使用人类的生理和病理的脂肪中提取的干细胞治疗外阴营养不良

文摘

“外阴营养不良”的特点是慢性外阴营养作用的改变,发生在两个生理(更年期)和病理(地衣sclerosus,会阴部的移植物抗宿主病)的条件。相关的症状是瘙痒,燃烧,性交困难,阴道干涩。目前的治疗通常不意味着完全缓解症状。注射脂肪干细胞(ADSCs)代表一个有效的替代疗法来提高营养作用和营养不良的组织的语气。我们评估疗效ADSCs-based治疗营养不良的地区。从2013年2月到4月我们参加8外阴营养不良患者。活检标本进行治疗前后。数码照片拍摄在基线和随访。发现疼痛视觉模拟评分和性功能与女性性功能指数评估。所有患者接受2治疗3个月。 Follow-up was at 1 week , 1 and 3 months, and 1 and 2 years. We obtained a significant vulvar trophism enhancement in all patients, who reported pain reduction and sexual function improvement. Objective exam with speculum was easy to perform after treatment. We believe ADSCs-based therapy finds its application in the treatment of vulvar dystrophies, since ADSCs could induce increased vascularization due to their angiogenic properties and tissue trophism improvement thanks to their eutrophic effect.

1。介绍

女性外阴营养不良是一个条件可能发生在生理和病理条件。相关症状包括瘙痒,燃烧,性交困难,阴道干涩和出血。阴道萎缩症通常影响绝经后妇女,患病率从10%到50% (1,2),据估计,多达45%的女性症状(3]。vulvovaginal萎缩的病因学在绝经后妇女中最常见的解释是降低循环与围绝经期相关的雌激素,这对皮肤胶原蛋白和弹性(有不利影响4]。即使采取系统性的雌激素,10%到20%的女性可能仍有残留症状(5]。症状相关的雌激素减少也可能发生在其他阶段的女性的生活以响应事件与持续降低雌激素也如哺乳或与化疗引起卵巢功能早衰14 - 100%的病例。这些高危患者临时或永久闭经,,对于那些妇女继续行经或恢复他们的周期,有一个额外的卵巢功能早衰的长期风险。尤其是乳腺癌治疗外阴营养不良的患病率增加,因为手术,内分泌,化疗药物用于治疗可引起或加剧这种情况。外阴营养不良的医源性原因与同种异体造血干细胞移植。这个过程已经发现在治疗各种恶性和非恶性的疾病的骨髓和免疫系统。然而,它可能是复杂的慢性移植物抗宿主病(GVHD),由于供体激活免疫细胞与宿主组织。移植物抗宿主病可能发生在急性或慢性形式。皮肤、口腔、眼睛、肝脏和肠道器官通常参与慢性移植物抗宿主病。近25%的患者生殖道参与可能发生移植物抗宿主病。 Vulvar scarring can lead to vaginal stenosis and introital reduction and may also result in labial fusion [6]。这些表现可以导致一些并发症如子宫积血,hematocolpos和脓肿。Hypoestrogenism从化疗所致卵巢功能早衰和慢性移植物抗宿主病既能引起外阴或阴道疼痛和刺激。地衣sclerosus (LS)是一种慢性的免疫介导的炎症性皮肤病,知之甚少病因学(7,8),这可能是局部在身体的任何地方,但偏爱肛门-生殖器区域(9]。尽管疾病发病被所有年龄段的报道,它通常发生在女性第五或第六十年的生活。外阴的皮肤变化最初从白色开始,多边形合并成斑丘疹,皮肤萎缩和病灶周边红斑。此外,皮下出血瘀斑或hematosis和裂缝表面可能发生溃疡和侵蚀。后期进步的症状包括粘膜变薄,真皮水肿及纤维化,收缩的阴唇,凝集的小阴唇可导致狭窄的入口。此外,障碍被认为是良性的,一些女性会阴部的LS可能以后开发外阴鳞状细胞癌(SCC)和一些妇女伴随SCC当最初诊断为LS (10]。外阴营养不良可能会消极地影响整个性反应周期,诱导显著变化的欲望,兴奋,高潮,更年期和满意度。病人可能会被毁容的尴尬,避免可能发生的改变性亲密。而且这些患者可能增加的风险患细菌性阴道炎由于阴道的pH值变化和尿路感染或压力性尿失禁。主要解决泌尿生殖和性功能障碍治疗由于vulvovaginal组织变更目前包括药物治疗和润滑剂,但大多数患者这些疗法并不意味着完全缓解症状。最近的研究强调,脂肪组织是一个丰富的成体干细胞,所谓的脂肪干细胞(ADSCs) [11- - - - - -13]。我们测试的假设ADSCs的会阴部的应用可以提高营养不良的组织的营养性和语调。

2。材料和方法

2.1。病人

临床试验协议,符合赫尔辛基宣言的指南(1964),是我们机构的伦理委员会批准(Ref.1834/25.03.10)。从2013年2月到4月我们参加8影响外阴营养不良的患者的平均年龄为56.5(38岁和75岁之间)。其中,一个病人在绝经后期,2影响女性外阴的移植物抗宿主病,与LS和5受到影响。每一次访问太阳系时,个人记忆的,客观的数据收集。我们的研究病人的理解和同意。病人被告知调查的目的和目标,并要求他们的书面知情同意参与和发表过程中获得的数据研究。入选标准要求外阴营养不良的症状和体征,患者拒绝脂肪注入法,和病人nonresponders传统疗法。排除标准是怀孕或哺乳期和相关病理禁忌提出的治疗。

所有患者接受2治疗3个月。后续在1周1和3个月和1和2年。

2.2。外科技术

脂肪组织收集了通过从腹部抽脂或转子的地区,根据容易获得足够多的脂肪组织。抽样是在局部麻醉下,使用修改后的克莱因的解决方案(1升的氯化钠0.9%,20毫升2%利多卡因和1毫升的肾上腺素1:200000)通过一个3毫米的洞冲套管连接到一个10 cc Luer-lock注射器。收获的脂肪是离心机在1500转2分钟。离心后,油层(上层)和水层(低级别)从注射器中就被淘汰了。中间的层含有脂肪细胞和间质血管组件被送到实验室细胞培养在1小时内。

2.3。细胞隔离和文化

脂肪转移到无菌管和清洗广泛无菌磷酸盐(PBS)含2% PSG去除污染碎片和红细胞。间质血管分数(SVF),包含ADSCs,当时在2000 rpm(颗粒状的离心5分钟14)然后在DMEM-Ham resuspended F-12介质(/卷,卷1:1)(DMEM / F-12 Gibco)补充20%的边后卫,100 U /毫升青霉素,100μg / mL链霉素,2毫米谷酰胺和镀75厘米²组织培养瓶涂以胶原IV型。

ADSCs SVF的选择在随后的组织培养的段落,在能力的基础上坚持塑料组织cultureware,和维护有限公司5%₂孵化器在37°C在湿润的气氛中,与介质变化每周两次。细胞生存能力评估利用台盼蓝排斥试验。一个均匀的ADSCs随后检查通过确定生长动力学和通过分析表面标记表达谱。

2.4。富含透明质酸的制备

ADSCs来自每个病人的主要文化扩展为了获得足够数量的75厘米²烧瓶在95 - 100%的融合。一旦达到适当的细胞数量为每个病人,细胞分离与0.5毫米EDTA / 0.05%胰蛋白酶为5分钟37°C和统计。然后,ADSCs在1500转离心10分钟,洗两次磷酸盐去除血清,和足够的合成量resuspended稳定低分子量透明质酸溶液(1.6%的合成HA解决方案,没有化学修饰和分子量为1×10³KDa,非常类似于内生公顷)标准浓度的5×10⁵细胞/毫升,车辆干细胞和促进随后的渗透。环境条件下混合后,暂停一直10到15分钟,允许细胞坚持透明质酸矩阵。均匀分散的细胞在凝胶内确保了显微镜的观察。然后,cell-supplemented透明质酸的解决方案是加载到注射注射器和带到手术室。

2.5。ADSCs渗透

通常3周后,病人回到手术室的自体接种ADSCs瘠薄地区。手术是在局部麻醉和镇静,背截石术的病人。渗透是使用两个2毫升注射器提供30-gauge 1/2针通过多个通过皮下平面上的小阴唇。我们使用2毫升的透明质酸为每个病人,保持一个恒定速率的5×10⁵细胞每毫升的透明质酸。第二天所有病人都被驳回。

2.6。临床评价

评估参数组织营养性、痛苦和性满足。组织营养作用被摄影文档和活检评估治疗前后进行。照片拍摄于场合的后续利用相同的参数(同样的相机佳能EOS 500 d,拍摄50厘米的距离,和相同的解剖标志)。疼痛是估计T0和每周根据视觉模拟量表(血管)。一个范围从1(无疼痛)到10(最大痛苦的感觉)被认为是。性功能是由女性性功能指数评估(FSFI),治疗前后进行。它由19个问题执行的性活动在过去的四个星期。它使六性评估功能域:欲望、冲动,润滑,高潮,满意度,和不适或疼痛15]。子域得分正在考虑每个问题及其相应的值转换因素,和总FSFI得分的总和计算6个结果,从2到36。更好的性功能被最高分数表示。

3所示。结果

所有患者术后随访至少2年,与定期的医疗评估在1周,1和3个月,1和2年。

仅一个月后第一个ADSCs渗透,改善会阴部的营养性是临床观察,随着时间的推移逐步增强。减少疼痛已经记录在第一次治疗后一个月;戏剧性的减少疼痛1年之后了。性功能明显改善,一个月后第二次治疗。总体业绩的疼痛减少,会阴部的营养性,性功能的改善和维护良好在2年的随访。特别是摄影文档在2年随访显示改善会阴部的营养性,显示一个粉色的会阴部的皮肤颜色,恢复弹性,和红斑的地区的消失。我们观察到镜考试是容易执行和无痛表示的病人。阴道皱褶,阴道苍白,出血点是明显在绝经期患者的影响。组织学检查在更年期病人证明了弹性网络的改进。患者的LS,显示扩展到广泛的小阴唇红斑interlabial沟(也显示苔藓样硬化)和阴道入口前处理(图1),我们观察到红斑大幅减少和消失的interlabial沟后,阴道入口ADSCs渗透(图2)。患者和移植物抗宿主病的影响,组织学检查记录凋亡基底细胞层,上皮变薄超然的粘膜,胶原蛋白透明变性,和单核细胞的浸润黏膜下层。ADSCs治疗后,回归上皮细胞的形态变化和充分的炎症信号衰减connectival组织观察。活检标本的患者影响LS显示上皮棘皮症,appendageal角化过度和真皮修改透明样变化,淋巴细胞浸润与纵向带在中真皮,扩张的毛细血管,沿基底膜和淋巴细胞标记。ADSCs治疗后,皮肤硬化明显减少,导致不扩张毛细血管,炎性浸润大幅减少(数字3和4)。根据血管,可以观察到显著的疼痛减少所有的病人,如表所示1。此外,FSFI透露,所有患者获得ADSCs治疗后性功能的改善,记录在表2。我们的方法是有效的,不管外阴营养不良的病因学。

4所示。讨论

外阴营养不良负面影响女性的生活,但是女性缺乏知识的主题和犹豫咨询医疗专业人士,谁应该主动发起讨论关于适当的治疗方案。主要解决泌尿生殖和性功能障碍治疗由于vulvovaginal组织萎缩症目前包括药物疗法和润滑剂,但大多数患者并不意味着完全缓解症状。润滑剂可以用来减少直接刺激在性交活动,但没有证据表明这些产品有任何长期的治疗效果。全身激素替代表示女性寻求治疗各种症状与更年期雌激素不足有关,如潮热和睡眠障碍,但是,在一些女性,它不是一种有效的方法缓解vulvovaginal萎缩(16]。此外,女性雌激素不能使用与乳腺癌接受激素抑制疗法的影响。到目前为止,新的治疗方法已经尝试。透明质酸(HA)渗透最近用于阴道修复手术。哈是一个无支链的、nonsulphated多糖和生物相容性,无毒,可生物降解。由于其高水合能力或吸湿性,它诱发组织水合作用和润滑17]。在皮肤上,哈产生细胞,成纤维细胞的细胞膜HA-synthases [18)和挤压直接进入细胞外基质。由于HA是化学和结构相同的,无论它的起源,过敏反应是罕见的和皮肤测试之前注入并不是必要的。这导致了使用HA在几个组织工程领域,如审美手术。此外,以前的观测表明,另稳定透明质酸可能带来填充效果,由于其对胶原蛋白的刺激影响生产(19),但哈的主要缺点是缺乏组织再生,与填充材料只退化而不是被自体组织所取代。因此,1个月后几乎完全吸收,和它的影响只是暂时的。在过去的几年里,自体脂肪移植已成为首选的治疗恢复量,实现结构的修改。这种方法,使用病人自己的身体脂肪作为自然的填料,利用其丰富的和可访问性,从而避免并发症与外国相关材料(20.]。然而,许多研究表明,脂肪组织移植的大部分是通过时间或吸收被纤维组织取代,他们也显示低的调查由于局部坏死(21]。注脂术的好处已经被证明在营养不良和外阴的振兴治疗。如前所述,脂肪组织是一个富有的ADSCs来源。这种干细胞水库可以很容易地获得少量的抽脂送气音(1 - 5毫升)或从脂肪组织活检。此外,ADSCs具有分化成多种细胞类型的能力,包括脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞。因此,他们可能代表一种很有前途的方法细胞疗法(11- - - - - -13]。此外,它最近被证明ADSCs显示血管生成属性,也可以施加一些免疫调节活动,包括抑制胶原蛋白T细胞反应和恢复免疫耐受能力通过抑制炎症反应在活的有机体内(13]。ADSCs渗透发现在生理和病理的治疗中的应用vulvovaginal营养不良,因为这些细胞可以诱导血管化增加,由于他们的血管生成属性,和改善组织营养作用,由于其营养正常效果。特别是,与病理炎症营养不良患者的影响,典型的减少疼痛和烧灼感可以获得由于ADSCs的免疫调节特性,可能通过减少炎症,代表这些病态的产生疼痛的刺激。因此,可以获得适当数量的细胞来治疗不同的疾病,通过运输与低分子量透明质酸凝胶,从而允许一个简单的和nontraumatic渗透在受影响的地区。另稳定透明质酸是一个理想的支架,可以提供结构支撑和良好的环境生长的细胞,它是一种天然的组成部分常用注射软组织填充剂(22]。此外,进一步利用这个过程是减少操作时间和更大的合规的病人和外科医生相比,传统的入侵技术。

5。结论

ADSCs注入代表的进化标准化治疗,如传统的注脂术,和一个有效的替代方法单独注入透明质酸biorevitalizing用途。

我们的经验的基础上,我们主张ADSCs渗透在瘠薄外阴的地区是一个安全的方法,容易被执行的传统技术,无创,需要短时间内。它可以代表一个有效的治疗选择当病人拒绝或现状禁忌入侵过程。一致与先前取得的积极成果和该技术在硬皮病等病理表现为组织scleroatrophy [14),我们患上外阴营养不良的患者中获得了令人鼓舞的结果,即使在长期,皮肤,皮下、粘膜营养作用改善。病人经历了恢复的解剖学、病理学改变,并可能提高他们的生活质量。ADSCs治疗导致的阴道篇和periurethral强壮,因此解决问题的相关hypotrophic involutive过程影响泌尿生殖系统。治疗后患者进行客观考试,巴氏试验,和其他妇科手术,无痛苦。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关本文的发表和披露任何商业利益,他们可能在研究的主题和任何财务或材料的来源的支持。

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