文摘

客观的。研究三种方法的影响和three-acupoint技术在SNI模型大鼠DRG基因表达和分子机制的阐明和three-acupoint技术的三种方法对促进周围神经损伤的恢复。方法。27个雄性SD大鼠随机分为三组:一个虚假的团体,SNI组和推拿组。推拿治疗组治疗推拿操纵模拟器来模拟按摩点,质量和数量的控制。Point-pressing、脱毛、揉捏在Yinmen管理定量方法(BL37),成山(BL57)和Yanglingquan (GB34)点影响一侧一天一次,后7天开始建模。干预是一天一次申请10天,然后休息1天,紧随其后的是十多天的干预,完全相当于20倍的干预。三种方法的效果和三分技术的恢复受伤的老鼠被评估使用行为分析。差异表达基因的RNA序列(RNA-Seq)分析三组大鼠drg的也执行。去使用实时PCR KEGG浓缩进行了分析和验证。结果。RNA-Seq结合数据库信息显示,诊断相关差异表达基因的数量是最大的推拿治疗组与SNI组相比,共计226人。去积极的监管功能丰富的细胞过程,离子结合,蛋白质绑定,神经元,应对压力,对金属离子反应,神经元投射,和其他生物过程。功能也丰富Wnt, IL-17, MAPK信号通路在KEGG数据库中。PCR与RNA的测序结果一致,表明转录组测序的结果可靠。结论。三种方法和three-acupoint技术可以促进SNI的复苏模型大鼠drg中通过改变基因序列。

1。介绍

周围神经损伤(句)指的是周围神经丛,神经干或其分支机构因外力(如挤压伤、牵引受伤,和挫伤)。句的修复和再生,恢复基本临床重要性和其相关功能一直是一个受欢迎的研究重点。受伤的轴突周围神经系统有能力成功再生(1),和修复损伤后功能恢复有关。病理刺激或损伤周围神经系统会导致神经性疼痛(2]如异位疼痛、烧灼感、痛觉过敏,和自发或诱发不愉快的感觉异常,这被广泛认为是初级感觉神经元和异位过激励引起的电压门控离子通道的激活,包括感官特异性神经元电压门控钠通道(NaV1.8) [1.83]。轴突损伤导致肌肉无力和感觉丧失(4]。神经性疼痛的患病率高达8.0%,这不仅会导致身体疼痛,但也会增加抑郁症的发病率,焦虑,和其他情感障碍,极大地影响了患者的生活质量(5]。先前的研究在过去的十年中已经证明和three-acupoint技术的三个方法可以改善疼痛和温度的行为指标,促进NTFs的表达,保护神经元,修复神经髓鞘,防止肌肉萎缩和周围神经损伤大鼠在过去的十年里(6- - - - - -8]。但基因表达变化的三种方法和three-acupoint技术干预诱导在SNI老鼠和流程有什么他们推广,帮助周围神经损伤的修复?生物过程的参与和转导通路尚不清楚。在这项研究中,RNA-seq技术被用来揭示相关的转录组变化进行深入、全面的分析,这有利于周围神经损伤的开发和维护机制,提供了一个理论依据按摩治疗周围神经损伤。

背根神经节(DRG)接收所有神经冲动从外围受体,包括一般躯体感觉和发自内心的感觉。按轴突分叉成两个独立的分支:外围分支支配皮肤和肌肉和中央部门进入脊髓的DRG、终止在背角的表面,然后将感官信息传输到中枢神经系统。周围神经损伤和轴突退化后,神经营养因子分泌DRG神经元结构发生变化,涉及从各种各样的细胞分子和代谢过程,涉及到多个信号通路,伴随着大量的基因表达的变化(9]。

在学位ii iii神经损伤,损伤部位的损伤反应包括反应,沃勒变性(WD)受伤的水平以下,神经细胞的反应水平以上的身体损伤,和周边的反应器官。坐骨神经粉碎模型是一个特定的再生模型发生周围神经损伤后(10- - - - - -13]。在这项研究中,坐骨神经损伤(SNI)模型被用来刺激程度ii iii损伤周围神经的夹紧的神经轴突14]。在损伤的早期阶段,轴突和髓鞘被打破。缺血发生在受伤的神经段,intranervous水肿是显而易见的。WD引起颗粒分解结构的远端轴突,紧随其后的是不规则的髓鞘肿胀,结构性破坏,迅速瓦解。成形术可以恢复平衡的神经通路的信号,并提供各种营养因素纠正神经生长和再生的微环境的变化和修复各种异常和受损的神经结构,导致疼痛。

通过使用手术、激素、神经生长因子,和其他药物,神经功能可以通常只恢复70%左右和外源的干细胞移植治疗坐骨神经损伤并不是特别有效14]。阿片类药物可以有效地缓解症状,但长期使用阿片类药物会产生痛觉过敏和宽容,从而减少有效性(15]。在SNI模型中,受伤的坐骨神经接近中枢神经系统,远离效应,神经还没有恢复。远端效应的功能,尤其是肌肉,已经失去了。因此,具有十分重要的意义,使神经恢复早期通过外部干预。中医推拿是一种手工操作为中枢神经系统疾病和功能的外围干预。推拿是指从业者的操纵与适当的机械力刺激身体表层或深层组织的主题,引起受体的变化在当地皮肤或深层组织。然后从机械力刺激转换为电信号,通过传入纤维的神经冲动。根据中医推拿操作可以疏通经络,促进气和血液循环,消除冷,和减轻疼痛16]。它还可以有效改善初级疼痛的肿胀和变性的drg神经元SNI老鼠。细胞凋亡和解散drg神经元的光神经损伤后可以保护初级感觉神经元的形态完整的感官途径。

RNA-sequencing (RNA-Seq)技术是一种高通量测序技术近年来发展迅速。它可以研究基因功能和基因结构作为一个整体和揭示特定生理过程和疾病发生的分子机制。RNA-Seq技术成本相对较低,具有良好的可重复性,并且可以发现只有一个小样本大小,尤其是对生物样品的分析是很难获得17]。RNA-Seq DRG转录组变化的分析有助于揭示神经损伤后周围神经损伤的机制和可能导致发现新目标的预防和治疗神经性疼痛(18]。RNA-Seq诊断相关分析与挤压伤大鼠坐骨神经的显示的最大渗透率膜神经挤压伤后4 - 7天内出现。这个时间与急性炎症的峰值19]。整个网站的炎症反应神经损伤增加受伤后的第七天。因此,本研究利用大鼠坐骨神经夹损伤模型来模拟临床周围神经损伤。经过7天的受伤,三种方法和three-acupoint技术被用来治疗nerve-injured老鼠(1]。RNA-Seq技术被用来研究背根神经节转录水平的基因表达的变化,探讨三种方法的修复机制和three-acupoint技术nerve-injured老鼠,提供遗传学证据支持推拿治疗周围神经损伤。

2。材料和方法

2.1。动物

27男Sprague-Dawley (SD) 6 - 7周的老鼠的体重(200±10 g)喂养在北京中医药大学的实验室(SPF级)和自由提供食物和水。Sparford生物技术有限公司提供的所有老鼠有限公司进料温度是23±2°C,湿度45%,光明与黑暗时期是12小时(打开8点的光。)。适应性喂养1周发生。动物保护委员会和使用北京中医药大学(中医药大学- 3 - 20151202 - 4001)批准使用的所有程序在这项研究中使用的动物数量减少和动物的痛苦。老鼠被随机分为假组(n= 9),SNI集团(n= 9),推拿组(n= 9)。

2.2。建模方法

建模之前24小时禁食、水不足发生。老鼠被1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(350毫克/公斤体重)。

SNI组和推拿组老鼠固定在俯卧姿势和坐骨神经被发现,夹5秒5毫米远端与精细无血管镊坐骨神经结节,与一个完整的扣压力测试(5公斤),导致损伤点长约4毫米。然后我们管理当地盐水灌溉,一层一层地消毒、缝合、消毒。虚假的组大鼠仅受到手术的坐骨神经被发现但不操纵,和其他措施一样的SNI组。

老鼠保暖,我们等待着老鼠的觉醒。所有的大鼠术后禁食24小时,但被允许免费使用水。伤口条件和脚术后定期观察变化。

2.3。干预方法

虚假的组和SNI集团经常喂食,他们每天在9分钟的克制,没有推拿干预。

推拿治疗组管理的三种方法和three-acupoint技术作为SNI模型大鼠的干预。治疗开始后第7天模型成立。“按摩和推拿操纵模拟器”(专利号0187403.1 2007兹罗提,光滑球面直径10毫米)每天使用刺激Yinmen (BL37),成山(BL57)和Yanglingquan (GB34)点影响的老鼠使用三种方法:point-pressing方法,拔法、揉法。刺激力4 N和刺激频率是每分钟60倍;每个方法和每个点用于1分钟,总计9分钟(1分钟/穴位3的方法3穴位)(20.]。治疗10天每天服用一次,一天的休息,然后10治疗20次。为了减少动物的应激反应,抚摸和捕获的动物每天都服用9分钟前正式干预。

2.4。行为测量

累积疼痛评分被用来评估疼痛强度(21]。我们观察到着陆后爪和负重的情况下(压缩和增白后的爪子来表明负重):如果后爪子不接触地面,2点评估的得分;如果后爪子不承担体重,这是得分为1分;如果后爪子土地和熊的体重,评估的得分为0分。评估发生每5分钟,持续了1分钟;最常用的姿势1分钟内评估标准;12评估总共1小时进行观察。累积疼痛评分是通过减去侧脚从脚得分影响得分。每个老鼠测量三次,平均价值。

2.5。RNA提取和测序图书馆的建设

DRG的L4-L6来自20治疗后每组的右侧。为了获得足够的RNA,每三个老鼠的drg聚合中提取RNA作为样本,和三个生物复制(n= 9老鼠/组)在每组进行。从组织样本提取的总RNA使用“胍isothiocyanate-phenol-chloroform提取”的方法,和核糖核酸的浓度和纯度被Nanodrop2000检测。RNA的完整性评估通过琼脂糖凝胶电泳和RNA完整(RIN)是由Agilent2100数量。总RNA含量是1μg,浓度超过50 ng / uL、OD260/280是在1.8和2.2之间。样品与RIN得分> 8用于测序。

在这个项目中,转录组测序完成基于Hiseq测序平台,和启发PE图书馆是由Illumina公司truseqtm RNA样本准备装备2×150 bp测序的方法。QuantiFluor®dsDNASystem被用来量化和混合比例的数据。集群是由芝加哥期货交易所桥PCR扩增。测序数据的质量控制,然后转录组数据分析生物信息学。每千碱基片段每百万映射读取(FPKM)值是用来确定基因的表达水平,并与全转录组差异基因表达分析每个样本的数据。

2.6。去和KEGG分析

基因本体论(去)的术语用于描述和分类的功能基因和蛋白质。Goatools软件被用于浓缩基因浓度的分析,和Fisher精确检验使用。当纠正值(罗斯福)< 0.05,认为功能大大丰富。

京都基因和基因组的百科全书(KEGG)是一个大型知识库系统分析基因功能和基因协会的信息和功能信息。富集分析使用KEGG通路作为一个单元。统计测试是用来计算的罗斯福(核反应能量)价值和值对应于每个通路。纠正值(0.05)被用来作为一个阈值来确定通路显著富集的差异表达基因与基因组整体的背景。

2.7。实时聚合酶链反应分析

列出的引物(表而被放大1)。逆转录反应条件为3分钟×1周期95°C, 95°C 30年代,60°C 30年代和72°C 40 s×35周期。主要的混合物准备和循环条件(predenaturation 95为2分钟,变性为95,持续15秒,退火63 30秒,和伸长72 30秒)。样本的96孔板放置在Bori LineGene9600plus荧光定量PCR反应体系。

2.8。统计分析

分析的数据方差分析测试的一致性方差,然后t在SPSS22.0进行测试。被定义为统计分析的显著水平 。

3所示。结果

3.1。行为的结果

没有红肿的操作区域,伤口愈合良好,术后健康状况很好。建模后的一天,大鼠后肢的虚假的组中自由移动。膝关节的老鼠在SNI组和推拿组直垂着,无法flex和脚,一瘸一拐的在手术方面,显示显示SNI的成功模型准备。第七天(干预天0)建模后,老鼠在虚假的组能够自由移动后肢,而大鼠模型组和推拿治疗组有一个轻微的脚趾外翻,脚跛行步态,暂停或没有土地。28日(20干预后)建模后,大鼠后肢的骗局组自由移动;大鼠后肢的SNI组继续遭受爪挛缩,后脚掌完全暂停,不能接触地面,关节僵硬,显然和后肢肌肉萎缩。推拿治疗组大鼠后肢可能承担体重,和脚平放地上。脚趾可以放置在地面上,他们可以被分离,和步行肢体是可能的。

3.2。在老鼠身上比较累积疼痛评分

在建立模型之前,每组大鼠落在地上,两个后爪子和装载重量。每组的累积疼痛评分是相同的,都是0。结果表明(图1)经过7天的按摩干预,累计SNI组和推拿治疗组的疼痛评分显著高于虚假的集团( );10倍、20倍干预后,累积推拿治疗组的疼痛评分明显优于SNI组( )。然而,仍有某些区别骗局组和推拿组( ),表明三种方法和three-acupoint技术可以减轻疼痛的感觉有神经损伤的老鼠在某种程度上。

4所示。大鼠DRG的生物信息学分析

4.1。分析结果的质量控制

为了确保原始测序数据的质量,有必要评估前原始数据的质量分析。结果表明,4.3亿年读了,平均约4776万读取样本;问20的样本范围从97.97%到98.36%,问30从94.01%降至94.97%,95.93%到96.92%的所有样品可以映射到参考基因组,表明(表测序结果可靠2)。

4.2。度分析结果

20干预后,每组的大鼠DRG基因组测序用RNA。有369度的三组。三组度二维层次聚类分析可以清楚地显示虚假的集团之间的分离程度SNI组和推拿组(图2(一个))。维恩图解表明之间的差异表达基因有226推拿组和SNI组(图2 (b))。火山地图分析表明,度的分布按每组有统计学意义。诊断相关的差异基因表达在大鼠周围神经损伤和三种方法three-acupoint技术确定。虚假的组有93度与SNI组相比,23基因调节(图2 (c)),70个基因表达下调的虚假的组与推拿组。有138度在虚假的组和推拿治疗组相比,其中的66个基因调节,72个基因表达下调(图2 (d));226度推拿组和SNI组差异表达,其中50基因调节和176个基因表达下调(图2 (e))。有很多差异表达基因诊断相关的干预下三种方法和three-acupoint技术。结合大鼠的行为变化,这是猜测,疼痛知觉的变化SNI老鼠接受的三种方法和three-acupoint技术是由于诊断相关基因的变化。

4.3。去KEGG分析的分析结果

为了描述的功能度在SNI周围神经损伤后大鼠DRG和干预后三种方法和three-acupoint技术,浓缩度的分析每个样本进行了基于数据库。结果表明,前20名二级分类术语包括生物调控过程,对刺激的回应,和积极的调控的生物过程(图3(一个))。此外,还有生物功能如突触前过程,运动,成长,和分子传感器活动参与化学突触传递。去等生物过程的功能丰富活跃的开发过程的监管,积极调控的细胞过程,离子结合,蛋白质绑定,神经元膜结合细胞器,对有机物质反应,应对压力,对金属离子反应,神经元投射,等等(图3 (b))。

度被R-script筛选和基因表达变化大于1.5倍 。途径的意义进行了分析。总共有251 KEGG注释被发现。途径分类统计数据显示,代谢分类包括能量代谢、降解,和新陈代谢的外源性生物,核苷酸代谢,脂质代谢,附属因素,和维生素的新陈代谢,和遗传信息处理包括折叠、分类、退化,以及翻译。包括信号转导和信号分子相互作用,在生物系统中,排名前三的是免疫系统(31),内分泌系统(24)和神经系统(18);人类疾病包括癌症、免疫疾病、内分泌代谢疾病和神经退行性疾病;细胞过程包括细胞发生长度和细胞凋亡、运输、和分解代谢(图3 (c))。244浓缩通路被KEGG浓缩分析确定。图3 (d)表明KEGG排名前20名的重要途径,包括Wnt信号通路,IL-17信号通路,MAPK信号通路,氧化磷酸化,胆碱能突触,HIF-1通路。有5个代谢途径与显著差异( )。

5。实时PCR的结果

为了验证转录组测序结果,进一步分析基因的表达,发挥重要作用在修复神经受伤后按摩干预,5代表基因,Pdzd2 (ENSRNOG00000013140)和Camk2a (ENSRNOG00000018712),选择在这个研究。实时PCR验证进行MDK (ENSRNOG00000017560) C1ql3 (ENSRNOG00000017459)和Klf7 (ENSRNOG00046242)。结果表明,与虚假的集团相比,Pdzd2的表达,Camk2a, mdk, C1ql3,和Klf7(神经元突触调控基因)在SNI组增加,而这些基因的表达减少三分干预后受伤的老鼠。这些基因的表达趋势是一致的,通过RNA-Seq表明RNA序列数据可以可靠地反映基因表达的变化。KEGG数据显示,Wnt信号通路,Camk2a参与,MAPK信号通路密切相关,与通路的分析是一致的。这些结果表明,三种方法的影响和three-acupoint技术在SNI模型大鼠神经修复和再生可能由这些基因(图4)。

6。讨论

在这项研究中,我们确定了DRG在转录组水平的变化在周围神经损伤后,我们进一步探讨了DRG转录组外围干预后的变化。外围干预能显著抑制周围神经损伤的恶化,促进受伤神经的再生和修复,逐渐减少受伤的炎性水肿坐骨神经痛的一部分,加快清除变性,坏死和解体的产品,改善局部微循环,提高回收率的坐骨神经功能指数和缩短周期坐骨神经的损伤。复苏后,神经传导速度和延迟的异常率提高。外围的干预方法,临床疗效的中国推拿治疗周围神经损伤已经建立(22- - - - - -24),但相关机制不够明确。目前,许多研究都集中在特定的基因改变后神经损伤,但是缺乏研究基因治疗方法修复受伤的组织,在以前的研究中一直被忽视的RNA-seq和周围神经损伤。

在这项研究中,SD大鼠作为实验对象,SNI模型被用来模拟临床周围神经挤压伤。这三个方法和three-acupoint技术被选为干预方法。RNA-Seq技术用于定量估计的基因表达水平FPKM并探讨DRG基因序列的变化使用三种方法和three-acupoint技术有神经损伤的老鼠。在“三种方法,“point-pressing方法变暖经脉和激活络脉的功能,调节气流量,主要是用于缓解疼痛。拔的方法缓解痉挛的作用,分离粘连,治疗麻木,疼痛由神经压迫造成的。揉捏法是一种重要的方法来缓解肌肉痉挛和受伤的地区也可以减轻疼痛25]。“三分”是Yinmen点(BL37),成山(BL57),和Yanglingquan点(GB34);“三分”是位于Foot-Taiyang膀胱经络和Foot-Shaoyang胆经的,符合的原则选择分在针灸经络和地方点;“三分”是位于坐骨神经及其分支;Yinmen点位于坐骨躯干和成山点胫骨坐骨神经的神经分支。上和Yanglingquan穴位位于腓总神经,坐骨神经的一个分支,和这三个穴位周围股二头肌,腓肠肌,分别和胫骨前肌。因此,操纵这些“三个点”可以刺激穴位,同时神经和肌肉,所以三个刺激网站被称为“acupoint-nerve-muscle地区。”

去分析证实,在诊断相关差异表达基因参与许多生理过程,包括生物的监管,对刺激的回应,突触前化学突触传递过程,能动性,活动分子传感器。他们也富含离子绑定、神经元膜结合细胞器和压力。生物过程包括对金属离子的反应和神经元投射。这些结果表明,三种方法和three-acupoint技术可以通过许多潜在的促进周围神经损伤的修复机制。这个实验侧重于经济复苏的轴突神经受伤的使用三种方法和three-acupoint技术。结果表明,三种方法和three-acupoint技术可以改变诊断相关基因表达,促进轴突生长和疼痛恢复受伤的神经,并最终提高周围神经损伤在SNI老鼠。这是我们组的与以前的研究一致。KEGG通路富集在Wnt信号通路,IL-17信号通路,MAPK信号通路,氧化磷酸化,胆碱能突触,等等,这表明基因水平的变化包含三种方法的三点技术修复受伤的神经通路有关。以前的研究已经表明Wnt信号是神经性疼痛的一个重要途径26,27];IL-17神经性疼痛是一个潜在的治疗目标,导致神经性损伤后对疼痛的神经炎症反应和过敏(28],p38 MAPK在神经再生中发挥着重要的生理作用(29日]。重要的是要控制炎症的发生神经损伤的恢复。Wnt信号通路和IL-17信号通路代表的主要类别。在这项研究中,超过7基因的Wnt信号通路在神经损伤后表达不同。rt - pcr验证Camk2a, Wnt信号通路的重要基因,并演示了Wnt信号通路的重要性在周围神经损伤的修复,这是与之前的神经损伤有关。伤口愈合的关于基因表达的研究是一致的。

周围神经再生是一个复杂的过程。初始周围轴突损伤将促使感觉神经元准备随后的周围或中央轴突损伤后再生,激活内在的背根神经节神经元再生的能力,是由各种各样的分子反应和信号通路(30.]。RNA-Seq数据的研究表明,三种方法的干预和three-acupoint技术可以减少周围神经损伤,增加Pdzd2的表达,Camk2a, mdk C1ql3, Klf7基因损伤。蛋白质交互模块的PDZ领域起着重要的作用在突触连接组件之间的交互31日]。突触连接积累各种分子参与神经传递和突触可塑性。电压门控钠离子通道NaV1.8只是表达疼痛的神经元和疼痛通路中发挥着重要作用。结果表明,Pdzd2和侯,发挥协同作用在调节NaV1.8在感觉神经元的表达32]。去分析表明,BP Camk2a功能与神经突触可塑性调节、MAPK信号级联,Wnt信号通路,调节钙通道和树突形态发生。CC函数包括突触后密度和突触前膜。老鼠缺乏Camk2a表达在神经元的学习空间,内存赤字,和精细动作。行为变化包括受损的技能,社会互动细微变化,树突棘密度降低(33]。RNA-Seq数据在这个研究表明,Camk2a调节周围神经损伤后表达下调过程中包含三种方法和三分干预修复。这表明Camk2a是一个关键基因治疗周围神经损伤的使用按摩。Midkine (Mdk)是一种生长因子参与开发和各种组织的修复,尤其是神经组织。周围神经损伤后缺乏Mdk变性和再生的关键因素。它作为一个修复神经营养因子。操纵的供应Mdk可以提供一个有趣的治疗周围神经损伤的治疗选择34]。这项研究表明,BP Mdk涉及的函数的负调控神经细胞凋亡。C1q13神经分泌蛋白,以前的研究已经表明C1q13-deficient老鼠表现出更少的兴奋性突触和不同的行为异常35]。去分析表明,C1q13 BP的生理功能包括突触的监管组织。RNA-Seq显示C1q13基因表达的DRG的神经修复前后大鼠发生重大的改变。Klf7是一种转录因子,刺激雪旺细胞增殖和轴突再生的周围神经损伤后(SC)。这是一个有前途的治疗转录因子在神经损伤(36]。研究发现增加CTB-labeled DRG神经元,灯丝,P0和S100哈格里夫斯测试,进一步支持KLF7受伤的神经系统,它充当一个刺激转录因子(37]。结合RNA-Seq和rt - pcr的结果,我们发现Klf7基因表达的调控可能是一个潜在的治疗周围神经损伤的策略。

总之,促进周围神经损伤恢复使用三种方法和three-acupoint技术包括各种生物功能和基因表达的变化在多个KEGG途径和促进受伤的修复和再生神经通过多种生理过程。差异基因表达分析使用RNA-seq不仅提供了信息选择组的基因但还提供了整个鼠标转录概况信息。这些基因可能无法识别的功能,因为只有少数的前20,表达下调基因已经被科学证明neurorepair-related功能。本研究的主要缺点是,只有一个单一的时间点进行数据收集。未来的研究将结合不同的时间点来收集和分析数据以研究动态生物过程更加广泛和更好的解释修复受伤的疼痛障碍的神经机制。此外,我们将进一步研究差异表达基因的功能还没有被确认,以便促进我们理解神经修复的机制,预防和治疗周围神经损伤。

7所示。结论

周围神经损伤后,一些基因的表达在DRG增加或减少。三种方法和three-acupoint技术作用于SNI老鼠可以减少调节基因的表达和增加DRG中表达下调基因的表达,这对正常基因的表达往往因此可以促进周围神经损伤的修复和再生(图5)。RNA-seq在这项研究中获得的数据已经被证明是可重复的,rt - pcr验证。本研究提出的理论支持临床按摩治疗周围神经损伤及其预防和治疗提供了科学依据的神经性疼痛。

数据可用性

我们从RNA-Seq获得的原始数据是可用的国家生物技术信息中心(NCBI)序列读取存档(SRA)提交SUB6659208数量。

伦理批准

本研究通过动物保健和使用委员会制度。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

作者感谢教授Yu田元贡献本研究的设计和实现。莫颜峻和邵帅辅助设计的实验。罗Yu-ting和沈易建联表现动物手术、行为测试,收集和组织。张Yu-mo进行生物信息学分析和rt - pcr验证。史蒂文Wong协助起草手稿。陆Meng-qian和其他执行统计数据。作者也非常感谢刘先生天主对他有用的讨论。

确认

作者收到资助研究,本文的写作和出版的中国国家自然科学基金(81674094和81674094号)和北京自然科学基金(7192113)。