文摘
背景。脉冲射频(脉冲)背根神经节(DRG)已经被有效地应用于缓解神经性疼痛,然而疼痛机制减少由于这种治疗不彻底澄清。活化的小胶质细胞,脑源性神经营养因子(BDNF)、磷脂酰肌醇3-kinase (PI3K)和磷酸化细胞外signal-regulated激酶(p-ERK)脊髓被证明参与开发神经性疼痛。也,只是知道,脉冲重复频率在神经损伤大鼠DRG抑制小胶质激活。在这里,我们的目标是探讨脉冲治疗是否能调节脑源性神经营养因子的水平,PI3K和p-ERK老鼠幸免的脊髓神经损伤(SNI)通过抑制脊髓小胶质细胞的激活,以缓解神经性疼痛。方法。老鼠与SNI鞘内用二甲胺四环素治疗(具体小胶质细胞抑制剂)或同样体积的二甲亚砜每天一次,开始从1 h神经横断前7天。脉冲重复频率附近应用L4- l5的大鼠DRG SNI 45 V 6分钟术后第七天,而free-PRF老鼠没有脉冲治疗。撤军的阈值进行了研究,脊髓水平的电离钙结合适配器分子1 (Iba1), BDNF, PI3K,和p-ERK的计算是通过免疫印迹分析,逆转录-聚合酶链反应和免疫荧光。结果。爪子撤军机械阈值和爪子撤军热延迟减少身体的同侧的后爪SNI后,脊髓水平的Iba1, BDNF, PI3K和p-ERK增加后21天在SNI与基线相比 )。鞘内注射的二甲胺四环素逆转了SNI-induced Iba1触诱发痛和增长水平,BDNF, PI3K和p-ERK。阈值恢复部分撤军后一个脉冲治疗14天后,和SNI-induced小胶质细胞过度活跃,BDNF upregulation, PI3K和ERK的磷酸化脊髓减少D14由于PRF过程。结论。小胶质BDNF、PI3K和p-ERK在脊髓抑制治疗的脉冲重复频率在大鼠DRG缓解SNI-induced神经性疼痛。
1。介绍
神经性疼痛是一种难治性疼痛产生的直接后果病变或疾病影响躯体感觉系统(1,2]。各种各样的周围神经损害,包括糖尿病、带状疱疹病毒、人类免疫缺陷virus-acquired免疫缺陷综合症,和压缩损伤,会导致神经性疼痛(3]。神经性疼痛,表现为痛觉过敏或异常性疼痛,与中央和周边敏感的神经元在痛觉受器4,5]。很难治疗由于复杂的病因和机制,包括一些神经递质系统,受体,离子通道,和细胞类型6,7]。因此,目前药物治疗很少解决棘手的病人疼痛。脉冲射频(脉冲),一种电磁刺激,已成功用于治疗患有神经性疼痛(8,9]。脉冲重复频率对背根神经节(DRG)被认为是优于连续射频因为脉冲的电极头温度不超过42°C在整个过程中,以避免大规模组织破坏。如今,脉冲重复频率的应用对DRG治疗神经性疼痛大大帮助临床医生。但是,这种疗法的镇痛机制还不是很明确。
最近,脉冲重复频率管理在与周围神经损伤大鼠DRG(句)下调小胶质激活脊髓和改善疼痛行为(10,11]。小胶质细胞是常驻巨噬细胞在中枢神经系统(CNS),他们对刺激做出反应,可能会影响体内平衡和诱导病理改变12]。由于多种类型的神经系统损害,小胶质细胞可以通过累进级数变换活性状态的细胞和分子的变化,包括形态学肥大、增殖,和各种基因的表达(13]。活化的小胶质细胞扮演着一个关键角色,周边和中枢敏感化发展神经性疼痛的条件(14]。他们分泌脑源性神经营养因子(BDNF),这是一个关键microglia-neuron信号分子,盖茨在脊髓异常疼痛的处理(15]。许多研究支持在痛苦中BDNF的pronociceptive作用过程在周边和中枢神经系统。Nociceptor-derived BDNF参与炎性疼痛和microglial-derived BDNF在神经性疼痛16]。最近,刘等人。17)报道,BDNF参与colitis-induced脊髓中枢敏感化,和磷脂酰肌醇3-kinase (PI3K) /蛋白激酶B通路介导BDNF在脊髓采取行动。此外,第二信使生成PI3K可以激活磷酸化细胞外signal-regulated激酶(p-ERK) [18,19]。ERK激活发生在神经损伤后,小胶质细胞激活和抑制ERK可能抑制神经性疼痛发展(20.]。脊髓,主要集成中心的信息和敏化中心的起着至关重要的作用,是首选的疼痛医生施加神经调节来缓解神经性疼痛,如脊髓刺激。在先例不同动物模型、小胶质细胞BDNF, PI3K和p-ERK参与神经性疼痛的发展。然而,它仍不确定是否脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p-ERK脊髓控制慢性疼痛处理通过microglia-dependent机制。此外,脉冲重复频率的应用程序是否在DRG治疗神经性疼痛与小胶质细胞的表达下调水平有关,BDNF, PI3K和p-ERK脊髓需要进一步探索。
在这项研究中,小胶质抑制剂与幸免鞘内注射到老鼠神经损伤(SNI)肯定脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p-ERK脊髓通过microglial-dependent机制。我们还研究了脉冲治疗是否能调节脑源性神经营养因子的水平,PI3K和脊髓的p-ERK SNI通过抑制大鼠脊髓小胶质细胞的激活来缓解神经性疼痛。
2。材料和方法
2.1。动物
男性Sprague-Dawley (SD)大鼠(四个月大,250 - 280克)是来自福建医科大学实验动物中心、福州。动物们被安置在12 h光暗周期22°C-24°C和随意获取食物和水在药房学院福建医科大学(防晒指数类)。所有程序批准的这项研究是福建医科大学实验动物福利伦理委员会(SYXK 2016 - 0007)。
2.2。治疗组和设计
九十年雄性SD大鼠随机(根据随机数字表)的方法分为六组(n= 15,每个):虚假的集团,SNI集团SNI +编码脉冲群,SNI + free-PRF集团SNI与二甲胺四环素(SNI + M)集团和SNI二甲亚砜(SNI + DMSO)组。
2.2.1。二甲胺四环素对小胶质细胞水平的影响,BDNF, PI3K和ERK在脊髓
下列四组的老鼠(骗局,SNI、SNI + M和SNI + DMSO)进行了研究。所有大鼠(除了虚假的集团)受到SNI的坐骨神经。老鼠在SNI + M和SNI + DMSO组鞘内用二甲胺四环素治疗(具体小胶质细胞抑制剂)和同等体积的DMSO溶液,分别。疼痛行为和电离的水平钙结合适配器分子1 (Iba1), BDNF, PI3K和p-ERK脊髓被化验和比较四组。
2.2.2。脉冲重复频率对DRG神经性疼痛和小胶质细胞的水平,BDNF, PI3K和ERK在脊髓
四组观察,包括虚假的、SNI SNI +脉冲重复频率,SNI + free-PRF。所有大鼠(除了那些虚假的集团)受到SNI的坐骨神经。在术后第七天,脉冲重复频率是应用于身体的同侧的L4- l5DRG SNI +脉冲组和SNI + free-PRF组作为一个控制。疼痛行为和Iba1水平,BDNF, PI3K和p-ERK测量。
•冯•弗雷行为测试爪子撤军机械阈值(PWMT)和斯汀热成像爪子撤军热延迟(PWTL)之前执行的操作(D0), 1日(D01), 3日(D03)、5日(D05)和第7 (D07)术后几天,和1号(D1), 3日(D3)、5日(D5)、7日(D7)、9日(D9)、11日(这里),14日(D14)天之后完成编码脉冲治疗或鞘内注射。Iba1的表达水平,BDNF, PI3K和p-ERK脊髓被免疫印迹分析,测量逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)和免疫荧光D14。rt - pcr,免疫印迹和免疫荧光被应用于五大鼠。
2.3。神经性疼痛模型
句进行根据Decosterd SNI模型描述和伍尔夫21]。简而言之,河鼠对常见的坐骨神经在胫骨,三根分叉部腓,腓肠神经麻醉下的老鼠被暴露。胫骨和腓总神经被切断,留下腓肠神经完好无损。执行的程序都以同样的方式不横切神经假组。然后,肌肉按摩回到地方,关闭切口。所有操作都是由相同的研究人员。
2.4。鞘内导管和药物管理局
老鼠收到SNI前鞘内导管植入术。他们与腹腔内注射10%水合氯醛麻醉(300毫克/公斤)。L PE-10聚乙烯之间植入导管5和L6椎骨到达脊髓蛛网膜下腔的一项研究中描述(22]。外的部分导管插入并固定在皮肤上的伤口关闭。导管植入术后的老鼠显示神经赤字被安乐死。二甲胺四环素是溶解在无菌5% DMSO 95%生理盐水。老鼠鞘内用二甲胺四环素治疗(40毫克/公斤,Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)或同等体积的DMSO每天一次7天,1小时前神经横断。药物或车辆通过植入导管鞘内注射10μ其次是10 l的解决方案μl的冲洗车辆。每个注入持续了至少5分钟。注射后,针保留原位2分钟前被撤回。
2.5。脉冲重复频率对DRG
老鼠接受了脉冲治疗SNI后7天。他们使用注射10%水合氯醛麻醉(300毫克/公斤)。正确的信用证4- l5DRG暴露在SNI + free-PRF和SNI +编码脉冲组通过椎板切除术和facetectomy,而不损伤硬脑膜。一个射频电极(类型20克,长5厘米,4毫米主动提示)附近放置相应的DRG通过直接可视化使用射频设备(Cosman医疗公司,伯灵顿,妈,美国)运动刺激试验是用来代替感官刺激试验。脉冲波应用后进行运动刺激测试通过下肢的肌肉收缩。脉冲波的刺激参数设置如下:2脉冲/秒;时间= 20 ms;输出电压= 45 V;最高温度= 42°C;和刺激时间= 6分钟。PRF治疗后,射频探头被删除了,肌肉被关闭。SNI + free-PRF组中,电极是将以同样的方式没有任何刺激。
2.6。行为测试
老鼠被放置在一个塑料箱(20×25×15厘米3实验之前),习惯了15分钟。PWMT评估使用·冯·弗雷丝(美国IL Stoelting)上下方法中描述的一项研究[23]。每个丝垂直地适用于身体的同侧的领土,vibrissal垫的中心附近。避免进一步接触灯丝,快速车削刀架,抓刺激区域,或攻击灯丝被认为是一个积极的回应。allodynic鼠被定义为一个佩恩表的编制者50% < 4.0 g(撤军nonnoxious触觉刺激)的反应。
PWTL测试通过测量后的戒断反应爪子加热使用足底刺激试验装置(TaiMeng科技、成都、中国)所描述的哈格里夫斯et al。24]。截止延迟30年代以避免热损伤。撤军延迟在每个时间点的平均延迟三个分离的间隔5分钟。天一样的测试进行了冯·弗雷测试,和测试都是由相同的研究人员是盲人组分配的老鼠。
2.7。免疫印迹分析
腰椎脊髓(L4- l5同侧象限)病变的收集,分析,和均质蛋白裂解缓冲的蛋白酶抑制剂和孵化冰上10分钟。样本离心机在12000 rpm 15分钟在4°C。上层清液中总蛋白质含量是决定使用Bio-Rad直流蛋白质化验设备。等量的蛋白质被10% sds - page和转移到解决PVDF膜(微孔、马、美国)。膜被封锁的5%脱脂牛奶在室温和孵化一夜之间在4°C主要抗体(兔子anti-Iba1 ab178680 1: 1000年,Abcam,美国;兔子anti-BDNF ab108319 1: 1000年,Abcam,美国;兔子anti-p-ERK, # 4370, 1: 1000年,细胞信号技术,美国;兔子anti-PI3K ab40776 1: 2000年,美国Abcam)。然后,膜被孵化与辣根peroxidase-conjugated二级抗体(热科学1:5000年,美国)在室温下2 h。最后,过氧化物酶活动使用ECL免疫印迹检测可视化工具包(Beyotime,中国)。 Western blots were quantitated using an image analysis system (Bio-Rad, USA). After normalization withβ肌动蛋白,数据被当作是百分比的总蛋白质的比例各自的信号强度水平发现虚假的组动物,显示100%。
2.8。实时rt - pcr
的总rna提取L4- l5脊髓侧象限使用试剂盒使用高容量和反向转录cDNA逆转录工具包(美国应用生物系统公司,CA)。实时PCR进行混合使用电力SYBR绿色大师(应用生物系统公司)根据制造商的协议和分析通过rt - PCR检测系统(应用生物系统公司)。实时PCR协议如下:逆转录酶被激活,互补脱氧核糖核酸合成为5分钟(50°C), PCR被激活(95°C 3分钟),40周期的变性进行了30年代(95°C),退火和延伸了1分钟60°C。PCR的末尾,融化曲线分析是由缓慢增加的温度从60°C到95°C。2.2数据分析使用软件使用周期阈值(Ct)值的读出和相对正常的水平β肌动蛋白。
使用的引物如下:Iba1: 5′-GCAAGGATTTGCAGGGAGGA-3′(向前),5′-TGGGATCATCGAGGAAGTGC-3′(反向)脑源性神经营养因子:5′-AATAATGTCTGACCCCAGTGCC-3′(向前),5′-CTGAGGGAACCCGGTCTCAT-3′(反向)PI3K: 5′-ATTTCCAGTGGGTGAGGCAG-3′(向前),5′-CTCATGGTAGCCGGTGACTC-3′(反向)p-ERK: 5′-ATTATGTGCACCGGGACCTG-3′(向前),5′-TGTCATCCTGGAGGTAGCGA-3′(反向)β肌动蛋白:5′-ACTCTGTGTGGATTGGTGGC-3′(向前),5′-AGAAAGGGTGTAAAACGCAGC-3′(反向)
2.9。免疫荧光组织化学
200毫升的老鼠灌注生理盐水紧随其后的200毫升0.1磷酸盐缓冲剂(pH值7.3)包含4%的多聚甲醛。L4- l5脊髓被移除,24 h后缀在4%多聚甲醛,允许在30%蔗糖在平衡磷酸盐(PBS)一夜之间在4°C。(4 - 6横向脊髓部分μm)是减少使用低温恒温器,收集到0.01 PBS, pH值7.3。与PBS洗后,组织渗透Triton x - 100和0.3%主要抗体兔子anti-rat Iba1, BDNF, p-ERK和PI3K(兔子anti-Iba1 ab178680 1: 100年,Abcam,美国;兔子anti-BDNF ab108319 1: 500年,Abcam,美国;兔子anti-p-ERK, # 4370, 1: 200年,细胞信号技术,美国;兔子anti-PI3K ab40776 1: 200年,美国Abcam)。接下来,幻灯片包含1满是二级抗体μ美国米4′6-diamidino-2-phenylinedole(σ)。部分染色BDNF, p-ERK, PI3K双标记细胞类型特异的Abs为使用小胶质细胞(Iba1)。细胞核与DAPI染色(5μg / mL;美国Beyotime)。荧光信号检测使用荧光显微镜(日本奥林巴斯),图像捕获和信号co-localization测量使用MetaMorph(美国分子设备)。面积分数量化使用图像J软件(Rawak软件有限公司、德国)。
3所示。统计分析
所有数据使用SPSS 20.0统计分析软件包(美国IL SPSS Inc .)和作为均值的平均值±标准误差(SEM)。所有数据绘制图表使用Prism 5.0(美国CA GraphPad)。数据分布后测试正常,行为数据,免疫印迹数据和酶联免疫吸附试验数据进行了分析使用重复测量(多个组×时间)方差分析(方差分析)。使用Bonferroni事后多重比较进行测试,以确定整体意义。方差分析显示显著差异时,两两对比的方法进行测试使用事后图基方法费雪的保护或者至少显著差异(LSD)事后考验。0.05的alpha值被认为是具有统计学意义。
4所示。结果
4.1。抑制脊髓小胶质细胞激活产生显著减少神经性疼痛SNI老鼠
与基线相比,SNI组显示持久的机械触诱发痛( ;图1(一))和热痛觉过敏( ;图1 (b))在他们的身体的同侧的爪子,它达到了一个峰值在第五天的观察和维护稳定的阈值直到最后撤军。没有发现重大的改变对侧的后爪在所有的组( ;数据1 (c)和1 (d)),类似于身体的同侧的爪子在虚假的集团( ;数据1(一)和1 (b))。机械触诱发痛和热痛觉过敏并不在鞘内注射的二甲胺四环素诱导。虽然退出阈值显著降低完成注射后在SNI + M组相比,那些虚假的集团( ;数据1(一)和1 (b)),他们仍然高于SNI中的值和SNI + DMSO组( ;数据1(一)和1 (b))。没有发现显著差异之间的SNI和SNI + DMSO组( ;数据1(一)和1 (b))。
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4.2。抑制小胶质细胞激活有助于Iba1的表达显著减少,脑源性神经营养因子,PI3K和p-ERK脊髓
在更高的放大,几乎所有的BDNF, PI3K和p-ERK免疫荧光硝唑核DAPI标记(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。BDNF的本地化,PI3K和p-ERK证实了小胶质细胞三与BDNF / Iba1 / DAPI标记,PI3K / Iba1 / DAPI和p-ERK / Iba1 / DAPI(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。免疫印迹分析(数据3(一个)- - - - - -3 (d)(图),rt - pcr分析4)和免疫荧光组织化学分析(数据5(一个)- - - - - -5 (e))在脊髓水平证明了Iba1, BDNF, PI3K和p-ERK低假组和增加在SNI侧脊髓和SNI + DMSO组( )。他们在SNI减少+ M组相比SNI组但仍高于D14虚假的小组 )。
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4.3。编码脉冲治疗导致神经性疼痛明显降低
事实上,句诱导长期机械触诱发痛( ;图6(一))和热痛觉过敏( ;图6 (b)自SNI后第一天,第五天达到高峰,并维护稳定的撤军阈值直到最后的观察与Sham-operated老鼠。没有观察到显著变化对侧的后爪( ;数据6 (c)和6 (d)在这项研究的持续时间)。身体的同侧的一侧也获得了类似的调查结果在虚假的集团( ;数据6(一)和6 (b))。在这项研究中,脉冲重复频率是应用于L4- l5SNI的老鼠的DRG 6分钟后第七天神经结扎;机械触诱发痛( ;图6(一))和热痛觉过敏( ;图6 (b))部分恢复SNI +脉冲组的单个应用程序后,从第一天的脉冲重复频率和维护在14天,相比之下,那些在SNI SNI + free-PRF组,但不可能回到pre-SNI基线。在SNI SNI + free-PRF组,爪子撤军阈值和爪子撤军延迟从postlesion保持在低水平7-21天。
(一)
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4.4。编码脉冲治疗脊髓Iba1的水平降低,BDNF, PI3K和p-ERK SNI老鼠
免疫印迹分析(数据7(一)- - - - - -7 (d)(图),rt - pcr分析8)和immunofluorescent和组织化学分析(数据5(一个)- - - - - -5 (d),9)在脊髓显示Iba1的表达水平,BDNF, PI3K和p-ERK SNI和SNI + free-PRF组显著增加而那些虚假的组在神经损伤( )。Iba1的水平,BDNF、PI3K和p-ERK SNI +脉冲组显著下调比SNI和SNI + free-PRF组( )但仍高于骗局D14集团经过单个应用程序的编码脉冲( )。
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5。讨论
在目前的研究中,SNI诱导小胶质细胞过度活跃和脑源性神经营养因子,增加持久PI3K和p-ERK upregulation脊髓和导致疼痛敏感。二甲胺四环素,鞘内注射疼痛一代的早期阶段,缓解机械触诱发痛和热痛觉过敏和逆转Iba1调节水平,BDNF, PI3K和p-ERK脊髓注射后中断。脉冲重复频率应用同侧的DRG的老鼠在SNI后第七天,也扭转了机械触诱发痛和热痛觉过敏。一个脉冲重复频率应用程序的好处至少持续2周后治疗中断。就像一个特定的小胶质细胞抑制剂,脉冲逆转的小胶质激活和表达BDNF, PI3K和p-ERK脊髓。
5.1。行为变化引起的脉冲重复频率对DRG的疗法
神经性疼痛是一种难治性疼痛。传统的止痛药,如阿片类药物和非甾体类抗炎药承受可怜的功效,产生许多副作用。因此,一个好的有效的治疗神经性疼痛是迫切需要的。脉冲重复频率已经用于治疗神经性疼痛和以最小的副作用已经显示出令人满意的疗效。脉冲重复频率电磁脉冲信号传达到目标组织的射频电极20 ms, 500 kHz射频电磁能量,其次是480毫秒间隔。周围组织的温度的脉冲重复频率不超过42°C到避免靶组织和神经损伤。DRG的椭圆形通货膨胀是背根在椎间孔的上部区域,其中包含一流的感觉传入神经元。DRG外围敏化的过程中扮演着非常重要的角色。疼痛的感觉神经元的DRG有害刺激被激活的周边和中枢神经系统传递信息。免疫的激活和immune-like背根神经节和脊髓胶质细胞导致赞成和抗炎细胞因子的释放,参与了脊髓疼痛的传输和中枢敏感化(25,26]。因为在感觉处理的调制的积极作用及其解剖可访问性临床干预,DRG已经成为一个优秀的临床疼痛治疗的目标。
脉冲重复频率的治疗DRG已被证实能改善疼痛有效。例如,Arai报道,PRF DRG提供缓解疼痛患者的椎体转移性疼痛(27]。范Boxem等人取得了类似的效果与脉冲治疗慢性棘手的腰骶神经根疼痛诊断相关(28]。这里,脉冲重复频率是应用于诊断相关治疗SNI引起的神经性疼痛。随着神经性疼痛的发展显著,达到了峰值点后7天SNI [29日),第七天被任命为PRF治疗时间在目前的研究。
各种实验神经性疼痛模型也被证明脉冲机械超敏反应的缓解疼痛的效果,有时热异常性疼痛。脉冲重复频率对慢性疼痛的影响仍很不符,可能是因为不同的治疗协议,不同的曝光时间,持续疼痛,刺激脉冲重复频率,疼痛模型,使用的物种。治疗5分钟脉冲刺激L5DRG的单边L5脊神经结扎(SNL)模型大鼠显著降低机械超敏反应和热镇痛(30.]。CFA-induced外围的炎性疼痛,脉冲重复频率的L4脊神经前只是接近DRG显著增加PWMT PWTL,但脉冲重复频率的坐骨神经midthigh只是增加PWTL [31日,32]。然而,这些研究集中在预防效应的脉冲重复频率,而不是治疗申请建立慢性疼痛综合征。他们表明,脉冲重复频率松了一口气,甚至逆转,机械过敏症和一些热异常性疼痛。然而,机械过敏症的镇痛效应被认为只有当脉冲应用于建立慢性疼痛(10,33]。一个重要的发现在田中等人的研究。34)是增加2 - 6分钟的曝光时间脉冲电流显示显著antiallodynic效果没有运动障碍。因此,本研究应用脉冲电流6分钟的L4- l5与SNI DRG的老鼠神经结扎后的第七天。PWMT和PWTL脉冲诊断相关治疗后显著增加SNI后7天到21天。这些结果与临床观察相一致,刘等人的结果。35诊断相关),进一步表明脉冲重复频率是一个有益的治疗神经性疼痛。重大发现在这项研究中,热痛觉过敏也是克制时脉冲重复频率申请成立慢性疼痛。我们还观察到神经创伤性机械触诱发痛和热痛觉过敏可以逆转对DRG甚至长期救济由单个脉冲重复频率脉冲停止之后,他们不可能回到pre-SNI基线。确切的机制脉冲对神经性疼痛的镇痛效果值得进一步研究。
5.2。机制,脉冲重复频率的止痛效果
5.2.1。减少小胶质细胞激活
越来越多的证据表明脊髓小胶质细胞的关键作用在神经性疼痛36,37]。不同类型的侮辱后神经系统,包括句、小胶质细胞是第一个成为激活数周。小胶质细胞转化为活性通过展示一系列渐进的细胞和分子表型变化,包括形态学肥大、快速增殖,调节多种基因的表达,和增加小胶质细胞的表达特征标记,如电离钙结合适配器分子1 (Iba1)。然后,炎性细胞因子被小胶质细胞释放,导致疼痛的发展hypersensitization long-persisting痛苦(38]。抑制剂的小神经胶质鞘内政府显示伟大的疼痛模型中的镇痛效果39,40),但它仅限于减少建立晚期疼痛(41]。在这项研究中,二甲胺四环素是鞘内注射与SNI老鼠在早期阶段。疼痛是完全被二甲胺四环素药品管理局的期间。然而,治疗中断后撤军阈值略有下降,镇痛效果持续21天。此外,脊髓小胶质细胞水平会受到限制。我们的发现也表明小胶质细胞抑制尽早可以获得更多的长期缓解疼痛。
脉冲重复频率的治疗DRG可以诱导细胞形态学的变化。轴突超微结构的变化,包括不正常的膜和线粒体的形态和微丝和微管的破坏和混乱在C -和观察δ纤维在电子显微镜(42]。最近,据报道,脉冲重复频率的镇痛效应可能来源于长期调制通过改变基因表达的细胞功能。疼痛调节基因的表达,如促炎基因回到基线值。众多报道表明小胶质细胞在脊髓背角痛苦便利化是至关重要的。脉冲重复频率在老鼠模型应用于诊断相关的神经性疼痛透露,建立机械超敏反应减少,和小胶质细胞的激活在脊髓背角明显减10,11]。本研究的结果与先前的研究一致。机械触诱发痛和热痛觉过敏被逆转,伴随着显著下调表达的Iba1维持单个应用程序的编码脉冲后14天。这表明,脉冲重复频率可能会抑制小胶质细胞的激活,导致疼痛的缓解。
5.2.2。扭转小胶质脑源性神经营养因子的增加,PI3K和p-ERK脊髓SNI的老鼠
一些研究表明,神经营养因子,特别是BDNF,疼痛介质/调节器发挥重要作用[43,44]。脑源性神经营养因子是一种分泌蛋白和家庭的一部分生成的家人。Neutrophins采取行动促进神经元存活、生长、分化的新神经元和突触。然而,它有一个对脊髓神经损伤后有害的影响。董里发现P2X4受体激活小胶质表面促进了脑源性神经营养因子的合成和释放,从而加速中枢敏感化和维护神经性疼痛(45]。Microglia-derived BDNF是一个关键microglia-neuron信号分子,盖茨在脊髓异常痛觉。增强脑源性神经营养因子,引起痛觉过敏,也导致脊髓小胶质细胞的激活在前馈方式,和脑源性神经营养因子的功能抑制信号逆转异常性疼痛与SNI老鼠。的调节表达BDNF在脊髓中发现SNI后21天在目前的研究中,与先前的报道一致,进一步表明,BDNF高度参与神经性疼痛。
PI3K,脂质激酶磷酸化D3磷脂酰肌醇脂质产生π的位置(3、4、5)P3,作为一种第二信使。一些进展PI3K在难治性疼痛的作用。足底切口PI3K的诱导时间激活小胶质细胞,和抑制PI3K阻止疼痛的行为引起足底切口(46]。PI3K的特定抑制剂应用SNI之前减少了L5 SNL引起的神经性疼痛的行为(47]。PI3K信号通路在小胶质细胞表达,参与骨癌痛(48]。骨癌疼痛模型大鼠的治疗PI3Kcb-specific携带RNA导致疼痛反应行为的抑制(49]。PI3K的表达是化验后21天在脊髓SNI在目前的研究。PI3K被发现显著增加SNI后21天。因此,目前的结果暗示PI3K在神经性疼痛也发挥了重要作用。
兵,增殖蛋白激酶家族的一员,可以传输大量细胞外信息到细胞内的反应。小胶质细胞ERK信号通路的调节各种类型的疼痛,和抑制p-ERK可以缓解疼痛(50,51]。p-ERK在脊髓水平被发现显著调节在本研究SNI后21天。这些结果与其他报告一致52)和建议激活ERK导致神经性疼痛的发展。
小神经胶质细胞,BDNF、PI3K和p-ERK被证实参与本研究发展中神经性疼痛。然而,是否脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p ERK在大鼠脊髓与SNI调节慢性疼痛处理是通过microglia-dependent机制仍未确定。为了弄清这个问题,首先,我们采用了三重的方法与BDNF / Iba1 / DAPI标记,PI3K / Iba1 DAPI和p-ERK / Iba1 / DAPI证明BDNF的本地化,PI3K和p-ERK小胶质细胞。其次,二甲胺四环素(小胶质细胞抑制剂)和SNI鞘内注入大鼠早期阶段;Iba1水平的增加,BDNF, PI3K和p-ERK脊髓都克制。因此,这些发现表明,BDNF, PI3K和p-ERK可能是脊髓microglia-dependent的方式释放。
尽管编码脉冲对DRG神经性疼痛的镇痛疗效确切,机制并不完全理解。脉冲重复频率的影响,通过电磁场干扰或以某种方式调节疼痛信号传输和处理网站和中枢神经系统基因表达。Iba1的抑制,BDNF、PI3K和p-ERK脊髓中是非常重要的在缓解神经性疼痛与SNI在目前的研究中,老鼠和脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p-ERK脊髓可能发生在microglia-dependent方式。自编码脉冲在大鼠DRG的治疗神经性疼痛可以通过减少小胶质激活诱导缓解疼痛,我们推断,脉冲重复频率调节脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p-ERK脊髓缓解神经性疼痛。正如我们假设,BDNF的表达增加,PI3K和p-ERK 21天同时表达下调6分钟SNI后脉冲疗法。因此,这些结果表明,脉冲重复频率治疗DRG可能减弱神经性疼痛减少脑源性神经营养因子的释放,PI3K和p-ERK microglia-dependent脊髓。
6。限制
这项研究有一些局限性。首先,只有短期效果的脉冲重复频率对DRG探索。其次,在活的有机体内在PRF-treated老鼠没有潜在的记录。第三,选择只有一个时间点测定Iba1的水平,BDNF, PI3K和p-ERK。第四,脑源性神经营养因子之间的关系,PI3K和p-ERK没有调查。更详细的研究对脉冲重复频率DRG缓解神经性疼痛是必要的。
7所示。结论
脉冲重复频率的应用对DRG反向SNI-induced治疗期后神经性疼痛。这种治疗的机制可能是抑制小胶质细胞和BDNF水平下调,PI3K和p-ERK microglia-dependent脊髓。它支持编码脉冲治疗作为一种有价值的干预慢性神经性疼痛。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者要感谢金融支持省级卫生系统。本研究由福建省医学创新的项目(2016 - cx - 3和2018 - cx - 6)。