胞的顺铂+ MSC-CM-treated老鼠相比,动物只接受顺铂(图3 (c))。组织学得分证实cisplatin-treated显著减少急性肾损伤小鼠接受MSC-CM(图3 (b))。

如数据所示3 (d),3 (e),3 (f)MSC-CM治疗显著下调血清水平的肾毒性和炎症TNF -α( )和IL-17 ( )和增加血清免疫抑制il - 10的水平( )、il - 6 ( )、犬尿氨酸( )和( )cisplatin-treated老鼠。因此,MSC-CM显著下调表达的肿瘤坏死因子-α( )和il - 6的表达增加( 肾脏cisplatin-treated动物(图)3 (g))。

3.4。MSC-CM减少炎性细胞积累Cisplatin-Treated小鼠的肾脏

应用MSC-CM并不影响流入renal-infiltrated cisplatin-untreated动物免疫细胞(数字3 (h)和4(一),4 (b),4 (c))。然而,类似注射后观察msc, MSC-CM设法显著降低CD45 +白细胞(的存在 )、CD45 + CD11b +髓细胞( )、CD45 + F4/80 +巨噬细胞( )、CD45 + CD11c + DCs ( )、CD45 + CD11b + Ly6G +中性粒细胞( )、CD45 + CD4 +辅助T细胞( )和CD45 + CD8 + ctl ( (图)的肾脏cisplatin-injured老鼠3 (g))。

由细胞内染色,cisplatin-only-treated老鼠相比,MSC-CM治疗显著增加免疫抑制IL-10-producing DCs的总数( ,图4(一)左面板)和调节性T细胞( ,图4(一),右面板)和减毒的总数炎症TNF -α第DCs ( ,图4 (b)),干扰素-γ- - - IL-17-producing CD8 +细胞毒性T细胞( ,图4 (c))。

3.5。MSC-CM保护的能力从Cisplatin-Induced急性肾损伤是完全废除伊诺抑制剂

提出了各种介质负责msc的免疫抑制效应,包括不,被罩,TGF -βHGF,铂族元素₂和il - 1022- - - - - -24]。被罩在免疫调节中起着关键作用,由人类msc在小鼠msc主要使用iNOS-dependent抑制免疫反应(25]。因此,我们调查的影响间接宾语或被罩抑制cisplatin-induced MSC-CM-dependent衰减的肾毒性。

因为它是图所示5伊诺的封锁,L-NMMA几乎完全消失的renoprotective影响MSC-CM由血清水平的包和肌酐增加( ,图5(一个))和组织学分析(数据5 (b)和5 (c))。

几乎正常形态保存完好的刷状缘膜和没有注意到肾小管上皮细胞的损失在顺铂+ MSC-CM-treated动物。相反,顺铂+ MSC-CM + L-NMMA-treated肾脏表现出严重的组织学变化,包括肾小管坏死和扩张(图5 (c))。这些发现证实了组织学得分(图5 (b))。

同样注意到生化和组织学分析,伊诺的封锁与血清肿瘤坏死因子水平升高α( ,图5 (d))和降低血清免疫抑制il - 10的浓度( ,图5 (d)在顺铂+ MSC-CM + L-NMMA-treated小鼠的肾脏。更高的炎症TNF -α第DCs ( ,图5 (e)左面板),随后增加IL-17-producing ctl的数量( ,图5 (e)右面板),注意到肾脏的顺铂+ MSC-CM + L-NMMA-treated老鼠相比,顺铂+ MSC-CM-treated动物(图4(f))。有趣的是,伊诺抑制的能力也变弱MSC-CM影响监管流入细胞受伤的肾脏。有明显降低的耐受性IL-10-producing DCs ( ,图5 (f)左面板)和IL-10-producing调节性T细胞( ,图5 (f)肾脏,对面板)的顺铂+ MSC-CM + L-NMMA-treated老鼠相比,顺铂+ MSC-CM-treated动物。

生化和组织学分析表明,与L-NMMA相比,被罩抑制剂(1-MT)不能够完全废除renoprotective MSC-CM(数据的影响5(一个),5 (b),5 (c))。显著差异并不是观察血清肌酐水平和面包(图5(一个))和组织学得分(图5 (b))与顺铂+ MSC-CM -顺铂+ MSC-CM + 1-MT-treated动物。

按照生化和组织学分析获得的结果,细胞构成的cisplatin-injured肾脏显示1-MT只影响MSC-CM-mediated抑制TNF -α生产在DCs(图5 (e)),没有明显改变MSC-CM-dependent调制的ctl和监管细胞(图5 (f))。

3.6。伊诺的激活TNF -很重要α刺激msc

Nonstimulated msc表达伊诺和被罩但他们表达显著增加后激活TNF - mscα(图6(一))。为了评估MSC-derived没有之间的相互作用和被罩,犬尿氨酸浓度测定的上层清液TNF -α激活msc,培养有或没有伊诺抑制剂,L-NMMA。如图6 (b),L-NMMA显著减毒犬尿氨酸TNF -的浓度α影射msc指示伊诺的重要性在TNF -伊多活动α刺激msc。

4所示。讨论

在这里,我们提供的证据表明,腹腔内应用msc和MSC-CM变弱cisplatin-induced肾毒性抑制iNOS-dependent方式渗透和激活免疫细胞。

Cisplatin-induced肾损伤是紧随其后的是增加释放炎症TNF -α。应对这些炎性细胞因子、内皮细胞在肾脏受伤增加selectins和趋化因子的表达参与白细胞贩卖,产生大量的炎症细胞在肾脏受伤26]。msc与内皮细胞相互作用,通过产生il - 6,表达下调的内皮细胞粘附分子的表达,减少白细胞招募到受损的肾脏(27]。因此,降低TNF的表达α在肾脏、减毒血清TNF水平α,增加il - 6的表达在肾组织伴随着血清il - 6的浓度升高,发现顺铂+ MSC-treated老鼠(数据1 (d)和1 (g)),伴随着减少白细胞的浸润肾脏受伤的动物(图2(一个))。

renal-infiltrated免疫细胞之一,MSC治疗显著地减弱大量中性粒细胞,DCs、巨噬细胞、CD4 +辅助和CD8 + ctl(图2 (b))cisplatin-injured小鼠的肾脏。

据报道,中性粒细胞浸润和加剧cisplatin-induced急性肾损伤24至48 h后顺铂。尽管嗜中性粒细胞浸润的程度正好与急性肾损伤的严重程度和肾脏功能障碍,他们的消耗没有影响的程度cisplatin-induced肾毒性(27]。最近证明了Tadagavadi et al。27],cisplatin-mediated急性肾损伤不是由中性粒细胞,而DCs中扮演最重要的角色的刺激或抑制炎症cisplatin-induced肾功能衰竭。肾DCs与能够诱导免疫或免疫哨兵宽容在急性肾损伤。il - 10,主要由肾DCs、变弱顺铂肾毒性和保护从cisplatin-mediated急性肾损伤28]。此外,IL-10-producing枯竭和耐受性renal-infiltrated DCs cisplatin-induced的结果与加重肾毒性(28,29日]。

众所周知,msc可能抑制dc的成熟IL-10-dependent方式,促进生成的耐受性,免疫抑制表型(30.]。在炎症微环境,DCs暴露于tnf(由炎症细胞)和il - 10(由msc)未能上调成熟标记(31日]。这些不成熟的DCs强烈阻碍的能力产生TNF -α和促进炎症32]。

符合这些观察,血清TNF的表达下调α和血清il - 10的浓度增加,注意到在顺铂+ MSC-treated老鼠(图1 (d)),是伴随着显著降低许多renal-infiltrated TNF -α第DCs(图2 (c))。

msc还能抑制DCs迁移到引流淋巴结发炎组织显著影响抗原的能力表示CD4 + T辅助(Th)细胞和cross-presentation CD8 + T细胞(33,34)产生的减毒代和激活干扰素-γ第Th1和IL-17-producing Th17细胞和ctl [35]。因此,我们注意到减少肾的渗透干扰素-γ——IL-17-producing Th1和Th17细胞(图2 (d))和ctl(图2 (e)),伴随着IL-17血清水平降低(图1 (d)在顺铂+ MSC-treated老鼠cisplatin-only-treated动物相比。IL-17的重要的促炎作用对顺铂诱导的肾毒性被证明通过观察从cisplatin-induced保护功能和组织学IL-17和ROR肾损伤γt-deficient老鼠和老鼠对待anti-IL-17抗体(36]。

归航的msc肾损伤的网站和他们的集成和分化成管状细胞是罕见或缺席在急性肾损伤的动物模型37]。因此,人们普遍认为msc以旁分泌的方式施加有益的影响,通过生长因子和细胞因子的产生,抑制氧化应激、细胞凋亡、炎症受损肾脏(22,23,25,38,39]。符合这些发现,我们这里显示MSC-CM也变弱cisplatin-induced肾毒性(图3)以类似的方式,因为它是注射后观察msc(图1)。

被罩和没有重要MSC-mediated抑制免疫反应的急性炎症(25,40]。被罩促进退化成犬尿氨酸和色氨酸有毒代谢物(喹啉酸和3-hydroxy-anthranillic酸),抑制T细胞的增殖或诱导细胞凋亡。没有抑制磷酸化信号传感器和催化剂的transcription-5 (Stat5) T细胞,导致细胞循环逮捕[22,23,25]。在炎症条件下,鼠标msc伊诺的增加表达(38]。激活TNF - mscα与表达的增加导致伊诺和语言(图6(一))MSC-mediated免疫抑制的相互作用是重要的40]。以后,在炎性细胞因子的存在,没有被罩活动增加(39),我们假设cisplatin-induced TNF -炎症增加产量α在DCs(图2 (c))产生的一代和激活干扰素,增加γ第CD4 +和CD8 + ctl Th1细胞(数字2 (d)和2 (e)骨髓间充质表达),引发了伊诺和生产。MSC-derived没有被罩活动增加,MSC-mediated免疫抑制和衰减了cisplatin-induced细胞毒性和炎症(图6 (c))。符合这些观察血清免疫抑制水平没有增加,犬尿氨酸被罩活动(产品)和il - 10(数据3 (d),3 (e),3 (f))伴随着减少肾脏的免疫细胞的渗透cisplatin-treated老鼠收到MSC-CM(图3 (h)上层清液)和减毒犬尿氨酸浓度的TNF -α刺激培养的msc伊诺抑制剂的存在,L-NMMA(图6 (b))。伊诺的封锁L-NMMA导致增加渗透和激活炎症DCs,效应辅助T细胞,和ctl,涌入的耐受性下降DCs和调节性T细胞,并几乎完全MSC-CM renoprotective减弱的影响(图5)。

总之,我们的研究提供了证据表明,msc,在旁分泌,iNOS-dependent方式,减弱炎症cisplatin-induced肾毒性通过减少流入和免疫细胞的能力,尤其是DCs和T淋巴细胞,产生炎性细胞因子。这些发现可能有助于开发新的,MSC-based治疗方法的衰减cisplatin-induced肾毒性。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

本研究支持的“科学”启动授予由菲利普·莫里斯和领导力发展中心,瑞士国家科学基金会项目(范围IZ73Z0_152454/1),塞尔维亚科学(ON175069和ON175103),大学医学科学和教员Kragujevac (MP01/14和MP01/12)。

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