肝细胞特异性PPAR缺失γ.表达改善小鼠美联储蛋氨酸和胆碱缺乏饮食脂肪性肝炎的早期活动

抽象的

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的患病率在世界范围内呈上升趋势。迄今为止，NAFLD还没有一种被批准的特异性治疗方法，因此，了解导致NAFLD进展的分子机制非常重要。蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饲料用于再现小鼠NAFLD的某些特征。MCD饲粮可增加肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR)的表达γ.，Pparg)和脂肪酸转位酶(CD36，Cd36)，可增加小鼠和人肝脏脂肪酸摄取，促进NAFLD进展。在本研究中，我们评估了肝细胞特异性PPAR的作用γ.和CD36表达了MCD饮食诱导的早期事件的发展。具体而言，具有成人发作的小鼠，肝细胞特异性PPARγ.敲除肝细胞CD36过表达和不过表达的小鼠饲喂MCD饲料3周。肝细胞PPARγ.和/或CD36表达与MCD饮食诱导的脂肪变性的发展无关。然而，炎症基因和纤维化基因的表达似乎依赖于肝细胞PPAR的表达γ.和CD36。PPAR的表达γ.肝细胞中的CD36可能在调节NAFLD和STEATOHPOATISIT的某些特征中有关。

1.介绍

非酒精性脂肪肝疾病（NAFLD）正在成为慢性肝病的主要原因，并且它已经在全世界总人口患病率高[1］.肝细胞脂肪堆积(脂肪变性)与肝胰岛素抵抗、炎症、膨胀和最终纤维化是NAFLD的特征。非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是NAFLD的晚期病理状态，以肝炎症和肝损伤伴或不伴纤维化为特征。到目前为止，还没有fda批准的治疗NAFLD的药物，预计该疾病的患病率将继续增加[2，3.］.因此，需要理解的是调节NAFLD的进展以设计减少将来的治疗和反向NAFLD的代谢过程。不同的饮食小鼠模型被用来重现一些NASH的特征，以及它们之间是由蛋氨酸和胆碱缺乏（MCD）饮食诱导的脂肪性肝炎的模型。MCD节食迅速诱导部分由于增加肝脂肪酸摄取的NASH的一些特征[4- - - - - -6]，减少肝脏脂肪酸氧化[7]、极低密度脂蛋白(VLDL)的分泌[8，以及谷胱甘肽的产生[9，10.］.

肝过氧化物酶体增殖物激活受体γ.，Pparg）和PPARγ.- 解冻脂肪酸旋流酶（FAT / CD36，Cd36)在喂食MCD饮食的小鼠中表达增加[5- - - - - -7，11.，12.］.两个PPARγ.［13.- - - - - -15.]和CD36 [16.]通过上调涉及脂肪酸从头合成（DNL）steatogenic机制和脂肪酸摄取[有助于在小鼠高脂肪饮食诱导的脂肪变性的发展15.，17.］.此外，肝PPARγ.CD36表达与小鼠和人的NAFLD进展呈正相关[18.- - - - - -20.］.此前，我们已经表明成人发病肝细胞特异性PPAR那γ.击倒(Pparg^{δ.消息灵通的})小鼠显示高脂饮食诱导的脂肪变性减少，并伴有肝脏CD36表达和脂肪酸摄取的减少[21.］.因此，MCD饲粮增加了肝脏PPAR的表达γ.在小鼠中，这些基因可能导致了脂肪变性的发展以及随后在喂食MCD饮食的小鼠中进展为NASH。然而，肝脏PPAR的作用存在争议γ.在MCD诱发脂肪性肝炎的发展起着因为PPAR的腺病毒介导的表达γ.利用巨细胞病毒启动子(非肝细胞特异性)可减少纤维化和脂肪变性[22.，23.在喂食MCD饮食的小鼠中。相反，肝细胞特异性敲除PPARγ.减少高脂肪饮食引起的脂肪变性[15.，21.]和酒精性肝病小鼠模型的促炎和促纤维化事件[24.，25.］.另外，降低了肝PPAR的活性γ.，由于EGFR的抑制，与喂食快餐饮食的小鼠的纤维化有关[26.］.在这里，我们试图评估肝细胞特异性PPAR的作用γ.及其受调节的基因：CD36，在MCD诱导的脱脂性肝炎的发展中。为此，我们使用过Pparg^{δ.消息灵通的}没有肝细胞特异性CD36过表达的小鼠。在成人小鼠中诱导肝细胞中这些基因的表达的改变，我们评估了通过成年小鼠的MCD饮食诱导的早期事件（仅需3周的喂养）。Hepatocyte-specific PPARγ.和CD36的表达可能在MCD饮食诱导的脂肪变性的发展中不发挥关键作用，然而，肝细胞特异性PPARγ.和CD36可能有助于成年小鼠的胫骨肝炎的进展。

2.材料和方法

2.1。老鼠

所有鼠标研究都由伊利诺伊大学伊利诺伊大学的机构动物护理和使用委员会批准，他们按照伊利诺伊大学在芝加哥的相关指南和条例进行。Pparg^{FL / FL}老鼠(27.]从杰克逊实验室购买（菌株004584，B3.129-PPARG^tm2rev./J, Bar Harbor, ME)的纯合子。Pparg^{FL / FL}小鼠被安置在温度(22-24°C)和湿度控制的特异性无病原体屏障设施中，光照14小时/黑暗10小时(光照0600小时)。小鼠在三周龄断奶，除非另有说明，否则喂食标准的实验室鼠粮(配方饲料5008,Purina Mills, Richmond, IN)。12个chow-fedPparg^{FL / FL}随机抽取同窝鼠100只进行尾侧静脉注射μ.l含腺相关载体血清型8 (AAV8)的生理盐水敲除肝细胞PPARγ.表达如先前所描述[21.］.具体来说，是一群男性Pparg^{FL / FL}小鼠被注射了 带有甲状腺素结合球蛋白驱动(TBGp) Cre重组酶(AAV8-TBGp-Cre，宾夕法尼亚大学Penn Vector Core)的AAV8载体的基因组拷贝，用于敲除肝细胞PPARγ.表达并产生成人发病的肝细胞特异性PPARγ.敲除小鼠（Pparg^{δ.消息灵通的}KO)。鼠标Cd36基因（Cat＃Mg50422-UT，Sino Biological Inc.，北京，中国）被Penn Vector核心克隆到AAV8-TBGP驱动的矢量中，产生AAV8-TBGP-CD36载体，允许在肝细胞中过表达CD36（AAV8.tbg.pi.mcd36.wpre.bgh，penn矢量核心）。另一个子集Pparg^{FL / FL}小鼠被注射了 AAV8-TBGp-Cre的基因组拷贝数 AAV8-TBGp-CD36载体的基因组拷贝（Pparg^{δ.消息灵通的}+ CD36，KO + CD36）。最后的一个子集Pparg^{FL / FL}小鼠注射 AAV8-TBGP-NULL的基因组副本生成控制（C）。

AAV注射两周后,一半的老鼠在每组转向蛋氨酸和choline-deficient (MCD)饮食(猫# A02082002BR,研究饮食,新布伦瑞克,新泽西州),而另一半是美联储nutrient-matched蛋氨酸和choline-supplemented (MSD)饮食(猫# A02082003BY,研究饮食)。小鼠分别饲喂MSD和MCD饲粮3周，0700 h停食，1100 h注射ip 0.5μ.G 4,4-二氟-4-硼-3a，4a-diaza-s - s - sumacene（bodipy）-c16（寿命技术）/ g体重如前所述[28.］.从侧尾静脉采血 ，BODIPY-C16注射后的1和3小时，以确定血浆中BODIPY-C16的水平。通过斩波注射BODIPY后杀死了小鼠，并收集了树干血液以确定NEFA，TG，胆固醇（WAKO诊断，Richmond VA），ALT，AST（Pointe Scientific，Canton，Mi）和Bodipy-C16水平．称重肝脏和脂肪蛋白酶。肝脏在液氮中冷冻冷冻并储存在-80℃。为了测量BODIPY特异性荧光信号，组织在放射免疫沉淀测定中均化（RIPA）缓冲液，并使用10记录荧光（EX 485nm，EM 515nm） μ.在黑色96孔板上稀释组织上清液。

2.1.1。评估肝脂质

为了评估肝TG含量，中性脂质肝在异丙醇中萃取和TG测量为先前公开的[29.］.采用Bligh和Dyer法提取总脂，以评估肝脏脂肪酸组成[30.］.提取的脂质被bf3 -甲醇转甲基化(Sigma-Aldrich)，以使用GC/MS定量特定的脂肪酸甲酯，正如我们之前报道的[31.，32.], using 17 : 1 as the internal standard to quantify the amount of each fatty acid in the sample. In addition, we used a commercial sample of polyunsaturated fatty acid mixture (PUFA-2, Supelco) to identify the different fatty acids in the samples.

2.1.2。基因表达分析

使用TRIzol试剂（Life Technologies公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德）的肝提取RNA，并用RQ1无RNA酶的DNA酶（Promega公司，麦迪逊，WI）处理。DNA-RNA无转录物，并如先前公开的，进行定量PCR [29.，31.］.Peptidylprolyl异构酶(Ppia），β-Actin（ACTB.)和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT）被用作内政基因，以计算归一化因子，如前所述[29.］.qPCR引物序列Ppia，ACTB.，HPRT，Pparg，Cd36，肿瘤坏死因子(TNFA)、转化生长因子β 1 (TGFB1），α平滑肌肌动蛋白（Asma.）和胶原1a1（COL1A1）先前公布[28.］.引物序列F4/80 (NM_010130.4) Se: AGTACGATGTGGGGCTTTTG, As: TCTGTGGTGTCAGTGCAGGT, 164 bp;金属蛋白酶13 (Mmp13，NM_008607.2）SE：ATCCCTTGATGCCATTACCA，AS：GCCCAGAATTTTCTCCCTCT，204 BP;和TIMP金属肽酶抑制剂1（TIMP1Se: CCAGAACCGCAGTGAAGAG, As: CTCCAGTTTGCAAGGGATAGA, 193 bp。

2.1.3。苏木精、伊红和苦参红快速绿染色

用福尔马林(Fisher Scientific)固定肝脏48小时。固定肝石蜡包埋μ.未染色、苏木精和伊红染色的肝脏切片由芝加哥伊利诺伊大学的研究组织学和组织成像中心制作。为了染色胶原纤维，肝脏切片脱脂，在分级乙醇/水溶液中水合，然后在0.1%直接红溶液中染色(Cat # 365548， ，0.1% Fast Green FCF (Cat # P6744， ，在饱和苦味酸中浸泡60分钟，然后用0.5%乙酸溶液浸泡5分钟。样品迅速脱水，用Permount裱装介质(Fisher Chemical)进行裱装。照片使用倒置显微镜DMi8和徕卡应用套件X软件(徕卡microsystems CMS GmbH)拍摄。用ImageJ (NIH, Bethesda, MD)对天狼星红染区域进行量化。

2.1.4。统计数据

值表示为 (SEM)。采用双向方差分析，然后采用Tukey的后测。由于肝脏CD36的变异性，表达被log转化为统计分析。采用GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, La Jolla, CA)进行统计分析。值小于0.05被认为是显著的。

3.结果

3．1.肝脏PPAR表达水平γ.CD36没有改变喂养MCD饮食的小鼠的身体成分或血浆脂质

为了评估肝细胞PPAR的作用γ.在MCD饮食诱导的Stiopheatitis早期事件中，我们已经淘汰了PPAR的表达γ.只有在成人小鼠的肝细胞中，只需三周即可用MCD饮食喂食小鼠。MCD饮食增加了肝PPAR的表达γ.和CD36在PPAR中的表达γ.-intact小鼠（图1(一)和1 (b))，肝脏PPAR的表达γ.和CD36显着减少在Pparg^{δ.消息灵通的}小鼠（图1(一)和1 (b)）.我们以前发表了肝PPAR的表达γ.单次注射AAV8-TBGp-Cre降低mRNA和蛋白[21.］.评估肝细胞CD36独立于肝细胞PPAR的贡献γ.在小鼠脂肪性肝炎早期事件的发展中，我们过度表达了肝细胞CD36的生理水平Pparg^{δ.消息灵通的}小鼠（KO + CD36），CD36通过mRNA和蛋白水平所示（图1 (b)，补充材料）。正如预期的那样，喂养MCD饮食的小鼠表现出体重的剧烈减少[7，8与肝细胞PPAR表达无关γ.和CD36(数据1 (c)和1 (d)）.我们刚刚喂养MCD饮食三周，以评估身体成分和脱脂性炎的早期变化。体重的减少与相对白色脂肪组织的剧烈减少有关，但不是棕色脂肪组织（图1 (e)和1 (f)）.有趣的是，MCD饮食并没有改变血浆NEFA或TG水平(图)1（g）和1（h））.总之，我们改变了PPAR的表达γ.和CD36在成人肝细胞Pparg^{FL / FL}但这并没有改变MCD饮食对肥胖或血脂的影响。然而，肝细胞PPAR的作用有可能γ.和CD36在mcd喂养的小鼠中仅限于肝脏脂质代谢和/或脂肪性肝炎进展的特定过程。

３．２．肝细胞PPARγ.和CD36对mcd喂养小鼠的脂肪变性发展是不可或缺的

肝细胞PPARγ.CD36在肝脏脂质储存中起着重要作用[16.，21.］.有人提出肝脏PPARγ.CD36可能增加肝细胞对脂类的摄取，从而促进MCD饮食小鼠的脂肪变性。据我们所知，这是第一个评估肝细胞PPAR作用的研究γ.和CD36在成年小鼠的脂肪变性表达喂食MCD饮食与使用Pparg^{FL / FL}老鼠。虽然本研究中3周MCD饮食并未增加肝脏重量显着，但MCD饮食对相对肝脏重量的积极作用（ ），将其与增加肝甘油三酯（图相关联的2(一个)和2 (b)，liv tg，mcd效果， ）.注意，肝脏TG的增加仅在PPAR中显着γ.完整的老鼠。然而，当我们用GC/MS测量肝脏脂肪酸组成时，包括中性脂(TG)和极性脂(主要是磷脂)中的脂肪酸，mcd喂养小鼠的脂肪酸总量增加，而不受肝脏PPAR的影响γ.和CD36的表达（图2 (c)）.可以产生的脂肪酸原位by hepatic DNL: palmitic acid (16 : 0), palmitoleic acid (16 : 1 n-7), and oleic acid (18 : 1 n-7), were not increased in MCD-fed mice (Figure2（d））.正如其他研究提示，在MCD饮食可以减少肝DNL和肝饱和水平（SFA）和单不饱和的（MUFA）脂肪酸。在这项研究中，我们评估肝DNL的速率间接通过测量已知为指示DNL的水平的肝脏中的特定脂肪酸的比例[33.，34.]发现，肝脏DNL指数（比率为16：0和18：2（ ）））在mcd喂养的小鼠中显著减少(图2（e））.与此相反，喂食MCD的小鼠肝脏中不能由DNL合成的多不饱和脂肪酸(PUFA)的绝对水平显著升高，而喂食MCD的小鼠肝脏中SFA和MUFA的水平略微升高Pparg^{δ.消息灵通的}CD36过表达或不过表达小鼠(图2（f）- - - - - -2（H））.在喂食MCD饮食的小鼠中，多不饱和脂肪酸的选择性积累可能是脂肪酸摄入增加和/或肝脏释放VLDL减少的结果，正如其他人发表的[8］.为了评估如果组织特异性脂肪酸摄取是由MCD饮食改变，我们测量的脂肪酸在不同组织中使用BODIPY-C16（荧光标记的棕榈酸酯）作为脂肪酸摄取的指标的吸收。有趣的是，与MCD饮食喂养等离子体BODIPY-C16的在小鼠中的清除受损（图3（a）- - - - - -3（c）），并且这与由肝和心脏（图脂肪酸的减少摄取相关3（d）和3（e））.相反，皮下白色脂肪组织和棕色脂肪组织显示出增加的脂肪酸摄取（图3 (f)- - - - - -3 (h)）.虽然脂肪组织对脂肪酸的吸收增加了，但这可能不足以弥补其他组织对脂肪酸的吸收减少导致外源性脂肪酸清除延迟。此外，与喂食MSD(含完整脂肪组织)的小鼠相比，喂食MCD的小鼠体内脂肪组织数量显著减少，从而导致了BODIPY-C16清除能力受损。总之，这些数据表明，MCD饲粮促进了脂肪变性，并改变了肝脏中脂肪酸的组成，而不依赖于肝细胞PPARγ.或CD36表达和肝脏脂肪酸摄取。然而,PPARγ.通过促进炎症和纤维化，CD36表达可以参与MCD喂养小鼠的胫骨肝炎的进展。

３．３．肝细胞CD36在Pparg^{δ.消息灵通的}足以促进炎症和纤维化基因表达的MCD饲料的小鼠肝脏

众所周知，MCD饮食促进小鼠的脱脂性肝炎。血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT，图4（a）)升高，而血浆天冬氨酸转氨酶(AST，图4（b））没有显著在MCD饲料的小鼠增加。如图所示由他人，等离子体ALT的诱导发生在MCD馈送的第一周和血浆AST较长MCD馈送逐渐升高[35.］.为了确定血浆ALT水平的升高是否导致促炎基因和促纤维化基因的上调，我们检测了肝脏肿瘤坏死因子(TNFA），F4/80，转化生长因子β1（TGFB1），α平滑肌肌动蛋白（Asma.），胶原蛋白1A1（COL1A1)、金属蛋白酶13 (Mmp13），和TIMP金属抑制剂1（TIMP1）.喂养MCD饮食的对照小鼠表现出与肿瘤中炎症和纤维化有关的这些基因的表达显着增加。然而，Pparg^{δ.消息灵通的}喂食MCD饮食的小鼠显示出明显的表达减少肿瘤坏死因子α，转化生长因子β1，αSma，COL1A1，Mmp13,TIMP1与mcd控制相比(图)4（c）- - - - - -4（i））.令人惊讶的是，肝细胞CD36的过度表达Pparg^{δ.消息灵通的}小鼠与表达的增加有关肿瘤坏死因子α，F4/80，αSma，COL1A1，Mmp13,TIMP1达到了与mcd对照组相似的水平(图)4（c）- - - - - -4（i））.总体而言，这些结果表明肝细胞特异性PPAR的表达γ.，有趣的是，CD36的表达可能促进非实质细胞(免疫细胞和肝星状细胞)对MCD饮食的炎症和纤维化反应。在喂食MCD饮食三周的小鼠中，这些纤维化前肝基因表达的早期变化，被证实与天狼星红/快绿染色肝脏切片中的胶原蛋白定量(图)4（j））.此外，苏木eosin-和天狼星红和快绿染色的肝切片表明，MCD饮食诱导的肝组织学检查，包括大泡性脂肪变性，轻度炎症和纤维化（图进行了重组4 (k)和4(左))，支持肝脏基因表达的数据。

综上所述,尽管Pparg^{δ.消息灵通的}这些数据表明，肝细胞PPARγ.CD36的表达可能与NASH进展相关基因的上调有关。由于促炎基因和促纤维化基因在非实质细胞中表达，这些数据也表明，PPAR可能改变了实质细胞和非实质细胞之间的某种类型的通讯γ.在喂食MCD饮食的小鼠中，促进脂肪性肝炎早期事件发展的CD36。

4。讨论

肝PPARγ.表达正患有NAFLD的在小鼠和人类[发育相关的19.，36.，37.］.具体地，已经提出了PPAR的上调γ.NAFLD中的CD36可能会增加肝脂摄取并促进脂肪变性的发展[3.，17.］.mcd喂养的小鼠是饮食诱导的脂肪性肝炎的经典模型[9，10.]和肝PPAR的表达γ.在喂食MCD饮食的小鼠中CD36增加[5- - - - - -7，11.，12.］.因此，基于它们对肝脏脂质代谢和稳态的已知作用，PPARγ.CD36可增加肝细胞脂质摄取，促进MCD饮食诱导的脂肪变性和脂肪性肝炎的进展。在这项研究中，我们利用了我们的诱导肝细胞特异性PPARγ.KO (Pparg^{δ.消息灵通的})小鼠模型，检测肝细胞PPAR的相关性γ.mcd诱导的成年小鼠脂肪性肝炎的发展。此外，我们在肝细胞中过表达CD36Pparg^{δ.消息灵通的}研究CD36在独立于PPAR的疾病进展中的作用γ.表达式。

PPAR.γ.调节导致小鼠肝细胞中脂肪沉积的脂肪原制机制[38.，39.］.Hepatocyte-specific PPARγ.基因敲除小鼠已经表明PPARγ.需要增加乙酰-CoA羧化酶的表达（ACC1），脂肪酸合成酶（Fasn），硬脂酰-CoA去饱和酶1（Scd1），Cd36，单酰基甘油O-酰基转移酶（Mogat1），和脂肪酸结合蛋白1（Fabp1）[14.，15.，21.，这些基因参与DNL和脂质摄取。然而，MCD诱导的脂肪变性的发展并不依赖于DNL，因为MCD饮食降低了胰岛素、葡萄糖水平、肝脏DNL酶的表达和肝脏DNL率[8，40］.另外，小鼠喂食MCD饮食显示减少其主要是由DNL肝SFA和MUFA的量和增加的PUFA的肝水平[4，40]，其不被DNL合成，但从饮食中吸收的预成型PUFA改性。我们的结果符合以前的报道，表明肝脏脂肪变性与喂养MCD饮食的小鼠中的DNL无关。然而，在MCD喂养小鼠中富集肝PUFA可能是肝脂肪酸增加增加的结果[8］.Hepatocyte-specific PPARγ.有助于通过上调CD36的表达，以增加肝脏脂质的摄取可能。PPAR.γ.结合于CD36的和启动子增加了它的表达[41，42，这与肝脂肪变性的发展有关。事实上，腺病毒介导的肝脏CD36过表达导致周食小鼠的脂肪变性[43]，和肝细胞特异性CD36的敲除减少肝脏脂质摄取和脂肪变性模型中与饮食诱导脂肪变性[16.，支持肝细胞CD36的致脂作用。喂食MCD的小鼠肝细胞中CD36表达增加[6，7]，有人提出，喂食MCD饮食的小鼠肝脏吸收了白色脂肪组织释放的多余脂肪酸，从而导致脂肪变性[4- - - - - -6，8］.然而，MCD饮食引起的脂肪组织的显著损失可能会随着时间的推移减少脂肪酸从脂肪组织到肝脏的净通量[7]，作为结果，肝细胞CD36到MCD诱导脂肪变性的发展的潜在贡献。此外，已经显示，甲硫氨酸剥夺增加能量消耗和减少的静息呼吸商[40，44]，建议增加利用脂质作为外周组织中的能量来源。事实上，已经描述了与未偶联蛋白质1的上调相关的白色脂肪组织上的“褐变”效果[4，12.］.总体而言，由于外周组织中的氧化和NEFA对肝脏有限的净可用性，随着时间的推移，在喂养MCD饮食的小鼠中对小鼠的净脂肪分解对小鼠的净效果可能会降低。我们的数据将符合这些观察结果，并支持MCD饮食在脂肪组织中增加脂肪酸摄取和利用，这将降低脂肪酸的净助焊剂对肝脏。因此，脂肪性肝炎小鼠脂肪变性的进展可能不需要持续增加CD36在肝脏中的表达[7，8］.

脂肪变性是NAFLD的主要特征，但脂肪变性发展为NASH需要炎症的发展，而炎症可能与纤维化有关。肝细胞特异性PPAR的作用γ.在炎症和纤维化是知之甚少。这部分是由于PPAR的归属低表达γ.在肝细胞和PPAR的公知的抗炎和抗纤维化作用γ.在非正生细胞中：巨噬细胞和肝星状细胞[45］.既往研究表明PPAR过表达γ.在喂食MCD饮食的小鼠中使用巨细胞病毒启动子(非肝细胞特异性)可减少纤维化[22.，23.］.该效应可能是由于在非实质肝细胞，包括肝星状细胞，其中PPAR表达γ.用作抗纤维因子和巨噬细胞，其中PPARγ.作为抗炎因子。肝脏PPAR的保护作用γ.先前在四氯化碳[诱导的肝损伤的模型描述45］.此外，巨细胞病毒启动介导的PPAR的表达γ.在肝外感染的白色脂肪组织中，腺病毒颗粒可增加PPAR的胰岛素增敏作用γ.并间接减少肝脂积聚[46］.然而，在鲜明的对比，在高脂饮食加无节制乙醇，肝细胞特异性PPAR模型γ.KO降低了胶原蛋白的表达和胶原纤维的染色[24.］.此外，EGFR抑制剂介导了肝脏PPAR的降低γ.在由快餐饮食诱导的小鼠模型中，活性(主要在肝细胞中)与减少和逆转脂肪变性和纤维化相关[26.］.因此，我们的数据将补充之前的观察，提示肝细胞特异性PPAR的潜在病理作用γ.表达在脱脂肝炎的发展中。

在我们的研究中，我们已经淘汰了PPAR的具体表达γ.在成年小鼠的肝细胞中，使用由肝细胞特异性启动子驱动的Cre重组酶Pparg^{δ.消息灵通的}在MCD饮食诱导的脂肪性肝炎早期，小鼠的纤维化诱导减少。此外，我们的研究提示肝细胞PPARγ.对纳什进展的贡献可能与脂肪变性无关。这些结果自PPAR表达以来具有翻译相关性γ.与NASH的进展有关[19.，36.，37.]和PPAR的表达γ.-调控CD36在人类NASH患者中增加[18.］.到目前为止，PPAR的药理活性γ.与噻唑烷二酮（TZDS）和使用新型TZDS的使用减少粘合PPAR的能力γ.已被研究作为扭转NASH和脂肪变性[潜在疗法47- - - - - -51］.然而，虽然TZD对患者NASH脂肪变性适度的治疗效果已经持续报道，有没有效果的共识，即PPAR的药理活性γ.可能对纳什患者的纤维化。因此，TZD主要是基于胰岛素敏化作用的TZD的抗鼻窦效应可能在以某种方式通过激活肝细胞特异性PPAR来抵消γ.通过内源性配体和/或TZD。本研究表明PPAR的特异性表达γ.在喂食MCD的小鼠肝细胞中，可能促进促炎和促纤维化机制，部分通过CD36的表达，在某种程度上促进了NASH。然而，肝细胞特异性PPAR调控的机制尚需进一步研究γ.如果它们在肝细胞和非实质细胞之间的相互作用中发挥作用，就可能抵消全身PPAR的治疗效果γ.激活NASH患者。

总之，我们已经评估了肝细胞特异性的贡献PPARγ.和CD36表达在由MCD饮食诱导的脂肪性肝炎的早期事件。尽管脂肪变性在MCD喂养小鼠中观察到被认为是由增强脂质摄取促进，部分是由于增加的肝细胞PPARγ.和CD36的表达，我们的数据表明，PPARγ.和/或CD36-依赖性脂质摄取不是通过MCD饮食诱导的脂肪性肝炎模型发展脂肪变性所需的主要机制。然而，可能需要在肝细胞中表达肝细胞中的这些基因以促进喂养MCD饮食的小鼠的纤维化。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据可由通讯作者要求提供。

披露

这项工作的部分内容已在2018年旧金山美国肝病研究协会年会上和洛杉矶新奥尔良第101届内分泌学会年会上发表。

利益冲突

作者没有任何利益冲突。

作者的贡献

JCC构思和设计了实验，进行了实验，分析了数据，并写了稿件。

致谢

作者感谢Danielle Pins和Apoorva Tummala的技术支持。AAV载体来源于宾夕法尼亚大学基因治疗项目的Penn Vector Core。这项研究由美国国立卫生研究院K01DK115525和UIC启动基金资助。

补充材料

对照组肝脏CD36蛋白的表达(C)，Pparg^{δ.消息灵通的}(KO),Pparg^{δ.消息灵通的}肝细胞CD36（KO + CD36）小鼠的过表达。（补充材料）

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