人体运动神经元前体细胞移植导致内源性神经保留3的模型运动神经元的损失

文摘

运动神经元的损失是许多神经退行性疾病的特点和结果在快速肌肉不受控制,瘫痪,最终死于严重的病例。为了研究运动神经元的神经营养作用血统贪污,我们移植人类胚胎干细胞运动神经元祖细胞(hMNPs)和检查了他们的组织病理学的影响在三个动物模型的运动神经元的损失。具体来说,我们将hMNPs移植到啮齿动物模型的SMA(Δ7SMN)、肌萎缩性侧索硬化症(SOD1 G93A),和脊髓损伤(SCI)。移植细胞存活和分化在所有模型。此外,我们还发现,hMNPs分泌生理活性生长因子在活的有机体内,包括神经生长因子和NT-3显著增强幸免内生神经元的数量在所有三个动物模型。由交付汽车能够保持运动神经元死亡疾病特异性神经元神经营养支持是一个强大的治疗策略的特点是运动神经元的损失。

1。介绍

人类胚胎干细胞(为)可以分化成任何细胞类型,适合基因操作,容易自我更新在体外。定向分化为成高纯度的细胞类型可以用来定义设计有效的治疗方法,都是特定的细胞和网站。干细胞移植是一种固有的组合治疗方法,因为它不仅取代死亡或垂死的细胞,但也提供了一个内生增长的基质,这种桥梁差距,组织是输给了伤害或疾病,并提供内源性神经营养支持环境。

肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS),脊髓性肌萎缩(SMA)和脊髓损伤(SCI)都是运动神经元疾病损失可能会受益于hESC-derived细胞的移植。ALS是最常见的运动神经元病(1和可以零星或家族2- - - - - -5]。约5 - 10%的疾病的诊断有积极的家族史(1,6]。虽然零星的ALS的病因主要是未知的(5),家庭形式有很强的遗传连锁的点突变焦油dna结合蛋白43(TDP-43),付/ TLS,或者是铜/锌超氧化物岐化酶1(SOD1)基因(7]。发病的平均年龄在40到60岁之间,和发病的疾病通常是致命的1 - 5年内(1,6]。SMA也表现为运动神经元损失和婴儿死亡的主要遗传原因(8,9]。疾病体现了大约6个月的年龄在最严重的情况下(I型)、和死亡之前~ 2年来没有支持干预(9,10]。它是由缺失或突变引起的运动神经元生存(SMN1)基因9,11在大约每10000活产(9,10]。SCI涉及许多退化性流程包括但不限于运动神经元轴突和细胞损坏舱(12]。这三个神经退行性疾病的特点是进步的肌肉损失控制和在脊髓运动神经元的死亡。因为成人中枢神经系统(CNS)有自我修复的能力有限,治疗策略主要集中在改善二次细胞变性(12,13),促进内源性修复机制(14- - - - - -16],和细胞替换[12,17- - - - - -19]。

有很多证据表明,移植的干细胞和祖细胞进入中枢神经系统产生功能改进即使没有功能集成。人类神经干细胞持续分泌神经营养因子神经生长因子、脑源性神经营养因子,GDNF,促进经济增长的脊髓损伤后受伤的轴突(14,20.]。至少部分的移植后功能恢复看到hESC-derived少突细胞祖细胞向SCI模型已被归因于由移植细胞分泌的生长因子(12,20.- - - - - -22]。这些数据表明,生长因子分泌通过干细胞移植可以显著影响脊髓病变的发病机理/受伤(20.]。

我们以前记录的方法区分为高纯度的人类胚胎干细胞运动神经元祖细胞(hMNPs) [20.]。在这项研究中,我们试图探讨hMNPs是否分泌生长因子对神经元产生神经营养影响文化和三种不同模型的运动神经元的损失。我们证明hMNPs分泌生理活性生长因子在体外和在活的有机体内和显著增强内源性神经细胞移植后的数量在所有三个动物模型的运动神经元的损失。从治疗的角度来看,这些观察结果表明,细胞移植好处发病机制由生长因子分泌,除了细胞替换。

2。材料和方法

2.1。道德声明

所有动物工作依法进行了UCI机构动物保健和使用委员会(2007 - 2725)。动物收到适当的手术后的护理包括皮下盐水,预防性上边(2.5毫克/公斤/天,南卡罗来纳州。拜耳,肖尼使命,KS)和丁丙诺啡(0.025毫克/公斤/天,南卡罗来纳州。西方医疗供应,洛杉矶,CA)三天。动物被检查对减肥、脱水、不适,autophagia,根据需要适当的兽医护理。研究涉及人类参与者UCI的机构审查委员会批准的(2008 - 6467)和UCI医学中心书面知情同意。所有的工作涉及人类胚胎干细胞通过UCI的人类胚胎干细胞研究和监督委员会(2007 - 5645)。

2.2。从为其派生的hMNPs

hMNPs来自hESC行hCSC14 hCSC14-CL1(加州干细胞,Inc .,欧文,CA)在段落26-38段落和H7 15 - 17日。为扩大在基底膜基质(BD生物科学,圣何塞,CA) 1 - 3周StemBlast媒体(加州干细胞,Inc .,欧文,CA)补充20 ngbFGF /毫升(微孔、Billerica MA)。细胞被转移到超弱耦合菜(纽约康宁)和悬浮在运动神经元(MN)分化媒体,由渗透性改编DMEM: F12混合物(260 mOsm)补充Glutamax, B27补充(Gibco-Invitrogen,卡尔斯巴德,CA)、胰岛素10μg / mL,亚硒酸钠1 ng / mL,转铁蛋白10μg / mL(西格玛奥德里奇,圣路易斯,密苏里州),MgSO₄0.5毫米,bFGF 5 ng / mL(微孔、Billerica MA)。细胞暴露在这种媒体5天,补充了10μ米维甲酸(RA);从20毫米原液在DMSO, Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)。文化被喂食期间每日RA治疗,然后每2天随后16天。在21天,细胞集群被转移到附着层粘连蛋白底物(20μ克/厘米²)。在28天,条件媒体收集在体外化验,或者细胞移植的准备。子集的细胞被镀到层粘连蛋白涂4室的幻灯片(Nunc;费舍尔科学、匹兹堡、PA)采用免疫分析。

2.3。制备MN-Astrocyte Cocultures

评估成熟到一个运动神经元表型,hMNPs被镀到主要星形胶质细胞在28天,允许成熟3周之后根据以前公布的协议(20.)和加州大学的约翰•韦斯博士,欧文。简单地说,从大脑皮质星形胶质细胞的文化准备早期产后小鼠(1 - 3天)。清除皮层后,组织分离,镀的密度细胞/厘米²在媒体组成的鹰的基本介质(MEM、厄尔的盐,免费提供谷氨酰胺;血清;Gibco;大岛屿,纽约),补充10% heat-inactivated马血清(Gibco), 10%胎牛血清(Gibco)、谷氨酰胺(2毫米;Gibco)、葡萄糖(总25毫米)和表皮生长因子(最终浓度10 ng / mL)在15毫米Primaria-coated文化板块(猎鹰;新泽西富兰克林湖)。文化被保持在37°C / 5%的股份有限公司₂孵化器。在这种情况下,几乎没有神经元生存,星形胶质细胞单层膜通常成为~ 2周后汇合的。融合后,星形胶质细胞单层膜与hMNP坐在被播种密度50000细胞/厘米²。随后,媒体交换每周两次。成熟的运动神经元被应用和特点如下。

2.4。采用免疫标记

免疫细胞化学进行了使用标准协议,如前面描述的(20.]。以下蛋白质进行评估:anti-TUJ1 (1: 1000), anti-HB9 (1: 100;MNR2 Ab DSHB发育研究杂种细胞银行),anti-Islet1 (1: 200), anti-GFAP (1: 500) anti-SMI32(1: 1000),和anti-ChAT (1: 100;微孔在一夜之间4°C)。主要抗体应用是紧随其后的是荧光二次抗体应用程序(alexafluor - 488或-594共轭;表达载体,卡尔斯巴德,CA)。

2.5。初级皮层文化

混合初级皮层文化从产后第一天准备Sprague-Dawley老鼠的神经突结果有无hMNP-conditioned媒体(CM)或MN分化媒体(没有空调)如前所述罗西et al。20.]。短暂,皮质机械分离,使胰蛋白酶化,旋转在1500 g 5分钟。颗粒在Neurobasal resuspended媒体(表达载体,卡尔斯巴德,CA)。40000个细胞被镀到poly-L-lysine涂布室幻灯片神经突产物(23]。播种后,室幻灯片是美联储在未来2天Neurobasal媒体补充10 ng / mL FGF直到神经元附件。

2.6。在体外生长因子分泌试验

确定hMNP-conditioned媒体曾对神经突神经营养作用产物,MN分化媒体条件48小时的hMNPs表示皮质神经元和删除。初级皮层神经元喂养与MN分化媒体或hMNP-CM稀释1:1 MN分化媒体(/组)。MN分化培养基(没有空调)包括渗透性改编DMEM: F12混合物(260 mOsm)补充Glutamax, B27补充(Gibco-Invitrogen,卡尔斯巴德,CA)、胰岛素10毫克/毫升,亚硒酸钠1 ng / mL,转铁蛋白10毫克/毫升(西格玛奥德里奇,圣路易斯,密苏里州),MgSO₄0.5毫米和bFGF 5 ng / ml(微孔、Billerica MA) (20.]。

2.7。hMNPs ALS模型的移植

的SOD1 G93A突变小鼠和培育提供ALS-TDI GTC Biotherapeutics。免疫抑制是启动过程和由前48小时的混合吸收FK506 /雷帕霉素,1毫克/公斤。椎板切除术是在腰椎L2水平在两个椎体在60天。用于移植,32 G汉密尔顿针30°凸凹变化。总共40000 hMNPs CTS(车辆)脊柱内的注入。每个注射总量的1μ剂量的10000细胞/ LμL /注入。动物存活110天。

老鼠被分为两组治疗(与hMNPs移植;)和车辆控制(vehicle-injected;)组织进行评估,最后阶段的蛋白表达和组织学评价供者细胞表型。此外,1组的动物(由15老鼠hMNP治疗和车辆控制SOD1 G93A老鼠)分析了组织学量化和1组动物的分子分析进行了分析(由10老鼠hMNP治疗和车辆控制SOD1 G93A老鼠)。

SMA模型。在产后第一天,Smn^−−/;SMNΔ7^{+ / +};SMN2^{+ / +}(以下称为Δ7SMN)幼崽cryoanesthetized,执行和椎板切除术在木材上地区。glass-pulled提示附加到汉密尔顿注射器是获得立体定向仪,20000 hMNPs(10000细胞/ uL)或体积相当于汽车将双边移植到脊髓(24]。老鼠分为治疗(与hMNPs移植;)和车辆控制(vehicle-injected;)组织进行评估的结束阶段进行组织学分析。动物幸存移植后14天。

SCI模型。成年人,女性Sprague-Dawley老鼠(查尔斯河实验室,圣地亚哥,CA)使用氯胺酮麻醉(100毫克/公斤)和甲苯噻嗪(10毫克/公斤,i.p。:西方医疗供应,洛杉矶,CA)和接受了T3椎板切除术。200 kD双边挫伤受伤是使用无限视野撞击器(精密系统和仪器,肯塔基州的列克星敦)。动物收到5毫升溶液枪手,即0.02 mL上边,和0.4毫升稀释丁丙诺啡postinjury皮下注射2天。动物膀胱也表示对至少3天,一天两次,然后根据需要。24小时在移植之前,动物开始每日免疫抑制与环孢霉素(20毫克/公斤/天,南卡罗来纳州。贝德福德实验室、贝德福德,哦)。上边的动物也接受了抗生素治疗(0.02毫升)开始一天前在术后移植和持续。脊髓损伤后七天,动物收到hMNPs的移植;椎板切除术的reexposure网站后,脊髓T2是固定化的过程,和10μL汉密尔顿注射器(汉密尔顿,雷诺,NV) 33 G斜针被放入了脊髓使用立体定向机械臂。总共100000 hMNPs CTS(车辆)注入共有四个网站,2双边注射颅和尾的损伤部位(侧0.5毫米,1.2毫米深)目标腹侧角。每个注入由总量的1μ剂量的25000细胞/ LμL (20.]。

老鼠被分为两组治疗(与hMNPs移植;)和车辆控制(vehicle-injected;)组织进行评估,最后阶段的蛋白表达和组织学评价供者细胞表型。此外,动物被分为2组;第一组是老鼠(由20 hMNP-treated和车辆控制SCI老鼠)组织学量化分析和分子分析第二组动物进行了分析(组成的老鼠hMNP-treated和车辆控制SCI老鼠)。动物被移植后存活3个月。

2.8。免疫组织化学分析hMNPs

动物通过transcardiac牺牲和4%多聚甲醛灌注。组织低温贮藏在27%蔗糖,声带被分为10月1毫米块和嵌入化合物。组织是cryosectioned 20μm和安装到gelatin-coated幻灯片。组织部分被封锁有10%是因为在PBS和permeabilized Triton x - 100年的0.1%。确定移植hMNPs的命运,部分处理了多个标记。主要抗体Ku80一夜之间被添加在4°C (1: 300;Abcam), Islet-1 (1: 200;Abcam),生物素化的NeuN (1: 200;微孔),我(1:200年,圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯,CA),和聊天(1:100;微孔)。驴antirabbit共轭与生物素(1:250;英杰公司)、链霉亲和素594 (1:250; Invitrogen), Streptavidin 488 (1 : 250; Invitrogen), or goat antirabbit Alexa Fluor-488/-594 (1 : 250; Invitrogen) was used for 2 hours at room temperature as secondary antibodies.

2.9。神经元的分析

的脊髓神经保留的所有三个动物模型进行了分析。每十张幻灯片,间隔200μ分开,是为了处理可视化脊髓的长度(20.]。包含IHC染色进行组织幻灯片使用鼠标anti-NeuN (1: 200;微孔)主要抗体识别神经元和兔子anti-Ku80 (1: 300;Abcam)主要抗体识别人类细胞核。串行部分是与人类的核抗原标记,确保没有包含在分析人类细胞。运动神经元的分析、鼠标anti-ChAT (1: 100;微孔)主要抗体和兔anti-Ku80 (1: 300;Abcam)主要抗体。抗体在PBS稀释,孵化一夜之间在4°C。向量ABC生物素装备和Vectastain民建联基质包被用于二次检测。 Hoechst was used as a nuclear counterstain. Following IHC staining, the tissue was imaged using an Olympus AX-80 microscope. Images were taken of transverse sections of the ventral horns using MicroFire software. NeuN-positive neurons were quantified up to 2 mm cranial and 2 mm caudal to the injury epicenter or transplant site. The number of neurons was quantified using ImageJ software. Each image was opened individually and changed to an 8-bit image. Each image was then inverted, then the brightness and contrast was adjusted to the Auto setting, which made the gray areas darker and neurons were more easily visible. Then, threshold was adjusted from Default to MaxEntropy setting. Finally, the Nucleus Counter plug-in was used to detect pixels, the smallest particle size set to 400 and largest particle size set to 2000. Background subtraction and watershed filter were used in the plug-in. The plug-in then showed the black and white image of the neurons with a number indicating that it was counted and a summary table of the total counts. If a cell double stained positive for both NeuN and Ku80, then that cell was not used in quantification. Statistical analysis was performed using a Student’st以及(2跟踪分布和两个样本方差相等)。

2.10。ELISA

分析了脊髓移植使用ELISA对生长因子的表达。新鲜的中心块是flash冷冻然后均质。在冰冷的样本均质T-Per蛋白质提取试剂(皮尔斯生物技术,罗克福德,IL)。样本保存在−20°C到分析BCA蛋白质分析。一式三份上层清液样本用于确定总蛋白质含量呈现在组织内用BCA蛋白质分析工具包(皮尔斯,罗克福德,IL)。光学密度被读THERMOmax罗v1.72板读者在450 nm,和各自的蛋白质水平量化相比,牛血清白蛋白(BSA)标准曲线。被使用的ELISA试剂盒NT-3 Emax免疫分析系统(Promega),神经生长因子Emax免疫分析系统(Promega), VEGF人类酶联免疫试剂盒(表达载体),请AccuBind酶联免疫试剂盒(MonoBind, Inc .)。

3所示。结果

3.1。在体外分化

在28天,天的移植,93±2.3%的细胞表达神经元轴突TUJ1标志(图1(一)),96±1.7%的细胞表达了运动神经元标记Islet-1(图1 (b)),97±2.6%的细胞表达了运动神经元标记HB9(数字1 (c)和1 (d))。不到1%的细胞GFAP表达了星形胶质细胞标志(图1(一)),没有细胞表达了成熟的运动神经元标记在28天聊天。没有Oct4积极的干细胞可以被识别或之后的28天的差异化协议。

评估的成熟在体外,hMNPs镀在星形胶质细胞和成熟允许后续3周后28天的差异化协议(数字1 (e)和1 (f))。星形胶质细胞不应用运动神经元标记SMI-32(图1 (e)(图)和聊天1 (f)),但被宏彻染色明显。量化的星形胶质细胞阳性细胞不能执行。神经丝标记SMI-32(图1 (e)97.7±1.53%)表达的细胞和96.6±4.4%的细胞表达了成熟的运动神经元标记(图聊天1 (f));虽然HB9表达显著下降(;6±4.4%)28天分化概要文件。运动神经元成熟进一步证明了kainate-stimulated吸收有限公司^{2 +}钙离子的^{2 +}透水AMPA渠道(没有显示)。

3.2。体内分化

人类核(Ku80)抗原阳性细胞移植动物中发现的所有3从移植动物模型,没有迁移网站颅和尾注射部位(图(2))。人类细胞(图2(一个)和2 (c))双重染色年轻运动神经元标记Islet-1(图2 (b)),观察腹侧角hMNP治疗而不是车辆控制Δ7SMN动物。Δ7SMN动物,人类核抗原阳性细胞没有双标签和标记成熟的运动神经元标记或SMI-32聊天,表明他们的有限的时间在活的有机体内(13天)的分化移植hMNPs不足。然而,人类细胞被发现在SOD1 G93A和SCI动物,动物存活2和3个月,移植后分别。人类细胞与神经元和运动神经元标记如colabeled NeuN(图2 (d)),我(图2 (e)(图)和聊天2 (f)),符合运动神经元血统混杂的成熟状态。许多人类核抗原阳性细胞扩展TUJ1-positive流程。TUJ1组织染色没有no-primary和无二次抗体控制。移植细胞没有轴突延伸到周边或神经肌肉接头形式和宿主组织,如预期。

3.3。在体外生长因子分泌

罗西et al (20.)曾表明hMNP各种生长因子的分泌。探讨神经营养hMNP分泌物的潜力,我们执行功能的hMNP分泌物化验皮质神经元在体外(图3)。神经突的长度皮质神经元文化接触hMNP-conditioned媒体(图3(一个))相比,神经突的长度皮质神经元文化接触控制MN分化媒体只(无空调)(图3 (b))和被发现显著更大(;(图3 (c))。神经突的长度皮质神经元文化接触hMNP-conditioned媒体是250μm±27μm,神经突的长度皮质神经元文化接触锰分化媒体只有151μm±32μm。

3.4。体内生长因子分泌

NT-3生长因子的存在神经生长因子,VEGF,请,在动物的脊髓是评估蛋白质提取物通过ELISA(图4)。神经生长因子蛋白的水平明显更大()在hMNP-transplanted动物(76.3±3.0 pg / mL)与车辆控制动物(68.1±2.0 pg / mL;图4(a))。同样,NT-3蛋白质的水平明显更大()在hMNP-transplanted动物(66.5±7.2 pg / mL)与车辆控制动物(50.5±3.1 pg / mL;图4 (b))。没有显著差异(车辆之间的VEGF水平控制(387.8±13.3 pg / mL)和hMNP移植动物(382.9±13.9 pg / mL;图4 (c))。有趣的是,请水平显著更大((98.0±4.5)在车辆控制动物μg / mL),相比hMNP-transplanted动物(79.3±3.4μg / mL;图4 (d))。

3.5。神经保留

hMNP治疗组神经元的平均数量和车辆的对照组3动物内源性神经保留(图评估5)。在SCI和SOD1 G93A hMNP-treated动物脑损伤/注塑中心,有38±3 43±5内生神经元数,分别。车辆控制的平均数量的神经元群SCI和SOD1 G93A动物脑损伤/注射震中29±2和27±3,分别。颅骨损伤/注塑中心,hMNP-treated组显示神经元的一个重要保留车辆相比对照组在SCI(图5(一个);(图)和SOD1 G93A动物5 (c);)。hMNP-treated神经元群的平均数量SCI动物尾损伤/注射震中36±4。神经元的平均数量在SCI的车辆对照组动物尾损伤/注射震中37±3。hMNP-treated组未显示统计学意义在保留神经科学或SOD1 G93A动物尾损伤/注入震中。因此,尾损伤/注射中心、神经保留不受hMNPs的移植,而hMNP移植(图5 (e))做备用神经元颅骨损伤/注射和车辆控制中心没有(图5 (f))。

神经元的平均数量在Δ7SMN hMNP治疗组动物颅注射震中304±30。在对照组,平均数量的神经元颅注入震中304±46。颅注入震中,hMNP-treated集团并没有说明一个重要保留的神经元相比对照组(图5 (d))。神经元的平均数量在Δ7SMN hMNP-treated组动物尾注射中心是386±18。然而,车辆的平均数量的神经元对照组尾注入震中282±29。尾注震中,hMNP-treated组显示统计学意义在神经保留(图5 (d);)。因此,颅注入震中,神经保留不受hMNPs的移植,而hMNP神经元移植做备用尾注入震中。

3.6。运动神经元的

聊天阳性细胞的平均数量hMNP和车辆控制治疗组比较,检查是否保留神经可能包括内生运动神经元(图5 (b))。ChAT-positive细胞的平均数量在腹侧角SCI动物hMNP-transplanted集团的颅骨损伤/注入震中12±2。聊天阳性细胞的平均数量在SCI动物腹侧角内的车辆对照组颅骨损伤/注入震中7±2。ChATpositive细胞的数量颅骨损伤/注射震中hMNP治疗组也显著大于()比对照组,证明hMNP移植导致内源性运动神经元的特定抽出。没有显著差异聊天阳性细胞数量的尾损伤/注塑中心,尽管保留有增加的趋势。ChAT-positive细胞的数量尾损伤/注射震中hMNP治疗组13岁±2。ChAT-positive细胞的数量尾损伤/注射中心车辆对照组9±2。

4所示。讨论

移植是一种固有的组合治疗方法,因为它可以提供内源性神经营养支持环境,和细胞phenotype-related好处,如更换已死或将死细胞,内生增长的衬底,或组织内生增长的桥梁。神经营养支持和表型的相对贡献裨益移植是困难的或不可能辨别由混合血统的移植。在这项研究中,我们研究了高纯运动神经元的神经营养作用血统移植三个动物模型的运动神经元的损失。我们证明hMNPs分泌生理活性生长因子在体外和在活的有机体内并使内生的数量显著增强神经元移植后三种动物模型的运动神经元损失。由交付汽车能够保持运动神经元死亡疾病特异性神经元神经营养支持是一个强大的治疗策略的特点是运动神经元的损失。

运动神经元的反应神经营养线索和表达和分泌多种生长因子(25]。我们的数据表明,hMNPs分泌NT-3,神经生长因子,和我们之前发表进一步表明他们分泌VEGF,请20.]。NT-3和VEGF知道有益影响中枢神经系统病理(16,26]。此外,我们在体外数据表明,hMNP-conditioned媒体增强的伸长和分支神经突的皮质,证明hMNPs的生长因子分泌生理有关。

我们移植的研究进一步证实hMNPs有生理相关神经营养影响附近的移植。hMNP移植到SMA、肌萎缩性侧索硬化症和SCI动物模型对损伤发病机制导致有益的影响,证明了更多的幸免内生神经元在所有三个动物模型。尽管hMNPs生长因子分泌在活的有机体内一直参与神经元生存(16,26),其根本的原因与内生的交互环境是未知的。的作用机制可能是直接或间接、营养支持的神经胶质细胞和/或免疫或胶质的调制响应可能是导致内源性神经细胞的生存。区域内神经元病理移植我生成受体(p75NTR)和表达下调tyrosine-related激酶受体(TrkRs) [16,26]。p75NTR结合神经营养因子的前体形式和参与细胞凋亡,而TrkRs结合成熟的形式的神经营养因子和有益涉及神经营养作用[16,26]。hMNP-secreted生长因子可以预防、抑制或消除神经营养行动p75NTR和/或增强激活和/或upregulation TrkRs,提高下游神经营养作用。

本研究直接评估潜在的细胞治疗带来神经营养有利于地区的发病机理缺乏表型的好处。hMNP移植不扩展过程reinnervate遥远的肌肉,所以他们患病或受伤的脊髓神经营养好处可以孤立地研究表型裨益的移植。这些发现进一步了解神经营养hMNP移植的好处。尽管如此,努力成熟移植hMNPs,提高轴突投射到目标肌肉是很重要的这一细胞群的好处最大化。

确认

这项工作是支持的资助从脊髓性肌肉萎缩症的家庭和个人捐款Reeve-Irvine研究中心。此外,作者展示他们感谢加州大学的约翰•韦斯博士,欧文提供的方法星形胶质细胞coculture和成熟化验。汉斯·s . Keirstead是加州科学顾问委员会的主席干细胞,Gabriel Nistor Inc .是加州干细胞的科学顾问委员会有限公司

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