大鼠鼻呼吸Mucosa-Derived间充质干细胞分化成Schwann-Like细胞促进PC12细胞的分化和形成髓鞘在体外

文摘

许旺细胞(SC)作为细胞移植疗法能增强周边和中枢神经修复实验,但它是有限的施主能级发病率的临床应用。我们调查天气呼吸道黏膜干细胞(REMSCs),一种间充质干细胞(EMSCs),隔绝鼠鼻中隔可以分化成功能性Schwann-like细胞(SC-like细胞)。REMSCs迅速扩散在体外并表示神经嵴标记(SOX10,巢蛋白、波形蛋白和CD44)。处理的混合胶质生长因子7天,REMSCs分化成SC-like细胞。差异化REMSCs (dREMSCs)展出spindle-like形态类似于SC细胞。采用免疫染色和免疫印迹显示SC-like表示胶质细胞标记(GFAP、S100β,和我)和CNPase Galc。当cocultured dREMSCs 5天,PC12细胞分化成成熟neuron-like细胞神经突长。更重要的是,dREMSCs可能形成髓鞘结构PC12细胞的神经突的21天在体外。我们的数据表明REMSCs,一种EMSCs,可以分化成SC-like细胞和有能力促进PC12细胞的分化和形成髓鞘在体外。

1。介绍

雪旺细胞(SCs) myelin-forming周围神经系统的神经胶质细胞(pn),他们已报告在pn支持神经再生和中枢神经系统(CNS)形成髓鞘和提供各种神经营养因子和分子锚(1- - - - - -4]。在pn,端到端吻合术已建议作为主要选择治疗急性横断损伤的神经组织。当两个受损的神经末梢之间的差距太大缝合,自体神经移植通常需要(5]。供应有限的自体神经组织和施主能级的发病率是挑战神经学家。在脊髓损伤中枢神经系统,代表常见的中枢神经系统损伤和臭名昭著的终身残疾患者并发症,仍缺乏有效的治疗方法科学和治疗(6]。组织工程技术提供种子细胞对神经损伤可能是另一种修复策略。成功的组织工程神经组织的再生利用施万细胞已报告,各种细胞载体和细胞因子和生长因子,这可能会打开一个治疗方法治疗受损的神经组织的7- - - - - -16]。

然而,利用SCs严重担忧组织工程神经组织的入侵方法收集SC-donor组织和文化扩张他们的困难17]。因此,扩张和诱导干细胞在体外被认为是一种很有前途的工具来克服组织移植的实际和伦理问题,并积极寻找一个合适的细胞来源的神经组织工程领域的主要焦点。

间充质干细胞(msc)来自中胚层的可能是另一种细胞来源的神经组织由于其多功能分化特性。一些报道表明,骨骨髓来源间充质干细胞(bmsc)和脂肪间充质干细胞(ADSCs)可以transdifferentiate SCs [12,18]。然而,msc的神经性的潜力相比弱与干细胞来源于神经组织,因为他们来自中胚层的层(19,20.]。虽然它已经表明,神经干细胞(nsc)隔绝的大脑新出生的雄性SD (SD)大鼠中可能分化成SC-like细胞,人类nsc难以广泛应用于临床实践,因为困难获得同种异体组织来源和不可用自体来源的21,22]。

间充质干细胞(EMSCs),多能细胞能够自我更新和分化成多种细胞类型,在胚胎发育期间来源于神经嵴(23,24]。在胚胎发育期间ectomesenchyme导致颅面结构的形成。鼻中隔粘膜由上部的嗅觉粘膜和呼吸道粘膜在其下部虽然他们都源自胚胎外胚层层。在成年哺乳动物干细胞存在于人类鼻粘膜和可以被诱导分化成神经元细胞(25]。我们以前的工作表明,呼吸道粘膜毗邻嗅觉粘膜包含人口EMSCs [26]。我们还发现,呼吸道黏膜干细胞(REMSCs)更适合分化成神经元或神经胶质细胞与骨骨髓来源msc后短时间内神经感应文化(27]。因此,假定REMSCs可能分化成SC-like细胞的潜力。

在目前的研究中,REMSCs被孤立,扩大,确认为EMSCs和诱导分化成SC-like细胞。的能力促进PC12细胞的分化和形成髓鞘也被评估在体外。

2。材料和方法

2.1。REMSCs和PC12细胞的培养

本研究已通过IACUC江苏大学。培养和隔离REMSCs进行之前报道的刘et al。26)与小修改。总之,成年SD大鼠与戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.05 g / kg)。中间三分之一的鼻中隔解剖,洗在DMEM / F-12 (DF12)(美国Gibco)三次,然后切成小块,与0.25%胰蛋白酶消化(美国Gibco)在磷酸盐缓冲溶液(美国Gibco PBS) 25分钟37°C。组织/细胞悬液置于一个25厘米²瓶在生长介质与10%的边后卫,DF12补充100 U /毫升青霉素,100μg / mL链霉素(美国Gibco)和培养公司37°C的5%₂和95%的空气和饱和湿度。细胞的生长被数码相机连接到一个记录每日相差显微镜(蔡司,观察者,A1)。每72小时中被改变。当贴壁细胞迁移从外植体和汇合的达到了80%,一般一个星期在文化、细胞悬浮trypsin-EDTA 0.05%然后在新的培养瓶5×10³细胞/厘米²在相同的生长介质的观察。细胞在其第四通道被用于所有的特性研究。

PC12细胞系来源于一个大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤。这个细胞系是常用的作为神经元分化的模型系统的文化设置(28]。PC12细胞培养在37°C和5%的二氧化碳DF12中补充10%的边后卫,100 U /毫升青霉素,100μg / mL链霉素(美国Gibco)。

2.2。诱导大鼠REMSCs成SC-Like细胞

REMSCs在第四段是用来区分成SC-like细胞。SC-like细胞分化培养基(SCDM) DF12中补充10%的边后卫,5 ng / mL血小板源生长factor-AA (PDGF-AA;美国PeproTech), 10 ng / mL bFGF(美国PeproTech) 5μ美国M forskolin(σ),200 ng / mL heregulin(美国PeproTech HRG)。细胞培养10天在SCDM新鲜培养基添加每72小时。

2.3。Coculture SC-Like细胞PC12细胞在体外

诱导SC-like细胞的能力,促进PC12细胞的分化是由检查他们的交互与PC12细胞和myelin-forming SC-like细胞的能力。PC12细胞分离和山肩的密度500细胞/厘米²在菜肴DF12 + 10%的边后卫。建立了24小时后,4组cocultures: A组:PC12细胞单独培养DF12加上10%的边后卫,B组:SCDM PC12细胞培养;C组:PC12细胞和5000个细胞/厘米²REMSCs cocultured DF12 + 10%的边后卫;D组:PC12细胞和5000个细胞/厘米²SC-like细胞cocultured SCDM。这四组培养5天,每48小时媒介所取代。

观察两种类型的细胞之间的相互作用,SC-like细胞感染了绿色荧光蛋白(GFP)重组腺病毒,和PC12细胞被标记CM-Dil(美国表达载体)。GFP重组腺病毒是放大HEK 293细胞株。在分化培养基培养REMSCs后1周,GFP病毒感染增加了REMSCs 100我24小时。CM-Dil加入PC12细胞培养基浓度(1工作μ米);PC12细胞培养基中孵化与CM-Dil 5分钟37°C,然后额外15分钟在4°C。PC12细胞被标记后,他们用PBS和resuspend新鲜媒介coculture SC-like细胞。

2.4。西方墨点法

免疫印迹分析被用来检测我的表达,GFAP、CNPase S100βSOX10,巢蛋白、波形蛋白和由SC-like细胞CD44和REMSCs NF-H的表达,Synapsin II, GAP-43, psd - 95 PC12细胞。总蛋白提取与里帕缓冲区(10毫米Tris-HCl pH值7.8,150毫米氯化钠,1%诺乃清洁剂P40、钠脱氧胆酸盐0.1%,0.1% SDS, EDTA 1毫米,8 M尿素,10 lg / mL抑肽酶,PMSF和1毫米)。蛋白质含量是由bicinchoninic酸工具包。等量的蛋白质(50μg)从每个样本被加载到8%聚丙烯酰胺凝胶,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,electrophoretically转移到PVDF膜(美国微孔)。五个%脱脂奶粉被用来阻止非特异性结合的抗体。一夜之间,膜被孵化在4°C与兔子anti-P75 (Abcam 1: 500年,英国),鼠标anti-GFAP(1: 400年,圣克鲁斯,美国),鼠标anti-CNPase (Abcam 1: 500年,英国),兔子anti-S100β(Abcam 1: 1000年,英国),兔子anti-SOX10 (Abcam 1: 1500年,英国),兔子anti-vimentin抗体(Abcam 1: 1000年,英国),兔子anti-CD44(博士德1:500年,中国),anti-nestin抗体(1:500年,圣克鲁斯,美国),鼠标anti-NF-H(1: 300年,圣克鲁斯,美国),兔子anti-Synapsin II(1: 300年,圣克鲁斯,美国),鼠标anti-GAP-43(1: 300年,圣克鲁斯,美国),兔子anti-NGF (Abcam 1: 1000年,英国),或兔抗psd - 95(1: 500年,英国Abcam)抗体。膜被孵化与HRP-conjugated山羊anti-mouse或山羊anti-rabbit二级抗体(BioLegend 1: 1000年,美国)1小时。膜是发射极耦合逻辑处理化学发光底物(美国微孔)1分钟,由接触冷却CCD相机(Sage成像系统)。量化检测的乐队是由微使用ImageJ软件。

2.5。Immunofluorescent染色

细胞被固定在4%多聚甲醛,然后用0.1% Triton X-100/1% permeabilized BSA在PBS。主要的兔子anti-nestin抗体(1:300),兔子anti-Vimentin抗体(1:200),兔子anti-SOX10(1: 1000),兔子anti-CD44(1: 200),反- psd - 95(1: 1000),和anti-NF-H(1: 300)被用来染色REMSCs EMSCs表型的鉴定。主要的鼠标anti-GFAP(1: 300),兔子anti-P75(1: 200),兔子anti-S100β(1:300),兔子anti-GALC(1: 200年,圣克鲁斯,美国),和兔子anti-CNPase(1: 200)被用来染色SC-like细胞识别的SC表型。一夜之间,这些细胞被在4°C的环境与二次抗体包括CY3-conjugated山羊anti-mouse免疫球蛋白(BioLegend 1: 300年,美国)和CY3-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(BioLegend 1: 300年,美国)在1% BSA / PBS稀释2 - 3 h在室温下。美国核标记了赫斯特33342(σ)。用倒置荧光显微镜检查染色细胞(德国蔡司,观察者,A1)。

2.6。神经突的PC12细胞产物的分析

后的PC12细胞cocultured SC-like细胞GFP感染或感染GFP REMSCs 5天,神经突的形态分析和量化轴承是在荧光显微镜下进行细胞如前所述[29日,30.]。超过100细胞在10个随机选择的字段数和细胞神经突的长度大于或等于其胞体阳性神经突的产物。表达的阳性细胞数和细胞总数的比例在每个字段。神经突的长度也是衡量所有的细胞阳性神经突在产物通过追踪神经突的最长长度。每neurite-bearing细胞平均最大神经突长度计算每个字段和数据从10每道菜被指定为一个实验。neurite-bearing细胞的神经突的长度是衡量ImageJ软件(NIH) (31日)和记录。这些coculture实验重复三次,独立分析。

2.7。髓鞘形成SC-Like细胞的能力

PC12细胞分离和山肩密度500细胞/厘米²在培养皿中培养与10%的边后卫DF12补充。24小时后,SC-like细胞被播种密度5000细胞/厘米²对PC12细胞和介质SCDM所取代。控制,其他两组设计:SC-like细胞单独培养,并与PC12细胞REMSCs播种。每72小时中被改变。在文化7天之后,这些细胞被固定在2%戊二醛,然后评估通过扫描电子显微镜(Hitachi-S4800、日本)。后21天在文化、细胞被固定在2%戊二醛在4°C钠甲次砷酸盐缓冲24小时,然后用1%锇酸固定和1%醋酸双氧铀,并嵌入在环氧树脂。超薄部分(50 - 70 nm)切割和安装在Formvar-coated槽网格。这些细胞的超微结构观察和透射电子显微镜(Philips-Tecnai 12、荷兰)。

3所示。统计分析

从上述三个独立的实验获得数据和现在一样意味着±SEM。单向方差分析与Dunnett(方差分析)测试和学生的以及用于分析数据。的值被认为是具有统计学意义。

4所示。结果

4.1。REMSCs的特点

5天后,从外植体附着细胞迁移,形成殖民地(图1(一))。在第四段REMSCs fibroblastic-like细胞和扩散迅速出现在塑料基板(图1 (b))。Immunofluorescent染色显示几乎所有的REMSCs表示如SOX10(神经嵴细胞标记%)、巢蛋白(%)、波形蛋白(%)和CD44 (%)(图2(一个)- - - - - -2 (d))。

4.2。分化成SC-Like细胞

REMSCs服用SCDM含有胶质细胞生长因子的混合物为10天。SC-like细胞的形态学和SC蛋白质如GFAP的表达,S100β、Galc CNPase,我检查了。诱导分化后,老鼠REMSCs从呈形态学改变主轴的形状似乎比以前更细长,这些细胞可以继续增殖(图3(一个))。Immunofluorescent染色显示%的分化细胞GFAP阳性(图3 (b));%的分化REMSCs我(图)阳性3 (c));% S100分化REMSCs是积极的β(图3 (d));%的分化REMSCs Galc阳性(图3 (e)),%的分化REMSCs CNPase阳性(图3 (f))。

进一步证实immunofluorescent染色结果,免疫印迹分析用于研究神经胶质的表达特定标记和神经嵴标记(图4)。β肌动蛋白是用来装载参考。每个蛋白质的表达水平的比率表示为标记蛋白的表达水平β肌动蛋白。GFAP的表达水平,CNPase,我和S100β在SC-like细胞REMSCs相比更加明显()(数据4(一)和4 (c))。此外,数据4 (b)和4 (d)的差别显示了对这些巢蛋白、波形蛋白和CD44蛋白SC-like细胞()。然而,在REMSCs SOX10相似的水平和SC-like细胞()(数据4 (b)和4 (d))。

4.3。SC-Like细胞的功能分析

检测的能力SC-like细胞诱导PC12细胞的分化并形成髓鞘结构的探明PC12细胞,我们cocultured SC-like细胞PC12细胞neuron-like细胞。PC12细胞被贴上CM-Dil(红色);SC-like细胞或REMSCs病毒感染了GFP(绿色)。PC12细胞组(PC12细胞单独培养)和B组(SCDM PC12细胞培养)圆的红色和几乎没有探明(数字5(一个)和5 (b))。在C组(PC12细胞和REMSCs cocultured DF12介质),神经突短的可以发现(图5 (c)),而在D组(PC12细胞和SC-like细胞cocultured SCDM), PC12细胞神经突长增长(图5 (d))。与A组相比%),积极neurite-bearing细胞的百分比显著增加% (),% (),分别在C组和D组,但B组(%)没有显著差异(图5 (e))。同时,积极neurite-bearing细胞的百分比在D组与C组相比显著升高()(图5 (e))。同样,与A组相比μ米),最长的神经突的长度显著增加μ米(),μ米(),分别在C组和D组(图5 (f))。在A组和B组之间无显著差异(μ米)(图5 (f))。进一步研究PC12细胞的分化,免疫印迹被用来检查NF-H的表达水平,Synapsin II, GAP-43, psd - 95电脑12个细胞。如图6(一),与A组相比,GAP-43, NF-H, Synapsin二世和psd - 95显著()增加组C和D组之间有显著差异在NF-H组C和D组,Synapsin II, psd - 95和GAP-43 ()。Immunofluorescent染色表明,D组分化PC12细胞表达NF-H (%)和psd - 95 (%)(图6 (b)和6 (c))。神经生长因子水平的检查。SC-like细胞强阳性神经生长因子表达与REMSCs相比(图7)。评估SC-like细胞的髓鞘形成能力,与SC-like细胞或REMSCs PC12细胞培养。组成相衬显微镜下的形态观察,扫描电子显微镜(SEM)下观察也表明SC-like细胞双极和spindle-like形(图8(b))。当PC12细胞被cocultured REMSCs短(数字神经突8(c1)和8(c2)),相比之下,当cocultured SC-like为7天,细胞PC12细胞的神经突长和增长SC-like细胞(数字8(d1)和8(d2))。coculture 21天之后,透射电子显微镜(TEM)表明,SC-like神经突细胞可以形成髓鞘(图9 (c))。相反,REMSCs不能形成髓鞘结构PC12神经突(图9 (b)),REMSCs不能形成髓鞘结构没有探明(图9(一个))。

5。讨论

以前的研究已经表明REMSCs可能形成neurospheres neurosphere-forming状态,并分化成神经元(32]。然而,REMSCs能否沿着许旺细胞谱系分化仍然是未知的。在这里,我们的结果表明,分化REMSCs雪旺细胞有相似的形态和表型特征,更重要的是,分化REMSCs拥有myelin-forming能力,这是雪旺细胞的最重要的功能。

EMSCs起源于神经嵴在胚胎发育,导致颅面结构的形成33]。头部区域,神经嵴干细胞可以发现在许多器官和组织(34- - - - - -40]。最近,呼吸道粘膜细胞分离成人下鼻甲据报道多功能神经嵴干细胞(41]。我们以前的研究已经表明REMSCs表示msc标记如CD90、CD45和CD105不同成neuron-like细胞和成骨细胞25,27]。戈德斯坦和他的同事们的一项研究也表明,鼻干细胞来自鼻中隔形成neurosphere和产生neuronal-like细胞分化条件下(32]。在最近的研究中,immunofluorescent REMSCs染色显示,大多数细胞表达神经嵴标记包括巢蛋白、波形蛋白和SOX10(图2)。巢蛋白和波形蛋白被认为是神经干细胞的一个标志,表示在神经嵴细胞42- - - - - -46]。SOX10扮演了一个角色在发展早期当它存在于神经嵴细胞,它是唯一所需的转录因子的生成胶质细胞从嵴细胞在胚胎发育47]。与此同时,这些细胞也表达CD44的标记premigratory和迁徙的颅神经嵴48]。coexpression巢蛋白、波形蛋白、SOX10和CD44提供了强有力的证据,REMSCs起源于神经嵴,能够分化成胶质细胞和neuron-like细胞。

据报道,多种组织来源的干细胞能够分化成SC-like细胞(12,18,49]。Nestin-positive bmsc曾被观察到沿神经胶质细胞谱系分化(50,51]。小百分比的脂肪中提取干细胞与积极的巢蛋白标记,能够分化成SC-like细胞(18,52]。也已经证明,msc的胶质形成势来源于骨髓和脂肪也可能被解释成[嵴细胞群的存在53]。此外,Labat等人也发现bmsc起源于神经嵴的外周血单核细胞,同时对此表示标记中胚层和神经外胚层标记(54]。它表明ectomesenchymal-derived干细胞可能存在多个组织。然而,嵴细胞在这些组织的数量太小,不能获得足够的SCs有效的临床应用。目前的研究表明,几乎所有的REMSCs来自鼻中隔nestin-positive SOX10-positive。同意我们的发现,REMSCs来源于人类下鼻甲也表达了神经嵴标记(41]。这些结果共同表明REMSCs可能有更强的潜力比其他来源的干细胞分化成SC-like细胞。

调查的能力REMSCs分化成SC-like细胞,REMSCs在分化培养基培养(HRG、移频键控、PDGF-AA和bFGF)以前是用来从MSC诱导雪旺细胞和ADSC18,49,55]。5天之后,REMSCs elongated-spindle形态。免疫印迹的差别显示了对这些巢蛋白、波形蛋白和CD44(数据4 (b)和4 (d))。然而,SOX10 SC-like细胞水平与REMSCs相似。SOX10据报道是一个神经嵴标记(42]。此外,SOX10是重要的,表示在许旺细胞发展的所有阶段和独立和协同工作与其他转录因子调节雪旺细胞特定位点(56- - - - - -59]。在我们的研究中,免疫印迹分析表明,水平SOX10 REMSCs和SC-like细胞相似。我们推测SOX10 REMSCs分化中扮演一个角色。Immunofluorescent dREMSCs染色显示,大多数细胞表达许旺细胞标记如GFAP、我和S100β(图3)。在以前的研究中也发现了类似的结果(12,18,49]。有趣的是,SC-like细胞表达Galc为少突胶质细胞在特定的细胞表面抗原标记文化(60]。此外,这些SC-like细胞表达CNPase(图3),这是少突胶质细胞和雪旺细胞表达。CNPase作为myelin-forming标记细胞,光感受器神经元在长期的文化61年]。CNPase膜结合,与微管,这是第三个最丰富的中枢神经系统髓鞘蛋白,代表4%的中枢神经系统髓鞘蛋白(62年]。超表达突变表明CNPase髓压实作用[63年,64年]。因此,CNPase被认为是一个标记细胞产生髓磷脂。这些结果表明,SC-like细胞髓鞘形成的能力。

形态和表型特征的证据可能不足以证明SC-like细胞的功能类似于雪旺细胞。它已经证明了SC可以诱导PC12细胞的分化和形成髓鞘PC12[神经突12]。这里,我们测试的功能SC-like细胞被cocultured PC12细胞。当cocultured SC-like细胞5天,PC12细胞神经突延长和神经突细胞的显著增加的比例相比在coculture REMSCs(图5)。免疫印迹显示SC-like细胞促进了NF-H的表达水平,GAP-43、psd - 95和Synapsin II在PC12细胞(图6(一))。Immunofluorescent染色显示,分化PC12细胞表达NF-H和psd - 95(数字6 (b)和6 (c))。NF-H提供稳定发展神经突轴突,与轴突的阶段产物(65年]。psd - 95,这是一个膜相关鸟苷,是主要的支架蛋白的兴奋性突触后密度(66年]。所有这些结果表明SC-like细胞可以促进PC12细胞的分化。神经生长因子被认为扮演重要角色的分化PC12。当PC12细胞与神经生长因子治疗,PC12细胞扩展并形成突触结构和神经网络,神经突区分成neuron-like细胞(67年]。在当前的研究中,免疫印迹显示SC-like细胞神经生长因子的表达水平高于REMSCs(图7),这表明SC-like细胞可以促进PC12细胞分化的神经生长因子的表达。

SC细胞Myelin-forming能力是非常重要的。据报道之前,SC-like细胞诱导bmsc和ADSCs可以形成髓鞘在体外(12,52]。从REMSCs SC-like细胞可能形成髓磷脂的能力在体外和在活的有机体内。根据“地毯爬虫”模式,髓鞘形成开始沿着神经突的扩散膜表之前就转身移动下面增长表(68年]。我们观察到SC-like细胞增长的探明PC12细胞(图7天8)和神经突形成髓鞘结构(图21天9 (c))。然而,髓鞘结构没有检测到没有PC12细胞和REMSCs SC-like细胞培养中培养的PC12细胞。先前的研究已经表明,雪旺细胞髓鞘或nonmyelinating根据信号从轴突47]。从REMSCs SC-like细胞能否形成髓鞘在活的有机体内在将来的研究中仍然是一个问题。

msc被证明是安全的,因为他们并没有形成移植后肿瘤(69年]。研究表明,小鼠胚胎干细胞(制)将会形成畸胎癌当注入免疫缺陷小鼠70年]。另外,当注入人类胚胎干细胞(为)的严重联合免疫缺陷小鼠,为其能产生原始的、未分化的肿瘤(71年]。相反,Sieber-Blum发现表皮神经嵴干细胞移植到成年脊髓不形成肿瘤(72年]。同样,斯蒂芬·豪泽显示神经嵴干细胞从成人下鼻甲无法创建畸胎瘤(41]。这些数据可能集体表示的安全使用REMSCs和表明移植REMSCs可以替代neurotissue工程和神经退行性疾病的细胞治疗策略。然而,大规模的临床前和临床研究临床应用之前需要对其安全性。

6。结论

REMSCs隔绝鼻中隔能够分化成SC-like细胞有相似的形态,表型特征,与雪旺细胞和功能。这些发现可能表明,移植REMSCs可以替代neurotissue工程和神经退行性疾病的细胞治疗策略。

缩写

SC:	许旺细胞
EMSCs:	间充质干细胞
msc:	间充质干细胞
伴着:	骨骨髓来源干细胞
ADSCs:	脂肪干细胞
REMSCs:	呼吸道黏膜干细胞
SC-like细胞:	Schwann-like细胞
DF12:	DMEM / F-12
bFGF:	碱性纤维母细胞生长因子
PDGF-AA:	血小板源生长factor-AA
dREMSCs:	分化REMSCs
GFAP:	胶质原纤维酸性蛋白
Galc:	Galactosylceramidase
的边后卫:	胎牛血清
神经生长因子:	神经生长因子
绿色荧光蛋白:	绿色荧光蛋白
SCDM:	Schwann-like细胞分化培养基
制:	胚胎干细胞
为:	人类胚胎干细胞。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金(没有。81471263,没有。30570981,没有。30571878)和常州科技局(CJ20122027)。特别感谢将Jizong高博士,医学博士,Ph.D., for his critical review and editing the paper.

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