文摘
间质肿瘤的光谱与重组相关的EWSR1近年来基因增长由于分子检测技术的进展。最初的基因参与尤因肉瘤的发病机制,EWSR1现在已知的基因重新安排在不同临床和组织病理学的实体。的NFATC2基因的许多易位伙伴之一EWSR1基因融合的典型形态,虽然罕见,子群间质肿瘤。对含有肿瘤的临床特点NFATC2基因重组,因为大多数的几个报告发表描述分子而不是临床方面。在最近的研究中,我们报告三个肿瘤患者携带EWSR1-NFATC2基因易位,包括一个罕见的软组织的主要肿瘤。另一个独特的良性的骨肿瘤患者FUS-NFATC2基因易位。在不同的间质肿瘤(如黏液样/圆细胞脂肪肉瘤,低级fibromyxoid肉瘤,或angiomatoid纤维组织细胞瘤),付家基因,作为春节家族的一员,可能另外重新安排的EWSR1基因没有明显影响显微镜外观或临床结果。这一事实似乎并不适用于间质肿瘤的介入NFATC2基因,因为根据我们的经验和广泛的文献回顾,他们有不同的形态和分子水平上的属性。这两个ESWSR1-NFATC2和FUS-NFATC2fusion-carrying肿瘤不显示显微镜或尤因肉瘤的临床特征。
1。介绍
目前的分类(1]包含分子改变子类型化的间叶细胞软组织肿瘤,和特定基因改变的检测是一种重要的补充标准病理诊断(2,3]。的EWSR1是第一个基因识别与间质肿瘤的发病机制在90年代早期(4]。最初与尤因肉瘤的发病机制(ES),这个基因是现在已知的各间充质发挥致病作用,甚至一些上皮肿瘤(5- - - - - -8]。EWSR1融合与ETS转录因子的基因家族(9- - - - - -11)导致的发展,高度侵略性的、未分化的,圆细胞肿瘤。相比之下,重组EWSR1与其他合作伙伴在形态学和临床的实体,从高度侵略性(透明细胞肉瘤(CCS)和一轮cell-containing黏液样脂肪肉瘤(RMLPS))更少侵略性肿瘤(纯黏液样脂肪肉瘤(mlp)或extraskeletal黏液样软骨肉瘤(EMC)) (7,8]。一些未分化,没有经典的圆细胞肿瘤EWSR1融合基因的ETS家族指定尤因sarcoma-like肿瘤(以色列)12- - - - - -15]。可再生的融合CIC-DUX4(16),BCOR-CCNB3(17)已确定的子集EWSR1无关的以色列。临床病程和治疗反应似乎在这样不同肿瘤相比,典型的ES。例如,CIC-DUX4肉瘤是非常激进的,不应对ES化疗(18),而BCOR-CCNB3肉瘤遵循更懒惰的课程(19]。
罕见的间质肿瘤携带EWSR1-NFATC2融合已经分配给以色列,大概是因为部分CD99表达式和/或参与的EWSR1(20.- - - - - -23]。然而,最近的研究表明,不仅组织学特性,而且这种肿瘤的分子资料不同于ESs (24- - - - - -26]。对间质肿瘤的恶性潜能的重组NFATC2,因为即使在分子水平上,研究报道,临床课程的更详细的信息是只有很少的病人12,13,20.,22- - - - - -24,26- - - - - -30.]。的组织学外观EWSR1-NFATC2fusion-associated肿瘤非常重现但immunoprofile显示微观非均质性和变异性,不给一个特殊的模式。没有严格的相关性EWSR1-NFATC2融合当前形态定义的实体肿瘤。这些肿瘤已确定在以色列的例子:“肌上皮肿瘤,”myoepithelioma-like美家的骨头,或积极的成骨细胞瘤(表1)。的EWSR1鱼结果与着丝粒的放大信号可以作为一个重要的诊断线索。
几间质肿瘤(例如,ES, mlp、或AFH)可能包含融合,在其中付家或者重新排列而不是吗EWSR1。在这种情况下,在形态或临床行为之间没有明显的差异EWSR1- - -付家重新安排变体。几例FUS-NFATC2fusion-associated无差别的以色列已报告在最近的两项研究[26,33只有有限的临床病理的信息。的分子概要文件EWSR1-NFATC2和FUS-NFATC2不过,截然不同(26]。
在当前的研究中,我们将描述三个病人EWSR1-NFATC2fusion-associated肿瘤。最初的组织学诊断是硬化性上皮状的纤维肉瘤(海基会),肌上皮肿瘤,EMC-like肿瘤。我们提供详细的病理、免疫组织化学、分子和临床信息作为更好的描述这个分子的基础范畴,强调他们的区别ESs和以色列。额外的特殊情况的临床懒惰和显微镜下温和的骨肿瘤模仿动脉瘤性骨囊肿(ABC)包含FUS-NFATC2融合。EWSR1-NFATC2 -和FUS-NFATC2 -肿瘤相关的上下文中讨论了出版的文献。
2。材料和方法
情况下的可检测重组NFATC2从文件中检索的病理学研究所,瑞士苏黎世大学医院。两个年长的情况下(例1和2)显示提示和显微镜的模式EWSR1鱼发现回顾性研究了门店,而其他两种情况是电流和门店中研究了常规的诊断检查。临床和随访数据获得临床数据库涉及的机构。这项研究是通过机构审查委员会(市区的伦理委员会;KEK_ZH_2013_0430)。
2.1。组织学和免疫组织化学
肿瘤组织样本在缓冲4%福尔马林固定,石蜡嵌入式,彩色根据标准程序。免疫组织化学(包含IHC)使用广谱细胞角蛋白(AE1 / AE3、Dako巴尔,瑞士),CD99 (12 e7, Abcam有限公司,剑桥,英国),EMA (E29、Dako AG)、巴尔、瑞士),和MIB1(瑞士巴塞尔30-9、Ventana罗氏)抗体进行,使用Ventana基准XT自动化系统(Ventana医疗系统,图森,亚利桑那州)。
2.2。荧光原位杂交(FISH)
鱼的研究进行formalin-fixed,石蜡包埋,2μ米厚的部分。既分解鱼检测易位涉及EWSR1和付家基因(来自Vysis、雅培AG)、巴尔、瑞士)NR4A3基因(ZytoVision GmbH是一家现代化、不来梅港、德国)都使用商用探针。荧光染色是可视化的奥林巴斯BX61-microscope(奥林巴斯、Volketswil、瑞士)配备DAPI, SpectrumGreen, SpectrumOrange过滤器。获得图像CCD相机和处理分析软件(软想象系统,德国明斯特)。至少50不重叠的核进行分析。如果样品含有至少25%分红色和绿色信号(由至少两次分离的距离被单个探测器),肿瘤被认为是重新安排。
2.3。下一代测序(门店)
高通量分析如前所述[34]。短暂,RNA提取使用麦克斯韦16列弗RNA FFPE净化设备(Promega公司)。图书馆是准备使用Anchored-Multiplex-PCR商用阿切尔FusionPlex肉瘤面板(ArcherDx博尔德公司)。RNA输入250 ng,并使用随机引物互补脱氧核糖核酸合成。图书馆是量化使用qPCR (KAPA生物系统公司、南旧金山、钙、美国)。样本测序MiSeq平台(Illumina公司、圣地亚哥、钙、美国)。结果FASTQ文件进行了分析使用标准的RNA-fusion套件5.1.3阿切尔工作流实现的分析。
3所示。结果
总结了四个病人的临床特征表2。
3.1。组织病理学和免疫组织化学
3.1.1。案例1
从大型intraosseous和extraosseous核心活检,cortex-based肿瘤右股骨骨干的一个34岁的女人(图1)显示部分坏死,细胞增殖的单型的,小的,蓝色的,和圆的细胞群,它是嵌入在一个僵化的基质,导致显著的小梁的外观。没有证据表明典型的类骨质或矿化。immunophenotype非特异性(S100 CK−−, Des−和CD45−);然而分散CD99表达式被发现。一个不寻常的重排模式与一个放大和分裂红色信号被发现的EWSR1鱼,11年前在诊断的时候没有以前被认为是难以解释和描述不同寻常的ES。rt - pcr的EWSR1-FLI1和EWSR1-ERG融合是负面的。虽然很大程度上是排斥的诊断,但微观研究结果被认为是符合硬化性上皮样的纤维肉瘤(海基会)。MUC4疣状没有当时的诊断和消极的回顾。没有进一步发现肿瘤表现阶段。临床决定治疗术前化疗患者根据EURAMOS协议(35]。后续完成肿瘤切除并没有发现化疗所致坏死。4.5年在最初的演讲之后,一个1厘米的皮肤转移身体的同侧的大腿完全切除和显示相同的显微镜模式为主。病人定期跟踪,和10.5年后第一个演讲,一个孤独的7毫米肺转移切除。目前后续(11年),病人是没有已知的肿瘤表现不错。门店进行回顾性分析在皮肤上转移了EWSR1-NFATC2基因融合。
3.1.2。案例2
由于困难的组织学解释和广泛坏死,两个核心活检是外部机构,其次是intraosseous的刮除术和extraosseous过程的42岁男子骨髓炎的临床怀疑左胫骨(图2)。肿瘤细胞小而不显眼的,分组在坚实的巢穴和小梁,嵌入collagen-rich矩阵。细胞质是清楚明显的边界。几乎没有有丝分裂和增殖指数较低。immunophenotype透露扩散,弱的细胞角蛋白的表达,焦CD99积极性,coexpression EMA, CD10, CD117。Immunolabeling S100、SMA、肌间线蛋白p63 CD34、CD45是负面的。核表达INI1保留。EWSR1鱼显示放大的重排模式分裂红色信号。rt - pcr的EWSR1-FLI1和EWSR1-ERG融合是负的。基于显微镜图像,细胞角蛋白表达和增殖率低,一个主要的诊断轻度肌上皮癌呈现。没有发现肿瘤进一步表现分期。局部完整切除与重建。持续的手术并发症导致截肢7年后。他没有给出辅助治疗。无论是本地还是全身肿瘤表现完全被发现的随访8.5年。回顾门店的刮除术示例揭示了EWSR1-NFATC2融合。
3.1.3。案例3
腹腔内的核心活检上腹质量在一个60岁的女人(图3)显示肿瘤间质丰富的细胞外基质,小梁的单型的网络细胞组成。免疫组织化学标记要点以及S100 -, HMB45, SMA,肌间线蛋白,synaptophysin STAT6, MUC4。核表达INI1留存。罕见的细胞表达细胞角蛋白和教育津贴。观察扩散弱CD99表达式。鉴别诊断包括EMC和肌上皮肿瘤。两个类别可能显示的重排EWSR1、鱼进行了揭示重排与低级红色信号的放大。NR4A3鱼正常显示模式,不包括EMC的诊断。总会在切除标本的分析揭示了EWSR1-NFATC2融合。没有给出任何辅助治疗,没有进一步的肿瘤表现在分期中被发现。
3.1.4。例4
核心活检metaphyseal右肱骨的质量的一个12岁的男孩(图4)显示一个intramedullar乏味的梭形细胞增殖与焦siderin口供和一些osteoclast-type巨细胞。没有观察到坏死或有丝分裂活动。没有类骨质或软骨生产。鉴于动脉瘤性骨囊肿的影像学鉴别诊断(ABC),USP6鱼是不确定的。门店,最初对核心活检和重复执行独立后续性刮宫,显示相同的FUS-NFATC2融合两个标本。付家捷的鱼进行验证显示古典分解模式没有放大。lesional组织显示非常低的增殖活动MIB1染色(< 5%)。扩散的表达EMA和CD99看到,SMA的反应,肌间线蛋白,S100, CD34, synaptophysin仍为负。肿瘤刮除术不包含高档。在8个月随访,没有证据表明复发肿瘤的MRI的控制。
3.2。荧光原位杂交(FISH) /下一代测序(门店)
在1、2、3,分开调查的EWSR1基因(数据1(j),2(j)3(f))显示一个不寻常的模式分解探针有1至3个融合信号和几个分组和放大红色信号。这种模式诊断基因重排,然而,表明内打破染色体22 q与额外的畸变。EMC的鉴别诊断以来被认为是在案例3中,第二个NR4A3鱼(图执行,负面的反应3(e))。在所有三个案例1、2和3EWSR1-NFATC2融合了门店。
例4中的鉴别诊断的溶骨的人物4(一)和4(b))、巨细胞包含组织学上平淡无奇的扩散(数字4(c) -4干骨后端(f))的一个年轻的病人包括ABC。USP6鱼是不确定的,这意味着缺乏的重排。一个FUS-NFATC2基因融合检测独立门店执行和metachronically核心活检和刮除术标本。这个结果验证了付家鱼,显示古典分解模式,融合和分裂信号在两个样本(图4(e))。
3.3。后续
所有4名患者目前还活着,没有肿瘤的表现。患者1大腿皮肤转移涉及开发,四年半后首次诊断和小肺转移六年后。两个病灶完全切除没有额外的治疗。病人2了几个当地的手术并发症,导致的小腿截肢后7.5年最初的诊断。在诊断后8.5年,病人是免费的没有辅助治疗肿瘤的8.5年。3和4的8个月随访患者仍然相当短,得出最后结论;然而,肿瘤的病人都是免费的。
4所示。回顾文献发表
4.1。EWSR1-NFATC2
回顾文献发表在PubMed数据库显示8篇论文至少最小临床肿瘤患者15日携带信息EWSR1-NFATC2融合(12,13,22,26- - - - - -30.)(表1)。十四更多情况下缺乏临床信息中提到的三个进一步的研究特别注重ES和以色列的分子分析20.,23,24]。与临床资料的情况下,有一个引人注目的男性优势14男性和4女性。17岁的患者足够的数据,只有三个18岁以下;最古老最年轻的病人报告12岁和61.5岁(平均30岁,平均年龄31.5岁)。只有三例软组织中描述(两个在小腿和一个腹腔),而其余发生在长骨头(8股骨,3肱骨,2胫骨,腓骨1;一个肿瘤“下肢”)。后续数据可供9例(包括当前研究的3例)与所有报告为活着,与随访8个月~ 11年(平均52个月)。第十个病人,据报道是谁活着,患肿瘤,没有指定随访期间。转移已发现只有两个病人(肺和骨转移)和其他皮肤和肺转移和局部复发3例。处理的数据是更加稀缺:六名病人接受化疗(包括ES协议4个病人,一个用于错误诊断淋巴瘤,和一个EURAMOS)接受手术治疗。
4.2。FUS-NFATC2
两个出版物描述4患者窝藏肿瘤FUS-NFATC2融合检测的分子分析ES /以色列[26,33)(表3)。性别和年龄(三个男性病人:15 - 22,和小说和49岁女性)以及肿瘤的位置(在股骨)给出;但是,没有治疗或细节尤其是后续或者不提供结果。组织学检查,他们被描述为mitotically活跃坏死和地区由两个圆细胞和梭形细胞特性,伴随着焦点软骨样分化或myxohyaline基质(26,33]。分子分析与聚类分析26)表明,有很大的区别FUS-NFATC2和EWSR1-NFATC2肿瘤因为他们显示不同的和无关的签名。
在当前的研究中描述的患者肿瘤窝藏最年轻的报道FUS-NFATC2融合。此外,这个肿瘤代表第一个情况FUS-NFATC2融合没有微观或高档恶性肿瘤的临床证据。
5。讨论
后那样承认尤因肉瘤是由基因位于染色体的易位22 q12(后来称为尤因肉瘤基因)合作ETS家族的基因转化因素,子群的主要积极肉瘤不携带这种易位类型已被确认和设计为“尤因sarcoma-like肿瘤”(以色列)12- - - - - -15]。以色列一词后来被应用于一些不可归类的肿瘤,不符合在任何类别的实体和只有建立远程类似,显示变量CD99免疫组织化学表达抗原和/或的参与EWSR1,而不是与ETS家族的一个伙伴。EWSR1重组是参与一些行之有效的临床的发病机理和形态显然non-ES, non-ESLT,实体如mlp、CCS、AFH和软组织的子群肌上皮肿瘤(7,8]。
在当前的研究中,我们将描述三个患者肿瘤的特征EWSR1-NFATC2融合。NFATC2(核转录因子的激活t细胞、calcineurin-dependent 2)基因是参与激活t细胞转录的功能复杂的(21]。几项研究(表1)描述肿瘤携带EWSR1-NFATC2之间的融合,主要是确定肿瘤最初归类为以色列。这些肿瘤的组织病理学的比较表明,他们表现出一个相当典型的微观小梁的增长模式和僵化,外观myxohyaline矩阵,大大不同于一般的圆细胞方面stroma-devoid ESs事实上类似,而瘤谱的肌上皮肿瘤。重组的EWSR1与各合作伙伴(36- - - - - -40)描述了子群的软组织肌上皮肿瘤。其他子组的肌上皮肿瘤的软组织与其他基因的重组等替代基因畸变(例如,PLAG1(41])或纯合缺失INI1 /SMARCB1基因(42- - - - - -44),而在一个大比例,遗传背景不清楚。事实上,当前肿瘤之一系列最初诊断为肌上皮癌由于细胞角蛋白的表达和的存在EWSR1重排。腹腔肿瘤患者3最初认为是肌上皮瘤或基于EMC的重排EWSR1。另一个肿瘤报告在文献中被确认为myoepithelioma-like骨肉瘤(29日在回顾57未分化骨肉瘤的诊断检查。
第一种情况的系列目前最长的后续报道文献11年前被诊断为硬化性上皮样的纤维肉瘤(海基会),已经被认为是一个排除诊断。当时最初的诊断、软组织和骨骼的主要肌上皮肿瘤的概念还没有完善,人们知之甚少的分子背景海基会和MUC4 immunohistochemistry-nowadays容易应用来验证这个诊断是没有可用的。
的分子标志EWSR1-NFATC2融合是伴随二级融合产品的结构畸变,从而导致低级放大的着丝粒探针的部分分解鱼。这种模式非常典型,在所有情况下都观察到目前为止报道。事实上,这一发现应该作为第一诊断提示EWSR1-NFATC2发生易位肉瘤。
肿瘤携带EWSR1-NFATC2融合已报告主要在长骨头的男性患者只有少数报告在软组织或女性患者。女病人的腹腔肿瘤的3系列是我们所知的首次报道nonextremity位置。患者EWSR1-NFATC2肿瘤通常比ES患者,30年的平均年龄为例演示报告年龄数据,即使这些肿瘤发生在20岁以下。除了当地破坏性增长,报告的一小部分患者肺和骨转移罕见的皮肤或开发,证实的恶性潜能EWSR1-NFATC2fusion-associated肿瘤。然而,生存期长,即使没有辅助治疗和缺乏由于肿瘤死亡报告,表明这些肿瘤属于低度恶性的类别。的关系EWSR1-NFATC2转移肿瘤组ESs和以色列目前争议讨论的文献[27,45,46]。基于我们的经验和从发表的文献数据的回顾,这些肿瘤值得考虑的一个单独的类别。
的付家基因作为春节/场效应晶体管的家庭成员或者重新安排,而不是被发现EWSR1在几间充质实体如ES, mlp、LGFMS,或AFH没有明显的形态学上的差异或临床过程。的付家类似于EWSR1编码rna结合蛋白的春节家人分享相应的句子。5′transactivation域的付家和EWSR1似乎是可互换的改造潜力,以及产生的融合蛋白EWSR1或付家重组似乎与任何给定的伴侣施加相同的生物效应(14]。有趣的是,然而,在这种情况下付家相关基因,融合伙伴涉及ETS基因ERG或FEV,但不FLI1,这是最常见的重新安排的合作伙伴EWSR1ES。在最近的两项研究中,孤立的病例FUS-NFATC2融合相关肿瘤一直未分化的以色列(表中引用的文献中3)[26,33)只有有限的信息组织病理学和临床特征。值得注意的是,分子的EWSR1-NFATC2和FUS-NFATC2肿瘤却截然不同。这个观察表明,与前所述肿瘤EWSR1和/或付家基因融合其他基因NFATC2,必须存在实质性的差异。鱼的模式付家重排不是两篇论文报告中描述FUS-NFATC2相关的肿瘤。如果当前系列的第4,形成鲜明对比EWSR1-NFATC2融合,FUS-NFATC2融合与放大的影响无关付家地区的鱼,这意味着不同的融合产品的结构。例4的组织学特征,缺乏形态学和临床恶性肿瘤的证据,似乎不同于以色列的三个案例中描述的文学。需要更多的数据有关的临床、组织病理学和分子肿瘤携带的属性FUS-NFATC2融合。
目前的研究和文献综述强调的观察EWSR1-NFATC2fusion-associated肿瘤明显的组织病理学和分子实体,也不应该被包括在以色列类别。只有少数报告病例与不完整的临床数据是可用的FUS-NFATC2fusion-associated瘤。然而,有趣的是,基于当前的研究的情况下4和先前的分子分析数据26肿瘤),似乎是有区别的ESWR1或付家融合的合作伙伴NFATC2基因。在我们迈向分子间质肿瘤分类的相关性还有待更多了解特定的基因畸变与临床结果和对治疗的反应。
数据可用性
组织病理学、免疫组织化学和分子数据用于支持本研究的结果中包括这篇文章。
伦理批准
本研究符合伦理标准执行。这项研究是通过机构审查委员会(市区的伦理委员会;KEK_ZH_2013_0430)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
作者贝亚特Bode-Lesniewska和布鲁诺Fuchs构思和设计研究以及写,编辑,回顾了手稿。作者贝亚特Bode-Lesniewska,布鲁诺·福克斯,克里斯汀·弗里茨格哈德•乌尔里希报告》,和乌尔里希瓦格纳收集、研究和分析数据和编辑对稿件。所有作者最终批准出版。作者贝亚特Bode-Lesniewska充分负责的工作作为一个整体,包括研究设计,对数据的访问,并决定提交和发布的手稿。