研究文章| Sumanta Chatterjee, Pratima Basak Prosun Das, Madhurima Das, Jacintha医生佩雷拉,Ranjan Kumar Dutta马来Chaklader, Samaresh乔杜里,苏律法原始本来就积极的骨髓造血干细胞在再生障碍性贫血小鼠模型:通过Flowcytometric比较研究分析和扫描电子显微镜
文摘
自我更新的造血干细胞(hsc)负责所有血细胞血统的调整。本来是“干细胞抗原标记用于识别原始鼠HSC人口的表达,减少在分化成熟的细胞类型。 多能干细胞自我更新的肝星状细胞是负责补充所有血细胞血统的整个生命周期(<一个href="#B1">1一个>,<一个href="#B2">2一个>]。虽然代表只有1 000年10骨髓细胞,成熟的方法开发了孤立肝星状细胞纯度高、允许有意义的候选人干细胞的体外研究。单独使用多功能鼠标肝星状细胞是包含在 造血归纳一些血液恶性肿瘤微环境失去控制可能维持肝星状细胞的自我更新和分化稳态平衡导致发育不全的或增生性骨髓衰竭。慢性骨髓发育不全的失败或再生障碍性贫血是一个这样的疾病,其特征是一个空的骨髓,嗜中性白血球减少症,骨髓的急剧下降产生健康的成熟血细胞的能力(<一个href="#B18">18一个>,<一个href="#B19">19一个>]。这种疾病是由埃利希第一次描述了19世纪的末尾(<一个href="#B20">20.一个>),一直被视为涉及原始干细胞缺乏或更多目前被认为无组织的干细胞利基(<一个href="#B21">21一个>- - - - - -<一个href="#B24">24一个>]。在大多数情况下,再生障碍性贫血,骨髓衰竭被认为导致免疫介导的破坏原始造血干细胞和祖细胞(<一个href="#B25">25一个>,<一个href="#B26">26一个>]。也有间接的证据表明过早在骨髓造血细胞凋亡间的高速率导致退行性骨髓发育不全(<一个href="#B27">27一个>- - - - - -<一个href="#B30">30.一个>]。虽然报告存在有关干细胞在再生障碍性贫血失调,特定的原始HSC的参与和HSC利基的证据仍然是模糊的。
本研究的目的是对评估原始的命运/凋亡 天生的瑞士白化病老鼠,三十多(15每个正常的控制和实验组动物)被安置在过滤器笼子和随意浇水。20周大鼠体重大约18 - 20 gm,收到20毫克/公斤白消安和80毫克/公斤环磷酰胺腹腔第0天、28日。控制了相当数量的盐(<一个href="#B32">32一个>]。
12周后注射第二白消安和环磷酰胺,大约300 第二次注射后八十四天为再生障碍性贫血的发展,动物牺牲隔离长骨头(股骨、胫骨、腓骨)。骨髓被冲洗从上述骨头RPMI 1640媒体通过注射器和细胞混合和重复吸量。从整个骨髓干细胞分离通过percoll人口密度梯度密度(1.050的接口<一个href="#B33">33一个>,<一个href="#B34">34一个>]。细胞因此准备洗在PBS最后转移到non-FBS RPMI 1640媒体和细胞计数分布的实验组动物的细胞。
(一)分析膜结合本来,BM-HSCs ( (b)分析细胞凋亡,BM-HSCs ( 细胞内的caspase-3活动BM-HSC被caspase-3评估比色测定工具包(美国Clonetech)。约 骨髓的正常和实验再生障碍性组动物被全新彩色染色观察骨髓架构的特定形态变化有关的疾病在光学显微镜(400 x放大)。
一小部分的完整的骨髓组织包含总利基浸渍慢慢以生理的方式在不损害内细胞团和保存在2.8%戊二醛固定过夜。干燥的组织,它是不断通过30%,50%,70%,100%梯度酒精最后临界点干燥。涂料用金之后(Au)在IB-2离子,涂布机样品经过扫描电子显微镜检查使用s - 5330日立SEM和结果记录。
统计分析的结果是使用学生的执行<我>t我>以及不同数据的均值的标准差。所有结果评估统计通过应用SPSS-PC包(9.0版本,SPSS,芝加哥,美国)。的概率 为了确定疾病的临床地位而言,血像的外周血血红蛋白、网织红细胞,白细胞,polymorpho核中性粒细胞和血小板测定标准的实验室技术。结果(表<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/614395/tab1/" target="_blank">1一个>)表现出抑郁与均匀微粒计数减少、血红蛋白水平的网织红细胞计数明显低( (a) Sca1受体表达的表型鉴定BM-HSCs表示高度表达下调1。介绍
2。材料和方法
2.1。动物
2.2。外周血
2.3。隔离BM-HSC
2.4。流式细胞仪(FCM)分析
2.5。测定Caspase-3活动
2.6。骨髓涂片的研究
2.7。样品制备和扫描电子显微镜(SEM)
2.8。统计分析
3所示。结果
3.1。外周血血图
参数
正常对照组(的意思<米一个th我d="M24" xmlns="http://www.w3.org/1998/Math/MathML">
再生障碍性贫血组(的意思<米一个th我d="M25" xmlns="http://www.w3.org/1998/Math/MathML">
血红蛋白(g / dL)
白细胞(x 10
加拿大皇家银行(x 10
血小板(x 10
网织红细胞(%)
中性粒细胞(%)
3.2。Flowcytometric分析
(一)
(b)
(c)

(一)
(b)
(c)