未来和控制临床试验基质血管分数丰富脂肪移植在二级乳房重建

文摘

背景。脂肪移植是一个巨大的工具在二级乳房重建。间质血管分数(SVF)丰富脂肪移植有关体积维护已经呈现可喜的成果。方法。我们开发了一个方法,提供优质的SVF浓缩率(2:1)在手术室。这个前瞻性对照试验进行定量定性分析脂肪移植(干细胞群,SG)和没有(对照组,CG) SVF浓缩在二级乳房重建,通过mri容量分析,immunophenotyping和细胞计数。同时,病人满意度、审美效果和并发症进行了分析。结果。体积的持久性SG是78,9%,51岁,CG的4%;然而它没有达到统计学显著差异。CD90 SG是唯一标记高度表达,显示正相关与体积持久性(,)。脂肪坏死4例患者发生在SG和没有重心。病人在CG显示趋势更加满意。考虑到美学,两组提出了改进。没有观察到局部区域复发。结论。结果是鼓舞人心的尽管SVF浓缩在一个更高的补充率并没有改善,有统计学意义,脂肪移植物体积持久性。丰富的脂肪移植3年随访已被证明是安全的。

1。介绍

第一个描述脂肪移植于1893年完成的1),一个世纪后才恢复信誉(2]。科尔曼发表新概念和一种创新技术,过程,和转移脂肪组织,产生一致的和持久的结果在各种脂肪移植应用程序(3- - - - - -6]。以这样一种方式,一个美国调查显示,科尔曼的原则是完全或部分包含大约50%的整形外科医生采访(7]。然而,许多问题使用最好的技术来处理脂肪组织仍悬而未决。

祖克等人发表后,脂肪组织是一个丰富的间充质干细胞再生医学获得一个脉冲(8- - - - - -10]。基于区分能力的脂肪基质细胞(ADSCs)现在,Yoshimura等人开发了细胞辅助Lipotransfer (CAL),大部分高科技类型的脂肪移植(11]。这种技术将poor-ADSCs脂肪移植转换成丰富的,理论上,将提高接枝率和,因此,卷保留,通过刺激neoangiogenesis和基质细胞分化成新的脂肪细胞(12- - - - - -14]。一些作者发表了随机临床试验使用卡尔和有利的和不利的结果。然而他们采用不同的方法细胞获得,隔离,在不同临床设置和准备15- - - - - -17]。最近,De Francesco等人强调,脂肪组织是一个重要的生活ADSCs脚手架,它提供了足够的细胞生存环境(18]。此外,我们在一个集团在体外模型具有非均匀混合的细胞群,表现出积极的相关性ADSCs和增加的百分比在体外脂肪细胞分化[19]。

矛是正确使用脂肪注入法的先驱轮廓重建乳房的违规行为20.),自那以后,大量的文章已经发表关于它的多功能性,安全性和并发症发生率在审美和乳房重建手术6,21- - - - - -28]。同样,卡尔是主要用于隆胸29日)和纠正保守的乳腺癌手术的后遗症30.和先天性畸形31日),但这些研究是定量评价紧随其后。本研究的目的是开发一个前瞻性对照试验,以定性和定量分析脂肪移植的疗效并没有小说类型的基质血管部分浓缩在二级细化乳房重建。

2。患者和方法

2.1。道德的声明

这种前瞻性和控制研究伦理委员会批准Faculdade药物da圣保罗,巴西(代码498/11),是注册在ClinicalTrials.gov号码NCT01771913。这项研究是由Carmino Caricchio公立医院在圣保罗,巴西,2012年3月至2015年5月。

2.2。病人

患者从乳房重建中选择单位的演讲中,我们开始与干细胞组(SG)对照组(CG)紧随其后。匹配了CG年龄、BMI与SG和放疗。

入选标准在两组患者原发性乳房重建与轮廓不规则和BMI 20到35公斤/ m²,有足够的脂肪在腹部。放射治疗,尽管是一个糊涂的因素,并不被视为一个排除标准;然而只有患者等级1和2在LENT-SOMA规模(32)被包括在内。封锁的分层随机化也做放射治疗患者(被均匀地分布33]。乳腺癌患者乳腺癌保守治疗活动性疾病后遗症,吸烟者和不受控制的并发症被排除在外。

以计算样本量,STATISTICA软件需要假设基于体积持久性。干细胞组(SG),估计体积持久性被认为在80%,同时,在对照组(CG),它被认为是在40%,20%和5%的α误差的方差。因此,9受试者决心在每组分配(美国塔尔萨StatSoft STATISTICA,版本12日)。

2.3。吸入辅助脂肪切除、处理和注脂术手术

在手术室里站起来,患者乳房边界划分,分成四个象限。在全身麻醉下进行手术,自体脂肪从腹部19收获了一个3毫米套管与标准低压机抽脂(−350毫米汞柱)34,35]。

在CG,脂肪在圆锥管离心机在335 g 2分钟。中间层是收集和转移到3毫升注射器然后嫁接的1.4毫米钝插管多层纵横交错的方式主要是在皮下组织。

SG, 600毫升的脂肪得到和离心机在50 cc圆锥管2分钟335 g。收集到的中间层和1/2体积的0.15%胶原酶消化IA(美国密苏里州Sigma-Aldrich) 30分钟37°C和常数均化。水层转移到50 cc管和胶原酶灭活了3卷的哈佛商学院(汉克的平衡盐溶液,表达载体、钙、美国)。这个解决方案在750 g离心5分钟,和收集到的球转移到无菌袋包含其余300 cc脂肪离心的体积。脂肪和间质血管的混合分数(SVF)孵化15分钟在不断同质化导致出现脂肪细胞坚持。这个过程导致SVF丰富脂肪组织在2:1浓缩比例。

补充脂肪移植是在相同的方式进行的CG。样品的脂肪有或没有SVF除了被送往实验室进行分析。考虑组织处理的时间,花了1分钟准备2.5 cc CG脂肪的同时,在同一时期内,SG 2.0毫升的脂肪了。

2.4。细胞计数

在实验室、手术后、脂肪移植有或没有浓缩样品消化在相同的方式,在手术室里。SVF细胞数和测试的可行性采用台盼蓝排斥法自动细胞计数(美国伯爵夫人我,表达载体,CA)。

2.5。Immunophenotyping表征

以评估SVF细胞immunophenotype,流仪分析了番石榴EaseCyte加上血细胞计数器进行(美国微孔,MA)运行番石榴表达Pro 8.1软件。

刚从脂肪组织分离出SVF样本(SG和CG)在100年被过滤μ米尼龙网过滤器(美国微孔),以去除污染物的碎片。样例细胞培养1小时在4°C反CD29-PECy5, CD31-PE, CD34-PerCP, CD45-FITC, CD73-PE, CD90-PE, CD105-PE(美国新泽西州BD生物科学)。孵化后,标记细胞用磷酸缓冲盐(PBS、表达载体、钙、美国)和固定1% p-formaldehyde (Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)。5×10进行了分析³每样品每个抗体标记细胞,nonlabeled细胞样本作为控制。实验室人员对样本的分析也不清楚。

2.6。乳房容量分析

患者MRI扫描没有前注入钆对比,注脂术手术6到19个月后,他们再次扫描确定乳房体积的目的。1.5特斯拉扫描仪(Inthera,通用电气、Contagem、巴西)采用3毫米厚片。我们开发了一个新的战略确定和计算的边界和体积重建乳房以更精确的方式。就在MRI检查,每个乳房的高级调查员标志着边界。dermographic标记,一条线是在内侧,外侧,劣质,优越的乳房局限性。维生素E胶囊(外部标记)是应用于皮肤,以允许更精确的感兴趣的区域(ROI),由一个独立的放射学家和轴上执行序列(图1)。OsiriX软件、32位免费版(美国CA Pixmeo)是利用计算乳房体积。两个计算每考试完成,一般确定为最终的乳房体积。

2.7。病人满意度评估

病人满意度调查是在这项研究中进行的。我们包括密歇根修改的问卷调查36与5种可能),视觉模拟量表(非常不满意,不满意,不满意和满意,满意,非常满意),和一个分数范围从1到10来评估最终的乳房美学的结果。从两组患者满意度问卷回答的时候术后MRI扫描。

2.8。审美的结果评价

五位整形外科医生没有参与传导的研究,不同类型的乳房重建专家被邀请来客观、独立分析改善乳房外形。面板包含蒙蔽额前和术后的照片准备分析。外科医生可以选择5种不同的情况:强烈更糟糕的是,有些更糟糕的是,没有变化,轻微改善,和强大的改进。对于每一个分数,价值归结如下:−2−1,0,+ 1和+ 2。进行分析的目的,所有五个分数的总和,每个病人,作为最终的价值。

2.9。临床事件

两个组的患者监控任何类型的不良事件的发生,局部区域癌症复发,脂肪坏死,石油囊肿形成、皮肤坏死和感染。

2.10。统计数据

收集的数据进行了分析通过R统计软件,版本2.15.2 (R基金会,维也纳,奥地利)。数据所表达的意思(范围和标准偏差),中等(范围)和百分比。比较组间是与学生完成的以及或Mann-Whitney年龄、BMI、乳房容量分析,脂肪移植物体积,时间的随访中,基底细胞计数、自我评估问卷的问题6,和表面标记表达式。Wilcoxon是用来比较细胞的数量与SVF细胞前后颗粒浓缩。Fisher精确检验来分析放疗分布,发生脂肪坏死,和问题2、3、4和7的自我评估问卷。

3所示。结果

11个病人招募SG和九人被招募为重心。然而,一个病人退出她的知情同意,CG完成8个参与者。病人的人口统计数据如表所示1。

方法由作者(2:1浓缩率)和用于提高脂肪移植在SG产生2.6倍的浓缩基底细胞的数量()(表2)。细胞表面标记物的表达做的新鲜SVF如表所示3和宽变化的表达式是所有患者中观察到。两组在一起,CD45最少的表达,而表达CD29, CD90最。然而,间充质细胞标记CD90、高表达在SG,是唯一标记中达到统计上的显著差异()。似乎有CD31之间的正相关关系,CD73, CD90、和CD105表达和体积的持久性;然而CD90是唯一标记显示意义(和)(图2)。

体积的持久性SG (78.8%, SD = 74.9)高于在CG (51.4%, SD = 18.4);然而,它并没有达到统计上的显著差异()。脂肪坏死出现在4名患者在SG和CG(没有病人)(表4)。脂肪坏死手术切除,病理结果证实这对3例诊断。一个病人被观察和超声随访显示不需要干预。

在两组患者的长期随访,没有任何类型的不良事件,无感染、皮肤坏死,没有观察到局部区域复发。

满意度评估问卷调查的分析显示,两组所有患者会选择接受乳房重建,他们充分了解脂肪移植手术。在两组中,绝大多数患者满意的结果脂肪移植(),将再次进行脂肪移植过程(),建议脂肪移植手术的朋友()。当病人被允许自由地给他们一个分数化妆品(自我评估),结果分数范围从5到10在CG (SG和8到10)。这些结果显示患者的强劲趋势的CG SG比患者更满意。满意度评估通过视觉模拟量表时,两个组的患者同样满意()。

最初,5-peer pair-to-pair比较分析显示分歧,一般比较,kappa系数较低的值。改变5子集到3(恶化(−1),没有改变(0),和改进(+ 1)),外科医生同意未成年人学位(k = 0.131,置信区间= 0.020;0.242)。数据3和4病人被归类为展示“改进”同行。当计算新成绩,病人在SG和CG收到各自的分数(平均)2.9和2.3 (),因此被视为呈现类似的改进。

4所示。讨论

考虑年龄、BMI脂肪移植前后,时间运行之间的核磁共振成像,和放疗分布,统计组相似。在最开始的研究设计,在考虑到样本大小和放射治疗因素,“分层块随机化允许一个均匀分布33]。放射治疗的高发病率代表了绝大多数的患者寻求推迟乳房重建,这是证实被其他出版物(37,38]。放疗的影响脂肪移植保留仍然是有争议的。Rigotti等人显示,放疗引起的微循环和利益受损,脂肪移植推广,包括先进的再生和neovessel形成(39]。艺等人最近表明,放疗后乳房重建需要平均4.8程序相比,2.7未照射组的(40),这是按照Losken等的工作。24),最近,隆戈所发表的论文等。41]。反过来,de Blacam et al。25]显示相同的并发症率当脂肪移植用于二次乳房重建和放射治疗。蔡等人发表同样的脂肪移植物体积保留率重建乳房有无放射治疗(42]。关于体积持久性和并发症的发生率,目前研究显示没有区别患者接受放疗和之前那些没有脂肪移植。

在我们的研究中,两名患者在SG表现作为容量分析的异常值。病人6腹直肌皮瓣重建和体重增加,6公斤,术后MRI扫描的时候。古托斯基根据et al。43)、脂肪移植可能显示与体重波动和体积变化,考虑到所有电车皮瓣患者在本系列中体积持久性率高,尤其是在这个病例中,体重增加可能负责高容量的确定。患者1辐射和接收的最小体积脂肪移植。考虑所有的脂肪移植的容积损失可能发生内部错误的体积计算工具和术后MRI扫描,最后卷最终负的。

灵感来自Yoshimura et al。之前的出版物11,44),我们开发了一个方法产生一个浓缩率(比2:1)高于卡尔(1:1的比例),可以复制在手术室里的其他调查人员没有困难。基于先前的论文和假设(13- - - - - -15,45,46),添加更多的想法SVF细胞脂肪移植,可以呈现一个更好的生物框架和保证更多的体积长期持久性,考虑到将会有更多的间充质细胞分化成新的脂肪细胞和分泌大量的营养因素,如proangiogenic和凋亡因素(47,48),听起来有吸引力。然而,尽管所有作者的努力产生大量浓缩,SG的体积持久性相比并未达到统计上的显著差异,在CG。

我们知道,没有发表的预期和控制领域的研究,客观地测量乳房容量分析使用SVF丰富脂肪移植乳房重建。我们的结果非常乐观,因为体积持久性高达这个报告只是Kølle et al。15),实现持久性学习小组的80.9%和16%的对照组,和Tanikawa et al。16修正),使用卡尔颅面异常,取得了88%的体积持久性学习小组相比,对照组的54%。前雇了一个超级浓缩率与cultured-expanded细胞注射的手臂,而后者使用手册卡尔纠正与颅面矮子相关软组织缺损。有关细胞浓缩比,我们的研究是介于这些先前的研究,答案来解释我们的结果可能是变化的类型乳房重建技术,而现在不同数量的疤痕组织的床上。

相反,崔et al。42]使用3 d图像容量测定分析容积持久性的离心机脂肪移植,没有浓缩,在二级乳房重建。他们发现42%的平均体积保留在手术后140天,这被认为是一个短期的随访时脂肪移植体积持久性。RESTORE-2研究[30.)和非犹太人的研究等。31日]采用丰富脂肪移植通过Celution系统(美国圣地亚哥Cytori)二级乳房重建,而且,尽管好的结果发表,这些研究不具备客观的容量分析。Yoshimura et al。49]卡尔,救援用于乳房植入物并发症和卷保留40到80%,和他们的研究的主要批评是,它没有一个对照组。

同样,Peltoniemi et al。17]丰富脂肪移植用于初级隆胸。病人的两组对照研究平均50%体积的持久性,类似的其他作者获得的保留率,不采用基质细胞浓缩但使用布拉瓦系统(50,51]。相对Peltoniemi等人的工作,长矛和皮特曼(52)显示,39%体积保留在初级与传统离心机脂肪移植,隆胸,根据艺和其他人发布的结果(21,23,51),他们关注术前乳房外部扩张的方法提高受体床的一些重要方面,如neoangiogenesis和良好的孔隙压力,与脂肪组织在整容隆胸。

新鲜的immunophenotyping基质血管分数相比,本研究显示类似的表面标记资料,发表的松本et al。46]。绝大多数的研究发表后的细胞间质血管分数immunophenotyping至少一个扩张,和我们的研究集中在新鲜SVF分析。因此,我们可以观察到流仪分析显示一个非常个性化的表面标记表达式。在这样一种方式,没有病人提供了类似的概要文件。病人在SG表示比病人更CD90 CG,还有CD90的表达之间的正相关关系,一个典型的间叶细胞标记,和体积持久性。在两组中,与此同时,病人呈现高体积的持久性,证明高CD90表达式。

修改Alderman乳房切除术后的调查问卷显示乳房重建的重要性。此外,二级脂肪移植乳房重建,有或没有基质细胞富集,促进高水平的患者满意度。患者重心倾向于在SG变得比患者更满意,和脂肪坏死的发生率的原因导致痛苦关于局部复发,导致3例再次手术。脂肪坏死只发生在SG和病人接受放射治疗。我们推测,尽管基质细胞更有弹性的组织缺氧,出现在更多比CG移植,在某些情况下,加上成熟的脂肪细胞,他们无法生存充满敌意的接受者床,伴有极度纤维化辅助放疗和手术操作和受损的微循环39,45]。另一个可能的解释是,明显纤维化目前在收件人的床上可以表现这些细胞分化的另一个路径导致的小结节的形成脂肪坏死(53]。同样,Yoshimura et al。11]报告两例局灶性纤维化在胸腔和乳房时SVF细胞悬浮在注射生理盐水后整容隆胸注射脂肪。他们讨论了从脂肪组织可能没有信号,放心使用它作为一个重要的生活的重要性支架(53]。

kappa系数显示弱评级机构之间的协议;然而,审美的评价结果是积极的,这意味着轮廓违规被脂肪移植手术在改善患者两组。完整的随访,患者没有感染,皮肤坏死,或任何施主能级发病率。在我们的研究中,尽管不打算长期随访结果,未出现局部区域复发CG在平均随访16个月和36个月的SG,这个数据可能导致现有文献关于ADSCs丰富脂肪移植安全二级乳房重建。从SG三个病人,1和2的CG,被诊断为DCIS乳房的时候,但是没有一个实现了发布的需求小et al。54)在某种程度上被认为是在局部复发的风险更高。然而,这些患者仍在常规和观察随访。我们的研究结果对肿瘤安全性与他人一致以前公布的(43,55- - - - - -57]。

这项研究的限制包括放射治疗患者中发病率高,没有随机化的情况下,这是合理的,因为事实上,这项研究是在一个乳房重建单元没有大量的病人要求细化每组随机。

5。结论

这项研究的结果是令人鼓舞的尽管浓缩与SVF细胞的脂肪移植2:1比例不存在更好的容积持久性率在二级乳房重建的场景。实时补充率较高的脂肪移植SVF细胞,没有扩张,可以做在手术室里如果适当的材料和人员是可用的。考虑平均随访3年,脂肪移植的浓缩与SVF细胞已被证明不是促进局部区域复发。脂肪坏死的发生率提高担忧丰富脂肪移植在2:1的比例,他们可能不适合以前接受放射治疗的病人。足够的富集率,确保更高的体积持久性是由未来的研究。

利益冲突

作者没有利益冲突披露。

确认

作者要感谢丽塔玛丽亚Passos-Bueno博士和Meire Aguena广泛、引人注目的实验室工作。

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