切碎的脐带片段作为一个骨科组织工程的细胞来源:体外研究

文摘

肌肉骨骼修复和再生一个有前途的方法是mesenchymal-stem-cell——(MSC)建立组织工程。这项研究的目的是运用一个简单的协议基于装腔作势的脐带(加州大学),没有删除任何血管或使用任何酶消化,快速获得足够数量的多功能UC-MSCs。通道1 (P1),我们得到的平均值细胞从每个加州大学(SD 0, 4)。immunophenotypic表征,CD73细胞阳性,CD90、CD105, CD29、CD44,和CD34和HLA-class II HLA-I和消极,分组人口负HLA-I和HLA-II。新生的起源和multilineage潜在向骨、脂肪、软骨和肌肉了。端粒长度是类似于骨髓(BM)年轻捐献者的msc。结果表明,简单地从切碎的脐带碎片收集在P1 UC-MSCs允许实现一个有价值的适合骨科组织工程的细胞。

1。介绍

骨的修复和再生,关节软骨和肌肉是生物医学研究的一个主要挑战。最有前途的方法之一,是由间充质干细胞为基础的组织工程。间充质干细胞(msc)自1990年代以来一直在持续调查(1]因为他们优秀的增殖潜能和能力分化为多个血统。此外,他们的免疫抑制特性使其外源的细胞疗法的合适人选。同种异体的细胞方法意味着从捐赠者MSC被孤立,扩大,和冷冻保存同种异体的MSC银行,提供了一个现成的来源细胞替代疗法。

骨髓(BM)代表最常用的成人msc。功能定义为plastic-adherent BM-MSCs, nonhaematopoietic multipotential细胞支持造血干细胞在体外的扩张和能够分化成各种结缔组织的细胞。各种细胞表面标记与间质表型相关,CD105, CD73, CD90、和HLA-ABC蛋白质,而缺乏CD45的表达式,CD34, CD14,或CD11b CD79α或CD19和HLA-DR也认为这种细胞群的特征(2]。先前的研究已经显示广泛的能力分化成骨头(3,4],肌肉[5),脂肪组织(6),软骨(7),和肌腱8]。然而,一些局限性BM的痛苦过程收集、可用的有限数量的BM-MSCs自使用,和相应的同种异体BM捐赠了识别替代msc的来源越来越感兴趣。

人类脐带(UC)最近被认为是一个有效的替代组织msc (9]。加州大学是一个组织的胚胎外的起源躺在母亲和胎儿之间,由两条动脉、静脉,intervessels结缔组织(沃顿商学院的果冻),和脐上皮。加州大学通常是在出生后丢弃。因此,加州大学收集不需要任何侵入性程序也意味着重大的伦理问题。msc一直隔绝隔间的脐带组织,即脐静脉内皮细胞和内皮下膜和沃顿商学院的果冻。在沃顿商学院的果冻,msc孤立从三个区域:血管周的区(加州大学血管周的细胞),intervascular区,subamnion。msc也可以从脐带血分离,但有限的血液,可以收集和这个过程的技术难题做出合适的脐带血低于加州大学结缔组织和血管周的组织。沃顿商学院的jelly-derived细胞和脐静脉血管周围细胞(内皮和subendothelium-derived msc)显示multilineage能力以及免疫调节特性(10,11]。已经表明,一个注入MHC-mismatched未激活的人类UC-MSCs没有诱导检测免疫反应(12];因此,他们可以容忍在同种异体移植13]。这些细胞与BM-MSCs分享几个表面标记CD73, CD90、CD105和不表达CD34 (14]。此外,UC-MSCs低表达HLA类的我也没有表达HLA II级,除非与干扰素刺激γ(15,16]。

本研究的目的是运用一个简单的协议基于装腔作势的整个加州大学,没有删除任何血管或使用任何酶消化,为了获得足够的多功能UC-MSCs P1。这种方法并不意味着从加州大学不同区域选择一个细胞群(沃顿商学院的果冻、内皮和内皮下膜)但允许访问一个混合msc从所有加州地区的人口。immunophenotype Multilineage这些细胞的潜力,起源,染色体端粒的长度被验证在P1。本研究试图确定一个细胞群适合组织工程应用程序与一个简单的方法在骨科和肌肉骨骼医学小细胞操纵,为了建立一个良好生产规范协议多功能UC-MSCs的隔离和扩张。

2。材料和方法

伦理委员会的批准了两个MBC(分子生物技术中心),都灵大学从Mauriziano医院伦理委员会,都灵(意大利)。

2.1。加州大学收集和处理

获得患者的知情同意后,4新鲜UC样本检索的拥有健康的怀孕妇女在妊娠期间剖腹产分娩的Mauriziano医院的妇产科(意大利都灵)。

加州大学样本(平均长度,25 - 35厘米,体重,射程的技能g)被收集在一个磷酸盐(PBS)传输介质含有200毫克/ 100毫升环丙沙星(拜耳、米兰、意大利),500 IU肝素(Pharmatex、米兰、意大利),并被立即处理。后将细胞培养无菌层流罩下,线的长度和重量估计,加州大学在PBS洗两次去除污染物红细胞的痕迹。加州大学是首先切成3厘米长的段,随后将纵向裂开,露出内表面。加州大学部分被转移到60厘米²培养皿(康宁,纽约,纽约,美国)包含10毫升MSC扩张中,由杜尔贝科的修改鹰中/ F-12 (D-MEM)(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)富含5%的人类血小板溶解产物获得健康的捐赠者,10%胎牛血清的边后卫,1 x青霉素和链霉素,1 x丙酮酸钠,1 x不必要的氨基酸(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA), 500 IU肝素(Pharmatex、米兰、意大利)。加州大学段然后手工剁碎成非常小的立方形的使用没有碎片(4 - 7毫米长度)。15无菌解剖刀。小UC碎片被转移和均匀分布成6 - 7不同的60厘米²培养皿(约40 -片段/培养皿)和孵化在MSC扩张中37°C在湿润的气氛中公司为5%₂(0)(数据1(一),1 (b),1 (c))。加州大学剩下的碎片安静的在文化和监控2周允许识别msc的菜肴。

2.2。UC-MSCs文化

2周后从最初播种(14天),加州大学组织摘除和贴壁细胞被允许扩大额外2周。百分之四十的媒介是改变每3 - 4天。这个时期(28天)后,贴壁细胞(P0)使胰蛋白酶化,在1200转离心10分钟,在MSC resuspended扩张中,山肩一个连续扩张一步密度100 - 200细胞/厘米²,直到完全融合了(P1)。细胞融合在P1达成后约14天(42天)。

P1段的末尾(42天),活细胞被台盼蓝染色计算排除(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。

UC-MSCs从三个加州大学用于immunophenotypic表征,multilineage分化和荧光原位杂交。UC-MSCs加州大学被用于从一个端粒长度分析。

2.3。Immunophenotypic表征UC-MSCs

Immunophenotyping扩大UC-MSCs的P1段使用流式细胞仪的文化。1,5×10⁶UC-MSCs用于流式细胞术。

以下使用抗体:CD90-Peridinin叶绿素蛋白质(PerCP)花青染料Cy5.5 CD105-fluorescein异硫氰酸酯(FITC) (Biolegend,圣地亚哥,CA), CD73-Allophycocyanin (APC), CD34-phycoerythrin (PE), HLA-DR-FITC, HLA-PerCP, HLA-ABC-PE, CD29-APC (BD生物科学,圣何塞,CA) CD44-Alexa萤石(细胞信号技术,丹弗斯,MA), PE-conjugated anti-mouse免疫球蛋白G(免疫球蛋白)(生物技术协会南部,伯明翰,阿拉巴马州,美国),isotypematched IgG-FITC, IgG-PE和IgG-PE-Cy5控制抗体(Biolegend,圣地亚哥,CA)。

分析FACScan ((BD),正欲Buccinasco,意大利)至少10.000事件和使用CellQuest软件(BD)。

2.4。UC-MSCs分化

UC-MSCs P1从三个加州大学样本multilineage分化。

脂肪形成的、成骨的chondrogenic,肌原性的分化能力UC-MSCs决心的简要描述,在先前发表的方法(1,14]。

脂肪形成的差异化,5×10⁵UC-MSCs培养了EUROMED脂肪形成的差异化工具包(EuroClone、帕维亚、意大利)为3周。评估分化,细胞被固定为4%多聚甲醛在PBS 20分钟在室温和沾0.5%油红O (Sigma-Aldrich、米兰、意大利)甲醇(Sigma-Aldrich、米兰、意大利)在室温下20分钟。

成骨分化培养评估了5×10⁵在EUROMED UC-MSCs成骨分化工具包(EuroClone、帕维亚、意大利)。媒介改变了3周的每周两次。评估分化,细胞与4%多聚甲醛固定20分钟和茜素红染色,pH值4.1 (Lonza,日前,意大利)在室温下20分钟。细胞也研究了碱性磷酸酶染色(碱性磷酸酶Kit-based萘酚是双和快速红紫磅,Sigma-Aldrich)。免疫荧光分析,我们也直接在盖玻片培养细胞在相同的条件下确定的骨钙素(Abcam,剑桥,英国)17]。

球文化系统用于软骨形成(数字5(一个)和5 (b))。约1×10⁶UC-MSCs离心机在15毫升锥形聚丙烯管(猎鹰BD生物科学、米兰、意大利)150克与DMEM 5分钟,洗两次。球培养在EUROMED Chondrogenic分化工具包(EuroClone、帕维亚、意大利)补充10 ng / mL的转化生长因子β3 (SeroLab,瑞士洛桑)。媒介是改变了28天每3天。小球在一夜之间,80%乙醇固定,石蜡包埋部分被染色为硫酸粘多糖用番红精O和蛋白聚糖与阿尔新蓝(Sigma-Aldrich、米兰、意大利)与甲苯胺蓝18]。

肌原性的分化进行了使用5×10⁵UC-MSCs,镀在six-well文化板块(BD猎鹰、米兰、意大利)在血清DMEM 10%击倒的盖玻片,1%青霉素,链霉素1%,0.1毫米β巯基乙醇,40 ng / mL纤维母细胞生长因子(FGF) [14]。每3天中被改变。在文化21天之后,细胞被应用与人类myogenin单克隆抗体(Abcam,剑桥,英国)。

成骨的相同,chondrogenic,脂肪形成的差异化协议用于BM-MSCs人口控制。

2.5。免疫荧光分析

细胞免疫荧光分析简要描述为它遵循。

UC-MSCs生长在玻璃盖玻片冲洗短暂在磷酸盐(PBS 1 x)和4%多聚甲醛固定在PBS pH值7.4在室温下15分钟。样本与PBS 1 x洗了三次。获得透化作用,样本孵化与PBS 1分钟1 x包含0.5% Triton - 100和PBS 1 x洗了三次。阻塞,细胞被孵化1% BSA在PBS 1 x 1小时阻止抗体的非特定的绑定;然后样本与主孵化稀释抗体(antiosteocalcin或antimyogenin,取决于细胞株)在0.1% BSA在PBS 1 x 1小时在室温下的调湿室(稀释1:50)。然后,细胞被洗了三次在PBS 1 x和随后孵化与二级抗体(anti-mouse共轭Alexa萤石488表达载体,米兰,意大利)在0.1% BSA为1小时在室温下在黑暗(稀释1:1000)。解决方案与PBS,洗了三次,对比染色,细胞被孵化DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole, DNA染色)7分钟。然后,细胞与PBS 1 x三次冲洗15分钟;最后,盖玻片(5安装了下降μL)观察的安装介质。

2.6。荧光原位杂交

UC-MSCs的起源进行了使用荧光原位杂交(FISH) 2 UC样本。这是在男性新生儿在四个加州大学的两例标本收集。1×10⁵细胞被使用。

被使用的探针X着丝粒Xp11.1-q11.1 (DXZ1)(绿色)和Y异染色质Yq12 (DYZ1)(红色)。枚举探针集包含染色体特定DNA重复序列位于着丝粒染色体X和Y染色体的异色的块(Cytocell水瓶座,剑桥,英国)。

细胞从P1在Carnoy的固定剂固定,根据机构协议指南。鱼协议执行根据制造商的指示(Cytocell水瓶座,剑桥,英国)。使用荧光显微镜结果分析(Olympus-BX41,放大100倍,三重过滤RED-GREEN-DAPI)。

2.7。端粒长度分析

端粒长度是评估在P1 UC-MSCs从一个加州大学,和结果比较骨髓msc的端粒长度从骨髓吸入6健康成人志愿者(年龄20 - 30)。

大约4×10⁶细胞端粒长度分析使用。这一分析只进行一个加州大学。端粒长度是决定使用一个印迹分析如前所述[19]。2μg的DNA被混合消化Hinf我(20 U)和Rsa (20 U;罗氏诊断,德国曼海姆)和孵化在37°C 2小时。消化DNA片段被0.8%的琼脂糖凝胶电泳分离1 x Tris-acetate-EDTA运行缓冲。带正电的尼龙膜被用来转移DNA电泳分离。一夜之间转移后,尼龙膜被暴露在紫外线修复DNA片段。TeloTAGGG端粒长度分析工具包(罗氏诊断)是用于杂交的阶段。膜被淹没在prehybridization溶液在62°C下温和搅拌2小时然后杂交形成的解决方案(2μL的digoxigenin(挖)标记telomere-specific探测解决方案添加到prehybridization) 3个小时,在相同的温度下。杂交后,膜在室温下洗两次在严格的清洗缓冲我(2 x SSC 0 1% SDS) 10分钟,然后在37°C两次严格的清洗缓冲II (0.2 x SSC, 0, 1% SDS) 20分钟;是孵化与阻塞溶液在室温下1 x 30分钟,然后用DIG-specific抗体共价耦合碱性磷酸酶(美联社)。最后,CDP明星,化学发光底物,滴落在膜刺激美联社产生光发射。这个发射探测到x射线胶片(Lumi-Film化学发光检测薄膜,罗氏诊断)和扫描进行分析。分析使用数量(BioRad)之一。对于每个端粒涂片,端粒峰值限制片段长度和最大信号强度的定义最高浓度的端粒重复计算细胞的端粒长度的中位数人口调查。

2.8。统计方法

学生的t以及用于比较端粒长度评价UC-MSCS和健康的人骨髓。差异被认为是重要的。统计分析与统计软件包进行了GraphPad Prism 5.0 (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。

3所示。结果

3.1。形态学和UC-MSCs Immunophenotypic表征

在小学文化,典型的纺锤状附着细胞观察从加州大学组织碎片和启动迁移集落形成UC碎片播种后约14天。删除UC碎片后第14天,细胞在P0大约10天内获得60%的融合(图2观察),而充分融合后14天。UC-MSC克隆(P0)被收集在28天,山肩进一步扩张(P1)。文化融合在14天后观察P1(42天)。

在42天,我们在P1 4的平均值,获得2×10⁶从每个加州大学细胞±0,4。从最初的加州大学碎片播种(第0天),我们年底获得P1(42天)0,14×10⁶细胞/ g UC播种。

加州大学细胞的表型被流式细胞术分析。数据从一个代表性的实验报告在图3。收集的大部分加州大学细胞表现出积极的表达主要MSC标记CD73 CD90、和CD105, CD44和CD29。此外,他们负面的典型CD34造血的标志。

的数据也证明了存在HLA-ABC蛋白质和HLA-DR的缺失。此外,我们有可视化的一个显著的存在(40%)-双细胞HLA-ABC和HLA-DR蛋白质。

3.2。分化UC-MSCs

osteogenic-stimulated文化,重要的钙沉积和茜素红染色法观察到的集群内细胞后21天,与成骨的UC-MSCs的承诺一致。UC-MSCs显示一个模式类似于骨髓msc后21天的文化相同的介质,如图4(一)和4 (b)。

细胞碱性磷酸酶染色阳性(图4 (c))。

骨钙素被发现在细胞质免疫荧光在UC-MSCs承诺向成骨的途径(数字4 (d)和4 (e))。

Chondrogenic承诺与颗粒文化系统观察28天。组织学评价,小球的UC-MSCs三UCs表现出积极为阿尔新蓝染色和红色染料O(图5)和甲苯胺蓝方法(数据没有显示)。UC-MSCs显示圆的形状和模式类似于骨髓msc培养在相同的条件下,因为它显示在图5。

在细胞培养观察(图肌原性的承诺621天之后)。在免疫荧光细胞从所有三个UCs antimyogenin抗体阳性。积极观察主要在细胞核和细胞质中的较小,根据文献[20.]。

在adipogenic-stimulated文化(图7),UC-MSCs显示脂质沉积,21天后细胞形态学的变化。从三个UCs在所有文化中,细胞内脂质颗粒和油红O染色阳性3周后检测。在方差与骨髓脂肪细胞,显示较大的液泡,在我们的文化中UC-MSCs显示较小的脂质空泡,棕色脂肪可能相关的承诺。

3.3。UC-MSCs荧光原位杂交

细胞遗传学分析UC-MSCs两例男性新生儿进行。该方法表明,UC-MSCs主要是XY(95%和100%,resp)。这是一个普遍一致的新生这些细胞群的起源。

3.4。端粒长度分析

端粒长度的UC-MSCs UC决心和比较端粒的BM-MSCs P1来自成人志愿者(年龄20 - 30)(图68)。

两者之间无显著差异观察细胞群。UC-MSC端粒的中位数是9023碱基对(9023 kbp),而中位数从所有捐助者是9340碱基对(范围7872 - 9867 kbp)。

4所示。讨论

在这项研究中,我们应用一种简单,可靠和可重复的方法来分离混合人口从脐带UC-MSCs碎片。这个协议是基于直接剁UCs MSC扩张中以最小的机械操作。我们没有删除任何血管,我们没有使用任何酶消化或任何其他净化步骤,以避免可能的选择的细胞亚群。可行的方法,我们已经收集了足够数量的UC-MSCs P1。immunophenotypic特征,细胞P1主要MSC)阳性标记(CD73, CD90、CD105、CD44和CD29)和负面典型CD34造血的标志。此外,我们没有发现在所有细胞HLA II级,我们还观察到一个奇特的族群的存在的双重否定(HLA-I和HLA-II) UC-MSCs。UC-MSCs似乎与这个协议获得新生的起源和有能力提交对多个血统骨头,脂肪、软骨和肌肉。端粒长度是类似于BM-MSCs来自年轻的捐助者。综上所述,所有这些观察结果表明,从碎脐带碎片收集在P1 UC-MSCs允许实现一个有价值的人口UC-cells可用于骨科组织工程应用。

在骨科,细胞疗法被广泛用于增强组织修复在不同病理条件下涉及长骨缺陷或骨软骨病变。组织工程提出的不同的细胞来源,自体骨髓吸入或同种异体细胞(即。同种异体BM-MSCs或同种异体软骨细胞)。这些细胞通常装上合适的支架,直接转移到病变部位。这种“单程”的方法消除了患者自身的细胞“体外”扩张和被认为是比传统的自体的细胞培养和植入便宜,尤其是在软骨修复(21]。

浓缩自体骨髓细胞和骨髓被视为“黄金标准”的骨头和软骨修复(22,23]。然而,施主能级发病率是这个细胞来源的缺点。此外,BM-MSCs增殖和分化能力下降与患者的年龄增加所示(24]。此外,在骨髓浓缩,少量的msc可用,从而减少细胞的功效。

同种异体骨髓可以被认为是解决这些限制(25),但这种资源的可用性下降和BM捐款下降26)使这种方法不切实际的大规模在骨科临床使用。

加州大学最近介绍了作为一个潜在的替代BM在肌肉骨骼组织工程。许多假设的优势使加州大学一个有趣的细胞来源。加州大学是大量现成的,因为它通常被丢弃在正常阴道分娩或剖宫产组。收集细胞来源意味着没有侵入性程序和低成本。被加州大学一个胚胎外的组织通常放弃了最后的交付,几个伦理问题和法律问题参与这个过程,提供了一个完整的和明智的书面同意从母亲获得。最近的研究表明,msc可以从所有不同车厢的加州大学,获得沃顿的果冻(10),血管周围地区(27),和加州大学的内皮下膜和内皮地区船(11]。所有这些作品也表明这些细胞群的multilineage潜力。更大的扩张能力和长端粒序列UC-MSCs已观察到,建议后期开始衰老的细胞群相比,在体外BM-MSCs扩张(28]。免疫抑制UC-MSCs和缺乏致瘤的潜在能力和细胞遗传学异常的细胞,扩大在文化或植入体内时,都进行了广泛的描述在先前的研究26,29日]。最后,理论上的可能性结合UC-MSCs从多个捐助者增加的可用性的细胞来源,可能是有益的,当大量的细胞是需要一个过程30.,31日]。所有这些UC-MSCs的观察证实了有吸引力的治疗潜力。

在这项研究中,我们应用一个简单和快速的方法收集足够数量的UC-MSCs,只需剁UCs和培养小UC碎片和迁移msc总共6周在标准培养基富含人类血小板溶解产物和胎牛血清。

之前报道的隔离方法描述了msc从加州到多个步骤来选择特定的细胞来源。2003年,米切尔等人介绍了一种技术来收集多功能干细胞从沃顿果冻通过删除所有血管网络32]。2004年,王等人提出了刮掉从整个加州大学沃顿商学院果冻,执行与胶原酶和胰蛋白酶酶消化33]。最近,Montanucci et al。34)展示了一个过程涉及多个酶消化与透明质酸酶和人类重组Liberase加州大学消化产品的样品和离心的分裂细胞的原始沃顿果冻矩阵。复杂的方法也需要隔离人类脐带血管周的细胞,这意味着组织解剖为了孤立UC船,胶原酶消化、离心分离、磁珠损耗协议(27]。在所有这些研究中,选择细胞群得到详细的程序,尽管有效,隐含可观的组织处理。所有这些程序可能被认为太复杂面向临床的大规模的细胞疗法。

这些观察鼓励我们应用简单、实用、快速和经济的方法来获得MSC人口从混合切碎的脐带,类似于最近的研究(26,30.]。

为了减少外部污染的风险,只使用UCs从剖腹产。在我们看来,UCs从剖腹产更适合组织工程UCs从阴道分娩,因为可以收集这些样品在手术室的清洁环境。

本研究中描述的方法有一些实用的优点。它允许切断耗时的步骤包含酶的使用解决方案和长期酝酿的必要性。它涉及最小组织操纵机械装腔作势的组织组成。这一原则不损害组织的生命力,见以前的工作涉及软骨切片(35)和加州大学样本(30.]。此外,人口混合MSC与我们的方法获得,为了保持所有加州大学的“间充质属性”隔间。

与我们的协议,一个适当的细胞的数量从每个加州大学没有得到执行所有研究多个扩张通道。本研究主要不是为了获得大量的细胞,收获的最大数量从每个绳UC-MSCs作为临床使用要求。这种方法的目的是提取一个一致的细胞的数量与最小操纵初步体外试验研究。的确,骨髓间充质附着在塑料盘子的自然倾向是我们分离技术的主要元素。出于这个原因,大量的脐带被丢弃后15天的孵化和不习惯获得更多msc。最后的细胞的数量,虽然不是非常高,却足够整个实验设计包括细胞特性和承诺对成骨细胞的chondroblastic或myoblastic adipoblastic线。在灯体内的应用程序中,这些方法可能是合适的,因为脐带的无限来源细胞通常出生后丢弃和提取效率可以因此次要问题当细胞的主要来源是广泛使用在没有成本。不过我们意识到整个脐带处理与不同的收获过程和不同方法的装腔作势的,扩大的细胞群理论上会导致更多的细胞可以从每个加州大学。

收集到的msc显示呈形态,附着在塑料碗。immunophenotypic表征,BM-MSCs细胞表现出相似的表型,为正主MSC标记(CD73, CD90、CD105), CD29、CD44和HLA类我为造血的标记和消极CD34和HLA II级,在协议与其他报告(36]。有趣的是,一个特殊的人口UC-MSCs - HLA类我和HLA II级。这种“双重否定”的细胞群似乎特别适合一个同种异体的使用。进一步的研究将致力于正确分离这些特定的细胞为了在未来的体内实验中应用它们。混合UC-MSC人口用这种方法获得了新生的起源。这可以部分解释这些细胞的可塑性。

脂肪形成的,事实上,我们获得成骨的chondrogenic,肌原性的早期文化与分化媒体后的承诺。我们意识到,我们没有达到类似分化组织的形态,而是我们观察到一个承诺向一个特定的细胞类型,或者换句话说,一个进程向成骨细胞的chondroblastic或myoblastic adipoblastic线。此外,我们还观察到的差异这些细胞的可塑性与BM-MSCs相比,显示一个更高级的分化阶段类似的培养条件(见比较数据4,5,6,7)。

发表数据UC-MSC分化潜力仍有争议的;我们在与一些之前报道的观察结果显示低容量UC-MSC区分对骨骼、脂肪细胞、软骨细胞(15,26,37]。我们相信成骨、脂肪形成的和chondrogenic承诺这一研究获得的可能与这个协议中使用的媒介的具体成分,可能会进一步提高。这些早期的承诺阶段可以进一步提高体内微环境的影响完成分化过程。

所有这些原因,这些细胞可以被视为一个假定的候选人在骨科组织工程细胞疗法。

我们也评估了端粒的长度在UC-MSCs收集使用此方法,指标历史和衰老的细胞复制,我们比较了结果的端粒长度BM-MSCs获得健康的年轻献血者。我们观察到类似的结果在两个不同的细胞群。这是在协议与文献[28)和显示,用这种方法获得的混合UC-MSCs人口在P1分享一个等价的增殖潜力与msc BM吸入年轻的捐助者。尽管如此,它也表明,在我们的研究中描述的过程的细胞隔离不诱导UC-MSCs实质细胞衰老。

5。结论

总之,UC-MSCs主要文化后可以获得与该方法简单快速,P1。这种混合的细胞群的主要新生儿起源显示成骨的迹象,脂肪形成的,和chondrogenic承诺长端粒序列暗示了高增殖潜能。因此,在P1 UC-MSCs似乎有潜力成为适合使用在骨科组织工程应用。本研究的概念实际上可能被视作未来的假设选择的患者可能受益于干细胞疗法。然而,考虑到这些初步结果,测试体内的再生潜力的细胞群在一个动物模型,包括大型动物,将是下一个合乎逻辑的步骤。

利益冲突

作者指出任何潜在的利益冲突。

承认

作者感谢马可·弗尼(MD)细胞学和组织学援助和关键的观察。

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