茴香脑毒性和精油的柠檬草和甜万寿菊寄生螨瓦螨和他们对蜜蜂的选择性(蜜蜂)工人和幼虫

文摘

本研究研究了茴香脑的毒性和柠檬草精油(Cymbopogon citratus)和甜蜜的金盏花(万寿菊明星)的螨瓦螨和蜜蜂工人和幼虫。茴香脑是最有毒的化合物诉析构函数(LC₅₀:304.9μg / ml),而万寿菊石油是最有毒的(LC₅₀:1256.27μg / ml)。最高和最低的工蜂是茴香脑和有毒物质万寿菊石油与LD₅₀35942年和85381年μ分别g / ml。幼虫,万寿菊石油是最有毒化合物(LD₅₀:9580.7μg / ml)和茴香脑最有毒(LD₅₀:14518.0μg / ml)。茴香脑,Cymbopogon油选择性最高比率。的表达疼痛基因,调节乙酰胆碱酯酶的生产,解毒酶,不是蜜蜂接受改变的植物化合物,在治疗后的48小时。这项研究表明,茴香脑和Cymbopogon石油有潜在的控制蜂螨虫和似乎是相对安全的幼虫和成年蜜蜂。

1。介绍

的螨瓦螨负责普遍亏损的蜜蜂殖民地,特别是在北美(1- - - - - -4]。诉析构函数提要血淋巴和脂肪体的宿主和传播致命的病毒(5,6]。殖民地上爬满了诉析构函数与杀螨药治疗比未经处理的殖民地(生产更多的蜂蜜7),但合成杀螨药导致的频繁使用抵制这些产品的开发在螨种群(8]。合成杀螨药也可能污染蜂巢产品(9]。因此,有需求的新化合物具有高miticidal活动,同时是安全的蜜蜂,环境,和不属预定目标的物种(包括蜜蜂和人类)。植物精油和这些物质的成分是有吸引力的杀螨药候选人在蜂巢控制害虫和疾病,因为他们满足这些标准(10- - - - - -12]。此外,许多精油及其组件表现出相当大的反对miticidal活动诉析构函数(10]。

杀螨药也有毒的蜜蜂在某种程度上(13]。因此,蜜蜂也有毒农药时激活解毒机制。之一,这些机制导致产量的增加乙酰胆碱酯酶(疼痛),一种酶,这种酶调节乙酰胆碱的浓度在突触水平个人暴露于杀虫剂,如有机磷和氨基甲酸盐(14),以及拟除虫菊酯(15和烟碱类16- - - - - -18]。因此,疼痛活动被广泛用作神经毒性生物标志物。然而,这些机制的激活和疼痛的生产尚不清楚节肢动物接触精油(19,20.]。此外,解毒机制的激活能量要求和昂贵的蜜蜂,这可能会影响他们的生理和健康。因此,重要的是,杀螨药最低限度有毒的蜜蜂,它们不需要投入相当大的资源在解毒过程暴露在杀螨药蜂螨控制治疗。

本研究调查了茴香脑的毒性,茴香精油的芳香化合物(Pimpinella anisum),以及精油的柠檬草(Cymbopogon citratus)和甜香味万寿菊(万寿菊明星)来蜂螨虫和蜜蜂。的主要成分Cymbopogon citratus是monoterpenoid香叶醇,而万寿菊最亮的星是芳香phenylpropene草蒿脑。其他研究者已经报道了农药植物化合物,我们测试的属性。例如,茴香脑显示毒性几个昆虫(21,22),线虫(23),和螨虫24]。Cymbopogon石油可以杀死蚊子25和螨虫26]。万寿菊油价已证明臭虫等杀虫剂对昆虫活动(27)和蜱虫(28]。此外,万寿菊石油已经测试几个蜜蜂的病原体,包括细菌Paenibacillus幼虫,真菌Ascosphaera api,和螨虫诉析构函数(29日,30.]。然而,这项研究是第一次评估的相对毒性和选择性茴香脑,柠檬草油蜂螨幼虫和成年蜜蜂。的表达疼痛、基因调节生产的解毒酶疼痛,也分析了蜜蜂对待这些化合物。

2。材料和方法

2.1。化合物

茴香脑(技术等级)获得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国),而的精油Cymbopogon citratus和万寿菊最亮的星被蒸汽蒸馏从植物组织中获得按艾姆斯和马修斯(31日]。Tau-fluvalinate,作为积极的控制,也是从Sigma-Aldrich获得。

2.2。蜂螨和蜜蜂来源

圭尔夫大学的试验进行的蜜蜂研究中心在圭尔夫,加拿大。殖民地由Buckfast皇后区被用作螨和蜜蜂的来源。螨虫是获得从成年蜜蜂32)的三个殖民地大量出没诉析构函数,没有杀螨药治疗至少一年。其他三个殖民地提供成年蜜蜂和幼虫。对于成年蜜蜂,梳子与新兴小鸡被关在笼子里,孵化(33°C和60% RH)一夜之间获得新兴工人,和相同的殖民地为实验提供了幼虫如下所述。

2.3。毒性,诉析构函数

经过初步测试,六个对数间隔每个化合物的浓度(表1)准备在1.5毫升的高效液相色谱级丙酮。然后,根据Gashout和Guzman-Novoa [33),0.5毫升的每个解决方案放在一个20毫升玻璃闪烁瓶(费舍尔科学有限公司,渥太华,加拿大)吸管,包括丙酮和tau-fluvalinate控制。瓶是推出分发解决方案在他们内心的墙。丙酮蒸发后(约10分钟),瓶受限。五女螨虫被引入到每个瓶用一记漂亮的画笔,在黑暗中在室温下(26°C和65% RH)。总共有280螨虫被用于每个化合物8复制。确定每个化合物的急性毒性,死螨的数量记录在4 h后处理(hpt)。一根针是用来触摸每个螨虫的尸体。如果寄生虫不动,它被认为是死亡。

2.4。对蜜蜂毒性工人和幼虫

植物化合物和tau-fluvalinate溶解在96%乙醇上面获得相同的浓度和局部分析是用来治疗新出现的人员如下。每一个蜜蜂收到5μl(解决方案的治疗集中在她的前胸借助微量吸液管。总共25蜜蜂治疗/每个化合物浓度和控制蜜蜂与乙醇治疗。治疗组25蜜蜂引入囤积笼子(12.7×8.5×14.5厘米)配备两个20毫升重力喂,一个含有50% (w: v)糖:蒸馏水溶液和其他含蒸馏水。然后,笼子在孵化器举行33°C和60% RH。死去的蜜蜂在24和48 hpt数。三个试验进行了复制。

蜜蜂幼虫为食,梳子含有丰富的第三或第四龄幼虫被从源殖民地将他们视为每Gashout Guzman-Novoa [33]。简单地说,25幼虫被单独处理5组μl每个每个化合物浓度的解决方案通过将解决方案与微量吸液管底部的每一个细胞。外缘的细胞包含实验幼虫与无毒涂上不同的颜色标记(L551P2亨特Int,米西索加,,加拿大)来确定治疗方法。包含幼虫的梳子都回到各自的荨麻疹治疗后。死亡率在24和48 hpt决定。珍珠白色幼虫被假定为活着而幼虫与褐色的颜色或细胞由于缺少卫生行为的蜜蜂被认为是死亡。三个试验进行了复制。

2.5。相对选择性比率

评估安全的蜜蜂的天然化合物,相对选择性比率(34计算)除以的毒性值主机(LD₅₀职工或幼虫)的害虫(LC₅₀的诉析构函数)。这些比率允许比较的测试化合物相对于彼此,tau-fluvalinate。

2.6。乙酰胆碱酯酶基因表达

实时定量PCR (RT-qPCR)被用来衡量的表达疼痛工蜂的样本。大约15蜜蜂收集每治疗和复制在0和48 hpt。蜜蜂被放置在塑料袋和保持冷冻后RNA提取的−70°C。

在分析化合物的毒性,控制蜜蜂和蜜蜂处理浓度接近和95%置信区间内的LD₅₀48 hpt被用来衡量价值的表达疼痛(蜜蜂处理110μ克/毫升tau-fluvalinate, 34000年μ克/毫升的茴香脑,60000μ克/毫升Cymbopogon或万寿菊油)。总RNA提取了均质化每个复合试样每治疗15蜜蜂提取缓冲按照陈et al。35]。的数量和浓度的分光光度法测定RNA (Nanovue通用电气医疗集团,剑桥,英国)和RNA的互补脱氧核糖核酸合成利用cDNA合成装备(恢复援助,Fermentas生命科学、伯灵顿,加拿大)根据制造商的协议。

每20个PCR反应μL由2μL (cDNA模板,10μL SYBR绿色/火箭/ qPCR超级混合(热科学,米西索加、加拿大),0.6μL(每个特定引物浓度300海里,和6.8μL nuclease-free H₂o .存在反应进行96 -孔板(直径®,米西索加,,加拿大)与BioRad CFX96 (Bio-Rad实验室,米西索加、加拿大)thermocycler。本研究中使用的目标基因引物设计与Primer-BLAST工具,然后验证发夹环和二聚体基因跑步者(黑斯廷软件有限公司,纽约,美国)在获得和调整疼痛从NCBI(加入NC_007077.3)序列。正向和反向引物用GGACATAATGGCGGCTACGA CTCCTCGCTGTTCGTGAAGT,分别。是使用的参考基因RpS5(36]。引物被命令从圭尔夫大学的实验室服务(加拿大圭尔夫,)。

所有反应都设置为每个三个生物复制一式三份。两步循环协议之后,使用Uracil-DNA糖基化酶预处理在50°C 2分钟,一个初始变性为10分钟在95°C,和40周期15在95°C和60年代60°C。消极的控制使用nuclease-free H₂0而不是cDNA和积极的控制被包含在每个存在运行。引物的效率优化qPCR条件接近100%,与标准曲线确定使用300个基点从串行稀释10倍合成基因片段(gBlocks、集成DNA技术,爱荷华州,美国),其中包括序列的引物,扩增子序列和反向引物。疼痛转录丰度是相对于参考基因根据量化(Livak)方法(37使用控制作为校准器。的Bio-Rad大型Manager®软件CFX (Bio-Rad实验室,米西索加、加拿大)比率是用来计算表达式。

2.7。统计分析

数据螨、工人和幼虫死亡率受到使用PoloPlus probit分析软件(38致死浓度(LC)估计50%₅₀螨)和50%致命剂量(LD₅₀)的工人和幼虫,以及斜坡和95%置信区间的不同的化合物。PoloPlus程序也用于比较的剂量反应的化合物。丰富的数据疼痛成绩单是转换,然后进行方差分析和LSD测试时发现意义。

3所示。结果

3.1。毒性,诉析构函数

茴香脑LC最低₅₀(304.9μg / ml)的自然化合物测试诉析构函数,虽然其毒性不明显不同Cymbopogon石油。Cymbopogon和万寿菊油分别排名第二和第三,和不同的毒性诉析构函数从对方。Tau-fluvalinate更有毒诉析构函数估计比三个天然化合物与LD₅₀80.44μ克/毫升(表2)。

平行比较的山坡上的剂量反应行显示茴香脑,之间没有显著差异Cymbopogon油( df = 1, ),但茴香脑有剂量反应显著高于万寿菊油( df = 1, )和tau-fluvalinate ( df = 1, )。没有发现不同的剂量反应万寿菊石油和tau-fluvalinate ( df = 1, ;图1(一))。

3.2。对蜜蜂毒性工人和幼虫

最高和最低的有毒新兴工人茴香脑和天然化合物万寿菊油,分别不同的显著24和48 hpt。的毒性Cymbopogon石油对蜜蜂不是茴香脑或明显不同万寿菊石油,而毒性工蜂tau-fluvalinate明显超过三个天然化合物(表至少207次3)。相反,幼虫,万寿菊石油是最天然化合物的毒性,而茴香脑是最有毒的24和48 hpt。LD的₅₀值Cymbopogon石油是茴香脑和之间的中间万寿菊石油,但没有与任何的毒性不同蜜蜂幼虫。然而,tau-fluvalinate有毒的幼虫明显多于三个天然化合物在两个时间点(表3)。蜜蜂幼虫的毒性高于近11倍万寿菊石油。

工蜂,茴香脑有剂量反应显著高于Cymbopogon油( df = 1, ),万寿菊油( df = 1, )和tau-fluvalinate ( df = 1, )。然而,没有发现差异之间的剂量反应的斜坡线Cymbopogon和万寿菊油( df = 1, )或之间Cymbopogon石油和tau-fluvalinate ( df = 1, ;图1 (b))。幼虫,茴香脑有剂量反应显著高于Cymbopogon油( df = 1, )或tau-fluvalinate ( df = 1, ),但是没有发现显著差异之间的斜坡茴香脑和剂量反应行万寿菊油( df = 1, ;图1 (c))。

3.3。相对选择性比率

茴香脑相对选择性比率计算,Cymbopogon油,万寿菊油和tau-fluvalinate分别为117.9,115.7,68.0,和2.2,分别在成年蜜蜂和47.6,27.2,7.6,和10.9,分别在蜜蜂的幼虫。

3.4。乙酰胆碱酯酶基因表达

的相对丰度疼痛成绩单在48 hpt明显高于tau-fluvalinate治疗蜜蜂( 褶皱变化)比蜜蜂从其他治疗方法。表达水平没有明显差异的蜜蜂之间的这种基因控制,茴香脑,Cymbopogon,万寿菊油治疗在0 hpt或48 hpt,表明只有tau-fluvalinate与表达升高有关疼痛( , ;图2)。

4所示。讨论

本研究进行了测试潜在的一些植物化合物的控制蜂螨虫以及来确定它们的相对毒性蜜蜂工人和幼虫。茴香脑和Cymbopogon石油对螨虫的影响,同时高选择性和安全蜜蜂的利润率。茴香脑的miticidal效果(之前已经被证明24),但其相对毒性和选择性从来没有确定诉析构函数和蜜蜂幼虫和成年人。在这项研究中,茴香脑的剂量反应和毒性诉析构函数明显高于万寿菊油(4.1倍)和类似的Cymbopogon石油。其毒性工蜂也显著高于万寿菊石油(2.4倍),但不是不同的Cymbopogon石油。相反,茴香脑是有毒的比万寿菊对蜜蜂幼虫和石油Cymbopogon石油有中等毒性。相比之下,tau-fluvalinate是3.8倍的毒性蜂螨虫比茴香脑,但也导致了17倍的有毒幼虫和至少207倍比茴香脑对成年蜜蜂有毒。此外,茴香脑的选择性比率最高的所有化合物的测试。从上面的结果,可以得出结论,茴香脑潜力最高varroacide化合物中测试和演示了大型安全边际的蜜蜂。因此可以在荨麻疹建议进行进一步的测试。

茴香脑目前用作调味品或芳香剂在食品工业和对人类健康没有安全问题39]。然而,它可能影响蜂蜜的气味或味道应该考虑。茴香脑从八角茴香精油是孤立的,也产生了从硫酸盐松节油合成油。八角茴香精油的年产量隔离茴香脑(超过3000吨40]。因此,它可以假定为经济提供一个新的市场应该由于varroacidal创建活动。

的毒性Cymbopogon石油诉析构函数和蜜蜂工人和幼虫是茴香脑的相似。然而,它比茴香脑相对选择性比例略低。尽管如此,它比的比率高得多万寿菊石油和tau-fluvalinate,也使其成为潜在的有效和安全varroacidal候选人在蜂巢级别进行测试。进一步纯化Cymbopogon石油和分离的活性成分可能会增强其varroacidal效果。在以前的研究中,Cymbopogon石油被发现miticidal活动(26),众所周知,柠檬醛,它的主要组件,可能杀死蜂螨虫(41]。然而,这是第一次研究证明其varroacidal活动和低毒性的成年蜜蜂幼虫。

万寿菊石油是大大减少有毒蜂比tau-fluvalinate螨虫,其他两个植物化合物,在本研究中进行了测试。也是最有毒的成年蜜蜂的化合物,但相反,第二tau-fluvalinate,万寿菊石油是最有毒化合物的幼虫。此外,它是选择性的植物化合物,当毒性测试结果幼虫被用于计算。因此,将等级低于茴香脑Cymbopogon石油作为潜在varroacidal化合物。这很让人困惑的原因万寿菊石油特别有毒的蜜蜂幼虫。然而,在其他昆虫的研究表明组织的万寿菊植物含有(5 e) ocimenone和α-terthienyl,显示有效的杀灭幼虫的影响对蚊子(25]。的行动方式α-terthienyl有关其幼虫抗氧化防御系统的干扰生物体暴露于这种植物杀虫剂(42]。精油的毒性t . minuta来蜂螨虫和成年蜜蜂被Eguaras之前评估等。29日波特塔下。他们估计一个信用证₅₀4.37毫克/笼蜂螨虫和13.6毫克/笼工蜂。然而,由于不同的评估方法,是不可能直接比较他们与我们的结果,尽管研究显示成年蜜蜂的选择性的石油。

我们发现的高表达疼痛蜜蜂在接受治疗后48 h与tau-fluvalinate但不是植物化合物(图2)。基因表达的增加可以解释为一种自适应机制的蜜蜂抵消tau-fluvalinate的疼痛的抑制作用。类似的结果被巴迪欧等报道。15)当他们暴露蜜蜂到另一个拟除虫菊酯,溴氰菊酯。我们的结果用于tau-fluvalinate公开同意的观点疼痛很可能与应激反应有关。疼痛当工蜂压力增加,例如,贫穷的条件下花粉可用性和抑制花粉时是可用的和小鸡饲养是诱导43]。因此,它是可能的,只有蜜蜂tau-fluvalinate造成压力。低毒性的植物化合物,相对于tau-fluvalinate成年蜜蜂发现在这项研究可能也缺乏相关的变化疼痛表达蜜蜂接触,因此只有蜜蜂接触tau-fluvalinate显示大量的高疼痛记录。另外,没有反应疼痛表达式的植物化合物,可能是由于缺乏这些化合物乙酰胆碱受体的特异性。众所周知,萜类化合物如麝香草酚绑定到章鱼胺或GABA受体(44,45),尽管其他的研究也发现,精油成分麝香草酚和芳樟醇等改变的表达疼痛(19,20.,27,46]。另一个潜在的假设来解释缺乏植物化合物的影响疼痛表达式是化合物可能是迅速代谢,因此没有任何明显影响的表达疼痛在48 hpt。在任何情况下,进一步调查才能发现为什么这里的植物化合物,测试没有影响疼痛在成年蜜蜂表达式。

5。结论

茴香脑,Cymbopogon油显示潜在的控制蜂螨虫,同时较低的毒性和相当大的安全保证金和成年蜜蜂幼虫。进一步研究这些植物化合物的作用方式和田间试验测试在蜂箱是必要的。这样的研究可能会导致用天然安全的化合物代替化学危险品为了保持健康蜜蜂殖民地和蜂窝产品的用户。

的利益冲突

作者宣称他们没有潜在的利益冲突的关系研究。

确认

作者感谢Paul Kelly Nuria莫芬南希·布拉德伯里,斯蒂芬妮·奥托,布鲁克·华莱士,大卫Stotesbury提供援助与研究任务。他们感谢泰勒坎贝尔回顾手稿。这项研究的部分资金由的资助加拿大自然科学和工程研究理事会(没有。386129389)。

引用

1. p·g . Kevan gosper e . Guzman-Novoa a .斯金纳和d . vanEnglesdorp“蜂群衰竭失调在加拿大:我们有一个问题吗?”蜂巢灯,20卷,14 - 16,2007页。视图:谷歌学术搜索
2. r·w·库里,s . f . Pernal和e . Guzman-Novoa“蜜蜂殖民地损失在加拿大,”《学研究工作卷,49号1,第106 - 104页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. e . Guzman-Novoa l·艾克尔斯y Calvete, j·麦高文,p·g·凯利,a . Correa-Benitez,”瓦螨的罪魁祸首是死亡和过冬的蜜蜂数量减少(蜜蜂)殖民地在安大略省,加拿大,”Apidologie第41卷。。4、443 - 450年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. d·梵j·海耶斯Jr .) r·m·安德伍德d·卡隆和j·佩蒂斯”管理的调查蜜蜂殖民地损失在美国,2009年秋季冬季2010”《学研究工作,50卷,不。1、1 - 10,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. 美国j·马丁,“蜂和病毒性病原体的作用在蜂群的崩溃:造型的方法,”应用生态学杂志,38卷,不。5,1082 - 1093年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. r . Anguiano-Baez e . Guzman-Novoa m . m . Hamiduzzaman l . g . Espinosa-Montano和a . Correa-Benitez“瓦螨(中气门亚目:Varroidae)寄生和气候差异影响流行,水平,和明显的感染deformedwing病毒蜜蜂(膜翅目蜜蜂科):“昆虫科学杂志》,16卷,不。1,文章ID 33242, 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. Arechavaleta-Velasco和e . Guzman-Novoa“相对效应的四个特征,抑制螨虫瓦螨的人口增长在蜜蜂的蜜蜂殖民地,“Apidologie,32卷,不。2、157 - 174年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. d . Sammataro p Untalan、f·格雷罗州和j·芬利,“蜂螨的抗性(壁虱Varroidae):杀螨剂和酯酶的存在,”国际期刊的蜱螨学没有,卷。31日。1,第74 - 67页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. a . s . Bogdanov“蜜蜂产品的污染物,Apidologie37卷,队,2006页。视图:谷歌学术搜索
10. a . Imdorf s Bogdanov r·奥乔亚,n . w .回复中,“使用精油的控制蜂jacobsoni乌得琴。在蜜蜂殖民地。”Apidologie,30卷,不。2 - 3、209 - 228年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. c,单j . Grodnitzky, j .外套,“Monoterpenoids尽可能控制代理瓦螨,”《学研究工作第41卷。。3 - 4、83 - 88年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. A . p . Melathopoulos s . f . Pernal e·穆勒w·费利克斯和e . Guzman-Novoa“春天评估制定麝香草酚的蔗糖尘埃控制瓦螨,蜜蜂的寄生虫(蜜蜂)在阿尔伯塔,加拿大,”蜜蜂的科学文化,卷2,2 - 6,2010页。视图:谷歌学术搜索
13. r·m·约翰逊·m·d·埃利斯c·a·穆林和m·弗雷泽“杀虫剂和蜜蜂毒性——美国。”Apidologie第41卷。。3、312 - 331年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. a·h·沃克s p·霍普金r . m . sib和d . b . Peakall生态毒理学原理泰勒和弗朗西斯,伦敦,英国,第二版,2001年版。
15. m·梅尔·a·巴迪欧,l . p . Belzunces“蜜蜂蜜蜂acetylcholinesterase-A生物标志物检测溴氰菊酯曝光,“生态毒理学和环境安全,卷69,不。2、246 - 253年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. m .男孩b . Sarrasin c . DeBlois p .阿拉斯和m .查冈“乙酰胆碱酯酶在蜜蜂(蜜蜂)暴露于烟碱类、阿特拉津和草甘膦:实验室和现场实验,”环境科学与污染研究,20卷,不。8,5603 - 5614年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. m . Alburaki s Boutin p.l.。Mercier, y Loublier、m .查冈和n . Derome”Neonicotinoid-coated玉米种子间接影响蜜蜂在田间试验性能和病原体的易感性,”《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。5篇文章ID e0125790 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. o . Samson-Robert g .莱柏瑞p.l.。Mercier, m .查冈n . Derome诉弗尔涅,“增加乙酰胆碱酯酶表达在大黄蜂Neonicotinoid-Coated玉米播种,”科学报告卷,5篇文章ID 12636, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 基恩和m·f·瑞恩“净化、描述和抑制乙酰胆碱酯酶的单萜waxmoth的Galleria mellonella (l),“昆虫生物化学和分子生物学卷,29号12日,第1104 - 1097页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. w·Blenau大肠随处和a·鲍曼“植物精油和formamidines杀虫剂、杀螨剂:分子的目标是什么?”Apidologie,43卷,不。3、334 - 347年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. K.-S。Chang和Y.-J。安,“熏蒸消毒剂(E)的活性在八角茴香脑发现对Blattella蠊verum水果,”害虫管理科学,卷。58岁的没有。2、161 - 166年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. I.-K。公园,K.-S。崔D.-H。金et al .,“熏剂活性的植物精油和组件从辣根(Armoracia rusticana),茴香(Pimpinella anisum)和大蒜(大蒜)油对Lycoriella ingenua(双翅目:Sciaridae)”害虫管理科学,卷62,不。8,723 - 728年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. y奥卡河,s . Nacar e . Putievsky Ravid, z Yaniv,和y明镜,“杀线虫的活性精油对综合线虫及其组件,”植物病理学杂志,卷90,不。7,710 - 715年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. H.-S。李,“食品保护作用的杀螨组件隔离储存食物螨茴香种子,Tyrophagus putrescentiae(双门衣柜),“《食品保护,卷68,不。6,1208 - 1210年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m·m·m·马科斯,s m .莫莱斯,我。g·p·维埃拉et al .,“杀灭幼虫活动对埃及伊蚊的万寿菊,”美国蚊虫控制协会杂志》上,27卷,不。2、156 - 158年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 诉Vicentini制作,d . Pratissoli v . t . de奎罗斯et al .,“乙醇提取Cymbopogon winterianus测定死亡率和数量的鸡蛋,“Ciencia农村,45卷,不。7,1154 - 1159年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. a . f . a . s . Politi j . d . Nascimento a da Silva et al .,”孔雀草新品种-雪域精油的杀虫活性(菊科)常见的臭虫臭虫l和分子对接的主要化合物的催化部位ClAChE1,”寄生虫学研究,卷116,不。1,第424 - 415页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. r . Andreotti m·加西亚诉r·c·达和j·c·巴罗斯”保护行动的万寿菊minuta(菊科)精油的控制扇头蜱属microplus (Canestrini, 1887)(壁虱:硬蜱科)在牛笔试验,”兽医寄生虫学,卷197,不。1 - 2、341 - 345年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m . j . Eguaras s Fuselli l . Gende et al .,”一个体外评价万寿菊minuta精油的控制蜜蜂病原体paenibacillus幼虫和ascosphaera api,叫做瓦螨寄生螨,”精油研究杂志》上,17卷,不。3、336 - 340年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. s . r . Fuselli s b·g·德·拉·罗萨·b·Gende m . j . Eguaras和r·弗里茨“抗菌活性的阿根廷野生植物精油对paenibacillus幼虫,幼虫因果代理美国污仔病(AFB),“《学研究工作,45卷,不。1,2 - 7日,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. g·r·艾姆斯和w·s·a·马修斯,”的蒸馏精油”,热带科学,10卷,第148 - 136页,1968年。视图:谷歌学术搜索
32. 诉Dietemann f . Nazzi s . j .马丁et al .,“蜂研究标准方法”《学研究工作,52卷,不。1,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. h·a·Gashout和大肠Guzman-Novoa精油和其他天然化合物的急性毒性寄生螨,瓦螨,幼虫和成年工人蜜蜂蜜蜂(l)”《学研究工作,48卷,不。4、263 - 269年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j . Stanley)和g . Preetha“农药对非靶标生物的毒性,”曝光,毒性和风险评估方法施普林格,页1 - 502年,柏林,德国,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. g . Y.-J。陈,美国金和p h·古德温”的一种改进方法总RNA的隔离锦葵pusilla组织感染炭疽菌、炭疽、”植物病理学杂志,卷148,不。1、年度,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. j·d·埃文斯,“Beepath:一个有序数组定量pcr为探索蜜蜂免疫和疾病,”无脊椎动物病理学杂志,卷93,不。2、135 - 139年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. k . j . Livak和t . d . Schmittgen相对基因表达数据的分析利用实时定量PCR和2^ΔΔC (T)方法,”方法,25卷,不。4、402 - 408年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. PoloPlus LeOra软件,马球为Windows美国加州伯克利,LeOra软件,2002。
39. 粮农组织/世卫组织,Trans-anethole,评价粮农组织/世卫组织食品添加剂专家委员会(联合),1998,http://apps.who.int/food-additives-contaminants-jecfa-database/chemical.aspx?chemID=2295(5月20日访问17)。
40. h . Surburg和j . Panten”共同的香味和风味材料:制备、性能和用途,”常见的香味和风味材料:制备方法、性能和用途,2016年,页1 - 358。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. p . j .·德·艾尔曾j·r·巴克斯特·g·w··德·艾尔曾r·里维拉和w·t·威尔逊”评价的葡萄柚精油控制蜂jacobsoni和Acarapis woodi,”美国蜜蜂杂志,35卷,第668 - 666页,2000年。视图:谷歌学术搜索
42. b . m . Hasspieler j . t . Amason, a . e . r .原本“光毒性的毒性、本地化和消除,a-terthienyl,蚊子幼虫,”美国蚊虫控制Associatuon杂志》上4卷,第484 - 479页,1988年。视图:谷歌学术搜索
43. 黄懿慧金,j·h·金,k金,和s h·李,“乙酰胆碱酯酶1的表达与窝在蜜蜂饲养地位,蜜蜂,“科学报告ID 39864条,卷。7日,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. e .亚希拉,“杀虫活性精油:octopaminergic网站的行动,”比较生物化学和生理学- C部分:毒理学和药理学,卷130,不。3、325 - 337年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. c·m·普里斯特利·e·m·威廉姆森,k . a . Wafford和d . b . Sattelle“麝香草酚,百里香精油的成分,是一种积极的变构调制器的人类GABA (a)受体和homo-oligomeric GABA受体从果蝇,”英国药理学杂志》上的报告,卷140,不。8,1363 - 1372年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. h . Gashout次致命剂量的合成和天然杀螨剂对蜜蜂蜜蜂(l)健康、记忆、行为和相关基因表达研究[博士。论文)加拿大圭尔夫大学,2017。

版权

版权©2018 Qodratollah Sabahi等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。