2,4-Thiazolidinedione治疗改善乳制品山羊的先天免疫反应引起亚临床乳腺炎

文摘

奶牛乳腺炎是一个主要的疾病造成重大经济损失。体外的作品表明,反刍动物过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARγγ)可以帮助改善应对乳腺炎和可以控制牛奶脂肪合成。本实验的目的是为了测试与假定的PPAR治疗γ2受体激动剂,4-thiazolidinedione (TZD)提高(1)亚临床乳腺炎的响应和(2)牛奶脂肪生产。哺乳期山羊收到每天注射8毫克/公斤BW TZD或盐水为3周。TZD注射一周后,一半的山羊在每个组乳房内的注入喉炎的症状。uberis或生理盐水两部分共4组( /组)。TZD治疗并不影响牛奶脂肪对牛奶体细胞数,但积极影响血液nonesterified脂肪酸,炎症标志物、肝功能。TZD髓过氧物酶明显增加,但没有影响白细胞吞噬作用或胰岛素。TZD增加脂肪细胞大小和PPAR的轻微影响表达γ目标基因在乳腺上皮细胞而不是脂肪组织。总的来说,TZD改善响应乳房内的感染,但影响牛奶脂肪合成与表达相关的成绩单是低于预期。

1。介绍

乳腺炎是乳腺的炎症反应与不利后果感染(通常是细菌),动物福利和牛奶数量和质量(1- - - - - -3]。据估计,乳腺炎的成本在美国乳制品行业是ca。每年20亿美元或美国牛奶销售总额的11%,平均的ca。179美元/牛[4,5]。

乳腺炎的临床或亚临床。亚临床乳腺炎的测量只能检测到牛奶中体细胞数(SCC),从而增加几倍相比,牛奶从健康的乳腺。高鳞状细胞癌在亚临床乳腺炎消极地影响牛奶质量和降低整体牛奶产量。据估计,亚临床乳腺炎每年花费130美元/牛(1]。考虑在美国大约有900万头奶牛,成本可以超过10亿美元/年。因此,预防隐性乳腺炎是乳制品行业的当务之急。

从营养的角度来看,这变得日益明显足够水平的膳食抗氧化剂,特别是维生素E、硒、锌和维生素a,减少环境在奶牛乳房炎的发病率(3,6,7]。除了提供氧化应激的保护,这些化合物的几个增强乳腺应答乳腺炎(6]。越来越明显,饮食化合物可以通过影响深远地改变宿主的反应转录组(8- - - - - -10]。营养基因组学是研究这种影响的学科(11)和革新领域的营养(12]。饮食的化合物可以通过绑定影响转录组转录因子(TF) [11]。过氧物酶体Proliferator-Activated受体(PPARs),在TF,最有趣的从营养基因组学的角度来看11,13]。

PPARs是核受体和核激素受体超家族成员的特遣部队。PPARs形成异质二聚体视黄素x受体(RXR),由天然或合成受体激动剂激活时,调节转录被绑定到一个特定的DNA序列称为PPAR响应元件(PPRE)诱导目标基因的转录14]。三个PPAR PPAR计价的同形像α,PPARβ/δ,PPARγ已确定在许多物种,包括牛(13]。在三个PPAR PPAR同形像γ牛白色脂肪组织中高度表达,但其表达也相对丰富在乳腺组织(13]。长链脂肪酸(LCFA)是最强有力的竞争者的牛PPAR建议膳食干预的可能性提高的响应在奶牛疾病通过激活PPAR [13]。

此外,PPARγ起着关键作用的脂质和葡萄糖代谢14)通过调节脂肪形成和脂肪生成15)和由insulin-sensitizing效应(16]。PPAR的相同的功能γ在反刍动物(似乎是守恒的13]。

PPAR的奶牛乳腺组织的表达γ从怀孕早期泌乳后期调节(17)表明这个核受体的作用在控制牛奶脂肪合成。这是由体外研究表现在牛羊18- - - - - -20.)而不是老鼠21),这表明PPAR的角色γ牛奶中的脂肪合成可能ruminant-specific [13]。

除了在牛奶脂肪合成的规定,PPARγ可能也积极作用的主机对乳腺感染的反应,综述了最近[11,22]。在nonruminants PPARγ已知有抗炎作用23]。在初选牛乳腺上皮细胞(bMEC) PPAR的激活γ由几个主人公的差别引起的对这些几个促炎细胞因子和趋化因子的表达增加(碳碳主题)配体2和肿瘤坏死因子α24]。相比之下,PPAR的激活γ自然激动剂显著增强的表达趋化因子和白介素8 (C-X-C主题)配体6但没有影响其他细胞因子(24]。白介素8是最强的化学引诱物为中性粒细胞和更高的生产是可取的快速响应乳房内的感染(25,26]。此外,乳房内的注入喉炎的症状。uberis有一个伴随的PPAR的差别减少牛奶脂肪合成和对这些通路在奶牛27]。的PPARγ也可能乳腺炎后在组织再生中发挥作用,因为在单胃的PPAR同形像伤口reepithelialization发挥重要作用[28]。

我们的长期目标是提高乳制品的整体健康和性能通过动物营养基因组学方法。我们推测,激活各种PPAR LCFA可以改善同形像的过渡从怀孕到泌乳奶牛(13]。目前的工作重点是PPARγ及其对乳腺的作用对感染和牛奶脂肪合成。我们的假设是PPAR的激活γ(1)提高了对乳腺感染和(2)增强合成的牛奶脂肪。评估这些假设我们使用公认的合成PPAR进行概念验证研究γ受体激动剂与客观测试如果PPAR的激活γ之前和期间引起亚临床乳腺炎(1)提高了应对乳腺炎和(2)影响牛奶脂肪合成乳制品山羊。

2。材料和方法

2.1。动物实验的设计和管理

机构的动物保健和使用委员会(IACUC)俄勒冈州立大学批准了这项研究的所有程序(协议# 4448)。实验设计的概述是描绘在图1。24哺乳期萨能奶山羊山羊(平均数±标准差;年龄 岁的时候, 泌乳, 天在牛奶, 公斤的BW, 体况评分1 - 5规模),-牛奶细菌分析,从一个商业购买农场(Tumalo农场,弯曲,俄勒冈州,美国),坐落在俄勒冈州立大学羊中心设施。一个星期的适应新的环境开始实验之前被允许。山羊被分配到治疗的随机区组设计(被体况评分、体重、牛奶产量,和牛奶组件)和设在4单独笔(6山羊/笔)。动物喂养一天两次(上午8点到下午6点)和类似的饮食喂养农场的起源与随意干草(约。果园苜蓿干草和50%)50%。山羊收到大约150 g的一个商业混合谷物山羊(Kountry自助餐,回报,哈里斯堡或)在挤奶。山羊是挤奶每天上午8点在一个支柱使用移动式挤奶机。乳头的山羊挤奶前predipped postdipped后挤奶用0.5%碘溶液。

2.2。治疗

一周的适应后,山羊都配备了一个内在的颈静脉导管(猫# 017376,亨利·史肯,美国)与一组扩展(猫# 005642,亨利·史肯)。最初导管是隐藏在地方和使用Elastikon弹力绷带从山羊(猫# 000925,亨利史肯);后一个星期的绷带VetWrap 4′′用于实用性。导管是使用10毫升的一天两次刷新肝素化盐水(2国际单位/毫升)。导管插入后的第二天,12只山羊收到每日注射8毫克/公斤的BW 2, 4-thiazolidinedione (TZD;美国Sigma-Aldrich猫# 375004)在10毫升无菌生理盐水(vinv -山姆- 1000,亨利史肯)在整个研究期间(20天)。其他山羊( ;CTR)收到10毫升生理盐水。下午12点执行每日注射。TZD的剂量是根据报道的效果选择4毫克/公斤BW奶牛(29日)和更快的药物清除乳制品山羊(30.)通常需要两倍剂量的药物比牛这个物种。

2.3。乳房内的注入链球菌uberis

一周TZD或生理盐水注射后,一半的山羊在每个治疗收到一封乳房内的注入1.7×10 (IMI)⁸链球菌uberis(喉炎的症状。uberis)在10毫升无菌生理盐水的乳腺部分(组乳房炎控制或主控制器和乳腺炎TZD或MTZD)后以前公布的协议(31日]。剩下的山羊了乳房内的注入10毫升无菌生理盐水(控制盐水或CTRL和控制TZD或CTZD)在每个腺的一半。整除的喉炎的症状。uberis在1.5毫升无菌瓶佩迪林高产的实验室提供的俄勒冈州立大学兽医学院。后的乳房内的输注执行只是早上挤奶后仔细清洗乳头以个人湿毛巾,用棉签消毒含有70%的乙醇。注入了借助一次性无菌尿导管(美国TomCat)。IMI之后,每个乳房的一半被彻底向上按摩到腺水箱大约20年代分发培养液。

的喉炎的症状。uberis用于本实验分离出mastitic牛和应变决定利用DNA分离出细菌DNA清洁& Concentrator-5(猫# D4013, Zymo研究、Tustin CA)并提交Sanger测序的基因组研究中心,在俄勒冈州立大学生物运算。测序结果就曾对所有细菌序列使用BLASTN测试盒框在国家生物技术信息中心。序列有89%的身份喉炎的症状。uberisS1菌株0140 j(文件在网上补充材料https://doi.org/10.1155/2017/7097450)。

2.4。后续研究

两只动物MTZD组停止产奶后IMI,增加温度> 41°C。因此从研究动物必须被删除;因此,MTZD组只有4动物。这一事件提出了这样的可能性,无乳的原因是TZD注入和IMI之间的互动。为了测试这个我们进行后续研究使用4动物CTZD和CTRL的动物。该研究为主要研究遵循了同样的协议。本文后续研究的数据是没有报告,除了无乳的频率。

2.5。测量和样品收集

牛奶收集两半乳细菌分析无菌的时候购买,IMI前3天,IMI之前。在抽样之前,乳头凹陷的乳头被解决方案和清洁使用一次性纸巾。与孔的奶嘴消毒棉签含有70%乙醇,首先把牛奶被丢弃,大约1毫升的牛奶收集在无菌1.5毫升管。样本立即搁置,在4小时内运送Ag)卫生实验室,Inc .(田园诗,佤邦),细菌培养血琼脂平板。所有样品都是负面的喉炎的症状。uberis。确定SCC测试了加州乳腺炎状态在最后IMI之前挤奶。

牛奶产量记录每日在整个实验过程。牛奶采集样本进行成分分析前5天治疗任务,然后开始注射TZD的前一天,IMI的前一天,和1,2,3,5,7,IMI后12 d。样本收集和运送到维拉米特国家奶牛信息协会(DHIA、萨勒姆或)使用10毫升瓶包含Bronopol DHIA提供的。鳞状细胞癌、乳糖、脂肪、和蛋白质测定牛奶中。能量修正牛奶(ECM)计算使用方程(0.327×公斤牛奶)+(12.95×公斤脂肪)+(7.65×公斤蛋白质)32]。

直肠温度检查日常使用之前和之后IMI直肠温度计和每小时在第一次IMI和大约每8 h后6 h IMI后直到114 h。每周体重(BW)被记录在整个研究。

血液样本采集前早上喂从颈静脉使用20量度BD真空采血管针(Becton Dickinson,富兰克林湖,新泽西)。血液收集TZD注射(即开始之前。,7days prior to IMI or baseline), 2 days prior to IMI (5 days into TZD injections), every day during the first 3 days after IMI (i.e., 24 h, 48 h, and 72 h after IMI), and at 6 and 12 d after IMI. Samples were collected into evacuated tubes (10 mL, BD Vacutainer®, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) containing either serum clot activator or sodium heparin. After blood collection, tubes containing sodium heparin were placed on ice, while the tubes with clot activator were kept at room temperature (~30 min) until centrifugation in a C3 Select centrifuge (LW Scientific) and frozen at −20°C until being analyzed.

2.6。血液代谢物和炎症标记物

整除的血浆和血清运史di Zootecnica干冰,意大利Cattolica del Sacro库雷,皮亚琴察,意大利,代谢和炎症性分析。19个参数的血液样本进行了分析。这些包括代谢参数葡萄糖、胆固醇、尿素、钙、镁、nonesterified脂肪酸(NEFA),三酰甘油(TG),β-hydroxybutyric酸(BHBA),白蛋白和视黄醇inflammatory-related参数,结合珠蛋白、血浆铜蓝蛋白,paraoxonase,髓过氧化物酶、总胆红素、总活性氧代谢产物(ROMt),锌α生育酚+肝参数gamma-glutamyl转移酶(γGT)。分析使用临床自动分析器(仪器实验室ILAB 650年,列克星敦,MA)和高效液相色谱程序前面描述的(33- - - - - -35]。

2.7。胰岛素,QUICKI, RQUICKI

胰岛素的浓度分析等离子体5天后TZD注入(即。,−2 d relative to IMI) and 3 d after IMI using a commercial ELISA assay kit (NeoScientific Cat# GTI0011) following the manufacturer instruction. The Quantitative Insulin Sensitivity Check Index (QUICKI; [36])和修订QUICKI (RQUICKI;(37)计算如下:

2.8。吞噬作用和%粒细胞

白细胞的吞噬能力从100年独立μL肝素化全血测定−2和1 d相对于IMI使用Phagotest工具包(Glycotope生物技术、海德堡、德国)制造商的指示后,但使用每个试剂的量的一半。一半的每个试剂的使用减少了大约5%一致的吞噬作用(图S1)。%多形核细胞(中性粒细胞或粒细胞)的评估使用向前散射和散射后浇注在有核细胞FL2(即。、DNA染色解决方案)。百分比吞噬所有白细胞、中性粒细胞和单核细胞测定(图S2)。

2.9。脂肪活检

皮下脂肪组织的活检收集交替的尾根前1 d和7 d后IMI(图1)。如前所述(执行活检38与修改)。短暂,剪尾根面积与poviderm彻底擦洗擦洗(美国聚维酮亨利史肯Inc .)和2%利多卡因(亨利·史肯Inc .)、美国)皮下注射的切口。4到5厘米的切口是公开的组织收集用无菌钳和手术刀。切口缝合关闭。活检组织将被放置在一个无菌培养皿中包含纱布喷洒核糖核酸酶Zap(美国ThermoFisher)。结缔组织和大型船只被切割使用无菌手术刀叶片和组织使用无菌生理盐水清洗解决方案借助一次性无菌注射器。清理组织被切割成3块。两块被转移到2.0毫升独立cryovials(猫#,26 - 201,杰纳西科学、美国),一个泡沫盒与干冰运输到实验室,然后储存在−80°C到分析。另一块是放在1.5毫升管含有10%中性缓冲福尔马林(美国VWR # 16004 - 126)是固定进行组织学分析。

2.10。乳腺上皮细胞隔离

乳腺上皮细胞(MEC)分离出50毫升的牛奶使用磁排序。牛奶样本中收集50毫升无菌管(VWR猫# 89004 - 364年,美国),立即保存在冰上直到隔离(约1小时后)。管离心机在1000×g在4°C 10分钟将脂肪和颗粒细胞。细胞被洗两次10毫升无菌PBS和离心机在4°C 500×g为5分钟。在最后洗细胞计数前使用磨Z迷你自动细胞计数(美国Orflo技术)。在500年最后的颗粒是resuspendedμL (PBS溶液+ 0.1%牛白蛋白和转1.5毫升管prewetted PBS + 0.1%白蛋白的解决方案。抗体对epithelial-specific标记粘蛋白1(美国罗福斯生物制品nbp1 - 60046) [39与皮尔斯共轭蛋白质AG)磁珠(美国ThermoFisher)添加(1μL / 10⁶细胞)。样本为30分钟在冰上孵化瓶,细胞被洗一次用PBS和立即隔离使用autoMACS分离器(Miltenyi研究,美国)。正极和负极分离细胞被储存在−80°C到RNA提取。评价浓缩的乳腺上皮细胞进行积极和5 -细胞5随机牛奶样品测量酪蛋白kappa的表情(CSN3)和乳白蛋白(LALBA)MUC1积极和MUC1 -细胞。总的来说,MUC1抗体的使用往往是丰富的细胞高表达量mammary-specific酪蛋白基因κ(CSN3)和乳白蛋白(LALBA)+粘蛋白1(MUC1)(图S3)。正常化转录丰度进行如下所述。

2.11。隔离和RNA逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)

使用RNA RNA提取进行清洁和集中器™5(美国Zymo研究猫# R1013)后供应商协议。RNA提取之前,脂肪组织下提前中断使用子弹搅拌机(实验室仪器,美国)。RNA是量化Nanodrop nd - 1000分光光度计(Nanodrop技术,威明顿、德)。RNA完整性评估使用2100生物分析仪仪器(美国安捷伦)基因组研究中心,在俄勒冈州立大学生物运算。MEC的比率是260/280 (平均数±标准差)和RNA完整性(RIN)数量 ,范围从1到9.2。脂肪组织的比例是260/280 (平均数±标准差)和RIN ,范围从1到9.0。

引物设计使用底漆表达3和测试(如前所述)(40)(表S1在文件S2)与修改。简单地说,·卡普拉狐臭的特定序列搜索的国家生物技术信息中心(NCBI)https://www.ncbi.nlm.nih.gov/),并炮轰在绵羊基因组的加州大学圣克鲁斯分校的基因组浏览器(https://genome.ucsc.edu/为了确定exon-exon连接。Primer-pairs抨击使用NCBI BLASTN工具。从每个primer-pair清洗使用DNA扩增子清洁& Concentrator-5 Zymo研究。美国)发送到基因组研究中心和俄勒冈州立大学生物运算顺序。测序结果表S2在文件中可用S2。

尽管低RIN数字我们继续RT-qPCR分析(见结果)。六个潜在的内部控制基因(ICG)(即测试。甘油醛3磷酸脱氢酶,(GAPDH),核糖体蛋白S9(RPS9),无所不在地表达了成绩单(UXT)色氨酸、酪氨酸3-monooxygenase / 5-monooxygenase激活蛋白质ζ多肽(YWHAZ),glucose-6-phosphate脱氢酶(G6PD),和线粒体核糖体蛋白L39(MRPL39)基于之前的出版物()40,41使用geNorm []42]。脂肪组织最可靠的标准化系数使用上述协调小组获得了(值= 0.23)通过使用5协调小组(所有国际协调小组除了进行测试MRPL39)。MEC 3协调小组(GAPDH,RPS9,YWHAZ;值= 0.26)被用来计算归一化因子。目标记录测量与脂质合成相关,PPARγ激活和炎症。特别是我们测量,MEC和脂肪组织,PPAR的丰度γ成绩单(PPARG)和PPARγ假定的目标脂蛋白脂肪酶(LPL)和脂肪酸合酶(FASN)。在脂肪组织我们还测量了转录的乙酰辅酶a羧化酶α(ACACA),固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)和肿瘤坏死因子α(TNFA)。MEC我们测量转录的MUC1白介素8(IL8)和趋化因子(碳碳主题)配体2(CCL2)。如前所述(执行RT-qPCR分析40)做了一些调整。短暂,RevertAid(美国ThermoFisher)作为逆转录酶制造商的指示和电力SYBR绿色主后混合(美国ThermoFisher)是用于qPCR。PCR反应是在7900年执行ht(美国应用生物系统公司)微安®光学反应384孔板(美国应用生物系统公司)。反应如下:2分钟50°C, 10分钟在95°C,和40个周期在15秒95°C之后1分钟60°C。解离曲线进行(梯度从60°C到95°C)对扩增子质量检查。最后qPCR数据是通过使用获得的6个2倍稀释标准曲线。后执行RT-qPCR MIQE指南(43]。

2.12。脂肪组织的组织学分析

脂肪组织样品保存在10%中性缓冲福尔马林沉浸在15%然后在30%蔗糖在PBS稀释减少15 -低温恒温器部分μ米厚度的温度−27°C。)染色之前,部分在PBS缓冲洗在水冲洗30年代紧随其后。接下来,部分与哈里斯的苏木精孵化(美国VWR猫。数量95057 - 858)解决方案3分钟,然后用温水清洗了25。部分被淹没在曙红解决方案和PBS冲洗1分钟。组织在80%乙醇洗1分钟,最后沉浸在二甲苯10年代,安装在显微镜幻灯片,用10倍放大成像目标使用徕卡DM6000显微镜(徕卡微系统有限公司,美国)。脂肪细胞大小的分析是使用CellProfiler 2.1.1执行软件(http://cellprofiler.org/)[44]。除了脂肪细胞的平均面积,不同的频率区域的范围和脂肪细胞直径测量来估计新脂肪细胞的形成(即。、体积小)和大型组织的形成,也就是说,积累大量的储存的甘油三酯。

2.13。统计分析

统计分析数据之前检查离群值使用PROC REG的SAS 9.2 (SAS研究所有限公司、卡里、数控、美国)。数据studentized> 3.0被移除。正态分布是评估使用PROC SAS的单变量。Shapiro-Wilk测试的数据 和统计< 0.90和Kolmogorov-Smirnov 被认为不是正态分布和日志吗₂统计分析之前或根转化。数据分析与SAS 9.2的PROC GLIMMIX过程。固定效应模型中TZD (Z)、时间(T),乳腺炎(M),和所有交互山羊为随机效应。由于每个测量的不规则的时间表,协方差结构SP(战俘)重复使用措施进行分析。统计学意义和倾向被宣布 和 ,分别。

为了账户和正确区别组在基线(血液参数和牛奶产量−7 d和牛奶成分相对于IMI−8 d),统计分析的Z, M,和Z×M对牛奶和血液代谢参数进行。如果一个不同之处在于 在任何观察的参数分析,每个样本数据修正用算术方法来获得相同的平均组间基线。这是由减去每个样本之间的差异之间的平均基线CTRL组和样品的组(即。,所有数据被CTRL组基线修正)。之所以选择这种方法而不是古典的协变量模型在基线为了average-corrected LSmeans每组在基线数据和标准误差。修正后的数据集是用于统计分析。

总体的意思是脂肪细胞大小的统计分析是使用上面的执行模型。为了评估效果在每个脂肪细胞区域或直径范围,使用上述模型的统计分析为每个范围执行。范围和时间结合起来时,模型包括Z, M, T,范围和所有交互为主要的影响。

3所示。结果

两只动物MTZD组从研究中删除,因为他们IMI后不再产奶。我们只有这个原因 MTZD组。然而并不是由于影响TZD注入和IMI之间的互动,因为在执行的后续研究中,1/4的动物对照组完全停止后牛奶产量IMI在所有TZD-treated动物继续牛奶。无乳的原因在两只动物在TZD组主要研究尚不清楚。五天后IMI几山羊导管的问题(无论是导管脱落或被其他山羊)咀嚼,它需要被删除。为了保持所有的治疗方法一致的我们将导管从所有的动物注射2,4-TZD直接进入颈静脉,直到试验结束。

3.1。直肠温度和体重

整个直肠温度下降后的第一个5小时IMI在所有组显著增加之后,直到IMI 44小时后,尤其是在对待动物喉炎的症状。uberis(图2)。直肠温度倾向于保持更高的主控制器组相比明显高于其他组,直到达到一个值相比,所有其他组在114 h(约。IMI后(图5 d)2)。温度MTZD组类似于CTRL和CTZD团体IMI后68小时内。整体CTZD集团有一个更稳定和更低的温度与其他组相比,包括CTRL,尤其是在44 h后IMI显著增加体温是CTRL观察动物。体重不是受TZD或乳腺炎(图S4)。

3.2。牛奶产量和组成

在图3是描述SCC和牛奶产量的趋势。鳞状细胞癌是总体明显高于群体接受喉炎的症状。uberis(即。,MTZD and MCTR) compared to the groups receiving intramammary infusion of saline at the beginning of the trial, but the differences disappeared just before IMI. Due to IMI, the MTZD and MCTR groups had a significantly larger increase in SCC (13.9- and 11.3-fold, resp., from −1 to 2 days after IMI) than the control groups (1.3 for CTRL and 1-fold for CTZD). The SCC remained higher in MCTR and MTZD compared to CTRL and CTZD until the end of the trial. A tendency for a Z × M × T was detected due to an overall lower SCC for the animals receiving TZD, especially for the CTZD group during the first 2 days after IMI.

尽管显著差异观察到−8 d,这将促使我们正确的数据基于标准使用在目前的工作,我们决定展示原始鳞状细胞癌数据由于SCC数据对农民的实际意义;然而,当数据调整−8 d,主控制器有一个整体大SCC所有组相比,包括MTZD(图S5)。

牛奶产量在基线 公斤/ d。M×T的一个重要作用是检测由于整体牛奶产量下降的山羊处理喉炎的症状。uberis而山羊接受乳房内的盐水(图3)。交互的趋势Z×M×T ( )检测牛奶产量。喉炎的症状。uberis乳房内的注入主控制器组产奶量下降,而MTZD只有一个数值牛奶产量下降。

其他牛奶参数(图4)不受IMI或TZD除了%蛋白质,高喉炎的症状。uberis治疗后山羊IMI可能由更高的鳞状细胞癌,高和%的牛奶乳糖,IMI后TZD-treated动物。虽然没有统计学意义,牛奶脂肪产量在主控制器IMI低数值。ECM没有明显影响治疗,但倾向于M××T检测由于减少ECM在主控制器而不是其他组(图S6)。

3.3。血液代谢参数

葡萄糖浓度没有影响TZD但总体高葡萄糖检测后IMI在动物接收喉炎的症状。uberis,主要是由于大量增加在主控制器组而MTZD组glycaemia nonmastitis组没有任何区别(图5)。我们观察到一个总体增加NEFA由于IMI集团除了CTZD(图5)。non-TZD-treated动物有更多的持续增加在NEFA IMI相比TZD-treated动物。总的来说,NEFA往往是低TZD-treated动物。所有的动物都有一个减少BHBA IMI和TZD的整体价值下降后观察到12 d后IMI(图5)。的浓度三酰甘油(TG)并不影响Z或Z×T但往往是高( )喉炎的症状。uberus对待动物IMI后(图5)。

一种趋势( )TZD、乳腺炎、完整的交互Z×M×T导致MTZD组与尿素浓度大于其他组d 1、6和12 IMI后(图七)。IMI在所有组α生育酚显著降低组间没有差异(图七)。

管理TZD没有影响血浆胰岛素浓度,QUICKI,或RQUICKI,虽然数值较大QUICKI TZD-treated和控制检测山羊(图S8)。乳腺炎的显著影响胰岛素IMI之前也被观察到;因此,它不能被认为是生物相关(图S8)。

3.4。血矿物质

Ca在TZD-treated山羊IMI前增加,倾向于保持高于后non-TZD-treated山羊IMI主要是由于高钙浓度MTZD-treated山羊(图6)。锌的浓度往往( )高TZD-treated相比non-TZD-treated山羊和高总在前者相比后者IMI(图6)。锌浓度较大在MTZD相比其他组在d−2和6相对于IMI但是锌高CTZD动物IMI后12 d。至于Ca,血液中锌的观察模式主要是由MTZD组。Mg水平下降后IMI但没有发现(图组之间的差异6)。

3.5。肝脏炎症和压力

积极的急性期蛋白的水平(+应用)结合珠蛋白 g / L(平均数±标准差)七天之前IMI在TZD-treated整体水平明显降低和控制动物TZD治疗1周后(图7)。结合珠蛋白水平上涨迅速,IMI在所有动物,与整体达成> 2 g / L值较大的持久性的高水平喉炎的症状。uberis对待动物,主要是由于主控制器(图组7)。其他测量+应用血浆铜蓝蛋白,增加后随着时间的推移,IMI在所有组没有显著影响TZD与数值较低的值或IMI但TZD-treated山羊和控制的试验(图S9)。

中性粒细胞杀死能力髓过氧化物酶标记的整体低TZD-treated相比控制山羊TZD治疗1周后但在TZD-treated山羊IMI后显著增加,高于对照组,直到结束的实验(图7)。CTZD有髓过氧物酶总体高于其他组。肝脏的压力标志γGT不是不同团体前IMI而是整体高TZD-treated IMI后与对照组。post-IMI差异主要是由于增加的参数在CTZD 6 d IMI(图7)。

负索引中急性期反应,白蛋白只是受时间和数值更高的价值在TZD-treated山羊IMI而总胆固醇降低后IMI non-TZD-treated组相比显著降低值TZD-treated山羊后6 d IMI(图7)。视黄醇往往受M T和Z××T交互主要是由于更高的价值在MTZD−2 d天相对于IMI在主控制器,较低的值后6 d IMI相比其他组(图7)。相反,消极的活动急性期蛋白质和抗氧化剂paraoxonase和总胆红素,作为肝脏清除能力指数,降低在所有团体不受TZD IMI治疗后(图S9)。在所有的山羊总活性氧代谢产物增加IMI不受TZD(图S9)。

3.6。%血液中性粒细胞和吞噬作用

中性粒细胞百分比是 (平均±SEM)之前IMI集团之间并没有不同。IMI %的中性粒细胞减少后在所有组(图8)。山羊处理喉炎的症状。uberis有更大比例的减少中性粒细胞比山羊接受乳房内的盐水(图8)。%所有白细胞和中性粒细胞的吞噬作用只是受到时间的影响,但不受TZD或乳腺炎,而单核细胞吞噬作用降低了喉炎的症状。uberis输液(图8)。

3.7。基因表达

周期阈值之间的负相关(Ct)或循环量(Cq)值和RIN据报道在一些出版物(45,46]。这是由于减少大量的整数信使rna与更高的降解(即样本。,低RIN)导致更高的Ct (Cq)值。基于这种相关性,RIN≥5提出适合RT-qPCR分析(45]。由于大部分的样品RIN < 5在脂肪组织(60%)和MEC(50%),我们的大部分样品是RT-qPCR不足。这样的原因大部分样品的低RIN尚不清楚,因为样本了干冰冷冻,保存在−80°C在冰中存储和分析。尽管低RIN,我们测试了如果退化观察RIN RT-qPCR数据的影响。我们进行了相关分析与Cq RIN。与上面的数据报道在以前的出版物引用,在总体上没有显著负相关关系Cq在所有测量值和RIN基因(图S10)。只有Cq的值FASN是负相关RIN ( ; )。然而平衡了这种负相关显著( ; Cq和RIN之间正相关GAPDH(图S10)。因此,缺乏相关性表明RNA降解由RIN的缺乏影响RT-qPCR结果在我们的实验。这些结果可以部分解释的非常短的序列放大我们的引物(扩增子大小约100个基点,文件S2)这可能阻止RNA降解Cq值的影响。由于缺少RIN和Cq值之间的相关性,我们认为RT-qPCR结果可靠。

皮下脂肪组织。结果mRNA表达在脂肪组织图9。的TNFA基因检测不到样品,所以在大多数的结果没有显示。没有观察到影响测量基因的表达,乳腺炎或TZD治疗除了Z××M T交互SREBF1由于更大的整体基因的表达增加MTZD IMI后比其他群体。

乳腺上皮细胞。丰富的结果记录在乳腺上皮细胞在图10。的表达MUC1乳腺炎的治疗影响,较低的表达在mastitis-treated山羊IMI后1 d,和一个更大的表达TZD-treated与控制在7 d后IMI山羊。乳腺炎感应的表达明显增加CCL2IMI之后。的表达IL8随时间减少所有组,但仍高于山羊处理喉炎的症状。uberisIMI后的第二天。PPAR的转录表达γ和它的目标基因SCD1,FASN,LPL所有增加或倾向于增加。TZD-treated山羊倾向( )有更高的表达PPARG特别是在IMI后1 d。的表达SCD1IMI后往往是高TZD-treated山羊。的表达FASN负面影响了乳腺炎,而TZD治疗预防减少的表达吗FASN但延迟的增加表达LPLIMI后mastitis-treated山羊。

3.8。脂肪细胞的大小

脂肪细胞的平均面积随时间显著增加,影响M××T因为CTZD集团有更大的增加脂肪细胞的大小后,IMI相比其他组(图11)。脂肪细胞的频率与媒介领域(3000年至5000年μ米²)整体低TZD与控制山羊IMI前1天(即。,6days of TZD treatment) and a decrease frequency of small adipocytes (1,500 to 3,000 μ米²)是在TZD-treated山羊和控制在7天后IMI(数字12和S11)。当脂肪细胞的直径被认为是(S12数据和向),低频率的中型脂肪细胞(60 - 80μ米)−1 d相对于IMI证明TZD和控制动物和倾向于更高频率的大型组织(> 100μ米)观察TZD和控制动物,特别是由于CTZD动物。

4所示。讨论

4.1。使用的亚临床乳房炎模型作品

在目前的研究中所有的动物接受乳房内的注入喉炎的症状。uberis发达的亚临床乳腺炎。这是证明SCC的大幅增加后24 h IMI牛奶中没有明显的异常。提供了进一步支持亚临床乳腺炎的重要(尽管温和)更高的直肠温度之间IMI 12和44小时后与对照组相比,牛奶产量下降,增加表达的CCL2MEC,通过在中性粒细胞百分比明显降低血液IMI后24小时内,可能引起暂时的大量中性粒细胞迁移到乳腺。CCL2是中性粒细胞和巨噬细胞的化学引诱物(47)和关键MEC-macrophages相声(48并发现调节接收IMI在奶牛喉炎的症状。uberis(27]。炎症发作期间如乳腺炎、等离子体浓度等急性期蛋白的结合珠蛋白和血浆铜蓝蛋白可能会增加。事实上,在目前的研究中所有组血浆结合珠蛋白的增加,表明所有的动物正在经历某种炎症条件。结合珠蛋白的平均水平在目前的实验中使用的山羊IMI之前(即。,0.3 g / L)高于正常情况下观察到的健康牛(< 0.2 g / L) (33,49- - - - - -52),高于之前观察到在健康的山羊53,54]。的水平被认为是高(或动物有明显的急性期反应)是当触珠蛋白> 0.3 g / L;因此,我们的动物有一些炎症的基础水平。在我们的实验中,结合珠蛋白高于0.3 g / L, IMI在所有组织和血浆中的浓度指标-急性期反应如白蛋白、paraoxonase,总胆固醇、视黄醇是下降,表明一个重要的炎症状态后IMI [49,51]。

我们的数据证实了模型的可靠性由Lasagno和合作者31日使用相同的剂量的]喉炎的症状。uberis诱发隐性乳腺炎在哺乳期山羊。此外,数据表明基底炎症条件在本实验中使用的山羊。积极的急性期蛋白,影响交通和混合在断奶小腿(55]。有可能,当我们开始实验(1星期后运输和混合)动物仍在经历一些压力和/或炎症引起轻微的急性期反应的条件。

4.2。代谢和炎症反应引起的乳房内的感染

山羊接受乳房内的喉炎的症状。uberis提高血浆葡萄糖和NEFA, IMI后BHBA浓度下降。这些参数是一致的模式乳腺炎的数据报道的一项研究中,归纳了用革兰氏阴性细菌大肠杆菌在初次分娩的荷斯坦奶牛(56]。我们的数据有些符合NEFA和葡萄糖的增加在等离子体fed-restricted多产的奶牛乳房内的喉炎的症状。uberis,尽管增加NEFA观察到12 h但不是在36 h后IMI在研究[57]。NEFA增加在我们的研究中也观察到在CTRL集团并没有接受乳房内的喉炎的症状。uberis但是有一个大的直肠温度相比CTZD IMI 12 h和44小时后。同一组似乎有增加SCC IMI之前,有一个略大促炎反应相比TZD-treated组。CTRL集团似乎也有类似的模式的主控制器组几个inflammatory-related参数,如白蛋白、胆固醇、髓过氧物酶,和NEFA,尽管在鳞状细胞癌则没有显著增加。inflammatory-related参数检查,很明显,所有的动物都有一个显示炎症反应一般结合珠蛋白增加,血浆铜蓝蛋白,和罗总,一般降低镁、白蛋白、胆固醇、和paraoxonase标记inflammatory-like条件(33,49,58]。炎症标记物的变化,然而,并不是伴随着显著增加在山羊接收盐水在乳腺鳞状细胞癌。增加炎症在山羊不接收喉炎的症状。uberis可能是部分原因是半乳房注射生理盐水。然而生理盐水是相对无害的,当注入牛乳腺(59),但捕捉动物和频繁注射引起的应力和树苗可以观察到明显的炎症反应(部分原因60]。

与我们的研究结果相反,没有降低BHBA莫耶斯研究et al。57),但我们的数据更有类似报道的数据Graugnard et al。61年),IMI在奶牛进行内毒素。在我们的研究中减少BHBA IMI后观察到所有的动物,可能表明一个总体响应炎症(见上图)或所有的动物的代谢变化与IMI无关,可能由于减少的采食量减少组件的BHBA瘤胃发酵(62年]。葡萄糖的增加在我们的研究中可以关联到牛奶产量的减少,尤其是乳糖率,证明了莫耶斯和合作者56]。上述观察结果表明类似的代谢反应的奶牛和山羊IMI使用喉炎的症状。uberis。

4.3。高TG、NEFA和血液中葡萄糖可能表示影响胰岛素敏感性乳腺炎

在莫耶斯和合作者的研究57),牛feed-restricted IMI TG的增加后,类似于我们在研究中观察到的趋势。后TG IMI的增加不是解释为乳腺脂肪的吸收减少,因为牛奶中脂肪合成减少,尽管只有数字,只对主控制器组观察,也不能解释为不太可能增加采食量或更大NEFA,也是出现在CTRL集团没有经验后TG IMI的增加。TG的增加可以引起血液中胰岛素抵抗[63年];然而,胰岛素敏感性指数没有显著表明更大的胰岛素抵抗山羊接收喉炎的症状。uberis。最近,有人认为,在奶牛证明本研究中使用的胰岛素指标真正的胰岛素敏感性的可能不是一个好的指标(64年)和葡萄糖钳可能需要精确测量胰岛素敏感性。因此,它仍然是可能的,尽管没有迹象表明胰岛素抵抗胰岛素敏感性指数,山羊IMI经历了一些胰岛素敏感性下降。

增加葡萄糖和NEFA IMI后观察到在我们和其他研究可以与炎症反应有关。的促炎细胞因子肿瘤坏死因子α众所周知,引起暂时的胰岛素抵抗在单胃的65年]。从Kushibiki和合作者的工作66年在反刍动物]表明,这种影响是守恒的;然而,最近的一项研究人民币和合作者67年)没有展示任何肿瘤坏死因子的影响α注射葡萄糖,NEFA或胰岛素早期泌乳奶牛。在我们的例子中,我们发现增加葡萄糖和NEFA IMI后第一次2 d后但在3 d IMI NEFA IMI之前返回的值。同样,IMI后的胰岛素3 d是IMI之前类似。测量后的胰岛素在3 d IMI可能错过了临时的胰岛素抵抗。有点类似于我们的数据,莫耶斯和合作者57没有发现任何影响IMI feed-restricted动物后血胰岛素水平。同样有趣的是,作者发现大量增加血液中胰岛素在奶牛IMI后拥有一个积极的能量平衡。总的来说,我们的数据不允许结束IMI的影响喉炎的症状。uberis胰岛素敏感性但feed-restricted响应出现相似的动物。

4.4。应对乳腺炎是影响动物的前提

观察增加NEFA IMI后可以采食量下降,高血浆浓度NEFA表明负能量平衡(68年]。我们没有测量采食量,但没有其他的数据,包括体重和BHBA,表明一个重要的和/或延长饲料摄入量的减少。此外,山羊生产相对少量的牛奶(约。1公斤/ d),随着时间的增加,脂肪细胞大小和他们在泌乳后期;因此,负能量平衡,如果存在,是暂时的,是不重要的。然而,正如上面所讨论的,反应有点类似乳腺炎在当下研究奶牛负能量平衡研究的莫耶斯et al。57)和体况评分的山羊在我们的研究中 (平均数±标准差;规模1 - 5),相比低量程值报告文学这个品种的山羊和泌乳阶段(69年]。在我们的实验中,定量不针对哺乳期山羊进行了优化。这样做的目的是符合饮食最初提供的商业农场,山羊是购买的。饮食可能没有足够的,建议应对乳腺炎更类似于动物的负能量平衡,表明可能营养不良。可能的缺陷可能是部分也由最初的决定条件的动物表示不到最佳的身体条件和相对较高的急性期,可能影响响应乳房内的感染。

4.5。TZD治疗效果:一般的方面

2,4-Thiazolidinedione的基本分子化合物的化学合成已知具体和有效的PPAR thiazolidinedione分子γ受体激动剂,包括罗格列酮和吡格列酮(70年,71年]。因此,2,4-thiazolidinedione被认为是PPARγ受体激动剂;然而,据我们所知,它没有被证明,2,4-TZD PPARγ受体激动剂。作为一个PPAR间接支持这种化合物γ受体激动剂在反刍动物来自之前的研究。在小母牛和奶牛证明2,4-thiazolidinedione注入中和TNF后的胰岛素抵抗α注射(66年),显著降低NEFA产后奶牛(72年),分别。基于上述证据,我们认为,在目前的研究中,2,4-TZD PPARγ受体激动剂。

4.6。大的脂肪细胞大小可能表明大型TZD-Treated动物的胰岛素敏感性

预防胰岛素抵抗与TNF治疗的小母牛α是通过治疗由Kushibiki TZD和合作者66年]。我们没有观察到任何重大TZD对胰岛素敏感性指数的影响,只有数值大QUICKI IMI之前控制动物相比。缺乏对胰岛素敏感性指数的影响在我们的研究中是按照数据在奶牛勋伯格和欧73年),TZD出生之前,和Yousefi和合作者74年吡格列酮),另一个合成PPAR thiazolidinedione和行之有效的γ配体,在整个过渡时期。

如上所述,可能不适用于反刍动物使用的胰岛素敏感性指数。大增加脂肪细胞大小伴随着较低的NEFA CTZD动物后IMI相比其他组可以通过TZD表明改善胰岛素敏感性。增加脂肪细胞大小TG积累的结果。脂肪组织积累TG的影响下胰岛素;因此,数据似乎表明,脂肪组织在CTZD组有更大比其他组的胰岛素敏感性。然而,我们不能没有胰岛素和葡萄糖钳提供一个明确的结论胰岛素敏感性。

4.7。TZD治疗有助于维持产奶量和奶脂肪IMI后生产

牛奶产量没有影响正常山羊TZD但TZD治疗阻止IMI后牛奶产量的减少喉炎的症状。uberis。TZD管理在当前审判并没有显着影响的牛奶成分,但与产奶量、乳脂肪和乳糖没有减少MTZD与主控制器。直接影响TZD的预防的牛奶脂肪合成下降可以推断MEC的高表达FASN在7 d后IMI MTZD与主控制器和一个数值更高的表达镜头分割在同一时间点。越高的表达FASN和较低的表达LPLMTZD与主控制器可能表明TZD对新创的影响和不同的脂肪酸在牛奶IMI [17]。有趣的是,牛奶脂肪抑郁症的特点是一个更大的表达下降FASN相比LPL(75年]。之前它已经被观察到的体外表达FASN,但不LPL,增加PPAR的激活γ在罗格列酮(18]。的反应FASN罗格列酮在反刍动物似乎是一致的,因为最近审查(13]。总的来说,这些数据可能显示一些PPAR的激活γ在MEC 4-thiazolidinedione。

4.8。TZD治疗预防急性期反应,改善肝脏对IMI的回应

结合珠蛋白的较大增加non-TZD——与TZD-treated山羊IMI IMI之后,尤其是在主控制器山羊和TZD的更高层次的血浆总胆固醇和控制山羊暗示改善肝脏活动TZD [34,51]。更好的肝脏TZD-treated地位和控制动物也倾向于支持的高血锌水平(76年]。这些发现在一起,有一个迹象表明动物对待TZD以前降低炎症状态IMI但是,IMI之后,相同的动物有一个更快的恢复由肝脏炎症状态由于更好的响应。因此,TZD治疗乳腺炎似乎提高了反应。

4.9。TZD增加中性粒细胞的查杀能力

招聘和激活中性粒细胞是先天免疫的主要防御机制。此外,在炎症,中性粒细胞的主要细胞类型观察乳腺(77年];因此,他们迁移到感染的网站的能力在炎症反应中起着至关重要的作用。在目前的研究中,血液中性粒细胞吞噬作用的下降%等离子体后1 d IMI和随之而来的鳞状细胞癌是暗示的乳房对中性粒细胞的趋化现象的过程在所有组,但大山羊接收喉炎的症状。uberis高,也支持IL8表达MEC的山羊处理喉炎的症状。uberisIMI后与对照组相比。虽然没有区别在血液中性粒细胞的吞噬作用被发现之间的群体,更大的增加MPO TZD-treated表明一个更大的微生物杀死能力与控制山羊(78年]。嗜中性粒细胞高酶MPO的丰富,构成大部分azurophilic颗粒。MPO产生抗菌化合物hypohalous酸,可以释放到循环也是关键的细菌杀死后吞噬作用(78年,79年]。增加血液MPO可以由于中性粒细胞计数增加80年)和/或由中性粒细胞增加MPO表达式。它已经表明,PPARγ控制MPO表达式在某些激活巨噬细胞(81年),但罗格列酮降低MPO含量中性粒细胞在兔子82年吡格列酮)和降低MPO的中性粒细胞数量和表达在几个种类83年]。在我们的研究很可能TZD MPO的表达增加。不可能肯定地结束这个在目前的研究中,因为我们没有执行全血白细胞计数;然而,缺乏不同群体之间的中性粒细胞百分比支持增加中性粒细胞释放MPO的和/或表达的TZD组。高等MPO也伴随着更大的炎症84年]。炎症标记物没有说明增加炎症,而是减毒TZD-treated与炎症控制山羊;因此,它更有可能增加了TZD MPO的表达。总的来说,我们的数据表明,尽管TZD没有影响中性粒细胞吞噬作用,中性粒细胞的细菌杀死能力可能增强。

4.10。TZD增加脂肪细胞大小尽管没有转录组的影响

数据显示TZD的影响脂肪组织减少释放NEFA和稍微改变脂肪细胞的大小。组织的数据表明,TZD-treated山羊有显著减少中型TZD治疗1周后脂肪细胞。增加小脂肪细胞的活跃的脂肪形成的说明。新脂肪细胞的形成通常先于大脂肪细胞的形成(85年]。我们的数据是一致的这一普遍的观察,因为大的脂肪细胞的比例在后期TZD-treated动物大。PPARγ是脂肪形成的完善的主监管机构(15]。因此,看来TZD对脂肪组织生物效应。令人惊讶的是,没有观察到TZD效应在脂肪组织目标基因的表达。缺乏对脂肪组织的基因表达的影响是一致的,在怀孕的干奶牛进行的研究(73年]。然而,在另一项研究中,没有干奶牛,注入TZD影响多个基因的表达,包括PPARγ目标基因,但效果只是暂时的,尽管连续注射(86年]。

尽管没有显著影响表达的几个主要在脂肪组织,脂肪生成的基因的存在降低NEFA和更大的组织,特别是在CTZD组,表明脂质积累。甘油三酯在脂肪组织可以争夺的积累与乳腺脂肪前体。这不能完全证明在目前的工作,但我们可以推测,如果现有的,我们应该发现牛奶脂肪减少生产CTZD动物。我们没有观察到显著变化在牛奶脂肪。然而,我们观察一个倾向于更高的表达式在MEC的几个脂肪生成的基因和PPAR的目标γ如FASN,SCD1,PPARG在CTZD-treated动物(13]。因此,我们可以推测,TZD在我们的实验中帮助乳房组织保持牛奶脂肪合成,尽管竞争与脂肪组织脂肪酸。

4.11。是应对TZD受不到最佳的身体条件和饮食不足?

缺乏PPAR TZD对表达的影响γ目标基因在脂肪组织和非常小的影响相同的基因的表达在MEC表明TZD PPAR的弱活化剂γ。然而,最近牛乳腺细胞体外工作表明,为了2,4-thiazolidinedione激活PPARγ维生素A代谢物9 -独联体视黄酸是必需的(11]。9 -独联体视黄酸是一种特定Retinoic-X-Receptor活化剂,PPAR的专异质二聚体γ(13]。正如上面所讨论的,山羊在目前的实验似乎有反应喉炎的症状。uberis类似于牛负能量的平衡。我们的山羊是薄,他们来自一个农场,他们从不擦过,只收到了干草和少量的补充。这可能给政权提供了足够数量的维生素a。因此,可能我们的山羊有一些缺乏维生素A和,因此,9 -水平较低独联体视黄酸减少PPAR的响应γ激活。不幸的是,我们没有测量9 -水平独联体视黄酸在等离子体在目前的实验中。

5。这项研究的限制和机会

目前的研究提出了一些限制。这些包括山羊的可用性与身体条件低于最优和缺乏平衡配给哺乳期山羊之前和期间的实验。此外,我们没有测量个体的采食量。上面的限制可以但是也被认为是一个机会。奶牛,一般来说,经验负能量平衡和各种营养物质的缺乏在产后早期。这也是乳腺炎发病率升高的时间;因此,我们的模型似乎更早比晚哺乳期牛有关。推断可能的缺陷(或低水平)9 -独联体视黄酸的血液会减少PPAR的反应γTZD。由于上述原因,未来的实验考虑同样的待遇与良好的身体条件和肥胖的动物,包括足够的维生素a的水平,应该执行。

大幅增加的解释髓过氧物酶会更容易与白细胞计数数据。使用胰岛素和各种胰岛素敏感性指数似乎没有足够的;insulinaemic夹的使用可以帮助在数据解释。我们总RNA的低RIN小于理想。尽管如此,我们证明了低RIN并不总是一个问题和数据可以使用如果缺乏了RIN对基因表达的影响。

最后,该研究将受益于使用大量的动物。六个动物可以提供足够的统计能力,但在我们的例子中,2动物有可能减少的损失的能力观察生物相关的影响。

6。摘要和结论

使用的亚临床乳房炎模型在目前实验之前建立。我们证实了该模型的有效性,可用于未来的研究。此外,乳房内的注入的山羊的反应喉炎的症状。uberis有点类似于奶牛经历负面的能量平衡。

管理TZD哺乳期乳制品山羊发生亚临床乳腺炎相对温和的影响产奶量和组件和整体代谢可能暂时降低胰岛素敏感性由TZD改善治疗。TZD注入有强烈影响炎症反应和鳞状细胞癌。尤其值得注意的是TZD对肝脏的影响,有更好的总体响应IMI后炎症的情况,以及中性粒细胞的功能。尽管没有任何影响白细胞吞噬作用,TZD中性粒细胞的杀戮能力(即增加。髓过氧物酶)。整体的数据表明,动物对待TZD有改善有机反应乳腺感染。

牛奶脂肪合成并不是增加而是牛奶脂肪合成的减少由于乳腺感染部分由TZD减毒治疗。虽然我们发现一些TZD注入的生物效应,我们只观察表达PPAR的影响不大γ目标基因在MEC但不影响脂肪组织。低于预期的响应TZD的基因表达的象征是一个相对较弱的PPAR的活化剂γ。也有可能,在目前的研究中,缺乏一个转录组TZD效应是由于动物的不到充分的条件和/或某种营养缺乏。我们推测,山羊在目前的实验中有一个不到适量的维生素a和其代谢物9 -独联体视黄酸。这种猜测值得进一步调查。

我们的假设是PPAR的激活γ(1)提高了对乳腺感染和(2)增强合成的牛奶脂肪。我们可以得出结论,TZD注入改善总体响应乳腺感染没有或对牛奶合成和基因表达的影响很小。我们的数据表明PPAR的可能性γ只是弱激活TZD、阻碍一个完整的演示上述假设。为了充分证明上述假设研究山羊中使用一个适当的饮食和良好的身体条件是必需的。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

支持的工作是舱口/跨州农业部动物卫生和疾病批准号NE1048收到马西莫Bionaz和查尔斯·t·Estill来自俄勒冈州立大学的研究站。作者感谢玛丽Smallman和俄勒冈州立大学羊与动物管理中心工作人员的帮助。欣赏是扩展到教授约瑟夫·s·贝克曼(美国俄勒冈州立大学生物化学和生物物理学)和内森·洛佩兹(教师在贝克曼的实验室的研究助理,俄勒冈州立大学生物化学和生物物理学)帮助低温恒温器和染色方法。作者感谢萨曼莎·理查兹,劳伦·罗伯逊达尔夫妇,和劳拉·约翰斯顿必不可少的帮助进行体内实验,包括照顾动物,挤奶,注射2,4-thiazolidinedione,血液和牛奶样本收集。作者感谢教授Gerd Bobe动物和牧场在俄勒冈州立大学科学系关键论文的修改。

补充材料

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