mri评估Intralesional交付骨骨髓来源间充质干细胞在屈肌腱炎的典范

文摘

超声引导下intralesional注射间充质干细胞(msc)作为细胞的基准交付在肌腱炎。本研究的主要目的是探讨msc的intralesional注射后的细胞分布。单边表面数字屈肌肌腱(SDFT)病变中创建的前肢六马和注射10×10⁶msc与超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记(SPIOs)超声指导下。化验进行确认细胞生存能力没有明显变化,增殖、迁移,或由于存在SPIOs trilineage分化。上映出1.5特斯拉四肢临床磁共振扫描仪后期注入前后确定肌腱炎的程度和检测SPIO msc。集群信号空间的标记细胞可见6/6科目。合并区域的信号空隙被广泛地出现在peritendinous组织。虽然先前的报道已经确定,局部损伤保留细胞注射部位出现的小半径之内,我们的研究显示比预期更大的离域和相对较少的细胞保留在胶原相比肌腱周围的筋膜。需要进一步的工作,如果这是一个现实在活的有机体内并确定定向intralesional交付msc目前认为是至关重要的。

1。介绍

运动的发病率,过度使用损伤继续上升随着休闲和竞技体育的普及人类和兽医的病人。这时,50岁以上的美国临床试验调查的影响干细胞生物治疗包括富含血小板血浆或肌腱或韧带损伤是活跃或最近在人类(ClinicalTrials.gov)完成。全面评估病变的马和人类的运动员表现出了惊人的相似之处和得出结论,马为转化疗法提供了一个健壮的临床前模型(1]。间充质干细胞(msc)的使用肌腱治疗马已经显示出令人鼓舞的结果,包括上级组织的组织、成分、和力学比未经处理的控制(2- - - - - -6]。直接,intralesional注入msc超声指导下举行的基准msc治疗肌腱炎(3,4,6- - - - - -8),虽然对这种交付技术的功效。

电流跟踪研究严重依赖后期组织学验证(9- - - - - -11)或利用低分辨率成像模式如核探讨[12,13)和低场磁共振成像(14,15]。这些研究报告低细胞保留和生存在肌腱注入msc、报告< 25%细胞完全保留后第一个24小时12,13),少于5%的原始丸10天后,经组织学证实[11]。然而,对离散本地化后的细胞注入或迁移到受伤组织的能力。

这项研究代表努力的一部分建立肌腱损伤的模型,可以搭配纳米细胞跟踪方法跟踪msc在超声引导下注入受损组织(16]。超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIOs)使用MRI图像和监控细胞的能力。SPIOs在低浓度和生物可降解和无毒不发射电离代理和很容易附着细胞内源性的文化(17- - - - - -20.]。这时,SPIOs安全被实现为一个细胞内标签肝脏干细胞研究[21,心22),脊髓和大脑19,23),和关节软骨24)研究空间分布和迁移后植入使用MRI在时间从几周,几个月(18,25- - - - - -27]。

本研究的主要目的是验证的安全标签马BM-derived msc SPIOs和调查的直接分配细胞超声引导后,intralesional注入msc医源性的建立模型,在马屈肌腱损伤(28,29日]。这个模型被选中来反映环境与急性跟腱损伤,并提供可再生的相关领域的组织对比MRI上可以用来增强intralesional SPIOs检测。本研究的假设是(我)将改变马BM-MSCs SPIO标记,(ii) SPIOs标记msc可以追踪后立即注射的屈肌腱炎模型,和(3)msc将在肌腱损伤后超声引导局部注射。这项研究代表了第一个努力跟踪肌腱损伤的细胞一个医源性模型高,临床扫描仪可能翻译成纵向研究实验和自然发生的疾病模型。

2。材料和方法

2.1。在体外验证

所有实验进行了一式三份使用低温贮藏,来源于马的骨骼间充质干细胞从3马通过以下6。细胞冻存10% (v / v) DMSO在细胞培养基和解冻1分钟37°C水浴。细胞被稀释在10毫升MSC培养基(低葡萄糖杜尔贝科修改鹰介质(DMEM), 10%胎牛血清,1%的谷酰胺,50 U / mL青霉素,和50μ镀g / mL链霉素)、离心机和文化在10000个细胞/厘米²。细胞被维持在37°C和5%的公司₂在MSC培养基。与25 confluency 70%, msc治疗μg / mL Molday离子C6Amine (Biopal, Inc .)悬浮在0.1 mL /厘米²MSC培养基为4到16个小时,如上所述。未经处理的细胞被用作控制。治疗后,细胞使胰蛋白酶化、离心机和手工计算用于以下分析。

2.1.1。SPIO治疗后细胞生存能力

细胞生存能力,细胞被贴上SPIOs如上所述4或16小时。细胞被收集和评估后立即治疗,治疗后24小时内完成。台盼蓝(Cellgro®)排除试验进行了可行性根据制造商的协议。结果分析了单向方差分析(方差分析)和Dunnett多个比较测试使用未经处理的细胞的控制。Bonferroni多重比较的测试是用来比较细胞治疗后细胞复苏的24小时后。

2.1.2。铁含量和细胞增殖

定性评估,细胞与4%多聚甲醛固定冰10分钟,10分钟孵化与普鲁士蓝试剂(Biopal, Inc .)和普鲁士Blue-positive SPIOs被证实与光学显微镜的细胞内存款。细胞被收获,定量评估计算,在稀释水硝酸消化分析电感耦合等离子体质谱法与VG Plasmaquad 3 (VG工具)来确定铁含量。测量扩散,细胞被镀在平底,96孔板和CyQuant®(生命技术)分析根据制造商的微型板块协议执行和分析(0)24、48和72小时。结果分析了双向方差分析使用Dunnett多个对比测试和未经处理的细胞的控制。

2.1.3。Trilineage分化

成骨的和脂肪形成的分化实验,SPIO-labeled细胞被镀在平底,96孔板的密度28000细胞/厘米²在MSC培养基和培养24小时。新鲜的msc(未分化)作为控制实验。成骨诱导培养补充了Hyclone®AdvanceSTEM™成骨的28天中每2 - 3天。成骨分化决定使用钙Liquicolor®测试(Stanbio)根据制造商的协议。钙与0.6 N从差异化的文化中提取盐酸一夜之间在4°C。上层清液结合在一个比1:20同等比例的混合物的颜色和基础试剂钙Liquicolor测试和阅读在盘子里读者在550 nm (Biotek协同4)。

脂肪形成的诱导文化补充了Hyclone AdvanceSTEM脂肪形成的媒介14天,然后切换到一个脂肪形成的中修改从维达尔et al。(2006)组成的DMEM, 10%的边后卫,5%兔血清,0.5μ60 M地塞米松,μ吲哚美辛,0.5毫米IBMX 1μ50 M胰岛素,U /毫升青霉素,50μg / mL链霉素为剩下的14天中改变每2 - 3天(30.]。脂肪形成的细胞用4%多聚甲醛固定10分钟冰和沾油红O识别脂质沉积。

chondrogenic分化,100000细胞/镀在锥形底,96 -孔板离心10分钟,补充Hyclone AdvanceSTEM chondrogenic 28天中每2 - 3天。Chondrogenic丸与甲醇固定,阿尔新蓝沾0.2%盐酸0.1一夜之间,提取0.1毫升6 M盐酸胍/ 2小时,读者和阅读在一盘650海里(Biotek协同4)。

2.1.4。划痕试验

修改的协议概述了划痕试验梁等。31日]。细胞被镀在confluency 24-well盘子。p200吸管的小费是用来抓一条线穿过细胞。光学显微镜照片拍摄在0 8 16和24小时。图像分析是使用ImageJ执行。距离测量之间的像素数量3套细胞/好/时间点。结果分析与双向方差分析重复测量分析和Bonferroni多个比较测试0.05的显著性水平。

2.1.5节讨论。炎症调制和细胞因子的生产

马外周血单核细胞(PBMCs)通过收集60毫升的外周血从健康的马变成一个注射器与乙二胺四乙酸(EDTA)作为抗凝剂。血液分层到histopaque - 1077和离心机在20°C为30分钟,和PBMC层被愿望移除。细胞被洗两次磷酸缓冲盐(PBS) resuspended单核细胞媒体(rpmi - 1641 10%马血清,50 U / mL青霉素,和50μ在4×10 g / mL链霉素)⁶/毫升,镀。PBMCs孵化了2小时,之后不依从细胞被冲洗掉,附着PBMCs收获了以下分析。

评估骨髓间充质调节炎症反应的能力,100000年msc被镀在12-well transwell盘子和允许坚持大约12个小时。这时,MSC媒体兑换1.5毫升单核细胞/。接下来,400000单核细胞被添加到每个上transwell 0.5毫升单核细胞媒体补充50 ng / mL大肠杆菌有限合伙人可以孵化,一夜之间16小时。单核细胞与LPS刺激被用作控制。单核细胞没有有限合伙人不报道的结果。上层清液收集生产ELISA和用于分析的白细胞介素- 10”(il - 10, Abcam®)和前列腺素E₂(铂族元素₂生命科学,恩佐®)根据制造商的协议。肿瘤坏死因子- ELISAα(肿瘤坏死因子-α)是由太阳表现如前所述et al。32]。ELISA板被涂上一层anti-equine TNF -α多克隆抗体一夜之间,洗,孵化样本。板块再次清洗,孵化anti-equine TNF -αbiotin-labeled多克隆抗体,水洗,孵化avidin-horseradish过氧化物酶,再洗,孵化与过氧化物酶底物(abt®),读者和阅读在一盘405海里(Biotek协同4)。

2.2。核磁共振研究

使用西门子核磁共振进行交响乐与蒂姆技术1.5 T MRI与B17软件单元。所有与肢体成像进行集中在膝盖15-channel线圈与接收机带宽130千赫。质子密度(PD)加权涡轮旋转回声(谢霆锋),真正的快速成像与稳态自由旋进(TRUFI)序列,,多次回声旋转回声(MSE) t2加权序列获得细胞幻影和所有科目(表1)。分析与Osirix DICOM软件和ImageJ。

2.2.1。在体外幽灵的研究

初步研究了建立核磁共振检测的敏感性和限制SPIO-labeled msc。细胞幻影被暂停准备0.01,0.1,0.25,0.5,1×10⁶细胞在200年μL 1%的琼脂井的96孔板。标记细胞的平均信号强度(MSI)测量使用8.44毫米的圆形ROI²连续4日片从TRUFI获得图像。信噪比(信噪比)计算标准差除以MSI的背景噪音。第二项研究进行正常肌腱。组织收集从1马安乐死的目的与本研究无关。开始检查,1、5、10和20×10⁶细胞被连续注入SDFT和扫描如上所述。

2.2.2。在活的有机体内核磁共振分析Intralesional细胞注入

执行所有的工作在这个研究是按照乔治亚大学制度动物保健和使用委员会的指导方针。所有的马都将安乐死的原因与此项目无关。

(1)试点病变。一个医源性损伤是由前肢的一匹马定于麻醉和随后的安乐死。在全身麻醉下,掌骨地区压剪和无菌准备。肢体麻木的环块执行使用10毫升2%利多卡因注入皮下远侧地的手腕子。1厘米的切口是在掌骨的尾方面,进入SDFT略高于近端指屈肌腱鞘的程度。内4.5毫米插入Steinmann销SDFT和先进的5 * 5厘米,撤回和皮肤缝合。这匹马是在全身麻醉下实施安乐死。10×10⁶SPIO-labeled msc被注射到病变超声指导下和成像如上所述。

(2)肌腱损伤的模型。单边SDFT损伤了六匹马的前肢。协议修改从Schramme et al。28)与马站的位置。马与输液premedicated氟尼辛葡甲胺(1.1毫克/公斤),然后与盐酸结合detomidine镇静(10μ克/公斤)和布托啡诺(20μ克/公斤)管理的静脉注射。肢体是如上所述手术准备。1厘米的切口是在掌骨的尾方面,进入SDFT略高于近端指屈肌腱鞘的程度。持有肢体离开地面的时候,一个4.5毫米Steinmann销插入SDFT和先进的5厘米。销是提取,取而代之的是一个5毫米关节镜毛刺。毛刺在2500 rpm激活,插入和退出SDFT 5次。皮肤切口关闭与外科主食和前肢上了绷带。马被保持在摊位每天休息和用手走了两次,随后安乐死感应的病变后10天。细胞注射和MRI进行安乐死和删除后的肢体。

冻存BM-derived马msc低于10通道被解冻,镀前3 - 5天治疗文化如上所述。一天在成像之前,细胞治疗25μg / mL C6Amine Molday离子悬浮在MSC培养基为4小时。注射时,细胞收获和10×10⁶细胞数。细胞悬浮在0.25到0.75毫升注射用PBS,根据病变的大小取决于MRI和超声。

安乐死之后,受伤的前肢是放置在一个15-channel膝盖线圈与手掌一面和西门子1.5 T磁共振扫描仪成像。PD图像获得在矢状面和横向飞机和TRUFI收购在背平面之前注射如表所示1。接下来,四肢被从扫描仪和放置在一个平面上在一个水平位置,评价超声的手掌一面。这个位置被选来模拟细胞注射执行non-weight-bearing肢体,以最小的张力的屈肌肌腱以允许的最大体积流体内的核心病变。细胞被交付通过一个20量度针放置到病变超声指导下使用7.5 mHz探头连接到一个Micromaxx超声波系统(SonoSite, Inc ., 21919年30日开,十分佤邦98021年,美国)。细胞丸没有交付,除非针的尖端可以验证核心内的病变在横向和纵向的飞机。注射后,四肢回到MRI扫描序列表中描述1。

hypointense信号或信号无效的程度与SPIO-labeled使用Osirix软件MSC色散测量各向同性TRUFI图像向近端和远侧地的注入。信号的深度进入皮下组织周围正常肌腱也测量。相对像素强度(RPI)测量每隔一片横向图像最近端和远端方面,信号空隙可以观察到。直方图生成ImageJ量化零售物价指数从远端悬的手掌表面的肢体。直方图也SDFT和深度产生的数字屈肌肌腱(DDFT),随后被减去从总零售物价指数量化的零售物价指数很可能与SPIOs paratendinous筋膜和皮下组织。像素值> 100人被排除在分析之外。

2.2.3。组织学

磁共振成像后,3.5 - -4.0厘米的疫区SDFT切除在注射部位出现的,嵌在10月化合物(Tissue-Tek®),纵向分组在低温恒温器(莱卡)12μm。部分安装,以4%的多聚甲醛固定,孵化与普鲁士蓝试剂(Biopal, Inc .)评估铁纳米颗粒的存在,与核快速复染色红可视化组织形态与光学显微镜。

2.3。统计分析

结果分析与单向方差分析和Bonferroni在0.05的显著性水平的多重比较测试使用棱镜6软件,除非另有上面所提到的。分析了细胞分离出3匹马在每个时间点与测量一式三份。错误报告数据的标准错误(SE)的意思。

3所示。结果

3.1。在体外验证

3.1.1。SPIO治疗后细胞生存能力

未经处理的msc和msc治疗4小时(SE)和分别为%可行性(图1)。马的可行性msc治疗4小时后在24小时内没有差别待遇(图1)。msc明显下降可行性治疗后16小时(%,)。细胞治疗16小时证明可行性增加24小时后(%)与可行性后立即治疗()。

3.1.2。铁含量和细胞增殖

铁含量测定(SE)和(SE) pg /细胞在细胞治疗4和16个小时,分别。治疗和治疗msc不断增加,线性关系增殖能力超过72小时后治疗。在未经处理的细胞增殖没有明显不同细胞与细胞治疗(图4到16个小时2)。

3.1.3。Trilineage分化

由于细胞标记之间的显著差异在可行性4和16小时,只用于细胞治疗4小时的实验。细胞治疗和治疗成功演示了成骨的()和chondrogenic分化(如果不治疗,治疗)与未分化的控制细胞(数字3(一个)和3 (b))。此外,处理和未经处理的细胞都证明去评估油红O染色的脂质空泡在治疗后28天(图3 (c))。

3.1.4。划痕试验

划痕试验显示无显著差异的能力处理和未经处理的msc关闭伤口的距离差距超过24小时(图4)。

3.1.5。炎症调制和细胞因子的生产

处理和未经处理的msc成功调节铂族元素₂(),表达下调肿瘤坏死因子α(),调节il - 10的生产(ns)当cocultured PBMCs刺激有限合伙人(图5)。

3.2。核磁共振研究

3.2.1之上。在体外研究

幻影模型表明,信号强度和增加标记细胞数量减少。细胞浓度都是定性明显比凝胶(CFG)游离TRUFI和PD-weighted图像显示不同的信号(图的损失6(一))。信噪比(信噪比)对所有细胞浓度明显不同的凝胶相比无细胞(),但是只有10000人();100000 ();和250000个细胞()是明显的从背景(BG)信号(图6 (b))。在正常肌腱细胞不能可视化。hypointense信号领域中可见paratendinous筋膜皮下组织和集中地点附近注射后注入正常肌腱(图6 (c))。

3.2.2。在活的有机体内核磁共振分析Intralesional细胞注入

(1)初步研究。医源性损伤是本地化的,由一个焦点区域的纤维破坏和水肿的手术切口在横向和矢状面。虽然产生了少量的对比,对比没有明显检查手术切口的网站。细胞输送到病变的程度无法确定(图7(一))。此时,模型设计,细胞被注入手术后10天内允许水肿发展和更真实的模拟临床疾病。当前的研究经常注入细胞医源性损伤后1 - 2周,支持这个时间框架的实现(2,10,11,14,33,34]。

(2)肌腱损伤的模型。注射前,肌腱损伤检测是小,hyperintensity本地化的病灶部位的SDFT横向平面(数字8(一个)和8 (e)),可见为纵向,hyperintense信号的线性段背平面(数字8 (b)和8 (f))在5/6。测量病灶平均(SE)厘米长。TRUFI图片,标记细胞群,可见hypointense,信号6/6科目的空洞。合并区域的信号空隙中广泛存在的损伤,paratendinous,皮下和周围纤维疤痕组织自卫队(数字8 (c),8 (d),8 (g),8 (h))。细胞内保留病变大大不同,主题展示没有1/6细胞保留在病变(数字8 (f)- - - - - -8 (h))。大量泄漏的标记细胞观察SDFT之外的。大量的低强度像素值可能与SPIO-labeled周围组织细胞可量化的整个SDFT和DDFT对象(图6/69)。细胞位于(SE)厘米向近端和远侧地的注入和被发现的深度(SE)毫米到周围组织。

3.2.3。组织学

肌腱损伤是严重可见区域的机械破坏几乎没有纤维密度。没有疤痕组织损伤区域内。伤害周围的边缘被密集的划定不规则结缔组织与多孔性增加。周围的组织损伤是正常的,没有炎症细胞浸润,并演示了褶和纤维正常肌腱的模式特征。普鲁士Blue-positive,含铁细胞中检测到损伤区和附着接壤,密集,不规则的结缔组织(图10)。几个普鲁士Blue-positive细胞位于周围的正常肌腱组织病变。

4所示。讨论

这项研究代表了一个综合评价的特点SPIO-labeled马msc在体外。我们旨在规范技术安全加载马BM-MSCs SPIOs和确保msc不会被SPIO标记功能改变。之间的正相关是观察到的孵化与SPIO-treated媒体和铁负载每个细胞。一项研究表明SPIO浓度之间的线性关系在媒体和铁负载每个细胞(17]。孵化时间的增加可能会提供一个更经济的选择增加铁负载每个细胞。我们的数据表明,高铁负荷19 pg /细胞可以通过隔夜孵化,但这是不利于细胞的可行性。必须小心,以避免干扰细胞迁移和生存在执行细胞跟踪研究。后续成像演示了健壮的检测能力的临床相关的细胞数量只有4小时的潜伏期后SPIO-treated媒体。确保最大细胞生存和功能在未来细胞追踪研究中,我们使用一个较低的铁负荷4 pg /细胞标记和追踪BM-MSCs虽然更高负荷的10 - 12 pg /细胞已经在之前验证工作(17]。有趣的是,即使这种低铁负担,trilineage分化显示增加了软骨形成潜在的潜力(ns)和降低骨(ns)和增加细胞增殖(ns)中指出SPIO-labeled细胞。以前的研究报告类似trilineage潜在的冲突和行动的机制尚不清楚35- - - - - -38]。另一项研究相关细胞增殖的变化与自由铁溶酶体导致细胞周期进程的增加(39]。因此,SPIO-labeled细胞细胞跟踪应该考虑一个可行的方法在活的有机体内,但是应该小心当解释结果。

本研究的第二个目的是建立一个临床相关的,可再生的模型细胞检测和跟踪在屈肌腱损伤。医源性损伤的模型描述Schramme et al。(2010)已经研究的很透彻一些成像模式(28,29日]。然而,病理肌腱的特点是异构的领域和t2加权像低信号强度高,可从SPIO-associated信号难以分辨14,15]。SPIOs几乎检测不到正常肌腱和只能在靠近皮下组织分化他们的偶极可能扰乱正常肌腱边界影响核磁共振。高场磁体可以增强这种效果,是有价值的解释细胞分布在较低的组织之下,像肌腱。

以前的工作与高场核磁共振表明,超微SPIOs能够有效地用于追踪脐cord-derived msc和BM-MSCs屈肌腱胶原酶缺陷(40]。我们的研究实现了一个类似的成像方法的15-channel收发线圈,这更紧密地匹配马远端肢体的解剖。高场磁共振成像细节病理学更准确,提高对比度和组织的利润,从而提高监控细胞跟踪并发与组织愈合的能力(41]。其他研究也试图追踪细胞与低场磁铁在站在马14,15]。使我们的选择的设备和序列成像片厚度在0.3毫米,接近一个分辨率接近显微镜先生。这是第一个研究来实现这一壮举只使用临床设备马远端肢体。

这项工作是设计有效的翻译转化为长期的目标成像研究,允许同时跟踪的细胞和肌腱愈合。其他的研究在很大程度上依赖于T2 -三梯度回波序列(15,40]。然而,T2-weighting提高工件由iron-labeled细胞,这可能扭曲周围的解剖结构,很容易与其他磁场的非均质性包括出血混淆。医源性和胶原酶肌腱损伤模型与严重肿胀,血管损伤,炎症级联的感应。出于这个原因,序列的实现提供明确出血之间的歧视和标记细胞是至关重要的。为了克服这些挑战,我们的协议利用MRI序列的三种类型:PD-weighted谢霆锋序列,提高病理变化在肌腱和最小化移相引起的标记细胞;TRUFI序列,最大化信号的对比空洞产生的标记细胞,同时保持足够的信噪比和减少工件(42];t2加权序列,最大化信号工件和通常用于成像SPIOs。

在这项研究中使用的动物模型是最有代表性的急性,焦SDFT损伤和成功可以用来监视一大丸msc注射后MRI的标签。利用损伤力学模型的增强检测msc通过提供软组织对比与缺乏相关的损伤和破坏的胶原纤维和轻度水肿。细胞进入皮下组织的流出是很容易被由于信号强度较高的脂肪对比与这些周边地区相关。在未来,这些细胞可以很容易地跟踪和监控细胞存活和迁移到肌腱,由hypointense信号的降低和组织内的再分配。长期在活的有机体内跟踪研究还必须考虑肌腱生物力学载荷的影响,运动,和重力对细胞运动和分布。

我们的第三个目标是描述细胞的分布时的注入。与我们设定的假设,我们的数据表明,有一个实质性的变化在细胞中分布研究对象虽然精确的注射执行超声波三角测量技术。接受三在横向平面图像演示异构和不一致的细胞内定位肌腱损伤相比,注射前图像和显示一致的标记细胞的泄漏到SDFT周围的组织,包括paratenon和皮下组织,在所有科目。

组织学评价证实,一些细胞内还保留核心病变。的组织学外观损伤区域表明液体灌装间质组织的压力增加,导致细胞沿针逆行表面流入肌腱周围的筋膜层。有趣的是,大多数马研究暂停细胞体积的1 - 2毫升注入屈肌肌腱损伤(3,4,6,7,34),而我们仍然小于1毫升注射和观察到的可怜intralesional细胞保留。临床假设大多数的细胞团内保留核心损伤是不正确的,应该进行进一步的研究来探讨细胞迁移的程度后肌腱内注入如果愈合细胞非局部化程度的影响。

5。限制

本研究进行成像和注射后期经济和后勤方面的原因。四肢没有注入负重构象,这是常见的做法在诊所。然而,它是可能的,当屈肌肌腱松弛位置减少医源性损伤的风险从传入的流体和针棒。如果在站位置,执行注射细胞将流远侧地的针位置由于重力的影响,而不是流动检查和远侧地腿时放置在水平位置。循环的影响在肌腱损伤细胞生存能力也必须被认为在将来的研究中。可能是细胞道进入皮下组织可能出现较高的生存比病变,因为更高的血管灌注和营养供应。

由于固有的低信号强度正常肌腱,它不可能执行的定量评价SPIO信号或比较细胞的比例和周围的肌腱损伤。然而,图像提供了一个有凝聚力的尽管定性评估关于msc在超声引导下的分布,注射intralesional肌腱。虽然这个问题没有在文献中提出的在过去,几项研究已经开始调查细胞迁移和生存使用组织学或其他方法(2,10,11,14]。细胞后细胞注射的移位在活的有机体内成像方法为分析这些数据将远远优越。此外,细胞分布模式以来,确定在本研究中是更广泛的比预期或报道,MSC政府可能需要的变化。然而,细胞的位置和确认在活的有机体内对肌腱修复的影响,通过组织活检在大型动物的研究中,需要更好的建立一个协议细胞疗法。

6。结论

尽管先前的报道已经确定,局部损伤保留细胞注射部位出现的小半径之内,我们的研究显示大于预期的移位和相对较少的细胞保留在胶原肌腱相比,周围的筋膜。MSC的作用机制的理论可能需要考虑从MSC胶原组织以外的更大的贡献。msc的地区保留关于伤病的治疗有重要意义。需要进一步的工作,如果这是一个现实在活的有机体内因此确定定向intralesional交付msc目前认为是至关重要的。

缩写

核磁共振成像:	磁共振成像
SPIO:	超顺磁性氧化铁纳米颗粒
msc:	间充质干细胞。

信息披露

约翰Peroni目前的地址是大型动物医学系,乔治亚大学兽医学院501 DW布鲁克斯,30602年雅典,GA。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢美国夸特马协会,莫里斯动物基金会和乔治亚大学的跨学科格兰特的金融支持这个项目。

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