Smad2/3上调波形蛋白的表达,影响其分布DBP-Exposed塞尔托利氏细胞

文摘

塞尔托利氏细胞(SCs)睾丸生殖细胞提供生理和营养支持。波形蛋白的细胞骨架在SCs打乱了邻苯二甲酸二丁酯(菲律宾),导致SCs功能障碍。在先前的研究中,我们发现过氧物酶体proliferator-activatedα受体(PPARα)影响波形蛋白的分布影响DBP-exposed SCs的磷酸化。在目前的研究中,我们调查的角色Smad2/3 DBP-exposed SCs调节波形蛋白的表达。我们假设Smad2/3影响波形蛋白的分布通过调节其表达,有相声Smad2/3和PPAR之间α。实时PCR和ChIP-qPCR结果表明SB431542 (Smad2/3抑制剂)可以显著减弱在类似SCs引起的波形蛋白的表达。磷酸化和可溶性波形蛋白表达下调SB431542预处理。WY14643 (PPAR激动剂α)预处理刺激,而GW6471 (PPAR的拮抗剂α)抑制,Smad2/3的活动;SB431542预处理也抑制了PPAR的活动α,但没有拯救波形蛋白DBP-induced崩溃。我们的结果表明,除了促进波形蛋白的磷酸化,菲律宾也刺激波形蛋白的表达通过激活Smad2/3在SCs,从而诱发不规则波形蛋白分布。

1。介绍

精子发生是一个重要的过程男性生殖功能。在一个报告中,通常subfertility或不孕是由于精子形成的缺陷(1]。邻苯二甲酸二丁酯(菲律宾)是一种增塑剂,广泛分布于环境和经常联系的人。以前的流行病学、动物、和分子研究表明,精子发生中断(类似2- - - - - -6]。精子形成发生在细精管;SCs是独一无二的体细胞在细精管,提供生理和营养支持精母细胞成熟(7,8]。定期“开放”和“关闭”SCs和生殖细胞之间调停精母细胞的成熟过程9]。波形蛋白是紧密相连的连接生殖细胞和SCs细胞桥粒结构。波形蛋白纤维的分布在精上皮细胞周期动态变化(10]。先前的研究已经表明,波形蛋白细胞骨架被破坏在DBP-exposed SCs [11]。然而,这一过程的机制仍然是未知的。

在我们之前的研究中,我们发现水平的磷酸化和可溶性波形蛋白高DBP-exposed SCs相比GW6471 + DBP-treated SCs [12]。我们没有调查波形蛋白mRNA表达,但波形蛋白的表达也会影响可溶性波形蛋白的浓度。根据一项研究,波形蛋白mRNA在DBP-exposed SCs调节(13]。

波形蛋白mRNA的表达是受Smad2/3在其他几个细胞系,如食管鳞状细胞癌细胞系(例如,Eca109 EC9706, KYSE150),鳞状细胞癌的头部和颈部细胞系Tu686,骨骼C2C12肌原性的细胞系,正常的人类表皮角化细胞的细胞。Smad2/3 Smad绑定元素结合在启动子区域的波形蛋白调控其表达(14- - - - - -17]。在这项研究中,我们调查的角色Smad2/3调节DBP-exposed SCs的波形蛋白mRNA的表达。

我们假设Smad2/3可能影响波形蛋白的分布通过调节DBP-exposed SCs的mRNA表达,可能通过与PPAR相声α;这两个因素影响合作波形蛋白的分布。染色质免疫沉淀反应和定量实时PCR (ChIP-qPCR)分析确定监管地区波形蛋白受磷酸化Smad2/3的启动子。波形蛋白的分布对经过不同方法处理过的SCs决心与免疫细胞化学、免疫荧光和各种受体激动剂或拮抗剂疗法被用来调查Smad2/3和PPAR之间的关系α。

2。材料和方法

2.1。动物和试剂

购买3个男性Sprague-Dawley (SD)老鼠从第三军医大学实验动物中心(中国重庆)。他们习惯在3 r(替代、减少和细化)原则。菲律宾和4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)从Sigma-Aldrich有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。WY14643 (sc - 203314), GW6471 (sc - 300779), SB431542 (sc - 204265),对波形蛋白抗体(V9, sc - 6260), p-vimentin (Ser83, sc - 16674 r), PPARα(sc - 1985) N-19 p-Smad2/3 (sc - 11769),和Smad2/3 (sc - 8332)购买的圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯、钙、美国)。一个抗体β肌动蛋白(AA128) HRP-labeled二级抗体(A0216、A0208和A0181),西方/ IP细胞裂解缓冲(P0013), BCA蛋白质分析工具包(P0010),一个增强化学发光试剂盒(P0018A),芯片检测工具(P2078)和PCR / DNA净化设备(D0033)从Beyotime购买生物技术研究所(Beyotime生物技术研究所、海门、中国)。DyLight 488 AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白(H + L)从地球上购买牛(美国旧金山,CA)。0.22μ0.45 m PVDF膜μm NC膜,增强化学发光设备买来密理博公司(美国Billerica的)。3,3′-diaminobenzidine (DAB)工具包用于采用实验从中山购买金桥生物技术(ZSBiO,北京)。引物由上海Sangon合成生物工程技术与服务有限公司(上海,中国)。逆转录工具包(RR047A)从豆类购买生物技术有限公司(大连)。定量实时PCR试剂盒(A6001)从Promega有限公司购买的Promega(北京)生物技术有限公司有限公司

2.2。塞尔托利氏细胞的准备

主要SCs分离根据先前描述的过程18- - - - - -21]。总之,胰蛋白酶(美国HyClone,罗克福德,IL)和胶原酶IV (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)被用来消化剪刀睾丸组织块30 - 60分钟37°C。停止消化后添加10%的边后卫(美国Gibco)包含杜尔贝科的修改鹰的中/火腿的营养混合物F12 (DMEM / F12, 1: 1)介质(pH值7.2)(IL HyClone热费希尔科学,罗克福德,美国),混合是100目筛分消毒。新分离的细胞培养48小时在10厘米直径菜(美国纽约康宁)DMEM / F12, 10%的边后卫,1 x penicillin-streptomycin (Beyotime生物技术研究所、海门、中国)5%股份有限公司₂在35°C。然后,细胞治疗20毫米Tris-HCl (pH值7.4)为2.5分钟。

2.3。细胞培养和治疗

大约2×10⁶SCs被播种到10厘米的菜肴。菲律宾是稀释在DMSO(二甲亚砜)100毫米。10毫升的菲律宾菜被添加到每个10厘米,100年最终浓度μm .平等的DMSO溶液添加到控制菜肴。受体激动剂或拮抗剂(GW6471、WY14643 SB431542)添加治疗类似前两小时的浓度为10μ米,根据先前的研究14,22,23]。SCs DMSO溶液处理,菲律宾,SB431542 +菲律宾,SB431542 24 h中提取RNA。SCs对待菲律宾,WY14643 +菲律宾,GW6471 +菲律宾,或SB431542 + 0 h,类似1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 24 h,分别提取蛋白质。的用量是基于类似CCK8和免疫荧光实验。在CCK8实验中,我们添加了0,20岁,40岁,60岁,80年、100年和200年μM SCs的菲律宾来检测其毒性。结果表明,菲律宾以剂量依赖性的方式促进滋养细胞增殖。我们选择100μ米,因为它的不利影响在SCs波形蛋白在24小时的时间点是明显但不严重到足以干扰免疫印迹。我们选择的一系列时间点在24 h因为诱导的损害菲律宾SCs太严重的在48小时或72 h。此外,我们还考虑了其他研究人员使用的剂量和时间点(24]。

2.4。实时聚合酶链反应

核糖核酸提取试剂盒(美国表达载体)的SCs治疗。浓度和纯度的RNA被Nanodrop量化2000(美国热费希尔科学,罗克福德,IL)。大约1μg总RNA用于生成cDNA使用PrimeScript RT试剂盒和gDNA橡皮擦(实时完美)。PCR反应7μL nuclease-free水,10μL GoTaq探针qPCR大师混合(2 x),和1μL cDNA和引物,分别在20μL反应总额。实时PCR进行使用Bio-Rad IQ5(美国Bio-Rad)预热盖到105°C,初始变性5分钟在95°C,和40的重复(95°C 10年代,60°C 30年代),紧随其后的是扩展为5分钟在72°C,并使用的数据进行了分析方法。引物用于表列出了这个实验1。

2.5。ChIP-qPCR

芯片检测工具(P2078)用于实验从Beyotime购买生物技术研究所(海门,中国)。ChIP-qPCR以前描述的详细过程(12]。一个anti-p-Smad2/3抗体被用在这个实验中(1μg)。本实验中使用引物是针对Smad绑定元素(在波形蛋白的启动子区域”(25]。我们设计了四对引物在SBE-containing侧面序列,2000年英国石油公司上游的转录启动波形蛋白。引物序列表中列出1。初步实验后,只有针对地区837−−924显示引物扩增效率高,所以我们选择这个区域进行进一步的实验。产品尺寸是88个基点。

2.6。西方墨点法

蛋白质提取SCs的0 h, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 24 h,分别GW6471 +菲律宾,菲律宾之后,WY14643 +菲律宾,或SB431542 +治疗类似。西方/ IP细胞裂解缓冲(20毫米,pH值7.5三,150毫米氯化钠,特里同x - 100 1%,焦磷酸钠,β甘油磷酸盐、EDTA、Na₃签证官₄和亮抑酶肽)被用作蛋白质提取缓冲。蛋白质浓度测定BCA蛋白质化验设备。然后,20岁到40岁μ克样品蛋白质被加载到5% - -12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)。蛋白质在凝胶都转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜在18 V 30分钟使用Trans-Blotting SD半干电泳转移细胞(美国Bio-Rad)或转移到PVDF膜或硝基湿转移在80 V或70 V 2 h在4°C或一个包含容器的冰水。转移膜被封锁在TBST 5%脱脂奶粉在室温下1 - 2 h。首先,抗体与膜在4°C孵化过夜。肌动蛋白抗体的稀释比例是1:1000;对于其他抗体,它是1:500。与0.1% TBST三洗后5分钟,二次抗体与膜在室温下孵化1 h或第一在4°C的环境为4 h在室温下培养30分钟或1 h。稀释比例的二次抗体都是1:1000。最后,膜与0.1% TBST洗3次,5分钟。信号被开发使用一种增强化学发光设备从密理博公司购买(美国Billerica的)。 FUSION FX5 Spectra (Vilber, France) was used to image the membranes. Densitometric analyses of immunoblots were performed by Image J software. Phosphoprotein and total protein levels were normalized by actin.

2.7。免疫荧光分析

801001年共焦文化菜(20毫米直径,康宁,纽约,美国)被用来执行免疫荧光实验。治疗后24 h, SCs固定在4%多聚甲醛(PFA) 15分钟,然后用0.1% Triton x - 100与磷酸盐(稀释)。与PBS三洗后,固定细胞孵化与波形蛋白抗体(1:500)在一夜之间在4°C。与PBS三洗后,细胞被孵化DyLight 488 AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白(H + L)二级抗体(1:1000)在室温下1 H。然后,这些细胞被孵化与DAPI 30分钟洗和PBS三次。徕卡TCS-SP5共焦激光扫描显微镜(徕卡,曼海姆,德国)被用来可视化波形蛋白的分布。

2.8。采用免疫分析

SCs培养在48-well板块,不同治疗后,细胞被固定在4% PFA 15分钟。与PBS三洗后,细胞治疗在PBS 0.1% Triton x - 100 10分钟。然后,细胞治疗H₂O₂10分钟。与PBS三洗后,细胞被孵化与5%牛血清白蛋白在PBS室温1 h。然后,细胞被孵化与波形蛋白抗体在一夜之间在4°C。三个洗PBS,细胞被孵化与辣根过氧化物酶(合)标记anti-mouse二级抗体(ZSBiO,北京)在室温下1 h。4洗后,细胞与DAB-chromogen孵化并在显微镜下观察,直到适当的棕色。然后,细胞用PBS彻底清洗。尼康Eclipse TE2000年代倒置显微镜下原来200 x放大和尼康数码视觉(尼康、日本)被用来捕捉照片。

2.9。统计分析的免疫印迹、实时PCR和ChIP-qPCR结果

组之间的差异被单向方差分析评估(方差分析),其次是Holm-Sidak测试使用σ3.5统计软件(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。Smad2/3的作用在调节波形蛋白mRNA的表达

实时PCR用于测量控制和波形蛋白mRNA表达,类似Smad2/3抑制剂(SB431542), + SB431542-treated SCs类似。DBP-exposed SCs呈现明显的波形蛋白mRNA水平增加倍的变化相对于细胞培养(图控制条件1(一)),SB431542 +——或者类似SB431542-treated SCs显著减少波形蛋白mRNA水平——或者倍的变化相对于SCs培养在控制条件下,分别。我们设计了四对引物扩增SBE-containing序列波形蛋白启动子区域。最有效的一对引物被选中执行ChIP-qPCR实验。作为显示在图1 (b)波形蛋白的,绑定的p-Smad2/3 DBP-treated SCs显著增加倍变化相对于SCs培养在控制条件下,和抑制Smad2/3 SB431542可以显著减少p-Smad2/3的绑定的SBE波形蛋白倍SB431542 + DBP-treated SCs和变化倍SB431542-treated SCs的变化相对于SCs在控制条件下培养。ChIP-qPCR结果与实时PCR结果一致。总的来说,这些发现表明,Smad2/3 DBP-exposed SCs调节波形蛋白mRNA的表达。

3.2。Smad2/3的作用在调节波形蛋白表达的蛋白质

西方墨点法是用来检测在DBP-treated p-Smad2/3 SCs的活动,和磷酸化和可溶性波形蛋白被发现在菲律宾和SB431542 + DBP-treated SCs。在数据显示2(一个)和2 (d)总Smad2/3蛋白与肌动蛋白的相对浓度保持稳定在24 h DBP-treated SCs;相对集中的p-Smad2/3肌动蛋白相比DBP-treated SCs显著增加倍变化在1 h,倍变化在3 h,倍变化6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs培养在控制条件下,分别。确定Smad2/3磷酸化和可溶性波形蛋白的影响,西方墨点法。在数据显示2 (b)和2 (e)磷酸化DBP-treated SCs波形蛋白含量增加倍变化在1 h,倍变化在3 h,在6小时倍变化,倍变化在12 h,然后下降倍变化在24 h相对于SCs 0 h。在数据显示2 (c)和2 (e),磷酸化在SB431542 + DBP-treated细胞波形蛋白水平增加倍变化在1 h,然后下降倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs 0 h。在每个时间点磷酸化波形蛋白水平明显下降在SB431542 + DBP-treated比DBP-treated细胞()。肌动蛋白的可溶性波形蛋白的相对数量DBP-treated SCs增加倍变化在1 h,倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs 0 h。可溶性波形蛋白在SB431542 + DBP-treated SCs下降倍变化在1 h,倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h,相对于SCs 0 h。可溶性DBP-treated SCs的波形蛋白水平明显高于SB431542 + DBP-treated细胞在每一个时间点()。总之,Smad2/3 DBP-exposed SCs波形蛋白磷酸化和溶解度的影响。

3.3。PPAR之间的关系α并在DBP-Treated SCs Smad2/3

拮抗剂(GW6471)和PPAR激动剂(WY14643)α被用来研究PPAR的效果吗αSmad2/3的活动。如数据所示3(一个)和3 (b)的相对数量p-Smad2/3肌动蛋白在WY14643 + DBP-treated SCs增加到1。倍变化在1 h,倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs 0 h。的相对数量p-Smad2/3肌动蛋白在GW6471 + DBP-treated SCs增加倍变化在1 h,然后下降倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs 0 h。的相对数量在WY14643 + DBP-treated SCs p-Smad2/3明显高于GW6471 + DBP-treated细胞在每一个时间点()。WY14643 + DBP-treated SCs Smad2/3水平增加倍变化在1 h,在3 h倍变化,倍在6 h和减少变异倍在12 h和变异倍变化在24 h相对于SCs 0 h。GW6471 + DBP-treated SCs Smad2/3水平增加倍变化在1 h,在6小时倍变化,倍在12 h和减少变异倍3 h和变异倍变化在24 h相对于SCs 0 h。之间没有显著差异水平Smad2/3 WY14643 + DBP-treated和GW6471 + DBP-treated SCs 1 h, 6小时和12小时()。Smad2/3显著水平()在WY14643 + DBP-treated高于GW6471 + DBP-treated SCs 3 h和24小时。

此外,抑制剂p-Smad2/3 (SB431542)是用来评估的影响Smad2/3 PPAR的活动α。如数据所示3 (c)和3 (d),PPARα水平DBP-treated SCs增加倍变化在1 h,倍变化在3 h,在6小时倍变化,倍变化在12 h,然后下降倍变化在相对于SCs 24小时0 h;PPAR的相对数量α在SB431542 + DBP-treated细胞增加倍变化在1 h,然后下降倍变化在3 h,倍变化在6 h,倍变化在12 h,倍变化在24 h相对于SCs 0 h。PPARα显著水平(在DBP-treated SCs)高于SB431542 + DBP-treated细胞3 h, 6 h, 12 h, 24小时。这个结果建议可以激活PPAR类似α,PPAR的激活α反过来激活p-Smad2/3, PPAR发起一个积极的反馈回路α。总之,WY14643诱导Smad2/3的活动,Smad2/3 GW6471抑制活动,SB431542抑制PPAR的活动α在DBP-exposed SCs。

3.4。波形蛋白的分布类似,SB431542 + DBP-Treated SCs在24 h

免疫荧光和采用免疫实验检测波形蛋白的分布进行控制和菲律宾,菲律宾在24 h + SB431542-treated细胞。如数据所示4(一)和4 (d),波形蛋白是对照组的分布规律和主要是作为一个网络结构,异常聚合波形蛋白很少观察到。如数据所示4 (b)和4 (e)、正则分布波形蛋白在DBP-treated破坏细胞,异常聚合波形蛋白部分分配给区域的细胞,和一个大比例的细胞显示集中波形蛋白在细胞核。如数据所示4 (c)和4 (f),波形蛋白在SB431542 + DBP-treated SCs是大量存在不规则长丝状结构不同于DBP-treated细胞。总之,SB431542没有反向的崩溃引起的波形蛋白类似但触发波形蛋白的分布不规则的长纤维。

4所示。讨论

精子形成发生在细精管,SCs是独一无二的体细胞在细精管26)提供结构和营养支持在生殖细胞的成熟过程中27]。波形蛋白是细胞桥粒(的一个重要组成部分28),以及波形蛋白的破坏会导致功能障碍类似细胞骨架的细胞桥粒(24]。没有SCs的支撑结构和营养供应,生殖细胞容易凋亡[29日]。

我们之前的结果表明,增加被PPAR波形蛋白的磷酸化α的主要机理是破坏SCs的波形蛋白(12]。然而,波形蛋白的表达是否也由PPAR规定α还不清楚。在这项研究中,我们调查了Smad2/3的作用在调节波形蛋白mRNA表达和Smad2/3和PPAR的关系α在SCs波形蛋白的分布。

我们的存在结果表明,波形蛋白mRNA表达调节在DBP-exposed SCs 24 h。前一个微阵列研究表明,波形蛋白是调节在妊娠20 DBP-treated鼠睾丸(GEO加入数字:GSE13550)。以前的蛋白质组学研究也显示,波形蛋白是调节在DBP-exposed鼠睾丸13]。这些结果表明,波形蛋白表达被菲律宾刺激。先前的研究已经表明,Smad2/3调节波形蛋白的表达,和目标是受p-Smad2/3 SBE-specific序列GTCTG或CAGAC [30.,31日]。在这项研究中,我们发现一个SBE序列波形蛋白启动子的837年位于−−924 bp ChIP-qPCR相对于转录起始点。此外,12英国石油下游ChIP-qPCR我们选定目标区域的分析是一个AP1目标站点。绑定的AP1网站可能促进p-Smad2/3目标序列(17]。我们假设Smad2/3交互与其他转录因子在调节波形蛋白的表达。

接下来,我们调查的影响Smad2/3磷酸化和波形蛋白的溶解度。结果(如图2 (b),2 (c),2 (e),2 (f))表明,Smad2/3有抑制作用的抑制与DBP-treated SCs相比,波形蛋白的磷酸化。的影响Smad2/3波形蛋白的溶解度明显是可溶性波形蛋白的相对浓度显著降低()在SB431542 + DBP-treated SCs时间的方式。这是与以往的研究一致(14,15,32,33]。在这些研究中,波形蛋白的upregulation刺激Smad2/3密切相关,并直接SB431542治疗抑制波形蛋白的表达。这些结果表明,波形蛋白表达的调控Smad2/3可能是一个普遍机制。

照亮PPAR之间的关系α,GW6471 Smad2/3 WY14643, SB431542被使用。结果表明,Smad2/3的活动被GW6471提升WY14643和抑制。PPAR之间的关系α和Smad2/3类似于之前的研究,TGFβ1-inducedαsma是高架WY14643预防组,而抑制在GW6471预防组(34]。另一项研究表明,WY14643可能上调TGF的mRNA的表达β在肺移植和脾脏35]。此外,SB431542被用来抑制p-Smad2/3的活动,和结果表明,PPAR的活动α没有受到SB431542 1 h,但3 h后下降。这些结果表明PPARα刺激激活的p-Smad2/3 DBP-exposed SCs, Smad2/3 PPAR可能发起一个积极的反馈回路α。

的干扰波形蛋白细胞骨架在DBP-treated SCs SB431542没有恢复,但显示一个新的异常分布,主要包括丰富的不规则长丝状结构。波形蛋白的磷酸化SB431542 + DBP-treated SCs是抑制相比DBP-treated组。SB431542抑制波形蛋白的表达。异常高和低水平的磷酸化影响的动态重组的波形蛋白(36]。这两个因素可能原因的异常分布波形蛋白在SB431542 + DBP-treated SCs。研究与其他激酶Smad2/3的交互影响波形蛋白的转译后的修改DBP-treated SCs将是我们的下一个目标。波形蛋白的不规则长丝状结构背后的机制可能涉及信号转导沿着这些细丝(37]。

我们确定异常刺激的活动在SCs Smad2/3扰乱了类似动态组装SCs之间的联系和发展中精子的影响Smad2/3波形蛋白是引起一连串的反应菲律宾的一个方面。通过Smad3 SCs扩散是由苯丙酸诺龙;Smad3基因敲除小鼠表现出延迟SCs成熟(38,39]。塞尔托利氏细胞分离从睾丸生殖细胞间质和合作的小肌肉的细胞促进精子发生(40]。菲律宾,邻苯二甲酸盐,可以引起睾丸间质细胞增生,然后剥夺属于SCs的空间(41]。根据最近的一项研究中,SCs可以重新编程到睾丸间质细胞Wt1消融(42]。前两个阵列研究表明,Wt1基因表达下调在菲律宾引起的睾丸(GSE25196 GSE13550)。Upregulation波形蛋白,epithelial-to-mesenchyme转换的标志(43- - - - - -45),由Smad2/3诱导在类似SCs也可能触发epithelial-to-mesenchyme变换,扰乱上皮细胞层,并影响血睾丸屏障的稳定性。血睾丸屏障的破坏的一个主要引起的不良反应(类似46]。此外,TGF相声β1 / Smad3孤儿核受体Nur77据报道,压制的类固醇生成睾丸间质细胞(47]。波形蛋白参与胆固醇的运输类固醇生成(48- - - - - -50]。类固醇生成中断是根据几个类似以前的研究(51,52]。PPARα据报道,是一个间接transrepressor SF1 steroidogenic基因在睾丸53]。在某种程度上,PPARα也会影响类固醇生成的影响在DBP-exposed睾丸细胞波形蛋白。虽然我们进行我们的实验在SCs,还有在睾丸间质细胞波形蛋白(54]。这里机制推导出也可能阐明DBP-exposed睾丸间质细胞的研究。

这项研究的一个限制是,我们只研究了波形蛋白的表达和磷酸化DBP-exposed SCs。在生理情况下,泛素化、糖基化、乙酰化作用,和许多其他的修改影响波形蛋白的分布和功能(55]。在未来的研究中,应该考虑其他修改。还需要在体内的研究来证实这些体外研究的结论推断。

5。结论

在这项研究中,我们发现在DBP-exposed SCs Smad2/3调节波形蛋白的表达。PPAR的抑制α可以减弱Smad2/3的活动。对PPAR Smad2/3可能有一个积极的反馈作用α。Smad2/3和PPARα合作的规范表达,波形蛋白的磷酸化,分布DBP-exposed SCs(如示意图,如图所示5)。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(国家自然科学基金委),没有。81072319,国家自然科学基金委(没有的关键程序。81130051)。

引用

1. a·波伊尔l . Hermo m . Paquet b . Robaire和d . Boerboom“精小管退化和不育小鼠持续激活WNT / CTNNB1信号在支持细胞,”生物的繁殖,卷79,不。3、475 - 485年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a·j·德雷克,s . van den Driesche, h·m·斯科特·g·r·哈奇森j·r·塞克尔和r·m·夏普“糖皮质激素放大二丁基phthalate-induced睾酮生产中断和男性生殖发展”内分泌学,卷150,不。11日,第5064 - 5055页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. m . Ema和e . Miyawaki”负面影响生殖系统的发展在雄性大鼠的后代单丁酯、酞酸二丁酯的代谢产物在怀孕的后期,“生殖毒理学,15卷,不。2、189 - 194年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. j·s·费舍尔,麦克弗森,n .马尔凯蒂和r·m·夏普“人类“睾丸发育不全综合症”:一个可能的模型使用大鼠子宫里接触邻苯二甲酸二丁酯,”人类生殖,18卷,不。7,1383 - 1394年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j .包m . Wang x Ning et al .,“个人护理产品中邻苯二甲酸酯的浓度和累积暴露在成年女性和婴儿在上海,“毒理学和环境卫生杂志》上的一个部分:当前的问题,卷78,不。5,325 - 341年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. j·d·米克尔和k·k·弗格森“尿邻苯二甲酸酯代谢物与降低血清睾酮在男性、女性和儿童NHANES 2011 - 2012,”临床内分泌和代谢杂志》上,卷99,不。11日,第4352 - 4346页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. m·g·阿尔维斯t·r·迪亚斯b·m·席尔瓦和p·f·奥利维拉,“在睾丸代谢合作药理目标:从疾病到避孕,”当前分子药理学,7卷,不。2、83 - 95年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l·m·g·阿尔维斯拉托,r·a·卡瓦略p i Moreira索科罗,和p·f·奥利维拉,”塞尔托利氏细胞代谢的激素控制调节精子发生。”细胞和分子生命科学,卷70,不。5,777 - 793年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. d . d . Mruk和c . y . Cheng Sertoli-sertoli sertoli-germ细胞相互作用及其意义精上皮细胞在精子发生过程中,生殖细胞运动”内分泌检查,25卷,不。5,747 - 806年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. L.-J。朱,告诫。宗庆后,d·m·菲利普斯,a . j . Moo-Young和c . w . Bardin”分布的变化在老鼠的塞尔托利氏细胞中间丝精上皮细胞周期和产后发展”解剖记录,卷248,不。3、391 - 405年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. e . Kleymenova c . Swanson k . Boekelheide和k . w . Gaido”暴露在子宫内迪(n邻苯二甲酸二丁)改变了波形蛋白细胞骨架的胎鼠塞尔托利氏细胞和破坏滋养cell-gonocyte接触,”生物的繁殖,卷73,不。3、482 - 490年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. x张w·刘,杨h . et al .,”PPAR的抑制α变弱波形蛋白磷酸化在ser - 83和波形蛋白细丝崩溃暴露大鼠足细胞体外,类似“生殖毒理学,50卷,11到18门,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a m。包,X.-M。男人,X.-J。郭et al .,“邻苯二甲酸二丁酯对雄性大鼠生殖的影响在青春期后,“亚洲男科学杂志》,13卷,不。5,702 - 709年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. c . l .彭日成问:Li Wei et al .,“TGF -β1 / Smad信号通路调节epithelial-to-mesenchymal过渡在食管鳞状细胞癌:细胞系的体外和临床分析和游牧民族哈萨克病人从西北新疆,中国。”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。12篇文章ID e112300 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m•d•欧凯恩称诉杰克逊,a Kissenpfennig et al .,“SMAD抑制变弱上皮间充质转变的主要角化细胞体外,”实验皮肤病学,23卷,不。7,497 - 503年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. d . c . Yu y . Liu黄et al .,“TGF -β通过TGF - 1介导上皮间充质转变β/ Smad通路在头部和颈部鳞状细胞癌,”肿瘤的报道,25卷,不。6,1581 - 1587年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 张x, y . Wu m .鲑鱼,x, z . e . Zehner,“TGFbeta1调节波形蛋白基因表达在C2C12分化骨胳肌原性的细胞株需要Smads AP-1 Sp1的家人,”Biochimica et Biophysica Acta-Molecular细胞研究,卷1773,不。3、427 - 439年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m . Lydka b . Bilinska c . y . Cheng和d·d·Mruk”肿瘤坏死因子α介导的塞尔托利氏细胞屏障体外重组涉及矩阵metalloprotease 9 (MMP9)包围的细胞间粘附molecule-1 (ICAM-1)和肌动蛋白细胞骨架,“精子发生,卷2,不。4、294 - 303年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p·k·尼科尔斯,c·a·哈里森,r·b·吉尔克莱斯特落寞p·g·p·g·斯坦顿,“生长分化因子9是滋养细胞的生殖细胞调节器功能,“内分泌学,卷150,不。5,2481 - 2490年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. y, y, y王等。”$\mathrm{p},{\mathrm{p}}^{\mathrm{”}}$通过FasL-dependent dde的老鼠的塞尔托利氏细胞凋亡通路,”生物医学和生物技术杂志》上ID 181282条,卷。2009年,11页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. l . Su c . y . Cheng和d d . Mruk”Adjudin-mediated Sertoli-germ细胞结拆卸影响塞尔托利氏细胞屏障功能体外和体内,”国际生物化学和细胞生物学杂志》上,42卷,不。11日,第1875 - 1864页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. m . Regueira m·f·里埃拉m . n . Galardo e·h·Pellizzari s . b . Cigorraga和s . b . Meroni”PPAR的激活α和PPARβ/δ调节塞尔托利氏细胞新陈代谢。”分子和细胞内分泌学,卷382,不。1,第281 - 271页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. t . Kawahara m .山下式k Ikegami et al .,”及负调节牙周韧带细胞的早期BMP2-dependent承诺到硬组织形成细胞,”《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。5篇文章ID e0125590 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m . s .阿拉姆,s . Ohsako t·w·泰n .方向y金井,和m . Kurohmaru,”迪(n邻苯二甲酸二丁)诱导鼠支持细胞波形蛋白细丝中断:可能与精子发生的细胞凋亡,”解剖学、Histologia Embryologia,39卷,不。3、186 - 193年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m . r . Rogel p . n .索尼j . r . Troken a . Sitikov h·e·Trejo和k . m .脊,“伤口修复和重建所需波形蛋白是充分的和在肺泡上皮细胞,”美国实验生物学学会联合会杂志,25卷,不。11日,第3883 - 3873页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. l·拉托索科罗,j . e . b . Cavaco p·f·奥利维拉,“管状液体分泌精上皮:离子转运蛋白和水通道蛋白在滋养细胞,”膜生物学》杂志上,卷236,不。2、215 - 224年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. l·拉托m·g·阿尔维斯索科罗,ai Duarte, j . e . Cavaco p·f·奥利维拉,“为精子发生代谢调节是很重要的,”自然评论泌尿外科,9卷,不。6,330 - 338年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. a . w . Vogl k . s . Vaid和j·a·格特曼“塞尔托利氏细胞细胞骨架,”实验医学和生物学的发展卷,636年,第211 - 186页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. t·r·迪亚斯·l·拉托,公元马丁斯et al .,“胰岛素不足减少caspase-dependent培养大鼠足细胞凋亡信号,”ISRN泌尿外科ID 970370条,卷。2013年,8页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. l . j . c . Jonk s .伊藤,学术界。日,p .十Dijke, w . Kruijer”Smad绑定元素的鉴定和功能描述(JunB子”,作为转化生长因子,激活素,骨形成protein-inducible增强剂,”《生物化学》杂志上,卷273,不。33岁,21145 - 21152年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. S.-J。陈威元,s, m . Trojanowska和j·巴尔加,“互动的smad3近端smad-binding元素的人类α2 (I)所需胶原基因启动子转录激活TGF -β”,细胞生理学杂志,卷183,不。3、381 - 392年,2000页。视图:谷歌学术搜索
32. “抑制p . Wang DACH1促进迁移和入侵通过激活TGF -结肠直肠癌β介导epithelial-mesenchymal过渡。”生物化学和生物物理研究通信,卷460,不。2、314 - 319年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. c . Marmai r·e·萨瑟兰k . k . Kim et al .,“肺泡上皮细胞表达间充质蛋白质特发性肺纤维化患者,”美国Physiology-Lung细胞和分子生理学杂志》上,卷301,不。1,L71-L78, 2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. g . Oruqaj s Karnati诉Vijayan et al .,“妥协过氧化物酶体在特发性肺纤维化,恶性循环导致更高的通过TGF -纤维化反应β信号。”美国国家科学院院刊》上,卷112,不。16日,E2048-E2057, 2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. j .平贺柳泽t . Shiraishi PPAR Iwasaki et al。。α配体WY14643降低大鼠肺移植术后急性排斥反应的upregulation il - 4、il - 10和TGFβ信使rna表达。”心脏和肺移植杂志》上,28卷,不。11日,第1179 - 1172页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. r·k·Sihag m . Inagaki t .山口,t·b·谢伊和h c .裤子”的磷酸化作用的结构动力学和功能类型III和IV中间丝,”实验细胞研究,卷313,不。10日,2098 - 2109年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. d . g . Meckes Jr . n . f . Menaker和n . Raab-Traub“eb病毒LMP1调节脂质筏microdomains和波形蛋白细胞骨架对信号转导和转换,“病毒学杂志,卷87,不。3、1301 - 1311年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. j . c .年轻,s . Wakitani TGF -和k·l·拉夫兰。β总科信号在睾丸的形成和早期雄性生殖系发展,”研讨会在细胞和发育生物学,45卷,第103 - 94页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. c . Itman c .小m·格里斯沃尔德et al .,“发育调控SMAD2和SMAD3利用指导激活素信号传导的结果,“发展动态,卷238,不。7,1688 - 1700年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. d . r . Archambeault j .张照片a·约瑟夫·b·t·辛顿和h . H.-C。么,”Epithelial-mesenchymal相声在沃尔弗氏管和胎儿睾丸线发展,”《创世纪》卷,47号1,40-48,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. n标志,m·沃克McKinnell et al .,“独丁和迪(n邻苯二甲酸二丁)体外对类固醇生成和睾丸间质细胞聚集在从老鼠胎儿睾丸移植组织:与影响老鼠体内的胎儿和新生儿狨猴和体外的人,”环境健康展望,卷115,不。3、390 - 396年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. l, m . Chen问:温家宝et al .,”塞尔托利氏细胞的重编程fetal-like睾丸间质细胞Wt1消融,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷112,不。13日,4003 - 4008年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 美国x翟,h·朱w . Wang, y,和g .毛”S100A4 EMT-related蛋白的异常表达,波形蛋白和钙粘蛋白,与肝细胞癌临床病理特点和预后,”医学肿瘤学没有,卷。31日。6日,第970条,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. 郑胜耀嚼,a·阿卜杜勒·马吉德a . j . Dalley s . Stein a . Chan和c . s .法拉“上皮间充质转变(EMT) biomarkers-E-cadherin,β-连环蛋白,APC和Vimentin-in口腔鳞状细胞癌形成和转换,“口腔肿瘤,48卷,不。10日,997 - 1006年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. k . Vuoriluoto h . Haugen s Kiviluoto et al .,“波形蛋白调节EMT感应和蛞蝓的致癌h和迁移管理妳表达在乳腺癌,”致癌基因,30卷,不。12日,第1448 - 1436页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 周y、m .福冈和a .田中”di -引起的睾丸萎缩的机制n邻苯二甲酸二丁酯在大鼠。第3部分。一些酶的活性变化的滋养和生殖细胞,在金属离子的水平,”应用毒理学杂志,10卷,不。6,447 - 453年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. e .公园,c .歌曲,j .公园et al。”转化生长因子-β1信号压制睾丸甾类产生通过与孤儿核受体Nur7相声”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。8篇文章ID e104812 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. c . f .酱油,f . w . Chen Li j . Chaudhari和y . a . loannou”尼曼皮克C1细胞中PKC激活恢复亚细胞胆固醇运输,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。8篇文章ID e74169 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. f·b·Kraemer诉k·豪尔,W.-J。沈,s .爱资哈尔”胆固醇酯滴,类固醇生成。”分子和细胞内分泌学,卷371,不。1 - 2日,15 - 19,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. W.-J。沈,s . k . Zaidi, s . Patel et al .,“消融类固醇生成缺陷的波形蛋白的结果”内分泌学,卷153,不。7,3249 - 3257年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. z小风,问:Nai-Qiang, z, l .子和z,”Di(正丁基)邻苯二甲酸酯抑制睾酮合成glucocorticoid-mediated通路的老鼠,”国际毒理学杂志》上,28卷,不。5,448 - 456年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. c·j·汤普森,s·m·罗斯和k . w . Gaido”Di(正丁基)邻苯二甲酸盐有害胆固醇运输和类固醇生成在胎鼠睾丸通过快速、可逆的机制,”内分泌学,卷145,不。3、1227 - 1237年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. s . m .普卢默d·丹,j . Quinney et al .,“识别转录因子和辅活化因子受dibutylphthalate交互在胎鼠睾丸,”毒物学的科学,卷132,不。2、443 - 457年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. 美国老年群体,h .高桥,T . Mutou et al .,“非典型在成年大鼠睾丸间质细胞增生引起的低T和高LH产前Di (n邻苯二甲酸二丁)曝光。”毒物学的病理第41卷。。3、480 - 486年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. n t·斯奈德和m . b . Omary”中间丝蛋白的转录后修饰:机制和功能,“自然评论分子细胞生物学,15卷,不。3、163 - 177年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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