调查人牙周韧带细胞表面蛋白质组的干细胞

文摘

目前研究了人类牙周韧带细胞表面蛋白质组的干细胞(PDLSC)相比,人类成纤维细胞。细胞表面蛋白与CyDye prelabelled前处理提取膜溶解产物,利用二维电泳分离。选择的差异表达蛋白质“斑点”被确定使用质谱。四个蛋白被选为验证:CD73, CD90、膜联蛋白A2,鞘氨醇激酶1之前与间充质干细胞有关。流仪分析发现CD73和CD90被人类PDLSC和牙龈成纤维细胞高表达而不是角质细胞,表明这些抗原可以作为潜在的标记区分间充质细胞和上皮细胞的数量。膜联蛋白A2表达还发现在低拷贝数在人类PDLSC和牙龈成纤维细胞的细胞表面,而人类角质细胞缺乏任何细胞表面表达的膜联蛋白A2。相比之下,鞘氨醇激酶1表达中检测出所有的细胞类型检查使用采用免疫分析。这些蛋白质组学研究形成的基础进一步定义的细胞表面蛋白表达谱PDLSC为了更好的描述这个细胞人口和帮助开发新颖的策略的净化干细胞群。

1。介绍

尽管令人鼓舞的结果,治疗利用间充质干细胞(MSC)是受制于缺乏理解和定义的属性和发展状态体外扩张。在祖种群表现为异质性固有的一个主要限制他们在再生医学的临床应用。细胞属性的可变性和不一致性暗示在干细胞数量和等级秩序导致不同形态的共存的子集,表型,扩散率,和生物功能1- - - - - -3]。目前,缺乏个人或一组标记,可以区分不同的子集MSC-like种群内不同的起源和分化成纤维细胞的细胞在任何组织。

识别驻留在牙周膜干细胞/祖细胞(4- - - - - -6]提供了一个潜在的新的治疗途径治疗牙周组织破坏由于创伤、伤害和疾病。牙周疾病是非常普遍的在所有人类,如果未经处理导致牙周支持组织的破坏,可能会导致牙齿脱落。可预见的再生牙周组织由于先进的牙周疾病是超出了现有技术的范围,因此,替代策略正在接受调查。

除了牙周韧带干细胞(PDLSC),牙周膜含有多种细胞类型包括成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞休息Malassez (ERM),成骨细胞和成牙骨质细胞(7]。这一系列专门的细胞类型是融入和余函数提供牙周组织的重要和独特的结构和力学性能。这生物复杂性和细胞异质性也强调了需要识别特定于每个细胞表面标记的子集在牙周膜,使识别和判别隔离的想要的和需要的细胞群。

已经证明PDLSC共享一个表型骨髓衍生的剖面特征间充质干细胞(BMSC)包括BMSC标记的表达CD29、CD44, CD90、CD105 [8]。此外,PDLSC表达早期BMSC和血管周的细胞表面标记STRO-1 CD146 / MUC18 [4),一个子集的祖细胞与其他相关抗原呈现血管周的组织(alpha-smooth肌肉肌动蛋白和pericyte-associated抗原,3 g5) (9]。在一起,这些发现可能指定血管周的PDLSC起源,符合早期的发现麦克洛克和他的同事(10,11]。结合、比较基因组分析确定所展现出来的独特功能PDLSC相比BMSC和牙髓干细胞(DPSC)。这些研究证明了水平的提高scleraxis (tendon-specific转录因子)4)和PLAP-1(牙周韧带相关蛋白1 / asporin)表达PDLSC [12]。一组标记,提出了当前PDLSC鉴定,包括碱性磷酸酶、I型胶原蛋白,periostin, runt-related转录因子2 (Runx2)和上皮生长因子受体,由BMSC还表示,考虑到两个细胞群通常持有的天赋能力的形成形式的牙骨质和骨矿化矩阵,分别为(13]。由于上述细胞表面标记物无所不在地表达了MSC-like人口来自所有牙齿组织,特定的细胞表面抗原,能够区分个人牙齿干细胞群的子集,尚未确定(14]。因此,我们理解细胞表面表型PDLSC低于当考虑到需要隔离并净化干细胞/祖细胞从异构PDL人口子集。这推动蛋白质组学的使用,全球蛋白质表达技术调查,PDLSC描述细胞表面表型。

蛋白质组学研究调查牙科组织总结了麦克洛克(15]。虽然大多数的研究集中在蛋白质表达的牙周微生物群(16- - - - - -18),数量有限的论文研究蛋白质组的牙周韧带细胞和组织(15]。在这项研究中,我们提供了一个洞察细胞表面的蛋白质组PDLSC识别潜在歧视性PDLSC标记驻留在牙周组织不表达的其他细胞。

2。方法和材料

2.1。人类PDLSC和牙龈成纤维细胞的分离

人类PDLSC和牙龈成纤维细胞分离从三个捐助者和培养(GF)如前所述(人类阿德莱德大学的研究伦理委员会批准文号h - 112 - 2008) (4,19]。简而言之,牙龈和牙周韧带组织收集从切除齿龈和中等的第三根,分别。组织在相同体积的I型胶原酶消化3毫克/毫升;沃辛顿生化,莱克伍德,NJ)和dispase II型(4毫克/毫升;罗氏诊断,印第安纳波利斯)2小时37°C。孤立的细胞在修改维护和培养αmem媒体(αmem;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)补充10% FCS(热电子,墨尔本,维多利亚,澳大利亚),50 U /毫升和50μg / mL青霉素和链霉素(Sigma-Aldrich)、丙酮酸钠1毫米,2毫米谷酰胺(美国SAFC Lenexa, KS)和100年μM L-ascorbate-2-phosphate (Novachem、墨尔本、维克、澳大利亚)37°C和5%的公司₂在湿润的环境中,每周中改变。细胞被收获,曾经达到融合进一步扩大。这个过程被重复当细胞达到80%汇合,直到所需的细胞数量。

人类新生儿包皮,收集从常规环,用来分离上皮表与4毫克/毫升dispase隔夜孵化后在4°C,其次是胰蛋白酶化的5分钟37°C获得基底角质细胞。角化细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养,20 ng / mL表皮生长因子(Sigma-Aldrich)和0.4μg / mL氢化可的松(Sigma-Aldrich),在37°C和5%的公司₂在湿润的环境中,每周中改变。

2.2。免疫组织化学

室的幻灯片(Nalge-Nunc Lab-Tek,罗切斯特,纽约,美国)和8×10被播种³细胞每厘米²在媒体与添加剂2天。幻灯片和4%多聚甲醛固定(PFA)和内源性过氧化物酶活性抑制使用0.5% H₂O₂在甲醇。部分是孵化主要抗体或同形像控制抗体在一夜之间在4°C,二级抗体室温1小时,Vectastain ABC试剂(美国向量实验室,伯林盖姆,CA)根据制造商的建议,或horseradish-peroxidase-labelled链霉亲和素(WI Promega,麦迪逊,美国)在1000年1稀释,然后用diaminobenzidine发达(Dako Campbellfield,维克,澳大利亚)。幻灯片与苏木精复染色短暂(ProSciTech Thuringowa中央,昆士兰,澳大利亚)。抗体在这项研究中的应用是1 b5、鼠标IgG1同形像控制(1:25;纽卡斯尔大学教授l . k .清道夫,新南威尔士、澳大利亚);鼠标IgG1反CD73 (1: 25;美国BD Pharmingen火花,MD);鼠标IgG1反CD90 (1: 25;BD Pharmingen);鼠标IgG1反膜联蛋白A2 (1: 12.5; Invitrogen, Waltham, MA, USA); rabbit anti-human sphingosine kinase 1 (1 : 20; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA); normal rabbit Ig (1 : 20; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA); goat anti-mouse IgG biotin secondary antibody (1 : 200; Southern Biotechnology Associates, Birmingham, AL); and goat anti-rabbit IgG biotin secondary antibody (1 : 150; Vector Laboratories).

2.3。Immunophenotypic剖析

单个细胞悬浮液的2×10⁵细胞被封锁与5% FCS, 1%牛血清白蛋白(BSA, SAFC), 50 U /毫升青霉素、50μg / mL链霉素,5%的正常人血清(澳大利亚红十字会、SA)在哈佛商学院的冰。细胞治疗原发性或同形像控制抗体(CD73, CD90、膜联蛋白A2)的浓度为20μg / mL,其次是孵化和藻红蛋白(PE)共轭山羊anti-mouse IgG1 (1: 50;生物技术协会南部)。样本与0.1%福尔马林固定在PBS和20毫克/毫升葡萄糖。分析在fluorescence-activated细胞分选仪配备250 MW氩激光器(贝克曼库尔特Cytomics FC500,使用列表级血细胞计数模式数据采集和分析软件2.2版本;美国贝克曼库尔特、迈阿密、FL)。

2.4。蛋白质组学分析

所有设备和试剂购自Bio-Rad实验室(美国大力神,CA)除非另有说明。CyDye消化萤石最小染料购买通用电气医疗集团(英国白金汉郡)。

2.5。细胞表面标记使用CyDye消化萤石最小的染料

CyDye荧光细胞表面蛋白标签执行之前报道(4,20.]。简单地说,大约2000万subconfluent PDLSC或女朋友分离与1毫米冰球的EDTA或3毫克/毫升I型胶原酶和整除~ 500万每管细胞。细胞被洗在冰冷的哈佛商学院(pH值7.4)其次是冰冷的哈佛商学院(pH值8.5)和离心机在800×g 2分钟。细胞球团矿在200年resuspendedμL标签缓冲区包含哈佛商学院(pH值8.5)和1 M尿素。细胞被称为600 pmol Cy2, Cy3, Cy5或者CyDye消化萤石在黑暗中最小的染料在冰上20分钟。通过添加20染色就熄了μL赖氨酸(10毫米)10分钟。Surface-labelled细胞被离心分离,并在202年resuspended颗粒状μL哈佛商学院(pH值7.4)。一个整除(2μL)被标签之前和之后使用流式细胞仪检查标签效率。

2.6。膜蛋白的浓缩

蛋白质分离和分次使用相分离设备(美国Mem-PER,皮尔斯,罗克福德,IL)根据制造商的指示。简单地说,150年μ包含1 L试剂μL蛋白酶抑制剂(σ)添加到细胞颗粒包含PDLSC或女朋友。10分钟的孵化后,450年μL B和C的混合试剂添加到细胞溶解产物和管保持在冰30分钟。准备在10000×g离心3分钟,在4°C,上层的孵化在37°C 20分钟。在10000×g和相分离,离心后包含膜蛋白的疏水部分小心地删除和纯化使用ReadyPrep二维清理工具。膜蛋白浓缩效率评估和细胞受到三个膜分离步骤。

2.7。分离的膜蛋白的二维凝胶电泳(2 de)

膜蛋白是水溶性ReadyPrep试剂3缓冲室温1小时。蛋白质被温柔的愿望通过水溶性fine-gauge针,正如前面所描述的Zilm et al。21]。蛋白质浓度测定使用RC /直流蛋白质化验设备根据制造商的指示。蛋白质在第一维分离使用11厘米的蹩脚pH梯度(IPG)条(pH值3 - 10),330年一直被动地水化24小时μL补液/提取缓冲# 3,含有0.2% (w / v) pH值3 - 10两性电解质和1.2% (v / v) De-Streak试剂(通用电气医疗集团,白金汉郡,英国)。使用能源论坛千变万化的合作执行单元。简而言之,包含150个膜蛋白制剂μg蛋白被cup-loaded到阳极的地带。能源论坛的合作周期由8步骤表中列出1,50μ/带电流限制,温度保持在20°C。重复的IPG条并发运行。能源论坛后合作,的带平衡如前所述[22]。聚丙烯酰胺凝胶(厘米)含8% T, 3.3% C, 0.1% SDS, 375毫米三羟甲基氨基甲烷/液盐酸(pH值8.8)是不叠加凝胶使用千变万化II XL铸造室。第二维度使用千变万化的蛋白质分离2 XL多单元的油箱(Bio-Rad实验室)tris-glycine缓冲区(25毫米三、192毫米甘氨酸和0.1% (w / v) SDS)和解决在7 mA /凝胶。

2.8。凝胶可视化

凝胶是使用一个台风三个变量模式扫描成像仪(分子动力学Inc .,桑尼维尔CA)和一个100像素的分辨率μm CyDye激发和发射波长所描述的制造商。图像分析进行使用PD-Quest软件(版本7.2,Bio-Rad实验室)。复制组,每个片段包含4凝胶,用于分析。蛋白质斑点自动检测并手动编辑。凝胶染色是规范化使用凝胶中的总密度。

2.9。火烈鸟荧光染色法

想象所有蛋白质凝胶固定在40%乙醇(v / v) / 10%醋酸(v / v)与火烈鸟Milli-Q水和染色荧光染色(Bio-Rad实验室)根据制造商的指示。凝胶在0.1% (v / v)使退色渐变20 Milli-Q水10分钟前成像。凝胶是使用一个台风三个变量模式扫描成像仪使用绿色激光激励源和(532海里)纳米带通排放过滤器。

2.10。自动点选择

凝胶图像使用台风三个变量模式扫描成像仪和导入DeCyder软件(版本6.5,通用电气医疗集团)和斑点检测使用自动化的方法。选择感兴趣的点生成一个选择列表。挑选列表从DeCyder导出和导入点选择软件(版本1.2,通用电气医疗集团)。斑点切除使用Ettan现货切割机器人(通用电气医疗集团)根据制造商的指示。胶塞清洗两次,0.1米(NH碳酸氢铵缓冲区₄HCO₃),其次是Milli-Q水,然后在乙腈(ACN)、脱水和干燥。

2.11。蛋白质鉴定液态Chromatography-Electrospray Ionisation-Ion陷阱(LC-ESI-IT)质谱(MS)

每个胶塞与10消化μL(5毫米碳酸氢铵ACN包含100 ng 10%胰蛋白酶(Promega) 16小时37°C。肽提取的顺序与1%甲酸(FA)、50% ACN FA / 0.1%,和ACN,结合提取被离心蒸发浓缩和稀释6μL FA ACN 3% / 0.1%。真空浓缩样本resuspended 0.1% FA在ACN总量的2% ~ 8μl . LC-ESI-IT MS / MS使用在线执行1100系列高效液相色谱系统(安捷伦科技)和HCT超3 d-ion阱质谱仪(力量Daltonics)。LC系统界面的女士使用安捷伦科技芯片数据集操作与蛋白质芯片- 150(2),集浓缩列(Zorbax 300 SB-C18, 4毫米,40问),分析柱(Zorbax 300 SB-C18, 150 mm×75μ米),nanospray发射器。5μL样本加载到浓缩列设置的流量4μL / min在流动相(v / v ACN FA 0.1% 2%)和解决1 - 30%的流动相梯度B (FA 0.1% 98% w / v ACN)在32分钟300 nL /分钟。得物种(300 <m / z< 3000)被困和两个最强烈的离子洗脱时被collision-induced离解支离破碎。活跃的排斥是用来排除前体离子30秒后两个光谱的采集。

2.12。使用基于网络的生物信息学工具蛋白质鉴定

MS和MS / MS谱受到峰值检测和反褶积使用数据分析(3.4版本,力量Daltonics, Billerica,妈,美国)。复合列表导出到BioTools(版本3.1,力量Daltonics),然后提交给吉祥物(美国版本2.2,波士顿,MA)使用以下参数:固定修改= carbamidomethyl (C),变量修改=氧化(M)、质量公差= 1.5女士哒,MS / MS质量公差= 0.8哒,肽费用= 1 + 2 + 3 +,错过了分裂= 3。数据匹配到Swiss-Prot蛋白质数据库。

3所示。结果

3.1。膜蛋白的表达体外扩大人类PDLSC

源自人类PDLSC CyDye-tagged膜相关蛋白体外扩张是由二维电泳分离。基于CyDye成像,共有80个好看的蛋白质斑点的分子量范围10 - 110 kDa后被检测到自动排除pseudospots和鉴定蛋白斑点的位置代表原始图像如图1。

3.2。人类PDLSC识别蛋白质的表达的

切除和质谱的分析后,共有32个蛋白质斑点确定为膜相关蛋白(图1)。表2概述了膜相关蛋白的详细信息,包括蛋白质名称、现货数量,预测分子量和π值,ID /总查询,结合离子分数,和报道。一些蛋白质被发现在多个地点(例如,5′核苷酸酶、膜联蛋白A2和鞘氨醇激酶1)暗示亚型的存在,可能是由于转译后的修改。观察到的分子量差异/π和预期值被观察到在某些蛋白质(例如,鞘氨醇激酶1),可能由于转译后的修改,蛋白质水解,或蛋白质聚合。重要的是,这种方法验证了识别MSC-associated干细胞表面蛋白,5′核苷酸酶(CD73)和Thy-1膜糖蛋白(CD90),以前PDLSC表达的是(8]。此外,女士确认其他膜相关标记,如膜联蛋白A2和鞘氨醇激酶1的表达,以前从未被人类PDLSC报道。所有四个蛋白被选作进一步确认分析。

3.3。验证表达式的5′核苷酸酶,Thy-1膜糖蛋白膜联蛋白A2,鞘氨醇激酶1

确认选择的蛋白质的表达包括CD73 CD90、膜联蛋白A2和鞘氨醇激酶1 (SPK1),额外的研究进行调查他们的表达在人类PDLSC, GF,角化细胞(上皮细胞群)。流仪分析了高表面表达CD73和CD90、低细胞表面的膜联蛋白A2表达水平在人类PDLSC和GF人口(图2)。相比之下,人类角质细胞显示CD73缺乏细胞表面表达,CD90、膜联蛋白A2(图2)。表3总结了水平的细胞表面抗原表达这四个评估类型。总之,CD73和CD90表达了人类PDLSC和女朋友,但不是由人类角质细胞,证实它们MSC-associated标记。膜联蛋白A2表达了在低水平由人类PDLSC(1.92 -7.83%)和人类GF(2.41 - -4.66%),而人类角质细胞在很大程度上不利于膜联蛋白A2表达(0.88 -1.64%)。以前的研究已经表明SPK1可以把质膜在细胞刺激细胞因子(23- - - - - -29日]。没有检测到阳性表达与anti-SPK1抗体到人类细胞类型流仪分析(数据未显示),最有可能因为可用的抗体试剂与细胞外SPK1领域没有反应。

额外的研究进行调查的膜联蛋白A2和SPK1表达人类PDLSC,女朋友,和角化细胞,用免疫细胞化学。所有细胞类型的研究是积极anti-Annexin A2和anti-SPK1抗体(图3)。值得注意的是,没有观察到的反应性与anti-CD73或anti-CD90抗体检查所有细胞类型(数据未显示),这表明这些抗体发现的特定抗原表位是妥协处理后采用免疫分析。

4所示。讨论

最初,首先识别出的未分化的牙周韧带成纤维细胞蛋白质组参考地图117蛋白质,一直在三个克隆表达,其中包括各种细胞骨架-和代谢相关蛋白(30.]。蛋白质组的比较分析显示,总数的百分比cytoskeleton-related蛋白质中确定牙周韧带成纤维细胞(26.5%)高于真皮成纤维细胞(15%)。这提出了区别是分配给机械负荷和快速改造与牙周韧带组织(30.]。

评估蛋白表达在分化PDLSC确定29蛋白质,差异表达在早期cementoblastic /成骨分化[31日),展示了一个减少细胞骨架蛋白的表达及其约束力的合作伙伴,可能归因于分化过程中细胞骨架重组(32]。有趣的是,高钙结合蛋白膜联蛋白的表达A4指出后成骨分化。膜联蛋白被认为成骨的开发起着重要的作用,包括膜联蛋白A2和膜联蛋白A5骨骼组织中高度表达和调节成骨的文化中MSC (33,34]。

之间的直接比较的蛋白质表达谱绵羊的PDLSC, DPSC,和BMSC确定58至少两个MSC人口之间的差异表达蛋白质,与6蛋白的表达调节PDLSC相对于DPSC和BMSC, 5蛋白调节DPSC相对于PDLSC和BMSC,和1蛋白调节BMSC相对于PDLSC和DPSC [35]。增加PDLSC表达热休克蛋白β1,膜联蛋白A3,膜联蛋白A4 DPSC相比BMSC被认为与高营业额的牙周组织。

本研究的目的是确定人类PDLSC的表面表达谱和比较潜在的细胞表面标记物的表达在人类PDLSC, GF,角化细胞(如上皮细胞的来源)。我们的研究确定了80人类PDLSC表面的蛋白质表达,32的膜相关和四个被选为进一步验证由于他们协会与其他MSC-like种群称为proof-of-principal分析。这些包括CD73 CD90,众所周知MSC-associated标记,和膜联蛋白A2和SPK1。膜联蛋白A2是依赖于钙(36- - - - - -42并据报道与干细胞相关的利基(43- - - - - -49)和SPK1最近被证明与内皮细胞的祖细胞表型50]。CD73和CD90高度表达的人类PDLSC和女朋友但不是由人类角质细胞,表明这些抗原可以作为潜在的标记区分上皮间充质细胞数量。膜联蛋白A2是论证地表达在细胞表面在低拷贝数由人类PDLSC GF,使用流仪分析,而人类角质细胞缺乏任何细胞表面表达的膜联蛋白A2。SPK1表达中检测出所有细胞类型分析使用采用免疫分析。

CD73最初定义为淋巴细胞分化抗原,函数作为一个cosignalling分子在T淋巴细胞和淋巴细胞需要绑定内皮(51]。表达CD73已经证明在不同的细胞类型包括淋巴细胞,内皮细胞,MSC。它被认为发挥生理作用在上皮离子和流体运输、维护屏障功能,调节内皮通透性,适应缺氧,导致微生物反应(52]。CD73是一种胞外酶,催化形成免疫抑制腺苷的转换腺苷5′一磷酸(AMP)生物活性中间体,腺苷,进而激活腺苷酸受体,当释放到细胞外空间,调节各种生理功能(52,53]。腺苷信号,调制CD39 CD73表达,被强调为一种新型调制器在免疫抑制t细胞增殖的MSC (54,55]。因此,这可能是分摊PDLSC的免疫调节特性(8)和可能突出一个大道抗炎治疗牙周疾病(4,56]。

表达式的CD90 PDLSC[已有详细记载56- - - - - -59];然而,它的主要作用在PDLSC函数仍然未知。CD90,也称为Thy-1(胸腺细胞分化antigen-1),发现被表达在不同的细胞类型,如造血干/祖细胞(60),肝干细胞在人类胎儿肝(61年),肝癌干细胞(62年),神经细胞,成纤维细胞、血管周和MSC (63年]。其表达发育调节(64年),仍然是一个最小的标准定义人类MSC,委员会对国际社会提出的细胞治疗(ISCT) [63年,65年]。虽然CD90的生物作用尚不清楚,许多相关的免疫学和nonimmunological函数之前解决(64年]。除了参与t细胞激活(64年),它被认为是与许多细胞过程和病理条件在上下文相关的方式63年),包括信息和cell-matrix交互,细胞活性,胸腺细胞粘附上皮(64年]。此外,CD90表达也与纤维母细胞表型与伤口愈合和纤维化有关。微分CD90表达式与cell-extracellular矩阵的相互作用和细胞迁移,因此,与不同的细胞形态(64年]。

膜联蛋白A2,首先确定为一种细胞内蛋白质已经被发现细胞外地在分泌和膜结合的形式(66年]。而膜联蛋白A2单体主要存在于细胞质中,形成heterotetramer允许其绑定的质膜(67年- - - - - -70年]。潜在的细胞外膜联蛋白A2包括纤溶酶原激活物、角色信息粘附和免疫球蛋白运输(66年]。增加了证据calcium-dependent的膜联蛋白家族的角色,phopholipid-binding蛋白质在矿化过程36- - - - - -42),发现它们钙化软骨和骨骼中高度表达,为启动矿化细胞外基质(71年]。以前,有人建议,膜联蛋白成员也有能力功能补偿的方式彼此在骨骼发展的72年]。在研究细胞内过程参与成矿的一项研究中,超表达的膜联蛋白A2被证明能增加高山活动和软骨和骨形成,而减少膜联蛋白A2表达导致减少矿化(38]。集体,先前的发现与膜联蛋白在口腔组织符合他们的角色支持成骨分化和形成的矿物质31日,33,35,73年,74年]。

我们确定了膜联蛋白A2的人类PDLSC细胞表面表达的蛋白质。进一步流仪分析显示表面的膜联蛋白A2表达低拷贝数由人类的女朋友。膜联蛋白家族的一员,在矿化过程中扮演重要的角色(36- - - - - -42),膜联蛋白A2的低表达在人类女朋友可能相关的人类女朋友证明有限成骨的潜力在成骨的培养条件(数据未显示)。最近的一项研究[75年)表明,膜联蛋白A2调节附着力,自导,在干细胞移植在骨内膜的利基市场(43- - - - - -47和血管48,49]网站;因此,我们建议,它可能是一个潜在的标记PDLSC利基的牙周组织。

SPK1,特征的两个SPK亚型,增强细胞生长和增殖,参与免疫调节和肿瘤发生[76年]。这种高度保守的脂质磷酸化的激酶催化proapoptotic鞘氨醇形成凋亡sphingosine-1-phosphate (S1P) [77年),因此,是一个重要的细胞命运的决定因素(78年]。S1P是一个关键的鞘脂类代谢产物,调节各种生理和病理过程,如细胞增殖、分化、凋亡、迁移、入侵和血管生成78年),被认为是促进细胞生长和增殖和抑制细胞凋亡79年]。除了他们的角色在调节细胞增殖和细胞凋亡,SPK-S1P-S1P受体已经被证明参与免疫调节免疫细胞贩运等激活,t细胞分化[77年]。

多个研究表明SPK和S1P扮演重要角色在干细胞的维护76年包括内皮祖细胞,内皮祖细胞分化率(50,80年,81年),神经祖细胞(82年),人类胚胎干细胞(76年,83年),造血干细胞(76年),和肌肉祖细胞(84年]。此外,SPK1致癌潜力,制造商在许多组织类型肿瘤进展和癌症预后[85年,86年]。它主要是胞质酶,缺乏明显的膜锚定序列。然而,大量证据表明SPK1可以转移到质膜在细胞刺激生长因子和细胞因子(23- - - - - -25,27- - - - - -29日,83年]。本研究最初由蛋白质组分析和识别在人类PDLSC SPK1 SPK1表达了在所有细胞类型检查采用免疫分析。然而,我们无法证明这种酶的细胞表面表达,有限的可用性SPK1抗体适用于流式细胞术。

5。结论

总之,本研究是第一,迄今为止,对细胞表面的蛋白质组进行调查体外人类PDLSC扩大。除了承认MSC-associated细胞表面抗原的表达CD73 CD90、PDLSC也发现表达两种新颖的细胞表面蛋白,膜联蛋白A2和鞘氨醇激酶1。CD90,有趣的是,先前的研究已经涉及CD73膜联蛋白A2,鞘氨醇激酶1的表达在维护各种干细胞数量。重要的是,这项研究发现,人类皮肤上皮细胞缺乏CD73的表达,CD90、膜联蛋白A2。这些蛋白质组学研究提供了平台,进一步定义了细胞表面的蛋白质表达谱PDLSC为了进一步描述这种细胞群和支持开发新型分离和纯化策略。

信息披露

p .马克Bartold和斯坦Gronthos是文章的第二作者。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究部分由格兰特APP1043994 NHMRC项目,奖学金APP1042677, ADRF格兰特37.2013。

引用

1. t·格拉夫和m . Stadtfeld异质性的胚胎和成体干细胞”,细胞干细胞,3卷,不。5,480 - 483年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. m·欧文和a·j·Friedenstein“间质干细胞:骨髓来源成骨的前兆,”汽巴基础研讨会卷。136年,42-60,1988页。视图:谷歌学术搜索
3. s . Gronthos a·c·w·Zannettino大肠坟墓,太,s . j .干草和p . j . Simmons“微分STRO-1和碱性磷酸酶的细胞表面表达的抗原在离散发展阶段的主要文化人类骨细胞,”骨和矿物质研究杂志》上,14卷,不。1,47-56,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. b m。Seo, m .三浦s Gronthos et al .,”调查的多功能产后干细胞从人类牙周韧带,”《柳叶刀》,卷364,不。9429年,第155 - 149页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. d . Menicanin k . m . Mrozik:和田et al .,“Periodontal-ligament-derived干细胞具有长期生存的能力,自我更新,和体内多种组织类型的再生,”干细胞与发展,23卷,不。9日,第1011 - 1001页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. s . c . Chen诉马里诺,s . Gronthos和p . m . Bartold”假定的干细胞在人类牙周韧带的位置,”牙周研究期刊》的研究第41卷。。6,547 - 553年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. w·g·j . c .林康的年轻,p . m . Bartold”Malassez-a角色的上皮细胞建立在牙周再生?”牙周研究期刊》的研究第41卷。。4、245 - 252年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. t .岩田聪,m .大和h . Tsuchioka et al .,“牙周再生与多层次的牙周细胞ligament-derived犬模型,”生物材料,30卷,不。14日,第2723 - 2716页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 施p . m . Bartold s, s . Gronthos“干细胞和牙周再生,”牙周病学2000,40卷,不。1,第172 - 164页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. c·a·g·麦克洛克,”祖牙周韧带细胞群的老鼠,”解剖记录,卷211,不。3、258 - 262年,1985页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. c·a·g·麦克洛克e . Nemeth b . Lowenberg和a·h·梅尔彻”Paravascular的齿槽骨细胞在骨内膜的空间,导致牙周韧带细胞群,”解剖记录,卷219,不。3、233 - 242年,1987页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 山田,村上,r . Matoba et al .,“活跃的基因表达谱在人类牙周韧带和隔离PLAP-1,小说SLRP家族基因,”基因,卷275,不。2、279 - 286年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. y齐藤,t .吉泽章,f . Takizawa et al .,“牙周韧带成纤维细胞的细胞与特点是负调控矿化和Runx2 / Cbfa1 Osf2活动,其中部分由骨形成protein-2是可以克服的,”《细胞科学,卷115,不。21日,第4200 - 4191页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. c . Morsczeck g .过分伤感的t . e . Reichert f . Vollner k .吉利莲和o . Driemel“成体干细胞再生牙科,”临床口腔调查,12卷,不。2、113 - 118年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. c·a·麦克洛克”对牙周膜蛋白质组学:当前策略和未来的承诺,“牙周病学2000,40卷,不。1,第183 - 173页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. w . y, t . Wang Chen等人“微分蛋白表达Porphyromonas gingivalis为了应对分泌上皮细胞组件”,蛋白质组学,5卷,不。1,第211 - 198页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 问:夏,t . Wang f .陶布et al .,细胞内的“定量蛋白质组学Porphyromonas gingivalis”,蛋白质组学,7卷,不。23日,第4337 - 4323页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. p·d·威斯·g·h·Talbo n . Slakeski和e·c·雷诺兹的小说heterodimeric外膜蛋白的识别Porphyromonas gingivalis通过二维凝胶电泳和肽质量指纹。”欧洲生物化学杂志,卷268,不。17日,第4757 - 4748页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m . j . Somerman郑胜耀阿切尔g . r . Imm和r·A·福斯特,“人类牙周韧带细胞的比较研究和牙龈成纤维细胞体外,”牙科研究杂志》,卷67,不。1,第70 - 66页,1988。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. c . Mayrhofer s Krieger g . Allmaier, d . Kerjaschki”消化兼容的标签表面蛋白的重要细胞在体外和体内,”蛋白质组学》第六卷,没有。2、579 - 585年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. p . s . Zilm a .米拉c·j·巴格利和a·h·罗杰斯的碱性pH值增长”效应细胞被膜蛋白的表达梭菌属nucleatum”,微生物学第6部分,卷。156年,第1794 - 1783页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 答:Gorg, g . Boguth c .奥氏和w·维斯,“二维电泳的蛋白质固定化pH梯度4 - 12,“电泳,19卷,不。8 - 9,1516 - 1519年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. n . Ancellin c . Colmont j·苏et al .,“细胞外出口的鞘氨醇激酶酶。鞘氨醇1-phosphate生成和血管生成血管成熟的感应,“《生物化学》杂志上,卷277,不。8,6667 - 6675年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. j . a . Hengst j·m·吉尔福德·t·e·福克斯,x, e·j·康罗伊和j·k·云,“鞘氨醇激酶1本地化的质膜脂质筏microdomain克服血清剥夺诱导生长抑制,”生物化学和生物物理学的档案,卷492,不。1 - 2、62 - 73年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. k·e·贾曼p·a·b·莫雷蒂j . r . Zebol和s . m . Pitson“易位鞘氨醇激酶1的质膜是由钙和integrin-binding蛋白质1”生物化学杂志,卷285,不。1,第492 - 483页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. s . m . Pitson p .夏,t·m·勒克莱尔et al .,“Phosphorylation-dependent易位鞘氨醇激酶的质膜驱动其致癌信号,”《实验医学杂志》上,卷201,不。1,49-54,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. r . v . Stahelin j . h .黄黄永发。金et al .,“膜机制针对人类的鞘氨醇激酶1,“《生物化学》杂志上,卷280,不。52岁,43030 - 43038年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 鞘氨醇激酶b·w·瓦滕伯格”角色定位在鞘脂类信号,”世界生物化学杂志》上,1卷,不。12日,第368 - 362页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. k . w .年轻,j . m .鹞m . j .帕金森et al .,“Ca^{2 +}鞘氨醇激酶/ calmodulin-dependent易位:角色在质膜搬迁而不是激活”,细胞钙,33卷,不。2、119 - 128年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. e . Reichenberg m . Redlich p Cancemi et al .,“蛋白质组学分析牙周韧带成纤维细胞的蛋白质成分”牙周病学杂志》,卷76,不。10日,1645 - 1653年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. 凌x l .吴魏,j . et al .,“早期成骨的微分蛋白质概要文件被人类牙周韧带细胞蛋白质组学分析,“牙周研究期刊》的研究,44卷,不。5,645 - 656年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. p l . j . Foster a . Zeemann c·李·m·曼o . n . Jensen和m .卡塞姆“微分表达式分析膜蛋白的定量蛋白质组学在人类间充质干细胞线进行成骨细胞分化,“干细胞,23卷,不。9日,第1377 - 1367页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. A.-X。张,W.-H。Yu B.-F。妈et al .,”蛋白质组学鉴定不同表达蛋白质负责从人类间充质干细胞成骨细胞分化,“分子和细胞生物化学,卷304,不。1 - 2、167 - 179年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. h . j .阳光、y y Bahk崔y . r . j . h .垫片和j·w·李,s·h·汉”蛋白质组分析在串行亚文化和人类间充质干细胞的成骨分化,“骨科研究期刊》的研究,24卷,不。11日,第2071 - 2059页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. k . m . Mrozik p s Zilm c·j·巴格利et al .,“蛋白质组学鉴定间充质干细胞的人口来自绵羊的牙周韧带,牙髓,和骨髓:分析差异表达蛋白质,”干细胞与发展,19卷,不。10日,1485 - 1499年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m . Balcerzak e . Hamade l . Zhang et al .,“角色的膜联蛋白和碱性磷酸酶在矿化过程中,“Acta Biochimica Polonica,50卷,不。4、1019 - 1038年,2003页。视图:谷歌学术搜索
37. d . c . Genetos s Watari a . Wong和c e . Yellowley“缺氧增加膜联蛋白A2表达成骨细胞的细胞通过VEGF和ERK,”骨卷,47号6,1013 - 1019年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. j·m·吉列和s·m·Nielsen-Preiss膜联蛋白2在成骨细胞矿化的作用。”《细胞科学,卷117,不。3、441 - 449年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. t·l·唐纳修上流社会的d . c . Genetos c·r·雅各布斯h·j·多纳休和c e . Yellowley”膜联蛋白V破坏损害机械诱导钙信号在成骨细胞的细胞,”骨,35卷,不。3、656 - 663年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. t·基尔希,b . Swoboda》。不,“激活膜联蛋白II和V表达式,终端分化、矿化和人类骨关节炎软骨细胞凋亡,”骨关节炎和软骨,8卷,不。4、294 - 302年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. d . Pfander b Swoboda, t·基尔希,”表达的早期和晚期分化标记(增殖细胞核抗原、syndecan-3膜联蛋白VI,和碱性磷酸酶)由人类骨关节炎软骨细胞,”美国病理学杂志》,卷159,不。5,1777 - 1783年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. 王w·t·基尔希,“视黄酸刺激annexin-mediated生长板软骨细胞矿化,“《细胞生物学》杂志上,卷157,不。6,1061 - 1069年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. j .张c妞妞,你们l . et al .,“识别血液干细胞利基细分市场大小的控制,”自然,卷425,不。6960年,第841 - 836页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. 金牛,y . Ko, r . Forkert et al .,“骨桥蛋白是一种造血干细胞利基组件,它负调节干细胞池大小,”《实验医学杂志》上,卷201,不。11日,第1791 - 1781页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. s . k .尼尔森h·m·约翰斯顿g . a . Whitty et al .,“骨桥蛋白,一个关键组成部分的造血干细胞利基和监管机构原始造血祖细胞,”血,卷106,不。4、1232 - 1239年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. l . m . Calvi g·b·亚当斯,k . w . Weibrecht et al .,“成骨细胞的细胞调节造血干细胞利基,”自然,卷425,不。6960年,第846 - 841页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 时候,a . Hirao m . Ohmura et al .,“Tie2 /而信号调节在骨髓中造血干细胞静止,”细胞,卷118,不。2、149 - 161年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. 服部s . t . Avecilla k b Heissig et al .,“Chemokine-mediated交互与骨髓造血祖细胞血管利基为血栓形成是必需的,”自然医学,10卷,不。1,第71 - 64页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. m·j·基尔O。o·h·h·Yilmaz t Iwashita Yilmaz, c . Terhorst和s·j·莫里森,“大满贯家庭区分造血干细胞和祖细胞受体和揭示内皮干细胞利基市场,”细胞,卷121,不。7,1109 - 1121年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. j·b·j·m·巴雷特k . Parham Pippal et al .,”表达的鞘氨醇激酶1提高祖人类内皮细胞表型,”微循环,18卷,不。7,583 - 597年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. 张,“CD73:目标对癌症免疫疗法”,癌症研究,卷70,不。16,6407 - 6411年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. s p·科尔根h . k . Eltzschig t . Eckle l·f·汤普森,“生理角色ecto-5′核苷酸酶(CD73)”Purinergic信号,卷2,不。2、351 - 360年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. p . a .导演j·斯塔德·k·达西·m·j·史密斯,”CD73:有效抑制抗肿瘤免疫反应,”免疫学的趋势,33卷,不。5,231 - 237年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. c .解决m . Steinsdoerfer m .提供et al .,”t细胞增殖的抑制小鼠多能间充质基质细胞是由CD39表达式和腺苷生成,“细胞移植,20卷,不。8,1221 - 1230年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. f . Saldanha-Araujo f·s·费雷拉,p . v .帕尔马et al .,“间充质基质细胞调控CD39并提高腺苷生产抑制激活淋巴细胞),“干细胞研究,7卷,不。1,第74 - 66页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. 施n和d . Menicanin s, p . m . Bartold和s . Gronthos“人类牙周韧带干细胞的免疫调节特性。”细胞生理学杂志,卷219,不。3、667 - 676年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. t·加藤k .服部年宏t Deguchi et al .,”鼠基质细胞的成骨的潜力来自牙周韧带,”组织工程和再生医学杂志》上,5卷,不。10日,798 - 805年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. A . Tomokiyo Maeda h . s .藤井裕久等。”多能干细胞克隆人类牙周韧带细胞与神经嵴细胞表型促进neurocytic分化、迁移、和生存,”细胞生理学杂志,卷227,不。5,2040 - 2050年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. o . Trubiani s . f . Zalzal r . Paganelli et al .,“胚胎nanog标记的表达谱,OCT-4 SSEA-1, SSEA-4,人类牙周韧带和frizzled-9受体间充质干细胞,”细胞生理学杂志,卷225,不。1,第131 - 123页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. c·m·鲍姆。l . Weissman a . s .冢本a m。扣,b . Peault”候选人的隔离人类造血干细胞的人口,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷89,不。7,2804 - 2808年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. n·m·马森,i s Currie j . d .阶地o . j .花园,r . w .公园,和j·a·罗斯,“在人类胎儿肝肝祖细胞表达Thy-1椭圆形细胞标记,”美国Physiology-Gastrointestinal和肝脏生理学杂志》上,卷291,不。1,G45-G54, 2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. z f·杨,d . w Ho·m·n·Ng et al .,“意义CD90 +癌症干细胞在人类肝癌,”癌症细胞,13卷,不。2、153 - 166年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. j·e·布拉德利·g·拉米雷斯,j . s . Hagood”角色和监管Thy-1,上下文相关的调制器的细胞表型,”BioFactors,35卷,不。3、258 - 265年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. s . m . m . Haeryfar和d . w . Hoskin Thy-1:超过一只老鼠pan-T细胞标记,”免疫学杂志,卷173,不。6,3581 - 3588年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. m . Dominici k·勒布朗,穆勒et al .,“最低限度标准定义多功能间充质基质细胞。被国际社会公认为细胞治疗位置声明。”Cytotherapy,8卷,不。4、315 - 317年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. d . a .筛和惠普埃里克森,“细胞外膜联蛋白二世”国际生物化学和细胞生物学杂志》上卷,29号11日,第1223 - 1219页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. n . Zobiack诉Gerke, resch,“复杂的形成和submembranous本地化的膜联蛋白2和S100A10住HepG2细胞,”2月的信,卷500,不。3、137 - 140年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. j . r . Glenney Jr .)”共同沉淀的肠道p36 73 k蛋白质和高分子量的因素,”实验细胞研究,卷162,不。1,第190 - 183页,1986。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. 诉Gerke和k·韦伯的身份p36K磷酸化劳斯氏肉瘤病毒与蛋白质纯化刷边界转换;calcium-dependent绑定non-erythroid血影蛋白和f -肌动蛋白在EMBO杂志,3卷,不。1,第233 - 227页,1984。视图:谷歌学术搜索
70. c·泰尔·m·奥斯本,诉Gerke”紧协会与submembranous酪氨酸激酶的底物膜联蛋白ⅱ细胞骨架完好无损取决于侯,Ca2 +绑定网站,“《细胞科学,卷103,不。3、733 - 742年,1992页。视图:谷歌学术搜索
71. h·c·安德森,“分子生物学基质小泡。”临床骨科和相关研究,没有。314年,第280 - 266页,1995年。视图:谷歌学术搜索
72. b . Brachvogel j . Dikschas h . Moch et al .,“膜联蛋白A5不是骨骼发展至关重要,”分子和细胞生物学,23卷,不。8,2907 - 2913年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. k元,js。黄,C.-W。许,黄世建。挂”mineralization-associated膜蛋白发挥作用的生物功能peptide-coated牛羟磷灰石,”牙周研究期刊》的研究,42卷,不。5,420 - 428年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. d . Bozic l . Grgurevic i Erjavec et al .,“cementoblastic细胞的蛋白质组学和基因表达谱治疗骨形成protein-7体外,”临床牙周病学杂志,39卷,不。1,第90 - 80页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. j . y荣格,j . Wang歌et al .,“膜联蛋白2表达成骨细胞和内皮细胞调节干细胞粘附,自导,和移植后移植,”血,卷110,不。1,第90 - 82页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. a . Pebay c . s .焊机,s m . Pitson“干细胞调控溶血,”前列腺素和其他脂质介质,卷84,不。3 - 4、83 - 97年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. h .太极,“Sphingosine-1-phosphate和免疫调节:交易,”药理科学趋势,32卷,不。1 - 24,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. a·奥利维拉和明镜周刊,“鞘氨醇激酶:至关重要的细胞功能的中介”前列腺素和其他脂质介质,卷64,不。1 - 4、123 - 134年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. 明镜,o . cuvilly l . c .他通常et al .,“Sphingosine-1-phosphate在细胞生长和细胞死亡,”纽约科学院上卷。845年,一度连,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. 李诉驻x c·哈恩et al .,“鞘氨醇激酶1增强内皮细胞生存通过PECAM-1-dependent PI-3K / Akt激活和bcl - 2家族成员的规定,“血,卷105,不。8,3169 - 3177年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. c . s .焊机,w . y .太阳,t·马修斯et al .,“鞘氨醇激酶调节内皮祖细胞分化,“血,卷113,不。9日,第2117 - 2108页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. h·孟y元,v . m .李“鞘氨醇激酶1 / S1P信号损失损害细胞的生长和存活的神经元和祖细胞感觉神经节中,“《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。11日文章ID e27150, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. s m a . Pebay r . c . b . Wong Pitson et al .,“sphingosine-1-phosphate和血小板源生长因子的重要角色在维护人类胚胎干细胞,”干细胞,23卷,不。10日,1541 - 1548年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. y经营,t·a·帕特里奇,r .松田Zammit和p . s .,“肌肉卫星细胞进入细胞周期需要鞘脂类信号,”《细胞生物学》杂志上,卷174,不。2、245 - 253年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. p .夏j . r .赌博,王l . et al .,“鞘氨醇激酶的致癌作用,”当代生物学,10卷,不。23日,第1530 - 1527页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. d .师大k . Takabe d . Kapitonov s Milstien和明镜周刊,“针对SphK1作为对抗癌症的新战略”目前的药物靶点,9卷,不。8,662 - 673年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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