复苏和BiodistributiongydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大人类成红血球细胞注入/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

体外gydF4y2Ba扩大成红血球细胞(EBs)可以作为先进的输血产品提供,沉淀发生在骨髓的macrophage-niche允许成熟。EBs扩大从成人和脐带血表达受体(CXCR4、VLA-4 P-selectin配体1)与巨噬细胞相互作用的必要条件。然而,输血后4天完整/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠,gydF4y2BaEBs观察内部gydF4y2Ba脾细胞表明他们接受了吞噬。当splenectomized和完整/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠输血使用逆转录病毒标记人类EBs,人体细胞只在splenectomized动物被生物荧光成像可视化。四天之后注入,人类gydF4y2Ba细胞在骨髓中发现的splenectomized老鼠但只在脾脏和肝脏的控制。人类gydF4y2Ba血液中红细胞在所有情况下都保持在低位。这些研究建立splenectomized / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠是一个适合人类EBs的跟踪和量化的模型gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

培养条件生成的能力gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba人类成红血球细胞(EBs)人数足以输血已经建立了几个调查人员(了gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)增加的可能性,这些细胞可以作为替代输血产品(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。这些产品的临床前评价包括测试gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba的力量gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba生成的细胞在动物模型(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。发展的动物模型来评估人类EBs生成的效力gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba需要更好的理解人类EBs和小鼠微环境之间的相互作用和识别动物的操作可能赞成沉淀这些细胞的骨髓。gydF4y2Ba

体内,gydF4y2BaEBs在专业领域的成熟骨髓巨噬细胞接近既有利于hemoglobinization,通过促进铁吸收,摘出术(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。去核后,网织红细胞和巨噬细胞失去联系,出口到血液中。EBs与巨噬细胞通过表面粘附受体CXCR4 (CD184) P-selectin ligand1 (PSGL1 CD162)和VLA-4 (CD49d,gydF4y2Ba4整合素),识别CXCL12(也称为SDF1), P-selectin VCAM1,分别对巨噬细胞的表面(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。在稳态条件下,几个EBs出口从骨髓和这些通常是通过巨噬细胞在脾脏gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。涂片培养人类EBs通常含有巨噬细胞包围的EBs表明培养EBs能够与人类交互巨噬细胞来源于血液。然而,粘附受体的概要文件gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba生成的EBs和效率的这些细胞与小鼠巨噬细胞之间的相互作用是目前未知。gydF4y2Ba

二乙酸Neildez-Nguyen等人报道,人类carboxyfluorescein succinimidyl酯- (CFSE)标记EBs扩大gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba从gydF4y2Ba从脐带血分离细胞分化成红细胞输血时NOD / SCID小鼠(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。输血协议包括共同服用外生的人类促红细胞生成素(EPO)和腹腔内管理包装人类红细胞阻止网状内皮系统(导致瞬态功能脾切除术)。最初,人类gydF4y2Ba细胞在骨髓中发现,肝脏,脾脏,肺输血的动物,从第四天开始,也在外周血。然而,这些实验已经被怀疑,因为人类gydF4y2Ba细胞在免疫缺陷小鼠通常生成强健的淋巴道和难以觉察的骨髓细胞,但红细胞数量的细胞(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。这些数据已经被解释为证据表明小鼠微环境不宽松的EBs的成熟。虽然人类和小鼠促红细胞生成素的分子结构非常相似,它已经表明,小鼠促红细胞生成素可能无法支持人类EBs的最佳成熟因为它不引起二聚在绑定到人类受体(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。这个假设是间接由Nicolini等报道,与人类促红细胞生成素治疗移植后大大增加人类红细胞细胞当人类的一代gydF4y2Ba细胞免疫缺陷小鼠注入(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。然而,人类促红细胞生成素和包装管理的相对贡献人类红细胞动物模型的成功为人类输血由Neildez-Nguyen et al。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)尚未被澄清。gydF4y2Ba

我们的研究的目的是测试是否gydF4y2Ba体外gydF4y2BaEBs表达粘附受体生成配置文件必须完成他们的成熟gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba以及是否抑制之间的交互gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba生成的EBs和脾巨噬细胞将允许建立一个gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba模型功能的评估gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大人类EBs。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。人类被试gydF4y2Ba

低容量脐带血单位(CB)得到来自纽约血液中心(美国纽约)。外周血(PB)收集从正常成人捐助者的输血中心La Sapienza大学(意大利罗马)。收集的标本都是根据准则建立了制度伦理委员会和作为鉴定提供样品。gydF4y2Ba

2.2。老鼠gydF4y2Ba

12个女/ SCID / IL点头gydF4y2Ba老鼠从杰克逊实验室和购买安置在纪念斯隆-凯特琳癌症中心的动物设施。所有小鼠研究显示进行制度动物保健和使用委员会批准的协议。gydF4y2Ba

2.3。细胞的准备gydF4y2Ba

单核细胞(跨国公司)从离心获得的CB和AB Ficoll-Hypaque (Amersham淀粉微球研究,乌普萨拉,瑞典)。gydF4y2Ba细胞CB分离使用人类脐带血CD34选择工具(公元前干细胞技术公司、温哥华、加拿大),所述的制造商。gydF4y2Ba

2.4。人类扩张成红血球细胞gydF4y2Ba

细胞和跨国公司(gydF4y2Ba和10gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/毫升,职责。)是培养人类红细胞大量扩增(-)条件下在增殖阶段刺激干细胞因子(SCF, 10 ng / mL,研发系统,明尼阿波利斯,锰、美国),红细胞生成素(生成素EPO(促红细胞生成素)5 U / mL, Epogen,安进,千橡市,美国)和白介素3 (1 ng / mL, IL-3 Biosource,圣何塞,CA,美国),地塞米松和雌二醇(两者都是gydF4y2Ba,σ,圣路易斯,密苏里州,美国)10天,随后与促红细胞生成素刺激细胞分化阶段(5 U /毫升)、胰岛素(10 ng / mL, Calbiochem拉霍亚,CA,美国),和FeSOgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba(gydF4y2Baσ)4天,如前所述[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.5。集落形成实验gydF4y2Ba

排序细胞的集落形成能力评估标准半固体的甲基纤维素文化(40%,丙烯酰胺Biochemika)刺激与自洽场(10 ng / mL), IL-3 (10 ng / mL),集落刺激因子(gm - csf, 10 ng / mL),粒细胞集落刺激因子(g - csf, 100 ng / mL)和促红细胞生成素(5 U /毫升)。文化是在37°C的环境完全湿润pCO的5%gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba大气和得分后2天集落形成单位红细胞(CFU-E)和8天破裂后形成单位红细胞(BFU-E)和集落形成单位granulocyte-macrophages (CFU-GM)殖民地。gydF4y2Ba

2.6。细胞生存能力和表型分析gydF4y2Ba

细胞数量和可行性评估后由微观评价台盼蓝(美国波士顿Bioproducts、亚什兰、马)染色。红色的细胞被确定使用标准形态的外观检查标准cytocentrifuged细胞制剂(Cytospin 3 Shandon Astmoor,英格兰)沾May-Grunwald-Giemsa(美国费舍尔科学、匹兹堡、PA)使用Axioscope光学显微镜配有Coolsnap摄像机(蔡司、从、德国)。流仪分析,细胞悬浮在CagydF4y2Ba^{2 + /gydF4y2Ba}毫克gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}无磷酸盐,补充1% BSA,沾染了藻红蛋白- (PE)共轭CD36 (antithrombospondin受体)gydF4y2Ba13gydF4y2Ba],-CD184 (CXCR4) -CD162 (PSLG1) -CD49d (VLA-4),或allophycocyanin——(APC)共轭CD235a (anti-glycophorin),锅造血人类——(FITC)共轭CD45或适当的同形像控制(正欲从生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)。GFP决定,未经处理的细胞的自体荧光分析是消极的控制。荧光与流式细胞仪分析了正欲(生物科学)配备三章气冷式和固体激光(488 nm、633 nm和407 nm)。死细胞被propidium碘(π,5排除在外gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL,σ)染色。gydF4y2Ba

2.7。人类EBs的荧光标签。CFSE标记gydF4y2Ba

EBs获得在天11 -文化沾CFSE (10gydF4y2BaμgydF4y2BaM,表达载体,卡尔斯巴德、钙、美国)所描述的gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)和丙烯酸-条件下额外培养24小时。gydF4y2Ba逆转录病毒介导的标签gydF4y2Ba。CBgydF4y2Ba细胞培养3天在媒体X-VIVO 10 (Lonza Walkersville, Walkersville,医学博士,美国)含有促血小板生成素(TPO 100 ng / mL),自洽场(100 ng / mL), Flt3配体(Flt3L 100 ng / mL), IL-3 (20 ng / mL)和pg - 13级逆转录病毒制作人上层清液gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)包含的膜固定形式Gaussia荧光素酶酶(extGLuc) [gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)添加两次24小时。的转染gydF4y2Ba细胞被培养条件下宋春芳额外6天。一个nontransduced整除gydF4y2Ba细胞从同一隔离-条件下并行的控制。gydF4y2Ba

2.8。输血协议gydF4y2Ba

两个协议。在第一个实验中(见补充图1在网上补充材料doi: 10.4061 / 2011/673752), 2 NOD / SCID / IL2RgydF4y2Ba老鼠通过尾静脉注射gydF4y2BaCFSE-labeled EBs。24小时注射之前,老鼠流血(500gydF4y2BaμgydF4y2BaL)增加内源性EPO水平。在第二个实验中(Supplementalry图2),完好无损,splenectomized / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠每组小鼠(4)。NOD / SCID / IL2RgydF4y2Ba老鼠与异氟烷麻醉后(美国鹿田巴克斯特)和splenectomized双重结扎脾动脉和静脉(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。腹膜,肌肉和皮肤被关闭在单独使用无菌5层吸收性缝线。完好无损,splenectomised老鼠通过尾静脉输血gydF4y2Ba逆转录病毒标记EBs一起人类促红细胞生成素(20 U /鼠标)。24小时前,老鼠一直在流血(500gydF4y2BaμgydF4y2BaL)。在这两个实验中,小鼠接受文化媒体只作为消极的控制,所有的老鼠都牺牲后4 - 5天输血进行进一步的分析。gydF4y2Ba

2.9。免疫细胞化学gydF4y2Ba

从股骨涂片的单个细胞悬浮液,脾脏,肝脏和培养EBs由cytocentrifugation (Shandon,英国Astmoor)与多聚甲醛固定(美国3.7%,电镜ScienceHatfield PA) 30分钟和双重蒸馏水冲洗2次。涂片孵化了一个反人类的血型糖蛋白抗体(CD235a Abcam,剑桥,妈,美国)的免疫反应检测avidin-biotin immunoperoxidase系统(Vectastain精英ABC设备;向量的实验室,伯林盖姆,CA)与hematoxylin-eosin幻灯片复染色,如所描述的制造商。整除的注入EBs和涂片media-treated老鼠作为积极的和消极的控制,分别。组织学观察结果进行了使用蔡司AXIOSKOPE光学显微镜(德国耶拿)配备Coolsnap Videocamera。枚举的人类gydF4y2Ba细胞是由两个独立的调查员蒙蔽的方式。gydF4y2Ba

2.10。生物荧光成像gydF4y2Ba

生物荧光检测使用新创建Xenogen成像系统(创建Xenogen)如前所述gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。成像进行静脉注射后24 - 48小时之内coelenterazine (250gydF4y2BaμgydF4y2Bag)通过尾静脉(Nanolight技术)。背侧和腹侧动物获得的图像采集时间的1到3分钟。视野15、20或25厘米,较低的介质,或高面元在一个开放的过滤器是利用最大化信号强度和灵敏度。我们收购获得的图像数据和信号强度的测量使用生活图像感兴趣的区域(ROI)分析软件(创建Xenogen)。归一化图像显示在每个数据集根据颜色强度。gydF4y2Ba

2.11。统计分析gydF4y2Ba

结果表示为代表(±SD)除非另有声明至少三个复制实验。使用计算机软件统计分析是由方差分析起源5.0为Windows (Microcal软件公司,北安普顿,妈,美国)。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。脐带血跨国公司产生更多的成熟红细胞细胞比成人血液-条件下跨国公司gydF4y2Ba

我们组之前确定了文化策略EBs的大规模生产gydF4y2Ba体外gydF4y2BaCB和AB跨国公司定义为人类红细胞大量扩增(-)文化gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。在这种文化环境,包括在本文的实验中,AB跨国公司EBs的生成gydF4y2Ba而产生的EBs CB跨国公司是共产党连续大(gydF4y2Ba图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

CD36 / CD235a剖析,EBs -条件下生成可分为4类逐步用更成熟的细胞gydF4y2Ba/gydF4y2Ba(课上我门R1)gydF4y2Ba(二类,大门R2)细胞,含有克隆形成unit-erythroid (CFU-E)和pro-EBs,和gydF4y2Ba(第三类,大门R3)gydF4y2Ba细胞(四级,大门R4),分别包含basophilic-polychromatic和正色的EBs(补充图3)BFU-E - CFU-GM-derived殖民地并不是检测细胞中生成丙烯酸-文化从第八天(数据没有显示)。10天-文化的很大一部分文化中产生的EBs AB和CB跨国公司由不成熟的类I和II级EBs (38 78%, resp)(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。接触的第十天EBs源自AB和CB EPO仅4天成熟类III和IV EBs的比例增加到52 - 70%。CB-derived EBs包含成熟细胞的分数低于AB-derived EBs -无论是在文化和单独培养时促红细胞生成素(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

巨噬细胞包围岛屿6 - 9 EBs是一般涂片中发现AB和CB派生EBs在第七天开始,到第十天-文化(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(c))。这些岛屿的频率nonerythroid涂片是与频率有关的细胞中幸存下来的文化(数据未显示)。随机自然-文化无法量化的巨噬细胞这一现象。进一步研究中培养EBs将暴露于单核细胞纯化从人类血液,骨髓和脾脏需要定义这些细胞群之间的交互gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

3.2。动态模式的粘附受体分析AB - CB-Derived EBs在文化的成熟gydF4y2Ba

趋化因子受体CXCR4的表达模式,PSLG1 VLA-4 EBs从AB和获得CB在第十天4天-和诱导成熟的文化包含EPO单独提出了数字gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba图4,补充。gydF4y2Ba

趋化因子受体CXCR4的表达几乎没有可检测AB -或CB-derived EBs在第十天的文化,无论成熟阶段(数字gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。单独接触这些细胞的促红细胞生成素迅速(1天内)激活对未成熟细胞趋化因子受体CXCR4表达第一(R1) 1班,然后到了第四天也在表达一个更成熟的细胞表型(类2 AB EBs和类gydF4y2BaCB EBs)。最成熟的第4类EBs (AB和CB)不会表达的趋化因子受体CXCR4(数字gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。趋化因子受体CXCR4表达可视化的动态模式的直接比较CD184 (CXCR4)和CD235a(血型糖蛋白)表达式AB和CB EBs成熟仅在EPO文化提出了补充图4。虽然被观察到了类似的趋化因子受体CXCR4表达模式在EBs来源于AB和CB,更大比例的(30 - 80%和15 - 40%)CB-derived EBs趋化因子受体CXCR4表达比AB EBs和平均荧光强度(MFI)也更大的CB(范围1000 - 2500和500 - 1000年)。gydF4y2Ba

在第十天,AB和CB派生EBs表达高水平的PSLG1不管他们的成熟阶段(80 - 90%gydF4y2Ba细胞与小额信贷机构在1000 - 4000年)(数据的范围gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。PSLG1的表达是守恒的EBs诱导成熟时单独使用促红细胞生成素(图4天gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)尽管直接比较针对CD235a PSLG1表达式表示这种受体的表达与成熟,尤为明显的AB-derived EBs(补充图4)。gydF4y2Ba

百分比(60 - 100%)的第十天EBs表示强劲水平VLA-4 (MFI的范围1000 - 3000 AB EBs CB EBs和2000 - 6000年)不管他们的成熟状态。的频率gydF4y2BaEBs居高不下时,细胞诱导成熟与促红细胞生成素4天,虽然在AB EBs VLA4表达每个细胞的水平随时间下降仅在文化与传真照片刺激时(数据gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。显然高maturation-independent VLA4表达模式在AB和CB EB也观察到的直接分析VLA4 / CD235a表达模式(补充图4)。gydF4y2Ba

总之第十天EBs趋化因子受体CXCR4的表达低水平但PSLG1和VLA4强劲水平。诱导这些细胞成熟仅靠接触EPO迅速激活趋化因子受体CXCR4的表达,但适度的表达或没有影响PSLG1 VLA4,除了减少的数量gydF4y2Ba二班和三班EBs AB-derived细胞中观察到的文化。gydF4y2Ba

3.3。细胞的命运gydF4y2Ba体外gydF4y2BaCB EBs NOD / SCID / IL2R扩大gydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba

更高层次的粘附受体的表达CB EBs表明这些细胞可能更能比AB EBs建立成熟所需的细胞间的相互作用gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba因此更适合使用在动物模型来分析输血后细胞的命运。我们选择NOD / SCID / IL2RgydF4y2Ba小鼠作为实验动物模型,因为它已被证明很容易支持人类的移植gydF4y2Ba造血干细胞和优越,长寿模型适合研究采用异种移植策略(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

在初步实验中,小鼠的命运RFP-labeled EBs来源于肝脏和输血同源的thalassemic老鼠决心。小鼠RFP-labeled EBs (gydF4y2Ba)输血不能说thalassemic老鼠难以觉察的察觉或生成的红细胞水平。相比之下,当老鼠流血150到600gydF4y2BaL输血前24小时,相同数量的小鼠RFP-labeled EBs多达生成gydF4y2Ba红细胞(境阶段和p . Frenette未发表的观察)。这些结果表明,促进出血gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba成熟的输血鼠EBs,可能通过增加内源性EPO水平。在这些数据的基础上我们决定流血的动物与人类EBs输血前24小时。gydF4y2Ba

在最初的三个实验,CFSE-labeled EBs来自gydF4y2BaCB -细胞后11天文化通过尾静脉输血(gydF4y2Ba每个鼠标EBs) / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠流血(500gydF4y2BaL)(补充图3)的前一天。老鼠在输血后第四天牺牲了人类CD235的检测gydF4y2BaEBs和天21所有血统的人类造血细胞的存在(gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

在第四天,流式细胞仪分析显示0.99 - -1.18%和2.57 - -5.29%的存在gydF4y2Ba细胞(gydF4y2Ba和gydF4y2Ba分别在骨髓和脾脏,输血的老鼠(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(a)和表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。的存在gydF4y2Ba 细胞表明,一些人类EBs经历了扩散gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba在输血后4天。假设的骨髓和脾脏细胞总数的一只老鼠gydF4y2Ba细胞和gydF4y2Ba~gydF4y2Ba10gydF4y2Ba^8gydF4y2Ba细胞,分别gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),它是计算的骨髓和脾脏输血动物包含~gydF4y2Ba(1.7%的gydF4y2Ba细胞)和gydF4y2Ba(6.8%的10gydF4y2Ba^8gydF4y2Ba分别为细胞)人类EBs(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。因此,大多数人EBs卡在脾。采用免疫分析的表达人类红细胞CD235a标记确认存在的众多(占总细胞数的18%)人gydF4y2Ba输血的脾细胞动物(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(b))。然而,gydF4y2Ba细胞被困在大gydF4y2Ba可能细胞,巨噬细胞的小鼠。到了18天,很少(0.01 -0.06%)人gydF4y2Ba细胞在血液中检测到。白天21岁的人类gydF4y2Ba在骨髓细胞被察觉,脾脏和肝脏的输血/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠,确认集落形成数据,这表明,CB EBs -条件下扩大了10天不再含有造血祖细胞。这些结果表明,人类EBs提出优先在脾脏和可能被巨噬细胞所吞噬。gydF4y2Ba

脾切除术是否会促进骨髓中沉淀,的命运gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大EBs输血splenectomized和完整/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠比较。分析了细胞biodistribution retroviral-mediated标签与外部Gaussia荧光素酶基因(extGLuc),利用生物荧光成像,和e绿色荧光蛋白(eGFP)是用于流式细胞术的决定gydF4y2BaCB细胞然后扩大-条件下(见[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)和补充图2)。extGLuc酶是一种新研制的Gaussia荧光素酶含有羧基端CD8跨膜域。这一领域的存在允许锚定膜和细胞表面保留extGLuc,显著提高发光信号(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

逆转录病毒转导的扩张潜力和控制gydF4y2BaCB细胞比较图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。白天9日gydF4y2BaunmanipulatedgydF4y2BaCB细胞生成gydF4y2BaEBs (gydF4y2Ba倍),而gydF4y2BaCB细胞条件下培养3天宽容了逆转录病毒转导(请参见图2)补充生成gydF4y2BaEBs (gydF4y2Ba),绝大多数(80%)强健的eGFP表达(MFI >gydF4y2Ba)。FI - unmanipulated文化之间的差异和逆转录病毒转导gydF4y2BaCB细胞与死亡率的变化无关,所评估的propidium碘染色(数据没有显示)和可能与低估的可能性低数量的细胞(gydF4y2Ba)用于启动un-manipulated细胞的文化。通过流式细胞仪分析,绝大多数的gydF4y2BaEBs来自逆转录病毒转导gydF4y2BaCB细胞不表达CD235a。然而,通过形态分析这些细胞的成熟阶段相当的EBs源自un-manipulated CB细胞(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。我们相信低表达的CD235a逆转录病毒转导EBs之间的干扰是一个后果的抗体和eGFP荧光信号。gydF4y2Ba

整除(gydF4y2Ba)逆转录病毒转导EBs一起通过尾静脉注射20 U的人类促红细胞生成素splenectomized和控制/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠一直流血(500gydF4y2BaμgydF4y2BaL)。生物荧光成像进行输血后24和48小时。输血后24小时,extGLuc发光信号几乎检测不到,除了在小鼠在注射部位出现的(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。相比之下,显著水平的extGLuc信号在腿和头骨splenectomized小鼠,观察表明人类EBs可能创造大英博物馆。在这些老鼠,显著水平的生物发光信号也被发现在腹部(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。这些数据表明,在缺乏脾脏CB EBs在骨髓和肝脏。gydF4y2Ba

四天输血后,老鼠被牺牲,人类的存在gydF4y2Ba细胞在骨髓和肝脏的输血/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠被流式细胞仪分析。在完整的老鼠,伟大的数字(gydF4y2Ba~gydF4y2Ba占总细胞数的15%)的人gydF4y2Ba在人类细胞中发现脾脏gydF4y2Ba难以觉察的细胞在骨髓和肝脏。相比之下,在splenectomized动物,大量的人类gydF4y2Ba在骨髓细胞检测(25%)和肝脏(7%)(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。有趣的是这些细胞CD36没有表达,表明他们已经成熟了gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。然而,红细胞在血液中保持在低位完整和splenectomized老鼠(数据未显示)。gydF4y2Ba

这些结果表明,人类EBs的切除脾脏喜欢归航的骨髓/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

质量和安全的一个重要问题在于细胞产品的发展一个代理分析细胞产品尽可能接近最终产品用于治疗使用。我临床学习阶段,人类细胞的最佳评估产品由临床前研究在老鼠体内模型表示。根据我们的经验,这种方法不仅可以帮助验证研究和建立效能分析,而且还帮助指导生产过程本身的发展通过定义最佳细胞净化过程、文化条件,扩大系统。本研究侧重于建立一个异种的EBs扩展模型来测试gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba丙烯酸-条件下作为潜在输血产品。这样一个模型的可用性可能推动其他领域的研究提供了一个方法比较的功能地位EBs主要来源于造血干/祖细胞与那些来自其他干细胞来源如人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞。gydF4y2Ba

这项研究表明的成熟gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba生成的CB -和AB-derived EBs与粘附受体表达的动态模式。在天- 11 -文化,大多数不成熟AB - CB-derived EBs趋化因子受体CXCR4的表达低水平和高水平的VLA-4和P-selectin配体1(数字gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。仅靠接触EPO诱导成熟后,这些EBs迅速(24小时内)活化趋化因子受体CXCR4的表达,同时保留的表达VLA-4和PSGL-1 down-modulating表达式。到了第四天成熟的文化,大多数EBs已经发展到成熟gydF4y2Ba表型(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)和降低了所有粘附受体的表达。小个体发育的差异,观察到由于CB EBs更高层次的趋化因子受体CXCR4表达,PSGL-1, VLA4和活化趋化因子受体CXCR4表达促红细胞生成素比AB EBs更容易暴露。而人类表达的粘附受体模式成红血球细胞成熟gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba老鼠不知道,这些数据是可用的。未成熟小鼠EBs获得胎儿肝脏和成人骨髓强健的趋化因子受体CXCR4表达,PSGL-1和gydF4y2Ba4整合蛋白。这些细胞失去PSGL-1表达式和留住趋化因子受体CXCR4和VLA-4表达与成熟gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。这些高水平的趋化因子受体CXCR4代表的主要区别的模式表达的粘附受体小鼠细胞和表达的gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大人类EBs。低水平的趋化因子受体CXCR4表达在人类EBs -中产生和迅速,这些细胞,24小时内,获得趋化因子受体CXCR4表达单独接触EPO与报告一致,趋化因子受体CXCR4表达由地塞米松抑制(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba)的一个组件-文化(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。另一方面,低水平的趋化因子受体CXCR4表达观察到当人类EBs成熟(类4)预计,因为这些细胞趋化因子受体CXCR4的表达下调表达,所涉及的主要受体细胞保留在骨髓gydF4y2Ba25gydF4y2Ba),作为流程的一部分,它允许他们从骨髓(出口gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

另一组的实验评估CFSE的命运——或者retrovirally-labeled CB-derived人类EBs输血NOD / SCID / IL2RgydF4y2Ba老鼠。出血和/或注入动物与人类促红细胞生成素增加促红细胞生成素水平大大增加检测人类EBs的动物。到了第四天输血后,1.5 - -5%的细胞在BM和脾脏,分别,动物是积极的人gydF4y2Ba通过流式细胞术(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(a))。然而,通过免疫组织化学,大量人类CD235a阳性(18%)的细胞免疫组织化学检测脾(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba(b))。人类的gydF4y2Ba细胞,然而,出现困在大CD235a细胞表明他们可能经历了由小鼠巨噬细胞吞噬作用。这些结果表明,优惠脾沉淀和人类EBs的间隙可能代表一个障碍小鼠模型的使用功能评价人类输血的产品。gydF4y2Ba

趋化因子受体CXCR4扮演着重要的角色在细胞沉淀和保留在骨髓gydF4y2Ba25gydF4y2Ba为细胞归巢脾[]不过是可有可无的gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。我们假设人类CB EBs提出骨髓的失败可能是由不平衡的趋化因子受体CXCR4的表达对其他粘附受体的表达,如PSGL1 VLA-4, CD36 (CD36专门指导与内皮细胞相互作用系统(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba])。因此,切除脾脏,通过减少细胞由这些受体的相互作用,可能有利于贮存在EBs表达低水平的趋化因子受体CXCR4的骨髓。这个假设测试通过比较沉淀人力EBs完好无损的骨髓和splenectomized / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠。Bioimaging,紧随其后的是流式细胞术分析,表明在缺乏脾脏retrovirally-labeled人类EBs提出大量的骨髓输血动物(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。这些结果表明,切除脾脏在很大程度上改善了人类的生存EBs老鼠。然而,尽管的迹象gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba成熟检测(检测骨髓细胞阳性人类CD235a但CD36负),人类的数量红细胞输血的血液中检测到动物保持在低位。gydF4y2Ba

由于趋化因子受体CXCR4表达可能是upregulation当人类EBs是输血gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(细胞不再接触DXM但暴露于人类促红细胞生成素),它是可能的,除了脾切除术,沉淀人骨髓的EBs输血动物可能提高了实验方法旨在提高趋化因子受体CXCR4表达,如短pretransfusion促红细胞生成素gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba(数据gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。自循环细胞是已知下归航[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba),除了增加趋化因子受体CXCR4表达,这些方法也可以提高自导通过减少增殖EBs的数量。间接证明,趋化因子受体CXCR4表达可能促进人类EBs的归航骨髓最近获得的。尽管治疗许多染色质修改代理降低趋化因子受体CXCR4表达(gydF4y2Ba29日gydF4y2BaHDAC抑制剂丙戊酸(VPA)是很出名的,上调的趋化因子受体CXCR4表达而downmodulating表达的能力gydF4y2BaαgydF4y2Ba整合蛋白和其他粘附受体在几个细胞类型(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。最近Chaurasia et al。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)表明,gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大EBs VPA-treated CBgydF4y2Ba细胞殖民,除了脾脏、骨髓当输血点头/ SCID / SCID / IL2R,不住的点头gydF4y2Ba老鼠被屏蔽功能splenectomized网状内皮组织系统与腹腔内注射人类的O型+红细胞,为首次报道Neildez-Nguyen et al。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。然而,由于Chaurasia et al。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]没有测量VPA-treated EBs所表达的粘附受体的水平,不可能评估功能的相对贡献脾切除术和/或upregulation CXCR4(和/或监管VLA-4 PSGL-1表达式)的改善沉淀这些细胞的骨髓。进一步的研究是必要的澄清这个问题为了建立最优预处理(脾切除术与功能性reticulo-endotheium封锁)小鼠模型的功能评价输血产品所产生的不同的干细胞来源。gydF4y2Ba

这项研究报告的一个主要区别Chaurasia et al。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)是由人类的水平红细胞输血的血液中检测到的动物。几乎在我们的研究中,人类红细胞输血后血液中检测到在任何时间点在Chaurasia等人的研究离散的成熟红细胞中检测到循环从输血后第七天(NOD / SCID小鼠的15%和30%的改善/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba模型)。然而,祖细胞中不再检测到人类EBs -条件下扩大在这个研究(gydF4y2Ba老鼠细胞中未被发现的输血),而代表很大一部分(7%)VPA-treated细胞输血的Chaurasia et al。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。因此可能在这种情况下释放人类血液中红细胞的人类巨噬细胞产生的人类的存在造血祖细胞在动物模型。然而,另一个可能性是,在我们的实验中,血液中的红细胞释放被免疫系统清除。gydF4y2Ba

免疫反应代表一个障碍小鼠模型的发展为人类红细胞的功能评估产品(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。这些障碍包括细胞和体液免疫反应引起的红细胞抗原特异表达。因为一些红细胞抗原表达的抗原表位存在由膜蛋白质的细菌也提出了在肠道菌群gydF4y2Ba34gydF4y2Ba),红细胞可能触发免疫反应导致红细胞溶解即使没有任何之前的敏感。NOD / SCID,改善/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠,缺乏细胞介导和immunoglobulin-mediated体液反应(这些老鼠没有B细胞)。此外,很大一部分不曾对红细胞抗原通常是在脾脏(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)这是暂时性的灭活(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba),在我们的研究中永久删除。补体系统在体液中起着重要作用介导体内红细胞间隙。因为/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠缺乏C5 (gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),他们减少了激活补体旁路的水平。然而,这些老鼠表达C3 (gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)和可能激活补体经典负责溶解人类CD55和CD59缺乏红细胞在阵发性夜间血红蛋白尿(PNH) [gydF4y2Ba36gydF4y2Ba),防止使用/ SCID / IL2R点头gydF4y2BaPNH研究小鼠动物模型的发展。人类CB EBs扩大gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba丙烯酸-条件下表达CD55(53 - 87%正EBs,gydF4y2Ba)和CD49 (54 - 70%,gydF4y2Ba)。然而,这些抗原的表达时大大降低细胞诱导成熟与促红细胞生成素5天gydF4y2Ba体外gydF4y2BaEBs (CD55: 17 - 27%,gydF4y2Ba;CD59: 28 - 56%,gydF4y2Ba从2单独的文化)(境,数据阶段和C。Whitsett未公开的数据)。因此可能gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba扩大人类EBs也失去了CD55 / CD59表达在他们成熟的骨髓/ SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠后代容易C3-mediated溶菌作用。因为最近发达(C3缺陷小鼠gydF4y2Ba37gydF4y2Ba),我们预测,C3-deficient / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠将代表一个更好的读出动物模型存在的人类血液中红细胞。gydF4y2Ba

总之,我们描述数据表明splenectomized / SCID / IL2R点头gydF4y2Ba老鼠代表一个代理gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba模型来评估输血产品产生的力量gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba不同的干细胞来源。gydF4y2Ba

信息披露gydF4y2Ba

所有的作者都有看报纸,同意其内容和状态,其内容还没有提交的其他地方。作者没有利益冲突的披露。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

本文是NY-STAR基金会提供资助(c - 06066),美国机构基金从西奈山医学院和史Superiore Sanita,意大利。安进公司提供的人类重组自洽场(CA千橡市,美国;MTA没有。19982634 - 005年)。gydF4y2Ba

补充材料gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

1. a . r .阶段,c . Whitsett g .阶段“红细胞细胞体外:从发育生物学输血产品,”gydF4y2Ba目前在血液学的意见gydF4y2Ba,16卷,不。4、259 - 268年,2009页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
2. n .莫汉达斯·“指望红细胞,”gydF4y2Ba自然生物技术gydF4y2Ba,23卷,不。1,35-36,2005页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
3. m . c . Giarratana l . Kobari h . Lapillonne et al .,“体外代完全成熟的人类红细胞造血干细胞,”gydF4y2Ba自然生物技术gydF4y2Ba,23卷,不。1,第74 - 69页,2005。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
4. j . a .底架和n .莫汉达斯·“Erythroblastic群岛:红细胞生成领域,”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷112,不。3、470 - 478年,2008页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
5. a . r .阶段”成红血球细胞摘出术。”gydF4y2BaHaematologicagydF4y2Ba,卷95,不。12日,第1988 - 1985页,2010年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
6. t . Papayannopoulou j . Abkowitz a D 'Andrea et al .,“erythtropoiesis生物学,红细胞分化和成熟gydF4y2Ba血液学:基本原理和实践gydF4y2Bar·霍夫曼,e . j .奔驰s . j . Shattil et al .,。,pp。276–294, Philadelphia, PA, USA, 5th edition, 2009.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
7. t·m·a . Neildez-Nguyen h . Wajcman m·c·马登et al .,“人类红细胞细胞体外产生大规模分化成红细胞gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba自然生物技术gydF4y2Ba,20卷,不。5,467 - 472年,2002页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
8. m . Tacke c . r .球,m·施密特et al。”固有的分化程序短期造血细胞重新繁衍在人类个体发生变化,“gydF4y2Ba干细胞与发展gydF4y2Ba,19卷,不。5,621 - 628年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
9. 诉Divoky z . Liu t·m·瑞恩et al .,“先天性红血球增多症小鼠模型:同源替代人类促红细胞生成素受体基因突变的小鼠基因,”gydF4y2Ba美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国gydF4y2Ba,卷98,不。3、986 - 991年,2001页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
10. f . e . Nicolini t . l . Holyoake j . d .男et al .,“独特的人类胎儿肝干细胞分化程序显示体外和体内NOD / SCID小鼠,”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷94,不。8,2686 - 2695年,1999页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
11. g .阶段r . Di Pietro诉Di Giacomo et al .,“体外大规模生产人类红细胞细胞从血液中正常的捐赠者和thalassemic病人,”gydF4y2Ba血液细胞、分子和疾病gydF4y2Ba,28卷,不。2、169 - 180年,2002页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
12. g .阶段m·桑切斯f·马塞罗说道,“人性化的培养基为临床人类成红血球细胞的扩张,“gydF4y2Ba细胞移植gydF4y2Ba,19卷,不。4、453 - 469年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
13. 朱z l . Chen高,j . et al .,“CD13的识别gydF4y2Ba^+gydF4y2BaCD36gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba作为一个共同的祖细胞红细胞和人类骨髓髓系血统,”gydF4y2Ba实验血液学gydF4y2Ba,35卷,不。7,1047 - 1055年,2007页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
14. e·d·霍金斯·m·霍梅尔·m·l·特纳et al。”使用CFSE检测淋巴细胞增殖、生存和分化时间序列数据,”gydF4y2Ba自然的协议gydF4y2Ba,卷2,不。9日,第2067 - 2057页,2007年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
15. j·b·Latouche和m . Sadelain感应人类的细胞毒性T淋巴细胞通过人工抗原呈递细胞,”gydF4y2Ba自然生物技术gydF4y2Ba,18卷,不。4、405 - 409年,2000页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
16. e·b·桑托斯·r·叶,j·李et al .,“敏感的T细胞在体内成像使用膜结合Gaussia首要的荧光素酶,”gydF4y2Ba自然医学gydF4y2Ba,15卷,不。3、338 - 344年,2009页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
17. a . r .阶段f·马特利,m . Verrucci et al .,“Gata1表达式由替代那么HS2增强脾脏救助造血衰竭引发的hypomorphic Gata1gydF4y2Ba^低gydF4y2Ba突变。”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷114,不。10日,2107 - 2120年,2009页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
18. T·p·f·盖德w••e .桑托斯et al .,“定点清除前列腺癌的基因指导人类T淋巴细胞,”gydF4y2Ba癌症研究gydF4y2Ba,卷65,不。19日,9080 - 9088年,2005页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
19. b . Ghinassi f·马特利,m . Verrucci et al .,“瀑特异性干细胞微环境的证据,”gydF4y2Ba细胞生理学杂志gydF4y2Ba,卷223,不。2、460 - 470年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
20. f .石川y齐藤,吉田,“人类造血干细胞的分化和再生性能/祖细胞在NOD-SCID / IL2rgydF4y2Ba${\mathrm{\gamma gydF4y2Ba}}^{\text{零gydF4y2Ba}}$老鼠。”gydF4y2Ba微生物学和免疫学的当前主题gydF4y2Ba卷,324年,第94 - 87页,2008年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
21. d·l·格林尼r . a . Hesselton, l·d·舒尔茨“SCID小鼠模型的人类干细胞移植,”gydF4y2Ba干细胞gydF4y2Ba,16卷,不。3、166 - 177年,1998页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
22. s t·弗雷泽,j . Isern和m . h .男爵”原始成红血球细胞的成熟和摘出术在老鼠胚胎发生伴随着细胞表面抗原表达的变化,“gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷109,不。1,第352 - 343页,2007。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
23. j . Isern s t·弗雷泽,z . et al .,“胚胎红细胞细胞发展的利基市场,”gydF4y2Ba血液细胞、分子和疾病gydF4y2Ba,44卷,不。4、207 - 208年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
24. a . Kolbus m . Blazquez-Domingo s Carotta et al .,“合作信号细胞因子受体和糖皮质激素受体在红色的祖细胞的扩张:分子表达谱的分析,“gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷102,不。9日,第3146 - 3136页,2003年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
25. t . Lapidot a Dar, o . Kollet“干细胞如何找到回家的路吗?”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷106,不。6,1901 - 1910年,2005页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
26. h·a·李·t·s Lim史et al .,“分子机械的见解内皮受体介导cytoadherence falciparum-Infected疟原虫的红细胞,”gydF4y2Ba《公共科学图书馆•综合》gydF4y2Ba》第六卷,没有。第三条ID e16929, 2011。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
27. k . l ., a . Fahey a Pizzey et al .,“细胞循环和细胞分裂的影响CD34 transendothelial迁移gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞,”gydF4y2Ba英国血液学杂志》gydF4y2Ba,卷119,不。2、500 - 509年,2002页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
28. y佐佐木、c·t·詹森和s . Karlsson”执行的表达细胞周期蛋白D2提高髓系祖细胞的增殖潜能,加速体内骨髓重建,并促进从致命的myeloablation救援的老鼠,”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷104,不。4、986 - 992年,2004页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
29. a . Mandawat w . Fiskus k·m·巴克利et al .,“Pan-histone脱乙酰酶抑制剂panobinostat耗尽趋化因子受体CXCR4水平和信号和产生协同antimyeloid活动结合趋化因子受体CXCR4拮抗剂,”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷116,不。24日,第5315 - 5306页,2010年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
30. l . k .蔡y愣,z王et al .,“心境稳定剂丙戊酸和锂提高间充质干细胞迁移通过不同的机制,”gydF4y2Ba神经精神药理学gydF4y2Ba,2010年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
31. w x Wang, t . Ishii et al .,“修正的异常交易原发性骨髓纤维化CD34gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞治疗chromatin-modifying代理。”gydF4y2Ba癌症研究gydF4y2Ba,卷69,不。19日,7612 - 7618年,2009页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
32. p . Chaurasia d Berenzon, r·霍夫曼“染色质修改代理促进人类红细胞祖细胞体外生产功能,“gydF4y2Ba血gydF4y2Ba。在出版社。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
33. e·a·煤斗,s . a . Arinsburg r·o·弗朗西斯et al。”使用小鼠模型来研究红细胞间隙的机制和后果,”gydF4y2Ba肝病杂志gydF4y2Ba,卷99,不。2、99 - 111年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
34. 林k·e·哈德逊,大肠,j·e·亨德里克森,”的监管主要通过前期接触同种抗体反应微生物t细胞表位,”gydF4y2Ba血gydF4y2Ba,卷115,不。19日,3989 - 3996年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
35. j·e·亨德里克森,n . Saakadze c . m . Cadwell et al .,“脾脏中起着重要的作用主要体液异源免疫输血mHEL红细胞,”gydF4y2Ba输血gydF4y2Ba卷,49号8,1678 - 1684年,2009页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
36. r·a·布罗斯基“Paroxismal夜间血红蛋白尿”gydF4y2Ba血液学:基本原理和实践gydF4y2Bar·霍夫曼,e . j .奔驰s . j . Shattil et al .,。,pp。385–394, Elsevier, Philadelphia, PA, USA, 5th edition, 2009.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
37. r·汉·e·m·Frett j . r . Levy et al .,”补充C基因消融gydF4y2Ba_3gydF4y2Ba变弱肌肉病理dysferlin-deficient老鼠。”gydF4y2Ba临床研究杂志gydF4y2Ba,卷120,不。12日,第4374 - 4366页,2010年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

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