文摘

介绍。主时钟,它位于视交叉上核(SCN),协调生物钟基因存在于肝脏同步生活节奏和生物活性与周围的环境。“逆转喂养扰乱了生物钟基因的表达在肝脏。最近,一种新型的角色PPAR -γ作为管理者在关联昼夜节律和新陈代谢。本研究调查了PPAR -的影响γ受体激动剂吡格列酮(PG)原理生物钟基因的mRNA表达谱和炎症相关的基因在小鼠肝脏反哺而中断。方法。老鼠被随机分配到daytime-feeding和晚间的喂食组。老鼠daytime-feeding团体得到了食物从早上7点到晚上7点,和老鼠在晚间的喂食组得到了食物从晚上7点到早上7点。PG的剂量服用20毫克/公斤/ os作为水中悬浮体40μ我在早上7点或7点。每组由12个动物。8天的喂养干预,老鼠被颈椎脱位牺牲中午(5小时后光发作(晕))和午夜(光环17)。肝脏的表情Bmal1,时钟,Rev-erbα,Cry1,Cry2,Per1,Per2,Cxcl5,Nrf2,Ppar-γ定量逆转录聚合酶链反应测定。肝脏表达PPAR -γ,pNF——虽然κB, il - 6是由西方墨点法。葡萄糖、血浆铜蓝蛋白、总胆固醇、甘油三酯浓度,测定血清ALT和AST活动光度方法。零假设测试是PG和政府的时间没有影响时钟基因表达受反哺。结果。PG管理局在7点到晚间的喂食老鼠并没有透露任何影响时钟或炎症相关的基因的表达在午夜或中午。daytime-feeding组,PG摄入量在7点导致的增加Per2和Rev-erbα中午mRNA,增加Ppar-γ信使rna在午夜,减少Nfκb(p65中午)mRNA。一般来说,PG管理7点略规范化受损的生物钟基因的表达和增加抗炎能力受扭转喂食。这种模式是由生化衬底levels-glucose、总胆固醇、ALT、AST的活动。减少NF -κB导致抑制血清血浆铜蓝蛋白和肝组织中il - 6水平。根据我们的数据,PG摄入量在7点施加强大的正常化时钟基因表达的进一步增加Nrf2,特别是Ppar-γ和PPAR -γ表达与抑制Nfκb和pNF——虽然κB表达daytime-feeding老鼠。这些表情变化导致降低高血糖、高胆固醇血症、ALT、AST的活动。因此,PG了强有力的chronopharmacological影响管理时7点daytime-feeding老鼠。结论。我们的研究表明,扭转喂养诱导小鼠肝脏生理表达模式的破坏生物钟基因伴随着增加Nfκb和pNF——虽然κB和il - 6表达和减少Nrf2和PPAR -γ。PG恢复时钟基因表达谱和减少Nfκb,pNF——虽然κB, il - 6,以及增加Nrf2,Ppar-γ和PPAR -γ表达式。PG摄入量在7点是更有效的比7点钟逆转喂养老鼠。

1。介绍

主时钟,它位于视交叉上核(SCN),协调生物钟基因出现在周边器官(如肝脏、肾脏和心脏)和控制日常清醒状态、行为和生理功能同步生活节奏和生物活性与周围环境(1]。

主时钟基因主要是通过光暗周期携入的(1),而外围生物钟基因被摄食节律(携入的2]。将光暗周期改变主时钟基因的节奏,和改变喂养节奏改变了外周生物钟基因的节奏。这样的改变导致主人和外周生物钟基因的解偶联,从而导致高血压、睡眠障碍,葡萄糖耐受不良3,加剧了炎症反应。改变食物可用性说明细胞内在的层次肝细胞时钟机制和饲养环境(4]。肝脏时钟有营养处理中的核心作用和突出的应对白天喂(5,6]。逆转喂养的恶化可能导致炎症反应的差别,通过对这些基因的生存因素,如过氧物酶体proliferator-activated受体γ共激活剂1α(PGC-1α)和SIRT1 [7],生物钟基因相互作用[8,9]。结果表明,几种炎症相关基因与分子钟紧密相关,如核红色的两个相关因子2 (NRF2) [10,11),转录因子NF -κB (12),和嗜中性粒细胞趋化因子(C-X-C主题)配体5 (Cxcl5) [13),以及过氧物酶体扩散国受体-γ(PPAR -γ)[14- - - - - -16]。

受体激动剂PPAR -γ吡格列酮(PG)已被证明改变血压从nondipper七星在2型糖尿病患者。Thiazolidinediones,如罗格列酮和PG,属于一类insulin-sensitizing药物调节代谢的影响通过ligand-activated核转录因子PPAR -γ。Thiazolidinediones改善糖尿病患者的代谢紊乱和施加有益的影响(17,18]。PPAR -γ受体激动剂罗格列酮逆转生物钟基因mRNA的表达升高小鼠在胰岛素抵抗[19]。这些数据强烈表明PPAR -的重要作用γ在维持血压和心率的昼夜节律,这可能部分解释PPAR -的有益的副作用γ受体激动剂的心血管系统。这些发现证明了PPAR -小说的作用γ作为管理者在关联昼夜节律和新陈代谢20.]。

本研究调查了PPAR -的影响γ受体激动剂PG原则生物钟基因的mRNA表达谱和炎症相关的基因在小鼠肝脏逆转喂养而中断。

2。材料和方法

2.1。动物

八周大BALB / c单独雄性老鼠被安置在单独的笼子里,避免侵略12:12光暗周期(灯在7点钟,灯在晚上7点),可以随意提供食物和水。这项研究是通过波尔塔瓦州立医科大学的伦理委员会。老鼠被随机分配到daytime-feeding和晚间的喂食组。老鼠daytime-feeding团体得到了食物从早上7点到晚上7点,和老鼠在晚间的喂食组得到了食物从晚上7点到早上7点21]。PG的剂量服用20毫克/公斤/ os作为水中悬浮体40μ我在早上7点或7点。每组由12个动物。所有操作在红光下的黑暗阶段提供。图1显示了研究设计。

8天的喂养干预,老鼠被颈椎脱位牺牲中午(5小时后光发作(晕))和午夜(光环17)。肝脏被移除,左外侧叶的一部分样品立即冻结,保持在-80°C到使用。从右心室血液样本收集,通过离心分离血清。

2.2。RNA制备和定量逆转录聚合酶链反应

六只小老鼠在每两个时间点(光环05和光环17)是用于RNA提取。肝脏左外侧叶样本收集。总RNA提取肝脏利用RNA容易工具包(美国试剂盒)。

生成单链dna, RNA (≈1μg)使用QuantiTec反向转录®逆转录工具包(美国试剂盒)。

对于SYBR Green-based分析,cDNA相当于50 ng的总RNA从每个样本放大CFX96TM实时PCR检测系统(美国BIO-RAD)使用QuantiTec®SYBR-Green我PCR试剂盒(美国试剂盒)。

每个样本重复分析,确保数据的准确性。基因的表达被检测为2^{- - - - - -ΔCT}。所有的值都是标准化的看家基因的表达β肌动蛋白。

具体用于实时PCR引物的序列提供了表1。

2.3。免疫印迹分析

肝组织均质在裂解缓冲含有氟化phenylmethylsulfonyl TissueLyser LT(美国试剂盒)均质器。匀浆离心机在12.000 rpm 20分钟在4°C。总蛋白水平调整后,样本变性在加载缓冲10分钟95°C。样品(40μ克的蛋白质)在7.5% SDS-PAA凝胶分离,然后转移到硝化纤维膜止动剂®HAHY(美国Sigma-Aldrich)。膜堵塞5%脱脂奶粉2小时在室温和孵化一夜之间与兔子anti-PPAR - 4°CγSigma-Aldrich抗体(SAB4502262 1: 1000年,美国),兔子anti-pNF -κB p65抗体(Sigma-Aldrich SAB4301496, 1: 1000年,美国),兔子anti-IL-6抗体(Sigma-Aldrich SAB5700632, 1: 1000年,美国),兔抗β肌动蛋白抗体(美国Sigma-Aldrich ZRB1312)。洗后,膜与antirabbit孵化IgG-Biotin (B8895)、链霉亲和素,合共轭(18.152)。免疫反应性的乐队使用原子能委员会染色法染色工具包(美国Sigma-Aldrich)。

2.4。血清测量

葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯浓度,丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬酰胺转氨酶(AST)活性测定的分光光度法测定血清使用工具包Erba®曼海姆。血浆铜蓝蛋白的氧化酶活动决心spectrophotometrically根据Sunderman和野本的描述的方法24),与p-phenylenediamine作为衬底。

2.5。组织学分析

肝脏组织学分析,固定样本(左肝叶外侧)是嵌入在石蜡块。部分(4 - 5μ米)被切片机和与苏木精和伊红染色。形态和morphometrical使用光学显微镜分析。各种肝组织组件的比例是由显微镜Axio Lab.A1(卡尔蔡司、哥廷根、德国)软件。软件程序禅(蓝色版)2.5版本V1.0 04/2018 103年用于细胞计数和测量肝细胞细胞核的平均直径。

染色的最小集合包括苏木精和伊红())和Malory染色。综述了所有切片的病理学家。对于每一个切片,设立基本形式进行评估的主要组织学模式填写了切片的病理学家盲实验小组联系。

组织学检查表包括如下:(1)评估组织的肝细胞索和正弦曲线(0,正常;或1,损坏);(2)肝细胞细胞核的平均直径测量区域2(5最大核);(3)计算nonparenchymal元素(肺水肿)细胞(淋巴细胞、枯氏细胞和Ito) (25在1000年的区域μ米²在5个领域的观点×400(高通滤波器);和(4)评估肝细胞的膨胀,从0到3(0,正常肝细胞与立方形的形状和粉红色的嗜酸性胞浆;1,集群的出现圆形状和苍白的肝细胞细胞质通常网状)。虽然形状不同,大小非常类似于正常肝细胞;2是一样的1级放大肝细胞,正常细胞的至少2倍;和3与2类似,但是几乎所有的肝细胞改变。(5)小叶炎症被定义为两个或两个以上的焦点小叶内炎症细胞。焦点被数200×放大(0,没有;1,≥2每200×焦点领域);(6)门户炎症评估从低放大率(0,没有一分钟; 1, greater than min); (7) pigmented macrophages were assessed from 400× magnification similar to previous, 0/1; and (8) changes in the microcirculation were described as a sludge of erythrocytes (0, none to min; 1, greater than min); stasis of erythrocytes (0, none to min; 1, greater than min); and the phenomena of plasmostasis or cholestasis (0, none to min; 1, greater than min).

2.6。统计分析

执行统计分析使用GraphPad Prism 5.0(美国圣地亚哥GraphPad软件)使用描述性统计、单因子变异数分析,和因果Bonferroni测试的进一步计算Mann-Whitney测试未配对样本。2×2表统计,包括确切概率法,是用来比较的比例。< 0.05的值被认为是具有统计学意义的分析。

零假设测试是PG和政府的时间没有影响时钟和炎症相关的基因表达受扭转喂养。

3所示。结果

3.1。喂养干预和PG摄入量对生物钟的影响在小鼠肝脏基因表达

图2显示了生物钟基因的表达模式在小鼠肝脏后第八天开始喂养干预。

在晚间的喂食组的表达Per1,Per2,Cry1,Cry2,Bmal1在统计学上显著高于在午夜(光环17)比中午(光环05)( )。与此同时,的表达Rev-erbα高中午(光环05)。PG管理局7点钟没有影响时钟基因表达。相比之下,PG摄入量在7点稍微增加了Cry1和Cry2在午夜和表达式时钟中午表达式( )。

白天进食导致重要基因表达的变化。的表达Per1和Per2午夜水平下降的另一个模式,增加了一个中午( )。另外,我们观察到的下降Cry1和Cry2午夜的表情相比,夜间喂养。也显示出了类似的反模式Rev-erbα表达水平增加和减少中午(午夜 )。

PG摄入7点钟导致增加Per2表达在午夜Rev-erbα中午。PG管理局7点钟诱导的增加Per1,Per2,Cry1,Cry2,Bmal1表达式在午夜和减少Per1和Per2中午表达式。Rev-erbα午夜表达减少,并演示了一个中午进一步增加( )。

3.2。喂养干预和PG摄入量的影响在小鼠肝脏炎症相关的基因表达

图3显示在小鼠肝脏炎症相关基因的表达模式喂养干预。

在晚间的喂食组的表达Nrf2和Nfκb在午夜显著低于中午,和表达的Ppar-γ更高的午夜( )。

白天摄食诱导基因表达在统计上有显著差异。中午和午夜之间没有差别的表达Nrf2。我们观察到明显降低Nrf2中午和晚间的喂食组相比。

此外,显著减少Ppar-γ表达式是观察到午夜,中午和晚间的喂食老鼠相比。相比之下,一个显著增加Nfκb在午夜表达观察中午和晚间的喂食组相比。没有差异Cxcl5表达式。

PG政府在7点到晚间的喂食老鼠没有显著影响基因表达。我们收到了重要数据,PG摄入量增加下午7点Nrf2和Ppar-γ中午表达式。PG 7点钟daytime-feeding组管理导致的增加Ppar-γ表达式在午夜和减少Nfκb中午表达式。PG摄入量在7点导致的增加Ppar-γ表达式在午夜和减少中午( )。同时,我们观察到的增加Nrf2和Cxcl5表达和降低Nfκb中午表达式。

3.3。喂养干预和PG摄入量的影响在小鼠血清生化基质

表2总结了喂养干预和PG摄入量的影响在小鼠血清生化基质。

在晚间的喂食组,观察到在没有明显的统计学差异的葡萄糖水平,血浆铜蓝蛋白、甘油三脂、总胆固醇、ALT和AST的活动。白天摄食诱导葡萄糖的含量的增加,血浆铜蓝蛋白,甘油三酯,总胆固醇,ALT和AST的活动( )。PG管理局在7点或7点到晚间的喂食动物并没有透露任何影响基质进行调查。daytime-feeding组,PG摄入量7点钟只有AST活动水平下降。相比之下,我们观察到葡萄糖减少,血浆铜蓝蛋白、总胆固醇水平和活动后的ALT和AST PG摄入量(下午7点 )。

上述结果表明,扭转喂养诱导时钟和炎症相关基因的表达变化,和PPAR -γ受体激动剂PG也影响了这个表达式。因此,我们研究了扭转喂养和PPAR -的影响γ/ NF -κB / il - 6在小鼠肝脏炎症轴。

如图4,免疫印迹结果表明,与对照组相比(夜间喂养),PPAR -的表达γ在肝脏的daytime-feeding组显著降低。相比之下,白天喂pNF——虽然导致显著增加κB和肝组织中il - 6的表达。PG政府在7点或7点到晚间的喂食老鼠PPAR的表达——没有影响γ,pNF——虽然κB,或il - 6。当PG管理daytime-feeding老鼠7点钟,我们观察pNF——虽然略有减少κB和il - 6表达。PG管理局在7点减少pNF——虽然的表达κB和il - 6的水平控制老鼠。

3.4。喂养干预和PG摄入对小鼠肝脏组织学

组织病理学分析并没有显示出退化地区,纤维化,脂肪变性或microsteatosis实验动物。膨胀和微循环明显,但没有统计上显著的改变与对照组相比。表3总结了喂养干预和PG摄入量对老鼠的影响肝脏组织学。

在daytime-feeding未经处理的动物,一个杰出的发现是intrahepatocellular水肿7点(图13准备5(一个))。此外,嗜酸细胞(图5 (b))明显更频繁,而控制( )和daytime-feeding PG组(下午7点 ),由确切概率法如图所示。因此,PG摄入量在7点daytime-feeding动物嗜酸细胞体内的频率明显减少。

肺水肿的水平渗透在日间或晚间的喂食之间没有显著差异治疗组。然而,PG摄入导致肺水肿在上升daytime-feeding和晚间的喂食。PG摄入7点钟daytime-feeding动物导致肺水肿渗透水平最高的国家之一(图6)。偶尔,这些动物色素巨噬细胞,如图5 (c)。

肝实质的安排提出了“小核果”或“小叶”地区,点缀着中央小静脉和门管区。门管区包含门静脉、肝动脉的分支,和胆管。三个不同的“区域”是由这些结构:区1是毗邻门户,带3是最接近肝小静脉,带2是在(26]。我们测量了核区域2中,他们通常是最大的。

在daytime-feeding未经处理的动物,显著增加观察肝细胞的核直径。PG摄入导致下午7点相同的效果。但PG摄入7点钟明显只有从控制晚间的喂食不同治疗组(图7)。尽管在日间或晚间的喂食组没有显著差异,显示趋势似乎平衡所有的团体采取PG。

根据其他组织学检查表点,被发现两组之间没有明显的统计学差异。

4所示。讨论

人类自我平衡的系统已经适应了每天的变化,身体预计睡眠和活动时间。内源性生物钟位于下丘脑的视交叉上核回应太阳时。类似的时钟已发现外围组织,如肝脏(27,28]。将光暗周期改变主时钟基因的节奏,和改变喂养节奏改变了外周生物钟基因的节奏。这个变更导致增加对脂多糖,抑制自然杀伤细胞的细胞毒性活动,受损的活性氧产量及其消除,和解毒作用障碍(29日- - - - - -31日]。外围和主时钟基因节奏的解偶联逆转喂养导致脓毒症加剧炎症反应在幼童腹壁薄弱或致命的脂多糖的影响7,32]。重要数据被接收,在营养挑战liver-clock feeding-related信号对韵律性的影响变弱的其它外围组织,不管自己的时钟(33]。

逆转喂养可能损害颞表达的蛋白质模式形成联锁transcription-translation反馈环组成的七个公认的关键基因Per1,Per2,Cry1,Cry2,Rev-erbα,时钟,Bmal1。

我们的研究结果表明,老鼠在白天喂显著降低肝脏Per1,Per2,Cry2表达在午夜(光环17)比中午(光环05)。相比之下,的表达Rev-erbα是中午了。这些数据与其他观测22,34]。逆转喂养影响肝脏时钟基因表达显著:表达Per1,Per2,Cry1,Rev-erbα增加了中午。没有时间表达的差异时钟和Bmal1。类似的结果,白天摄食诱导生物钟基因收到拆开一项研究(7,35,36]。

同时,我们研究了几种炎症相关的基因的表达Nrf2,Ppar-γ,Nfκb(p65),Cxcl5。晚间的喂食老鼠的表达增加Nrf2和Nfκb(p65中午)相比,在午夜表达式。Ppar-γ有另一个表达谱在午夜表达增加。这些发现与之前描述数据肝组织(19,37,38]。逆转喂养取消的生理模式Nrf2表情,午夜的表达下降Ppar-γ,增加了午夜的表达Nfκb(p65)。的表达Cxcl5没有发生显著的变化。因此,逆转喂养影响外围时钟基因的变化节奏的小鼠肝组织伴随着表达下降Nrf2和Ppar-γ和表达的增加Nfκb(p65)。

这些转录因子相互之间复杂的相互作用网络和生物钟的分子组件。Nrf2调节的核心和稳定生物钟循环、耦合氧化还原和计时。小鼠肝细胞需要Nrf2维持一个正常的昼夜节律,并仔细观察肝细胞显示,Nrf2特别重视Cry2时钟蛋白质的基因的一部分。这样,Nrf2链接代谢信号的生物钟的滴答声39]。

时钟/ Bmal1-dependent Nrf2监管产生昼夜模式Nrf2信号,这背后有节奏的抗氧化剂和代谢酶的表达。在鼠标敲除模型中,Bmal /缺失导致肝细胞氧化还原的激活传感器Nrf2 [34,40]。

PPAR -γ是炎症和昼夜节律的调节(41]。另一方面,Per2 PPAR -可能控制活动γ通过经营作为其自然调制器。PPAR - Per2施加的镇压行动γ通过阻断其招聘目标启动子,一种机制,在概念上不同于镇压Per2:哭施加时钟:Bmal1 [42]。

Rev-erbα目标基因的PPAR -γ,是时钟的核心组件之一,虽然没有直接证据表明PPAR -γ发挥生理功能通过Rev-erbα(43]。

NF -κB应对各种各样的免疫调制剂是由核心蛋白质生理时钟,可上调NF -κ在缺乏Bmal1 B-mediated转录。此外,Bmal1抵消是个增加NF -的激活κB-responsive基因。时钟与p65蛋白复合物中发现亚基的NF -κB,其超表达与特定的磷酸化和乙酰化的增加转录活性形式的p65 [44]。

在daytime-feeding老鼠,有增加的葡萄糖水平,血浆铜蓝蛋白,lipids-triglycerides和总胆固醇。在这些老鼠,有肝细胞溶解与ALT增加优惠活动。这些数据支持,时钟中断导致葡萄糖代谢和胰岛素信号(45)以及脂质紊乱(46]。血浆铜蓝蛋白高度可能是通过激活NF -介导的κB通路(47]。我们的调查表明,白天喂导致pNF——虽然增加κB和il - 6水平,显示PPAR -促炎的转变γ/ NF -κB / il - 6轴。这些数据与肝细胞的观察,除了免疫细胞,也可能作为一个直接来源的il - 6和il - 6信使rna的转录控制下生产发生NF -κB (48,49]。此外,诺里斯CA等人表明,il - 6的合成肝细胞是正常反应常见肝刺激(50]。

daytime-feeding老鼠,我们观察到细胞间水肿,增加水平的嗜酸性的身体在肝脏组织,以及一个显著增加肝细胞的核直径。这些数据与观察,并行了生物钟在调解中扮演关键角色一些肝脏功能在生理条件下,和放松管制的慢性肝脏疾病包括非酒精性脂肪肝炎和酒精肝病(51]。肝细胞细胞核增大可能显示一个密集protein-DNA互动(52]。核的形状有明显的影响细胞的转录活动。最近的一项研究表明,基因表达的调节可以通过核形态和影响细胞分化期间可以彻底改造他们的染色质(53]。核被膜的蛋白质成分是许多研究的重点,这表明chromatin-proteins交互影响刚度的核54),并确定原子核内部的形状(55]。然而,脂质成分也是相关的。缺陷膜脂质会导致生产过剩的油脂和核膜扩张56),证明增加核大小、退化,预测从核膜中观察到两种酵母(57),黑腹果蝇(58]。

作为我们研究的下一个部分,我们检查了PPAR -的影响γ受体激动剂PG原则生物钟基因的mRNA表达谱和炎症相关的基因被逆转喂养的老鼠的肝脏。

最近,PPAR -的能力γ受体激动剂影响时钟基因表达是建议。Ribas-Latre et al。(2019)显示,罗格列酮恢复高脂肪食源性Bmal1招募及活动的变化在鼠肝59]。然而,缺乏PPAR - chronopharmacological方面的信息γ受体激动剂活性。

PG管理局在7点到晚间的喂食老鼠并没有透露任何影响时钟或炎症相关的基因的表达在午夜或中午。daytime-feeding组,PG摄入量在7点导致的增加Per2和Rev-erbα中午mRNA,增加Ppar-γ信使rna在午夜,减少Nfκb(p65中午)mRNA。一般来说,PG管理7点略规范化受损的生物钟基因的表达和增加抗炎能力受扭转喂食。这种模式是由生化基质如葡萄糖和总胆固醇水平。减少NF -κB导致抑制血浆铜蓝蛋白的水平。daytime-feeding组中,我们观察到,PG摄入导致下午7点增加PPAR -γ水平和pNF——虽然下降κB和肝脏组织中il - 6水平。我们的数据支持以前的报告(60],罗格列酮激活PPAR -γ抑制NF -κB炎症轴。

根据我们的数据,PG摄入量在7点施加强大的正常化时钟基因表达的进一步增加Nrf2,特别是Ppar-γ表达与抑制Nfκb表达daytime-feeding小鼠的肝脏。这些表达变化与降低高血糖并行,高胆固醇血症,ALT和AST的活动。一个重要的注意可能是一个克隆,PG肝外效果和可能会影响新陈代谢在这个模型。因此,PG chronopharmacological效应,可能会在7点。

第一个数据PG的能力来影响血压的昼夜节律在2型糖尿病患者(17]。正常化影响时钟中观察到小鼠(这也可能发生在病人服用thiazolidinediones)可能是由于一些Bmal1与PPAR -相互作用γ蛋白在染色质水平函数(61年,62年]。PPAR -γ配体减弱NF -κB信号(63年]。例如,通过Nrf2罗格列酮抑制LPS-mediated炎症,PPAR -γ激活(64年)变弱NF -κB / p65激活和Nox4表达在高glucose-induced氧化应激(65年]。此外,PPAR -γ是鼠标的转录激活细胞色素P450 2 a5,和它的节奏表达导致的生理功效肝脏的解毒系统(66年]。

吃饭时间之间有强烈的联系的证据,肝脏时钟,代谢体内平衡,和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)进一步肝脏炎症、纤维化、肝硬化和肝细胞癌(67年]。睡眠中断,白天嗜睡、睡眠质量和缺乏运动与非酒精性脂肪肝患者的严重程度(68年- - - - - -70年]。

对喂食时间和逆转的影响肝脏功能和形态。最近的数据表明,在鱼肝细胞形态的节奏以及光之间的交互和喂养周期在不同的肝脏代谢区(71年]。

重要的是要强调,PPAR -γ目前正在研究一种药物目标在非酒精性脂肪肝和由生理调节蛋白(72年,73年]。昼夜节律钟本身有潜力用作目标治疗非酒精性脂肪肝(74年,75年]。因此,它是重要的探讨小鼠肝脏组织病理学差异引起的扭转喂养以及日间和夜间PG剂量。

根据我们的组织学数据,PG摄入对小鼠肝脏也有影响,表现为nonparenchymal细胞的数量的增加,但这些细胞的贡献的昼夜节律性肝脏功能尚不清楚(76年]。此外,尽管统计无关紧要的数据恢复增加肝细胞的核大小、PG在7点是有利于扭转喂养老鼠。这一发现可能反映了PG增强protein-chromatin交互特别是在晚上服用。

在一起,我们的数据支持的假设相反喂养扰乱老鼠肝脏生理时钟基因的表达模式和代谢和炎症调控基因(Nrf2,Ppar-γ,Nfκb)与葡萄糖和脂类代谢,增加活动的ALT和AST,和肝脏组织病理学变化。PPAR -管理γ受体激动剂PG恢复生理表达模式,尤其是当PG承认在7点。这个恢复正常化与血液中的葡萄糖和脂质水平和肝脏形态。

本研究的限制可能是PG的肝外效应及其对代谢的影响在这个模型以及我们不能歧视pNF——虽然的水平κB /肝细胞和枯否细胞中il - 6。实验模型的持续时间可能不够的发展更重要的实验动物的变化。结果不能被转移到临床实践。未来的研究前景可能会进一步调查的炎性细胞因子和胰岛素抵抗在逆转喂养老鼠和其他动物模型的解偶联外围和主时钟基因的节奏。可能提供额外的调查排除肝外PG的影响及其对代谢的影响在这个模型。还需要进一步的试验临床观察来估计chronopharmacological PG在2型糖尿病患者的属性。

5。结论

我们的研究表明,扭转喂养诱导小鼠肝脏生理表达模式的破坏生物钟基因伴随着增加Nfκb和pNF——虽然κB, il - 6表达,减少Nrf2和PPAR -γ。

PG恢复时钟基因表达谱和减少Nfκb,pNF——虽然κB, il - 6,以及增加Nrf2,Ppar-γ和PPAR -γ表达式。PG摄入量在7点是比7点钟更有效。

数据可用性

所有的数据在时钟基因表达和炎症相关的基因用于支持本研究的发现包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究是研究项目的一部分0120号u101166”的致病的作用的研究生理分子钟在代谢疾病和全身炎症的发展和治疗方法针对这些过程的发展,“由乌克兰卫生部。