派生的组织在非洲爪蟾蜍光滑的胚胎表现出一致的生物电左右不对称

文摘

一致的左右不对称两侧对称动物的器官形态发生是一个迷人的方面发展。尽管胚胎模式不对称的内脏、心脏和大脑开始被理解,可能的微妙的不对称所知甚少出现在结构上相同的配对结构。我们研究了两个重要的发育事件:眼睛的生理控制神经嵴的开发和规范衍生品非洲爪蟾蜍光滑的胚胎。我们发现显著的跨膜电位超极化()界定眼睛感应通常发生在右眼领域。这种不对称随机扰动内脏左右模式,表明眼睛不对称与机制建立主要偏重。去极化通道的双边misexpression mRNA影响主要是右眼,揭示一个额外的功能不对称在眼睛的控制模式。ATP-sensitive K⁺SUR1通道亚基成绩单,不对称的眼睛表达原基,从而成为一名优秀的候选人观察生理上的不对称。这种微妙的不对称是不仅看到的眼睛:一致的不对称也观察到在差异化的黑色素细胞的迁移左右。这些数据表明,即使在解剖学上对称结构可能具有微妙而一致的偏重和与其他发育左右交互模式途径。

1。介绍

一致(定向偏见)内脏左右不对称,心脏和大脑是覆盖在整个双边对称的身体的各种生物(计划1,2]。错误在这个过程中形成一个重要的类人类出生缺陷(3- - - - - -5]。因此,理解左右模式和各个器官系统之间的相互作用的轴向身体的极性是极大的兴趣基本进化发育生物学和生物医学的先天缺陷。同样,大脑的高度边音的功能(如语言、演讲和构型)及其部分断开解剖左右不对称下研究几十年来一直是一个引人入胜的话题(6,7]。

最近的研究已经确定了许多基因(8- - - - - -13,生物物理14- - - - - -16),和生理17- - - - - -21)机制,构成大规模的左右不对称的地点不对称的器官。然而,更易于理解的微妙的不对称发生在配对的身体结构,结构上对称的(14]。

这种不对称体现在几个方面。首先,成对的定量的形态学结构可以揭示神秘的极性从形态学检查总值可能不明显22];昆虫翅膀是这种现象的一个很好的例子23,24),是人类的脚大小(25和性器官的位置26]。至关重要的是要注意,这种偏见的例子左右模式(不对称协调一致的方式与其他两个主要的轴)是一个独特的现象,从波动的不对称性,其中包括简单的左右之间的差异来源于发育噪声(27,28]。

其次,描述了基因表达的差异似乎对称的身体结构。这些包括一致高度动态的时间差异的双边驱动细分时钟转录波somitogenesis [29日- - - - - -31日),以及长期不对称的表达标记如EGF-like生长因子和MLC3F [32,33]。

也许最有趣的类型的微妙的不对称是那些显示只有在功能扰动。它早就知道,始终站在单侧肢体缺陷诱导啮齿动物的一些化合物如镉(34- - - - - -36]。自发的遗传缺陷有时发现有偏见的不对称,见几个人综合症单方面影响四肢(37,面对38),或臀部39]。Holt-Oram综合症(Tbx5相关)提出了上肢畸形更为常见(左边37,40- - - - - -42),而腓骨的发育不全影响右侧多(43]。事实上,各种人类综合症影响成对的器官有严重的偏见一边39]。奇怪的是,单边缺陷否则对称放置结构(例如,牙齿)在同卵双生展览mirroring-opposite本位主义在两个双胞胎(了44])。Hemihyperplasia [45,46),一个罕见的现象,身体异常的酝酿,是正确的偏见(47]。在易处理的重要的是,有针对性的分子遗传学实验模型系统开始揭示入口点到这个过程;例如,减毒FGF8信号结果始终有偏见左右不对称发展咽拱门和颅面骨骼在斑马鱼48]。

大多数研究使用不对称的心脏和内脏地点读出,关注机制,确定主要的一侧身体器官。然而,始终不对称显示在上面的例子暗示的可能性造成左右标识(组织的交互途径建立左右轴)可能是整个身体比目前更为普遍赞赏。信号通路可能造成在解剖学上偏重信息对称的组织?虽然大多数工作形态形成控制着重于生化途径(49,50)和物理力(51,52),最近的令人兴奋的以及经典数据展示内生生物电细胞行为的决定因素的重要性和大规模的模式53- - - - - -59]。我们因此集中搜索不对称体现在功能的生理学。

之前的工作真涡虫的扁形虫在头部再生模型系统显示,右眼是更敏感的抑制H, K-ATPase离子泵比左边,诱导频率模式的缺陷(60]。在我们努力理解空间的功能梯度在跨膜电位()在脊椎动物发展和再生18,61年- - - - - -65年),我们检查了眼睛的胚胎的发展非洲爪蟾蜍光滑的。使用无创测定荧光记者(66年,67年),发现新兴的眼睛字段是划定的局部超极化(68年,69年];引人注目的是,这个眼睛的生理签名的命运一直有偏见,与细胞的右边中线超极化。我们也报告类似的一致的微妙的不对称的神经嵴细胞的迁移行为。这里,我们分子描述这本小说不对称,显示生理差异分析可以揭示神秘的模式信息不明显从分子标记分析或解剖检查。理解这种微妙的功能不对称可能成为有用的处理与不对称和针对疾病的表现。

2。结果

2.1。眼睛细胞表现出一贯的不对称

扮演了一个至关重要的功能作用在定义字段的开发过程中非洲爪蟾蜍胚胎(68年,70年]。使用荧光染料CC2-DMPE电压特异性记者[71年]在活的有机体内描述实时变化的膜电位(17,65年,72年),我们发现了一个新奇的生理左、右眼原基之间的不对称。在阶段18日正常非洲爪蟾蜍胚胎展览双边集群的细胞更强烈极化比他们的邻居在假定的眼睛区域(图1(a),红色箭头68年])。令人惊讶的是,实时成像分析表明,右眼场极化第一,紧随其后的是极化的左眼字段(数据1(一)和1(b))。虽然不是绝对的,这生理不对称一直有偏见的,因为超过三倍,许多胚胎极化右边第一个相比,那些开始左边极化(图1(b);,卡方测试比较公正的期望)。除了明显的不对称在一个关键的计算,我们6个人胚胎(成像通过眼发展阶段)来估计时间超极化事件双方之间的区别。在20°C, 4胚胎展出30分钟延迟左眼的超极化,而2胚胎展出20分钟延迟左眼的外观超极化。我们得出这样的结论:眼睛的发展非洲爪蟾蜍本质上是不对称的,右眼字段通常启动内生的极化。

之前的小鸡和小鼠胚胎的研究表明,体节,虽然结构上对称,也表现出一个潜在的不对称(30.,73年]。体节免受这种固有的不对称的行动维甲酸(RA)信号,导致对称发展。为了确定眼信号的不对称是由于一个不完整的屏蔽效应RA-dependent信号,我们对胚胎有1.5μ广谱RA的M受体抑制剂ro - 415253。ro - 41 - 5253在这个浓度曾影响RA信号非洲爪蟾蜍(74年]。我们使用以前记录中线marker-Sonic刺猬(嘘),进一步证实ro - 41 - 5253的效果。非洲爪蟾蜍胚胎不及时治疗(控制)或接受ro - 41 - 5253 (1.5μ米),嘘表达评估阶段18岁了原位杂交(图1(c))。控制胚胎显示嘘表达式作为一个细线沿着背中线(图1(c),(我)白色箭头)。然而,ro - 41 - 5253治疗胚胎(> 90%)表现出明显的增加嘘沿着中线(图表达1(c),(2)蓝色箭头)如前所记录74年]。这种变化在嘘的表情证实了1.5μM ro - 41 - 5253是有效地抑制RA受体信号。

ro - 41 - 5253的影响分析了不对称的眼睛极化信号在18胚胎阶段使用CC2-DMPE电压记者染料。每个治疗(控制和ro - 41 - 5253)绘制了三元图使用患三眼科极化信号(左,右,和同步)根据前面描述的方法(75年)(图1(d))。情节的圆圈代表各自的误差区域的95%置信区间。使用三元图提供的计算算法(https://webscript.princeton.edu/ rburdine /统计/ three_categories),结果被认为是统计学意义(当没有重叠的95%置信区间。分析偏振信号的ro - 41 - 5253治疗胚胎18显示重要舞台右侧第一偏差()(右第一个48%,左第一个25%,同时27%)(图1(d),绿色圆圈),类似于控制/未经处理的胚胎()(右第一个51.5%,左第一个26.5%,同时22%)(图1(d),红色圆圈;三元图算法)。因此,RA信号不会right-side-first偏见中扮演一个角色信号的眼睛原基。

2.2。眼科领域不对称性被破坏的摄动pH-Mediated左右模式

我们接下来问眼睛不对称是由相同的通路控制支配心脏的左右模式和内脏。我们使用低ph值治疗在卵裂阶段特别引入不对称的随机化基因表达和随后的器官地点;这是已知干扰左右模式最早的步骤通过抑制质子流出的质膜H⁺V-ATPase需要正常的一侧(17]。这种治疗的早期时间确保它不能直接影响眼睛发育,而是允许我们问身体的随机化的主要左右模式途径同样随机观察生理的眼部不对称。丧失治疗的疗效在正常左右不对称证实了得分的蝌蚪阶段45改变心脏的本位主义、肠道或胆囊。正常的蝌蚪(未经处理的,图2(一个)(我)有一个right-ward循环心脏(红色箭头),则肠道线圈(黄色箭头)和右侧胆囊(绿色箭头)。相比之下,蝌蚪(图处理2(一个)(2)-(3))显示,心脏的位置的随机化,肠道,胆囊(独立分配器官),前面描述的(76年,77年),没有通用的毒性或其他畸形(包括任何dorsoanterior缺陷)。Heterotaxia诱导在19%的胚胎(图2 (b))(pH值扰动的程度一直远低于极端值与持续发展兼容,避免dorsoanterior畸形可能混淆眼发展分析,轻快导致高频随机外显率)。每个治疗(控制和pH值标注在三元图如上所述;结果被认为是统计学意义(三元图算法),没有重叠的95%置信区间。极化信号的分析治疗胚胎的兄弟姐妹在舞台18显示,向右偏差在正常的胚胎()(右第一个51%,左第一个23%,同时26%)(图2 (c))是明显的随机治疗胚胎(,三元图算法)(右第一个31%,左第一个39%,同时30%)(图2 (c))。我们得出这样的结论:眼睛现场电压不对称的决心是下游的早期离子流动力学,是心脏的定位和内脏8,78年]。

2.3。眼睛字段是微扰的敏感信息是不对称的

确定功能不对称(微分灵敏度的扰动电压水平,正如前面观察涡虫的(60)存在的眼睛领域除了两极分化的不对称内生序列,我们通过实验去极化的细胞的使用一个精心效价策略,允许我们操作并影响微妙的生物电受控过程没有诱导广义毒性或大规模的畸形68年]。我们利用glycine-gated氯通道(79年],它可以打开暴露于复合伊维菌素(IVM) [80年]——一个方便的方法控制细胞的潜力,我们以前用来探测的作用在眼睛感应和metastatic-like转换62年,68年]。在正常情况下和标准0.1倍MMR外部介质与伊维菌素补充,misexpression以来的这些通道去偏光细胞(带负电荷的氯离子离开GlyR-expressing细胞其浓度梯度(62年])。我们最近表明,注入GlyR mRNA的确改变了偏振模式中观察到公认的眼睛区域和影响眼模式(68年]。

因为眼睛是来源于背卵裂球4细胞阶段(88年),我们GlyR信使rna注入2背细胞和胚胎阶段开发42。平均45%的胚胎的影响只在一只眼睛的缺陷;有趣的是,有一个显著的偏差(2.5倍)对缺陷模式的右眼(图2 (d);卡方测试)。控制,我们用类似的方式注入一个显性负Pax6(DNPax6) mRNA先前所破坏非洲爪蟾蜍眼发展(68年,89年]。没有统计上显著的倾向右(30%)或左(27%)眼畸形动物中观察到只有1眼影响(一个有一只眼睛缺陷总数57%)(;卡方测试相比,一个公正的期望;图2 (e)),这表明Pax6信号在眼睛图案左右是中立的。

从这些结果,我们得出这样的结论:形态发生扰动的右眼更敏感比的了。

2.4。渠道调查揭示非对称表达的眼组织发展中胚胎

我们下一个试图确定观察到的不对称的分子基础跨膜电位眼睛的字段。不对称的显著影响细胞离子通道的行为往往是由微分表达式(90年- - - - - -92年]。K_{三磷酸腺苷}渠道(93年)从4蛋白八聚物形成inward-rectifying家庭钾K_红外6。x (K_红外6.1或K_红外6.2)与4磺脲受体(SUR1和SUR2)。我们曾发现改变生物状态与主导- K_红外内生K结构目标_{三磷酸腺苷}通道的形成导致异位眼睛(68年]。因此,我们分析了K的表达模式_{三磷酸腺苷}通道亚单位在非洲爪蟾蜍胚胎(94年),原位杂交在舞台18和阶段30。以前描述的K_{三磷酸腺苷}通道基因(87年,95年相关组织)没有显示出不对称的表达式;然而,探测器对小鼠K_{三磷酸腺苷}基因显示一组惊人的表达模式。

所有4 K的探针_{三磷酸腺苷}通道单元显示信号主要在头部,包括在舞台上公认的眼睛区域18(图3(一),(我)(iv)蓝色箭头)和强烈的彩色发展中眼阶段30(图3(一),(v) -(八)蓝色箭头)。阶段30胚胎神经管(图还显示表达式3(一),(v)、(八))。阶段30胚胎切割如图3(b),探测K_红外6.2、SUR1和SUR2显示信号的内层表皮而强烈的表达在镜头基板(图3(b), (2) - (iv)蓝色箭头)。K_红外6.1表达式被发现在发展中眼睛的视网膜层(图3(b) (i)蓝色箭头)。K_红外6.1还发现在眼睛周围的细胞组织和大脑心室(图3(b) (i))。引人注目的是,表达式的SUR1成绩单是不对称的,表达了强烈的右眼(图3(b), (iii) - (iv),)。别深究控制和SUR1和2探针,暴露时间长度相同的胚胎;探讨了反义RNA,表现出没有信号在任何阶段测试(图3(c),(我),(2))。这些数据揭示小说左右不对称的标记区分左和右眼睛在转录水平。在我们之前的研究中我们涉及的K_{三磷酸腺苷}通道在调节eye-specific极化信号(68年]。虽然本机非洲爪蟾蜍记录匹配的表达这些探针在不完全测序仍有待确定x光滑的基因组,当前不对称的结果揭示了鼠标K_{三磷酸腺苷}通道探测与内生K一致_{三磷酸腺苷}渠道为基础左派和右派之间的生理差异的眼睛。

2.5。黑素细胞殖民的横向树干一直左右不对称

发现一个神秘的成对的器官功能和生理不对称导致我们检查其他进程的不对称可能迄今为止没有注意到;我们尤其感兴趣的是其他的后代神经前体细胞。色素细胞(黑色素细胞,来源于神经嵴细胞)确定使用原位用探针杂交Trp2(也称为Dct),一个明确的黑色素细胞的标志(96年30)阶段。我们观察到,79%的胚胎得多Trp2阳性细胞(黑色素细胞)在他们左边比右边(数字4(一)和4 (b)和表1(和,配对以及))。

这种偏见在黑素细胞数量可能是由于left-right-biased神经嵴细胞的分化成黑色素细胞或由于偏见分化黑色素细胞的迁移。测试是否黑色素细胞中观察到的不对称是由于不对称的黑素细胞分化之前迁移(更多的黑色素细胞产生黑素细胞规范的一边在刚开始的时候),我们执行原位杂交与Trp2在早期阶段26(黑素细胞迁移开始之前)。在这个阶段,通过主干的部分,面积的定量分析Trp2阳性区域显示左右两侧之间无显著差异()(图4 (c))。这些结果表明,左侧的偏见在黑素细胞数量在30岁阶段可能不是因为偏见的黑色素细胞分化神经嵴细胞和支持机制基于偏见分化黑色素细胞的迁移率。从这些结果我们也得出结论,微妙的左右不对称对称结构并不是唯一的眼睛也延伸到了迁徙的行为神经嵴衍生品(图5)。

3所示。讨论

3.1。开发非洲爪蟾蜍的眼睛是不对称的

以前,我们显示一个特定范围的相对膜超极化电压调节非洲爪蟾蜍眼发展(68年,69年]。虽然眼睛是成对的器官和被认为是对称的,在这里,我们表明,生物信号,从内部调节他们的展品形成一个独特的、一致的左右不对称。超极化的右眼出现第一(图1),右边是一贯功能扰动(数据更敏感2 (d)和2 (e))。这观察right-side-first生物电信号与先前的文档一致的形态右侧神经结构的不对称非洲爪蟾蜍,包括视网膜、嗅基板和神经节的神经八世(97年)和符合比目鱼中描述的视觉系统的发育不对称98年),Ciona intestinalis(99年),和鸡肉One hundred.- - - - - -102年]。

尽管一致的和统计学意义,这种不对称的程度(61%)没有高的至关重要的内脏器官,如心脏和肠道(99%在野生型非洲爪蟾蜍)。其他组织表明,发育不对称对称结构中观察到出现的副作用从左右对称结构的不完整的屏蔽信号通路在时间和空间重合,证明了维甲酸信号作用在保护发展中从这些左右对称结构的信号。因为阻止维甲酸信号不加剧的不对称的眼睛在我们的研究(图信号1(d)),我们的数据不支持视黄酸的作用在这种不对称的屏蔽。然而,它是可能的,另一个(未知)通路的存在,有助于减少或面具眼睛形成过程固有的不对称,来自全身左右模式信号的影响。另一个有趣的可能性是,这种不对称性不是副作用,而是一直进化保守由于功能的相关性。

一致的不对称手性在非人灵长类动物的60%,但在90%的人类6,103年]。此外,许多研究已经报道左右不对称在视觉功能相关的食品/猎物和掠夺性反应鱼、两栖动物、爬行动物、鸟类和哺乳动物(104年- - - - - -110年]。可能是细微的差别在视觉系统的生物电子模式信号,以及不对称的大脑和认知过程,参与建立这些行为和功能不对称。在秀丽隐杆线虫,例如,随机侧抑制系统涉及离子通道导致单侧性的神经分化和功能(111年- - - - - -115年]。诱人的猜测这种不对称生物信号可能引发微分遗传,化学,和/或生物物理模式,覆盖在眼睛普遍发展模式允许左右的视觉系统开发不同的视觉功能。这是由我们的观察,depolarization-mediated内生双边极化信号中断导致右方式破坏眼的形成。然而,进一步功能研究需要测试这个假说。此外,这种机制似乎是守恒的,类似右方式破坏眼睛再生在涡虫在去极化(60]。因此,比较研究可能的不对称发育生理学和随后的功能类群之间的眼睛(和其他结构)可能偿还的发现小说在成对的器官不对称。

3.2。眼睛不对称与身体不对称

在过去的几年中,斑马鱼已成为一个好的模型,不对称发育生理学的研究,因为他们不仅表现单侧性的功能,但也显示出明显的左右不对称在大脑结构116年- - - - - -119年]。在非洲爪蟾蜍然而,没有大脑的一侧被描述的一致的标记。上面描述的内源性超极化是一种方便的小说读出神经不对称的,因为它可以在活体动物成像,因此兼容行为测试和其他实验范式要求提高动物与已知的神经一侧老年阶段。

是什么之间的联系微妙的不对称的神经器官和身体的主要途径,确定左右不对称?左右不对称的决心的迷人的方面之一是之间的脱节本位主义的主要身体器官和大脑。人类内脏逆位患者(展览左右身体完全相反的轴)显示正常水平偏手性和语言的偏侧性(120年,121年]。然而,某些行为特征(例如,手戴的手表)发现被逆转(7]。

在斑马鱼中,不对称的间脑的地区,系带和parapineal核116年)被发现被逆转内脏逆位动物,连同他们的视觉偏重行为的一个子集(110年]。此外,现在知道,个人有一致的顺时针手性产物[神经突122年],[123年]。我们的数据在非洲爪蟾蜍演示基本的链接身体不对称的不对称的眼睛:治疗随机的主要内脏器官也消除眼睛的right-side-first偏差模式信号,表明眼睛的不对称源自相同的路径模式的主要左右轴非洲爪蟾蜍。

3.3。的生理起源的不对称

负责持续不同的是什么左右的发展?K_{三磷酸腺苷}通道由K_红外和苏尔亚单位,负责设置静态电位在许多细胞类型(124年]。K_{三磷酸腺苷}频道活动取决于休息在细胞内ATP水平,外部钾水平,每个单元的极限水平。我们的表达数据(图3扩展和补充早期免疫组织化学数据K_{三磷酸腺苷}渠道在孵化腺,125年])显示一致的左右不对称的水平与同源性记录鼠标苏尔K_{三磷酸腺苷}通道亚基。比较鼠标苏尔探针序列完成非洲爪蟾蜍tropicalis基因组使用爆炸[126年]给出了SUR1匹配(),SUR2 (),但没有其他目标(下一个最佳匹配是PGER2无意义的),它支持的高概率调查捡SUR-like信使rna非洲爪蟾蜍光滑的。虽然我们还没有确认这个信号对应的本地记录,高特异性的染色模式和严格的原位鼠标探针杂交条件使它可能的苏尔捡一个本地SUR-like mRNA,尚未在不完全测序的特点x光滑的基因组。

观察到的不对称SUR1子单元的存在可能会导致更多的功能性K_{三磷酸腺苷}渠道更SUR1表达式。在最初的平等和外部钾水平左右,可用的不对称单元功能K的形成_{三磷酸腺苷}渠道可以解释的差异在左右。可能的不对称函数K_{三磷酸腺苷}通道还负责在敏感的眼睛观察到的不对称畸形在扰动。其他渠道可能参与生成观察到不对称的极化。比较分析和表达功能测试双方的眼睛区域可能揭示其他候选人配合K / s_{三磷酸腺苷}生成对称偏振眼睛模式信号。

K_{三磷酸腺苷}亚基表达主要在表面外胚层,形成基板。外胚层的基板之间的交互和底层neuroectodermal和中胚层层导致内陷的视杯和眼睛形成127年- - - - - -130年]。K_{三磷酸腺苷}离子通道表面外胚层,调节生物细胞属性,可能参与调节这些信号交互。

观察到的生物不对称的一个重要特性是其时间特性:尽管右眼信号是第一,eye-specific签名是最终看到两边(左边推迟了20 - 30分钟),导致结构上对称,同等大小的眼睛。离子通道的功能是封闭的转译后的事件,生理反馈回路由电压特异性通道可以实现放大稳定的差异,导致不同的电压梯度在细胞组织表达类似的离子通道蛋白质的补充。未来的工作将配置文件中的其他主要导眼细胞和定量描述和模型的分子遗传学和时间细节功能的电路控制静态电位眼睛前体细胞。这样的电路可能会表现出不同的稳定州,在老鼠(肌肉)细胞已被证明是由于内向整流钾通道(131年]。

3.4。神经嵴衍生品也一直左右不对称

类似的不对称在神经嵴色素细胞,黑色素细胞。黑色素细胞沿一侧的遵循特定的迁移路径非洲爪蟾蜍从神经嵴后胚胎分化。有趣的是,一个一致的左右不对称的黑色素细胞被发现在仔细分析。分析Trp2-positive细胞迁移(26)阶段开始之前透露,没有明显的不对称的程度从神经嵴细胞黑素细胞分化,表明观察到的不对称是由于不对称的迁徙模式。不对称迁徙线索的来源或机制确保左右不对称偏见反应的细胞迁移线索(如哺乳动物细胞(已观察到的132年,133年在未来的工作])还有待分析。黑素细胞分布不对称的进化和发育的作用尚不清楚;的确,小心可能量化细胞数量或其他属性的其他发育事件可能揭示其他heretofore-unrecognized一致的不对称系统,目前被认为是对称的。

3.5。结论

微妙的生理和细胞的识别定位的不对称非洲爪蟾蜍开放的发展引发了许多问题。可能是一致的不对称生物状态,细胞数量,对特定扰动的敏感性仍被发现在许多不同的配对(对称)器官。解剖和遗传分析研究进行到目前为止可能只触及表面的发展信息嵌入在各种体细胞组织信使rna和蛋白质水平的概要文件和可能不会揭示生理差异。这种不对称的识别,以及分子起源,和他们互动的特征主要左右轴向模式的级联可能会露出迷人的方面和重要的进化发育生物学的影响。此外,一个机械的理解这些微妙的不对称将提供洞察形式,功能和鲁棒性的神经系统,可以帮助解决边音的紧张和nonnervous器官的疾病。

4所示。材料和方法

4.1。畜牧业

非洲爪蟾蜍光滑的收集和受精的胚胎在体外根据标准协议(134年),在0.1 x修改Marc的伪专家(MMR);pH值7.8)。非洲爪蟾蜍胚胎被安置在14 - 18°C和举行据Nieuwkoop和费伯(135年]。所有实验都是批准的塔夫茨大学动物研究委员会依照指导护理和使用实验动物、协议号:m2011 - 70。

4.2。使用CC2-DMPE成像膜电压模式

CC2-DMPE(分子探针)的股票(股票:1毫克/毫升在DMSO)被稀释1:1000年0.1 x MMR最终浓度为0.2μ15 - 16 m .阶段胚胎浸泡在染料为1.5 h。胚胎在解决成像使用CC2立方体上设置一个奥林巴斯BX61显微镜与巨鲸CCD相机与Metamorph软件(滨松)。参见[66年,67年额外的细节。确定偏差在眼CC2-DMPE信号,定期胚胎成像。的胚胎,首先显示眼睛CC2-DMPE信号指出,和胚胎一直观察,直到双方都能看到信号。时差,左眼CC2-DMPE信号测量通过图像定期10分钟。虽然CC2-DMPE单独使用不能精确量化水平,强烈的从这个带正电荧光染料之前的研究已经证实,可靠地确定超极化区域所确认的电生理学围住(65年- - - - - -67年,136年)和识别相同位置的超极化细胞早期一样面对之前的研究使用比率成像(69年]。

4.3。显微镜下注射

封顶,合成mrna生成使用Ambion mMessage 1装备,resuspended在水中,每胚叶细胞(2.7 nL)注入胚胎3%聚蔗糖。报告的注射是结果的比例注入胚胎眼睛表型,样本大小(),值比较治疗组和控制。血统追踪,4细胞胚胎注射信使rna编码β牛乳糖。在45岁阶段,固定胚胎被孵化与半乳糖苷基质染色。

4.4。原位杂交

原位杂交根据执行标准协议(137年]。加入数字序列用作探针被K_红外6.1 NM_008428.4 K_红外6.2 NM_001204411.1 SUR1 NM_011510.3, SUR2 NM_001044720.1。非洲爪蟾蜍胚胎在MEMFA收集并固定。之前原位杂交,胚胎在PBS + 0.1% Tween-20洗,然后转移到乙醇通过一系列25% / 50% / 75%。原位探测器生成在体外从线性化模板使用挖掘标签组合(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。显色反应时间进行了优化最大化和最小化背景信号。组织学部分被嵌入胚胎后获得原位杂交JB4根据制造商的指示(Polysciences)。解剖之前,街区的一个角落里身体标记允许明确方向截面图像的左右轴(部分在图3(b))。

4.1.1。量化的原位信号

Trp2原位杂交胚胎是嵌入在4%低熔点琼脂糖如前所述,切割在100μ米(138年]。部分是使用尼康SMZ1500显微镜成像与Q-imaging Retiga 2000 r相机。用NIH ImageJ软件区域表现出紫色的信号在左边和右边的部分都使用徒手选择工具,Trp2染色的面积是自动量化。第三部分从最后一节包含眼睛被选中的10个不同的胚胎和用于量化。

4.5。Heterotaxia-Inducing治疗

胚胎保存在0.1 x MMR (pH值4.0 - -4.05)从受精到舞台12 - 13,然后搬到0.1 x MMR (pH值7.8)剩下的实验。在45岁阶段地点内部器官的得分的目视检查心脏,肠道和胆囊之前报道(17]。分类数据分析CC2-DMPE染色后药物治疗是通过使用三元块(75年]。

4.6。视黄酸受体抑制剂(ro - 41 - 5253)治疗

从受精胚胎保存在0.1 x MMR。在11 ~阶段ro - 41 - 5253添加到0.1 x MMR最终浓度为1.5μ18 m在阶段,胚胎的一部分,用于固定原位杂化。分类数据分析CC2-DMPE染色后药物治疗是剩下的活胚胎使用三元块(75年]。

4.7。统计数据

所有统计分析使用Graphpad棱镜(美国Graphpad软件,拉霍亚,CA),除了三元图的分类数据分析算法的使用(https://webscript.princeton.edu/ rburdine /统计/ three_categories)。数据汇集来自不同迭代,卡方检验或使用双尾二项计算。Nonpooled数据进行了分析以及(2组)或方差分析(超过两组)。

作者的贡献

v . p . Pai和m·莱文设计研究,v . p . Pai m·莱文l·n·范登堡和d . Blackiston进行研究,m·莱文和v . p . Pai写道。

确认

作者感谢Punita Koustubhan琥珀制革匠,琼Lemire,克莱尔·史蒂文森非洲爪蟾蜍畜牧业和通用实验室援助和达里尔·戴维斯和米里亚姆好GlyCl表达式构造。他们还特别感谢丹妮·亚当斯和布鲁克Chernet显微镜援助和雪莉啊许多有用的想法和讨论这个项目。这项工作得到了国家卫生研究院的基金EY018168, MH081842, GM077425 m·莱文。作者也感谢g·哈罗德的支持和莱拉y拿到慈善基金会。

引用

1. a·c·内维尔动物不对称爱德华·阿诺德,伦敦,英国,1976年。
2. a·r·帕尔默,“从对称不对称:系统发育不对称的模式动物和它们的进化意义的变化,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷93,不。25日,第14286 - 14279页,1996年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. h·彼得斯和k . Devriendt人类一侧障碍,”欧洲医学遗传学》杂志上卷,49号5,349 - 362年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. a . f . Ramsdell”,左右不对称和先天性心脏缺陷:进入问题的核心在脊椎动物左右轴的决心,“发育生物学,卷288,不。1,1,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. b . w . Bisgrove s . h . Morelli h·j·约斯特,“人类一侧障碍的遗传学:见解从脊椎动物模型系统,”基因组学和人类遗传学的年度审查4卷,学会年会,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 麦克马纳斯,的右手,左手:Asym对称的起源在大脑,身体,原子和文化,哈佛大学出版社,2002年。
7. i c·麦克马纳斯:马丁,g . f . stub e . m . k .钟和h . m . Mitchison“偏手性和内脏逆位原发性纤毛运动障碍,”《皇家学会学报B,卷271,不。1557年,第2582 - 2579页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l·n·范登堡和m·莱文”远未解决:视角我们了解早期左右不对称的机制,”发展动态,卷239,不。12日,第3146 - 3131页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. m·莱文,“胚胎发育的左右不对称:一个全面的审查,”机制的发展,卷122,不。1,3-25,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. p .加速,a . Petzoldt m .苏珊娜,s . Noselli”策略建立左/右不对称在脊椎动物和无脊椎动物,”当前在遗传学和发展意见,17卷,不。4、351 - 358年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. t .太阳和c·a·沃尔什,“大脑不对称性和构型的分子方法,”神经系统科学自然评论,7卷,不。8,655 - 662年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. b·巴苏和m·布鲁克纳”第六章纤毛。多功能细胞器在脊椎动物左右不对称的中心,“当前主题在发育生物学卷,85年,第174 - 151页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. r·p·哈维”链接在左/右轴向通道。”细胞,卷94,不。3、273 - 276年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 美国啊,d·s·亚当斯d .秋和m·莱文,”H, K-ATPase蛋白质定位和Kir4.1函数显示一致性的三轴在早期确定左右不对称,“机制的发展,卷125,不。3 - 4、353 - 372年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m . v . Danilchik、e·e·布朗和k . Riegert“非洲爪蟾蜍蛋皮质的固有手性属性:左右不对称的一个早期指标,”发展,卷133,不。22日,第4526 - 4517页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c·波尔”左右的模式秀丽隐杆线虫胚胎:独特的机制和共同的原则”,生物交流与综合,4卷,不。1,34-40,2011页。视图:谷歌学术搜索
17. t·d·s·亚当斯,k . r . Robinson Fukumoto et al .,“早,H⁺-V-ATPase-dependent质子通量对于持续左右非哺乳类脊椎动物的图案,是必要的,”发展,卷133,不。9日,第1671 - 1657页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m·莱文t . Thorlin k·r·罗宾逊,t .避难所和m . Mercola”不对称在H⁺/ K⁺腺苷三磷酸酶和细胞膜电位包括左右模式非常早期的一步,”细胞,卷111,不。1,第89 - 77页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 一个。莱雅,y Kawakami (c . Rodriguez-Esteban et al .,“切口活动作为传感器细胞外钙在脊椎动物左右的决心,“自然,卷427,不。6970年,第128 - 121页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. A . Garic-Stankovic m·埃尔南德斯·g·r·Flentke m . h . Zile和s·m·史密斯,“阿诺定receptor-dependent裁⁺不对称在原结介导禽流感横向身份,“发展,卷135,不。19日,3271 - 3280年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j . a . Kreiling z l . Balantac a·r·克劳福德et al .,“抑制内质网钙泵在斑马鱼原肠胚形成影响心脏和大脑的左右不对称,“机制的发展,卷125,不。5 - 6,396 - 410年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 美国Sienknecht”,脊椎动物的遗传稳定两国肢体对称性作为神秘的极性的一个例子,“发育生物学卷,295年,第415 - 414页,2006年。视图:谷歌学术搜索
23. c·p·克林·g·s·麦金太尔,s . d . Zaklan”左右不对称的苍蝇翅膀和身体的发展轴,“《皇家学会学报B,卷265,不。1413,2455年,页1998。视图:谷歌学术搜索
24. c·p·克林·g·s·麦金太尔,s . d . Zaklan”左右不对称的苍蝇翅膀和身体的发展轴,“英国《皇家学会学报B卷,265年,第1259 - 1255页,1998年。视图:谷歌学术搜索
25. j·利维和j·m·利维,“人类从头到脚偏侧优势:与性有关的因素,”科学,卷200,不。4347年,第1292 - 1291页,1978年。视图:谷歌学术搜索
26. 美国Mittwoch”,哺乳动物性别决定的遗传:一些人例外,”实验动物学杂志》上,卷290,不。5,484 - 489年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 克林根贝格c·p·g·s·麦金太尔,“几何形态学发育不稳定:普罗克汝斯忒斯波动不对称性的分析模式与方法,”进化,52卷,不。5,1363 - 1375年,1998页。视图:谷歌学术搜索
28. m . v . Angelopoulou诉Vlachou, d . j . Halazonetis“摩尔波动不对称性与环境辐射。”档案口腔生物学,54卷,不。7,666 - 670年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. g . c . Vilhais-Neto m . Maruhashi k·t·史密斯et al .,“Rere控制维甲酸信号和体节左右对称,”自然,卷463,不。7283年,第957 - 953页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. j . Vermot和o . Pourquie视黄酸坐标somitogenesis和脊椎动物胚胎中左右的模式,”自然,卷435,不。7039年,第220 - 215页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. l . Saude r . Lourenco a Goncalves, Palmeirim,“地球是一个左右不对称左右分割的同步时钟,所需基因”自然细胞生物学,7卷,不。9日,第920 - 918页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j·p·戈尔丁,t·a·帕特里奇j . r .波et al .,“老鼠肌刀对展览MLC3F和左右不对称的表达式α骨胳肌动蛋白”,发展动态,卷231,不。4、795 - 800年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. j·p·戈尔丁s Tsoni m . Dixon et al .,“Heparin-binding EGF-like生长因子显示了瞬时左右不对称的表达式在小鼠肌刀对,”基因表达模式,5卷,不。1,3 - 9,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j . Milaire“组织学变化发展中肢芽的诱导C57BL小鼠胚胎在子宫内提交到乙酰唑胺和硫酸镉的影响相结合,“畸形学,32卷,不。3、433 - 451年,1985页。视图:谷歌学术搜索
35. m·巴尔Jr .)”的致畸性氯化镉在Wistar鼠两只股票,”畸形学,7卷,不。3、237 - 242年,1973页。视图:谷歌学术搜索
36. w·m·莱顿jr .)和m·w·莱顿”镉诱导小鼠肢体缺陷:应变灵敏度的差异有关,”畸形学,19卷,不。2、229 - 235年,1979页。视图:谷歌学术搜索
37. a·t·史密斯·g·h·袋,g . j .泰勒“Holt-oram综合症”,儿科杂志》,卷95,不。4、538 - 543年,1979页。视图:谷歌学术搜索
38. m·德莱尼和t·k·博伊德,”案例报告的单边间隙:声波刺猬责任呢?”儿科和发展病理,10卷,不。2、117 - 120年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. l . j . Paulozzi和j·m·拉里”偏重在婴儿出生缺陷与外部模式,”畸形学,60卷,不。5,265 - 271年,1999页。视图:谷歌学术搜索
40. r . a . Newbury-Ecob r . Leanage j·a·雷伯恩和i d .年轻,“Holt-Oram综合症:临床基因研究”医学遗传学杂志,33卷,不。4、300 - 307年,1996页。视图:谷歌学术搜索
41. c . j .孵卵的m·m·戈尔茨坦c . s . Mah c·s·迪莉娅,和c t·森”识别和定位TBX5转录因子在人类心脏形态发生,”发展动态,卷219,不。1,第95 - 90页,2000。视图:谷歌学术搜索
42. b . g . Bruneau m·洛根:戴维斯et al .,“Chamber-specific心脏的表达Tbx5霍尔特-奥拉姆和心脏缺陷综合症,”发育生物学,卷211,不。1,第108 - 100页,1999。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. s . o·列文和j . m . Opitz腓骨的/发育不全:审查和文档的腓骨的发展领域,“美国医学遗传学》杂志上。补充,2卷,第238 - 215页,1986年。视图:谷歌学术搜索
44. m·莱文和m . Mercola缺口连接调控鸡胚盘初左右模式信号的传输是上游节点,嘘不对称的”发展,卷126,不。21日,第4714 - 4703页,1999年。视图:谷歌学术搜索
45. c . l . Clericuzio“肿瘤,临床表型和霍奇金病”医疗和儿科肿瘤学,21卷,不。3、182 - 187年,1993页。视图:谷歌学术搜索
46. j . f . Fraumeni Jr .) c·f·盖斯·m·d·曼宁,“要肿瘤及先天性hemihypertrophy:五个新病例报告和审查的文学,”儿科,40卷,不。5,886 - 899年,1967页。视图:谷歌学术搜索
47. h·e·Hoyme l·h·西维尔k·l·琼斯et al .,“孤立hemihyperplasia (hemihypertrophy):报告的前瞻性多中心研究肿瘤的发生率和审查,”美国医学遗传学杂志》的一部分卷,79年,第278 - 274页,1998年。视图:谷歌学术搜索
48. r . c . cpi和p . c . Yelick”角色在左右fgf8信号模式的内脏器官和颅面骨骼,”发育生物学,卷283,不。2、310 - 321年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. c . Niehrs”增长和形式:笛卡儿坐标系统的Wnt和BMP信号指定轴两侧对称动物的身体,“发展,卷137,不。6,845 - 857年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. j . s . Kanodia r . Rikhy y金正日et al .,“背形态梯度的动力,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。51岁,21707 - 21712年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. l . v . Beloussov“机械基础生成形态发生的法律,”物理生物学,5卷,不。1,文章ID 015009, 2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. l . v . Beloussov和v . i Grabovsky Morphomechanics:目标、基本实验和模型”,国际发育生物学杂志》上,50卷,不。2 - 3、81 - 92年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. s . Sundelacruz m·莱文和d·l·卡普兰,“膜电位的作用在调节细胞增殖和分化,“干细胞的评论和报道,5卷,不。3、231 - 246年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. d . j . Blackiston k·a·麦克劳克林和m·莱文“生物电控制的细胞增殖:离子通道,膜电压和细胞周期,”细胞周期,8卷,不。21日,第3528 - 3519页,2009年。视图:谷歌学术搜索
55. m·莱文,“几何错误:再生在更广泛的角度来看,“在细胞和发育生物学研讨会,20卷,不。6,643 - 645年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. c·d·麦凯格b .歌曲,a . m . Rajnicek”电子维度在细胞科学。”《细胞科学,卷122,不。23日,第4276 - 4267页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. c·d·麦凯格a . m . Rajnicek b的歌,和m .赵”控制细胞行为电:当前视图和未来的潜力,”生理上的评论,卷85,不。3、943 - 978年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. m·莱文”分子在发育生物学生物电:新的工具和最近的发现,“BioEssays,34卷,不。3、205 - 217年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. d·s·亚当斯”,组织工程师的新工具:离子在开发过程中形态发生和再生的监管机构,”组织工程,14卷,不。9日,第1468 - 1461页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. t .避难所,y . e .元,d . Sorocco r . Perez-Tomas m·莱文,“眼睛再生试验揭示了一个不变的功能性左右不对称两侧对称动物早期,Dugesia粳稻,”偏重,10卷,不。3、193 - 205年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. c·兰格s Prenninger p .指关节诉泰勒·m·莱文和f . Calegari,”H +空泡的atp酶保持发展中鼠皮层神经干细胞,”干细胞与发展,20卷,不。5,843 - 850年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. d . Blackiston d·s·亚当斯,j . m . Lemire m . Lobikin m·莱文,“GlyCl-expressing教练细胞的跨膜电位诱发neoplastic-like转换的黑色素细胞通过血清素激活的途径,”DMM疾病模型和机制,4卷,不。1,第85 - 67页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. w·s·比恩,j . Morokuma d . s .亚当斯和m·莱文,“化学遗传学的方法揭示了H, K-ATPase-mediated膜电压需要真涡虫的再生,”化学和生物学,18卷,不。1,第89 - 77页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. a . s .曾w·s·比恩,j . m . Lemire a·马西·m·莱文,“感应瞬态的脊椎动物再生钠电流,”神经科学杂志》上,30卷,不。39岁,13192 - 13200年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. d·s·亚当斯,a·马西·m·莱文,”H + pump-dependent膜电压的变化是早期机制充分必要诱导非洲爪蟾蜍尾再生,”发展,卷134,不。7,1323 - 1335年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. d·s·亚当斯和m·莱文”使用荧光测量静止膜电位电压记者DiBAC4(3)和CC2-DMPE,”冷泉港协议,卷2012,不。4、459 - 464年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. d·s·亚当斯和m·莱文“一般原则测量静止膜电位和离子浓度使用荧光生物电记者,“冷泉港协议,卷2012,不。4、385 - 397年,2012页。视图:谷歌学术搜索
68. v . p .拜美国啊,t . Shomrat j . m . Lemire m·莱文,“跨膜电位控制方法在非洲爪蟾蜍胚胎眼模式光滑的,”发展,卷139,不。2、313 - 323年,2012页。视图:谷歌学术搜索
69. l·n·范登堡、r·d·莫里和d s .亚当斯”V-ATPase-dependent外胚层的电压和Ph值为颅面形态发生区域化是必需的,”发展动态,卷240,不。8,1889 - 1904年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. d·s·亚当斯和m·莱文“内源性电压梯度的介质信息交流:策略调查生物电子信号模式形成过程中,“细胞和组织的研究。在出版社。视图:谷歌学术搜索
71. c·沃尔夫,b .的福娃,p .城主”比较研究膜potential-sensitive荧光探针及其在离子通道筛选化验使用,“《生物分子筛选,8卷,不。5,533 - 543年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. n . j .奥维耶多,c·l·尼古拉斯·d·s·亚当斯,m·莱文,“生活真涡虫的成像膜电位使用DiBAC4 (3),“冷泉港协议,3卷,不。10日,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. t . Brend和s . a .华立”平衡分割和偏重在脊椎动物的发展过程中,“在细胞和发育生物学研讨会,20卷,不。4、472 - 478年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. p·g·佛朗哥,a . r . Paganelli s l·洛佩兹和a·e·卡拉斯科”功能视黄酸协会和刺猬信号在非洲爪蟾蜍初级神经发生,”发展,卷126,不。19日,4257 - 4265年,1999页。视图:谷歌学术搜索
75. 徐,x冯,r·d·Burdine”在实验生物学分类数据分析”,发育生物学,卷348,不。1,3-11,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. h·j·约斯特”,左右轴发展两栖动物。”汽巴基础研讨会卷,162年,第176 - 165页,1991年。视图:谷歌学术搜索
77. m·c·丹诺斯和h·j·约斯特”,联系非洲爪蟾蜍心脏左右不对称和背侧前开发的“发展,卷121,不。5,1467 - 1474年,1995页。视图:谷歌学术搜索
78. m·莱文,“初左右轴像一个工厂,一个肾脏,还是神经元?生理信号的集成在胚胎不对称。”出生缺陷研究C,卷78,不。3、191 - 223年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. d·l·戴维斯j . r . Trudell s . j . Mihic d·k·克劳福德和r . l . Alkana“乙醇势差现象的甘氨酸受体表达在非洲爪蟾蜍卵母细胞与大气压力增加,”酒精中毒:临床与实验研究,27卷,不。5,743 - 755年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. 问:山、j·l·Haddrill和j·w·林奇,”伊维菌素,一个非传统的甘氨酸受体的激动剂氯通道,”生物化学杂志,卷276,不。16,12556 - 12564年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. j . m . Lobikin g . Wang徐et al .,“早,nonciliary作用微管蛋白在王国左右模式是守恒的,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国卷,109年,第12591 - 12586页,2012年。视图:谷歌学术搜索
82. n·j·奥维耶多和m·莱文缝隙连接在左右模式提供新的链接,”细胞,卷129,不。4、645 - 647年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. m·莱文和m . Mercola缝隙连接与初代的左右不对称,“发育生物学,卷203,不。1,第105 - 90页,1998。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. m·莱文和m . Mercola缺口连接调控鸡胚盘初左右模式信号的传输是上游节点,嘘不对称的”发展,卷126,不。21日,第4714 - 4703页,1999年。视图:谷歌学术搜索
85. k . Carneiro c . Donnet t Rejtar et al .,“组蛋白脱乙酰酶活动期间左右模式脊椎动物发展是必要的,”BMC发育生物学第二十九条,卷。11日,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. a . Schweickert t·韦伯,t·拜尔et al .,“在非洲爪蟾蜍Cilia-driven左流决定一侧,”当代生物学,17卷,不。1、60 - 66、2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. v . p .拜美国啊,t . Shomrat j . m . Lemire m·莱文,“跨膜电压电位控制在非洲爪蟾蜍胚胎眼模式光滑的,”发展卷,139年,第323 - 313页,2012年。视图:谷歌学术搜索
88. s . a .喜怒无常,“命运的卵裂球32-cell-stage非洲爪蟾蜍胚胎,”发育生物学,卷122,不。2、300 - 319年,1987页。视图:谷歌学术搜索
89. r . l . Chow c·r·奥特曼r·a·朗和a . Hemmati-Brivanlou“Pax6诱发异位的眼睛在脊椎动物,”发展,卷126,不。19日,4213 - 4222年,1999页。视图:谷歌学术搜索
90. e . Aydar唷,m . Djamgoz和c·帕尔默,“异常表达,本地化和交互的规范瞬时受体电位离子通道在人类乳腺癌细胞系和组织:乳腺癌的诊断和治疗的一个潜在的目标,“癌细胞国际第二十三条,卷。9日,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. a·e·诺瓦克,公元泰勒,r·h·皮·e·l . Lasda m·a·赖特和a . b . Ribera斑马鱼的胚胎和幼虫表达电压门控钠离子通道α亚基基因。”发展动态,卷235,不。7,1962 - 1973年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. s·m·琼斯和a . b . Ribera“钾通道基因的超表达扰乱神经分化,“神经科学杂志》上,14卷,不。5,2789 - 2799年,1994页。视图:谷歌学术搜索
93. c·g·尼克尔斯,”频道诱导细胞代谢的分子传感器,”自然,卷440,不。7083年,第476 - 470页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. 美国啊,j·c·科斯特w·皮尔森et al .,“ATP-sensitive K +路()诱导控制左右模式在非洲爪蟾蜍和小鸡胚胎早期,“发育生物学,卷346,不。1,39-53,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. 美国啊,j·c·科斯特w·皮尔森et al .,“ATP-sensitive K +路()诱导控制左右模式在非洲爪蟾蜍和小鸡胚胎早期,“发育生物学,卷346,不。1,39-53,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. m . Kumasaka佐藤,即Yajima, h .山本”隔离和发展家庭酪氨酸酶基因的表达在非洲爪蟾蜍光滑的,”色素细胞的研究,16卷,不。5,455 - 462年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
97. a . e . Proshchina和美国诉Savel主席,”研究两栖动物大脑的不对称性在正常的胚胎和幼虫的发展过程中,“研究Izvestiia Akademii,没有。3、408 - 411年,1998页。视图:谷歌学术搜索
98. b .保z Ke, j .兴et al .,“增殖细胞的亚轨道组织开眼睛迁移在比目鱼,”发育生物学,卷351,不。1,第207 - 200页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
99. 吉田k和h赛加羚羊”,Rx基因的镇压左边感觉泡的节点信号的右侧的形成是至关重要的发展的单眼感光Ciona intestinalis,”发育生物学,卷354,不。1,第150 - 144页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
100. r . l . Trelstad和a·j·Coulombre”小鸡角膜胶原基质的形态发生,”《细胞生物学》杂志上,50卷,不。3、840 - 858年,1971页。视图:谷歌学术搜索
101. a . j . Coulombre”实验胚胎学的脊椎动物的眼睛,“调查眼科4卷,第419 - 411页,1965年。视图:谷歌学术搜索
102. r . l . Trelstad”的双边对称架构submammalian角膜基质类似于胆甾型液晶,”发育生物学,卷92,不。1,第134 - 133页,1982。视图:谷歌学术搜索
103. p . f . MacNeilagea m . g . Studdert-Kennedya, b . Lindbloma“灵长类动物偏手性重新考虑。”行为和大脑科学,10卷,不。2、247 - 303年,1987页。视图:谷歌学术搜索
104. g·维罗提格拉与l . j .罗杰斯的“生存与一个不对称的大脑:大脑偏侧性的优点和缺点,”行为和大脑科学,28卷,不。4、575 - 589年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
105. n·拉希德和r . j . Andrew右半球优势地形方向在国内的小鸡,”这项研究,27卷,不。7,937 - 948年,1989页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
106. 罗杰斯l . j . r . j·安德鲁,t·h·j . Burne”曝光的胚胎和发展行为lateralisation小鸡,我:嗅觉反应,”大脑研究行为,卷97,不。1 - 2、195 - 200年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
107. g . Lippolis a .碧莎l . j .罗杰斯和g .维罗提格拉“Lateralisation避免捕食者的反应在三种蟾蜍,”偏重,7卷,不。2、163 - 183年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
108. g .维罗提格拉l . j .罗杰斯a .碧莎g . Lippolis和a .知更鸟”互补的左翼和右翼障碍用蟾蜍的掠夺性和好斗的行为,”NeuroReport,9卷,不。14日,第3344 - 3341页,1998年。视图:谷歌学术搜索
109. 碧莎,a·德·桑蒂s Bonso诉答:Sovrano,”青蛙和蟾蜍在镜子前:lateralisation应对社会刺激的蝌蚪五无尾类的物种,”大脑研究行为,卷134,不。1 - 2、417 - 424年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
110. g .维罗提格拉l . j .罗杰斯,碧莎,“可能的进化起源的认知的大脑偏侧性,”大脑研究评论,30卷,不。2、164 - 175年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
111. c . Chang y . w .谢长廷,b . j . Lesch c·巴格曼,和c f .壮族“Microtubule-based本地化的突触calciumsignaling复杂需要左右在秀丽隐杆线虫神经元不对称,“发展,卷138,不。16,3509 - 3518年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
112. c . f .壮族m . k . VanHoven r . d .羁绊,v . k . Verselis和c·巴格曼,”一个Innexin-Dependent蜂窝网络建立左右在秀丽隐杆线虫神经元不对称,“细胞,卷129,不。4、787 - 799年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
113. s·l·鲍尔黄、y Saheki m . k . VanHoven et al .,“左右嗅不对称的结果从敌对voltage-activated钙通道和原始功能蛋白质OLRN-I重复秀丽隐杆线虫”,神经系统发育,卷2,不。1,第二十四条,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
114. 黄m . k . VanHoven s l·鲍尔,s·d·阿尔宾和c·巴格曼,“claudin总科蛋白质NSY-4偏见侧信号生成左右不对称秀丽隐杆线虫嗅觉神经元”,神经元,51卷,不。3、291 - 302年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
115. r·j·普尔和o . Hobert早期胚胎编程秀丽隐杆线虫的神经左/右不对称”当代生物学,16卷,不。23日,第2292 - 2279页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
116. m . l .外耳和s w·威尔逊“不对称的丘脑上部脊椎动物,”解剖学杂志,卷199,不。1 - 2、63 - 84年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
117. k·a·巴斯a . Miklosi j·沃特金斯,即h·比安科s w·威尔逊和r . j .安德鲁“fsi斑马鱼显示内脏整合逆转一侧,神经解剖学,和行为反应的一个子集,”当代生物学,15卷,不。9日,第850 - 844页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
118. l . Facchin h·a·伯吉斯m . Siddiqi m . Granato和m . e . Halpern,“确定斑马鱼上丘脑的功能不对称,”英国皇家学会哲学学报B,卷364,不。1519年,第1032 - 1021页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
119. l . Facchin f . Argenton, a .碧莎”行鲐鱼类为相反的行为选择偏侧性显示解剖左右不对称的差异,“大脑研究行为,卷197,不。1,第165 - 157页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
120. d·n·肯尼迪,k . m . O 'Craven b . s . Ticho a . m . Goldstein n . Makris和j·w·亨森,“大脑结构和功能不对称在人类内脏逆位totalis,”神经学,53卷,不。6,1260 - 1265年,1999页。视图:谷歌学术搜索
121. 田中,r . Kanzaki m . Yoshibayashi t . Kamiya和m . Sugishita“两耳分听患者的内脏逆位:大脑不对称性和位置不对称,“这项研究,37卷,不。7,869 - 874年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
122. a . m . Heacock和b . w . Agranoff”,从视网膜外植体顺时针神经突生长的。”科学,卷198,不。4312年,第66 - 64页,1977年。视图:谷歌学术搜索
123. a . Tamada美国之森,f .村上春树和h . Kamiguchi“自治右旋螺钉旋转生长锥丝状伪足驱动神经突转,“细胞生物学杂志,卷188,不。3、429 - 441年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
124. A . p . Babenko l . Aguilar-Bryan和j·布莱恩,“视图/ K (IR) 6。X, k (atp)通道。”年度回顾的生理,60卷,第687 - 667页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
125. s·m·陈,陈,m·莱文”频道诱导活动需要在非洲爪蟾蜍胚胎孵化,”发展动态,卷225,不。4、588 - 591年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
126. s . f . Altschul t·l·马登a·a·谢弗et al .,“豁裂的爆炸和PSI-BLAST:新一代的蛋白质数据库搜索项目,“核酸的研究,25卷,不。17日,第3402 - 3389页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
127. m . e . Zuber”眼科领域规范非洲爪蟾蜍光滑的,”当前主题在发育生物学卷。93年,29-60,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
128. c·霍尔特,“非洲爪蟾蜍眼睛的细胞运动发展,”自然,卷287,不。5785年,第852 - 850页,1980年。视图:谷歌学术搜索
129. c . l . Spann m . s .萨哈,r·m·格兰杰”胚胎镜头感应:超过满足眼泡,”细胞分化和发展,28卷,不。3、153 - 172年,1989页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
130. t .原田,c .原田和l . f . Parada”分子调节视觉系统开发:超越视觉,”基因和发展,21卷,不。4、367 - 378年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
131. j·加拉赫,m .棺材和j·s . van Heukelom“一阶相变和磁滞膜的细胞的维护potential-An内向钾整流器的重要作用,“生物系统,卷101,不。3、149 - 155年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
132. l .问:广域网k . Ronaldson m .公园et al .,“微型图象哺乳动物细胞表现出phenotype-specific左右不对称,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷108,不。30日,第12300 - 12295页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
133. t·h·陈,j . j .许x赵et al .,“左右对称闯入组织通过细胞骨架力学形态发生,”循环研究卷,110年,第559 - 551页,2012年。视图:谷歌学术搜索
134. h .铁架,r·m·格兰杰,r·哈兰早期发展的非洲爪蟾蜍光滑的,冷泉港实验室出版社,纽约,纽约,美国,2000年。
135. p·d·Nieuwkoop和j·法伯尔,非洲爪蟾蜍的正常表光滑的(Daudin)。非洲爪蟾蜍的正常表光滑的(Daudin),1967年。
136. r . Burgstahler h . Koegel f·洛克,d·特蕾西·Grafe和c·阿尔茨海默,“人工培养的角质细胞共焦成像的比率计电压显示分层的反应ATP,”美国生理学杂志》上,卷284,不。4,C944-C952, 2003页。视图:谷歌学术搜索
137. r·m·哈兰,“原位杂交:非洲爪蟾蜍胚胎的改进的包埋方法,”方法在细胞生物学36卷,第695 - 685页,1991年。视图:谷歌学术搜索
138. d . Blackiston l·n·范登堡和m·莱文,“高通量非洲爪蟾蜍光滑的免疫组织化学利用琼脂糖部分,“冷泉港协议,卷2010,不。12日,2010年。视图:谷歌学术搜索

版权

版权©2012 Vaibhav p . Pai et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。