文摘
甲基苯丙胺(MA)诱导神经毒性与线粒体功能障碍和增强氧化应激有关。我们之前的研究表明,马诱发自噬在多巴胺能神经细胞模型(N27细胞)。MA-induced自噬和凋亡的细胞机制仍缺乏特点。在目前的研究中我们试图调查中谷胱甘肽氧化还原状态的重要性MA-induced使用硫醇氧化神经毒性,防治(NAC)。形态学和生化分析表明MA-induced N27多巴胺能细胞自噬与明显的谷胱甘肽水平的损耗。此外,预处理与南汽减少MA-induced谷胱甘肽耗竭和自噬,而谷胱甘肽的耗竭使用L-buthionine sulfoximine (L-BSO)增强的自噬。此外,NAC治疗显著减毒MA-induced凋亡细胞死亡以及氧化应激标记,即3-nitrotyrosine (3 nt)和4-hydroxynonenal (4-HNE)。在一起,这些结果表明,NAC对MA-induced多巴胺能细胞死亡表现出显著的保护作用,可能通过调制的谷胱甘肽水平和自噬。总的来说,我们的数据提供机械的见解细胞谷胱甘肽氧化还原状态的角色在MA-induced自噬和凋亡细胞死亡,和需要更多的研究来确定治疗的有效性在衰减多巴胺能神经退化细胞氧化还原修饰符在活的有机体内。
1。介绍
甲基苯丙胺(MA)是一个高度成瘾精神刺激剂,已表现出强大的中枢神经系统兴奋剂的效果。滥用的精神兴奋药已成为国际公共卫生问题,全球估计有15 - 16岁百万用户(1]。MA-induced欣快效应是伴随着食欲下降,体温过低,偏执,侵略,和高度的快乐2]。马神经毒性的特点是长期减少多巴胺和血清素激活的功能,包括消耗的多巴胺转运体(DAT),羟色胺转运体(泽特)、5 -羟色胺(5 -)和多巴胺(DA) (1]。大脑的磁共振成像表明,长期使用MA导致神经元损伤(3]。马滥用也会增加患帕金森病(PD)的风险。尽管大量证据表明取代安非他明是神经毒性,作用的确切机制仍然知之甚少。越来越多的证据表明,MA-induced神经毒性包括活性氧(ROS)和活性氮物种(RNS) [4)和激活下游的氧化应激机制。马进入多巴胺神经元通过多巴胺转运体(DAT)和多巴胺取代水泡。可以氧化取代胺酶学和nonenzymatically形成高活性多巴胺醌类和活性氧,导致增强氧化应激(5]。近年来线粒体功能障碍已被卷入MA-induced退化的机理(6]。事实上,马暴露于线粒体膜电位降低,增加线粒体质量,增强蛋白质亚硝基化,和减少水平的复合物,III, IV的电子传递链主要的人类细胞。同时,抗氧化剂被发现减轻神经元损伤,进一步表明线粒体损伤和细胞氧化应激之间的串扰MA-induced神经毒性(7]。此外,氧化应激已经被观察到在体外和在活的有机体内后,马英九政府(6,8,9]。
4-Hydroxy-2-nonenal (4-HNE)是一个主要的氧化产品来源于多不饱和脂肪酸的分解和相关酯(10]。此外,4-HNE已被证明有生理角色在细胞增殖和分化11修改),引起细胞损伤的胞内蛋白(12]。此外,治疗与HNE导致酶失活、蛋白质纯化蛋白质交联(13]。细胞内4-HNE反应迅速,半胱氨酸、赖氨酸和组氨酸残基的蛋白质(14,15)形成蛋白加合物。增加蛋白质硝化是由于ROS增加/ RNS的水平,和3-nitrotyrosine (3 nt)作为标记的生产活性nitrogen-centered氧化剂(ONOO -,没有2等)。硝化活性部位的酪氨酸残基被证明改变蛋白质的结构和功能(16,17]。在病理条件下,3 nt建议修改两个平移和转译后的流程18- - - - - -20.]。因此,检测这两种生物标志物(4-HNE和3 nt)后马治疗提供有力证据的实际存在氧化/ nitrative损伤。
大脑是特别容易受到氧化应激由于其产生大量的活性氧的能力。谷胱甘肽(GSH)、三肽由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸,扮演着重要的角色作为抗氧化剂,酶辅助因子,半胱氨酸存储,主要氧化还原缓冲,在中枢神经系统(神经调质21]。谷胱甘肽缺乏与神经退行性疾病包括帕金森病。最早的事件导致神经退化包括氧化应激和线粒体功能障碍(22]。氧化应激在早期PD与大幅减少细胞抗氧化剂谷胱甘肽在SN。谷胱甘肽耗竭之前线粒体功能障碍和多巴胺耗竭,因此被认为是最早的神经退化的标志(23,24]。在细胞培养模型中,谷胱甘肽耗竭与增加氧化应激和线粒体功能降低23,25]。这些结果表明,早期损失SN的PD患者的谷胱甘肽可能与线粒体功能障碍,最终导致神经退化。因此,识别代理恢复细胞内谷胱甘肽,它可能防止帕金森病多巴胺能变性,是一个重要的努力。
防治(NAC)是一种抗氧化剂和自由基清除剂,增加细胞内谷胱甘肽在细胞水平。NAC可以作为前体的谷胱甘肽的生物合成以及刺激胞质酶参与谷胱甘肽再生(26]。南汽已被证明能够防止4-HNE-induced神经元培养颗粒神经元死亡(27]。根据南汽的有利影响,我们假设NAC也可能引起的保护作用对MA-induced通过调节氧化损伤神经毒性。使用一个在体外MA-induced细胞凋亡模型,我们调查了南京的神经保护机制。我们的研究结果显示,南汽补充MA-induced谷胱甘肽耗竭和氧化和nitrative损伤。最重要的是,部分减少LC3-II(自噬的标志)水平是体现在MA / NAC-treated细胞,从而突显出重要作用的氧化应激机制MA-induced神经毒性和自噬。因此,我们的研究结果表明,改变细胞的氧化还原状态作为一个关键触发不仅对自噬的诱导细胞凋亡也。
2。材料和方法
2.1。试剂
(+)甲基苯丙胺(MA)请提供了尼达(国家药物滥用研究所,马里兰州贝塞斯达)。Monochlorobimane(通过丙烯酰胺分析)、谷胱甘肽S-transferase 3 5-di-tert-butyl-4-hydroxytoulene(通过SUPELCO分析),dansylcadaverine, buthionine sulfoximine,和抗体β肌动蛋白是从σ化学公司购买(圣路易斯,密苏里州)。从Calbiochem N-Acetyl-L-cysteine购买(通过EMD生物科学、Gibbstown新泽西)。抗体LC3, 3-nitrotyrosine和4-hydroxynonenal来自Abcam, Inc . Cambridge, MA。细胞死亡检测ELISA +试验设备购买从罗氏分子生化药剂(印第安纳波利斯,)。
2.2。细胞培养
永生化大鼠中脑多巴胺能细胞(N27细胞)生长在RPMI 1640中补充10%胎牛血清的边后卫,2毫米谷酰胺,50单位青霉素,50μg / mL链霉素,称为完全RPMI中等以下。细胞生长在潮湿大气中5%的有限公司2在37°C,直到他们汇合的70 - 80%。
2.3。治疗模式
融合性的细胞收获和播种密度0.2 - 4×106/毫升。细胞用N-acetyl-L-cysteine预处理(NAC) 1小时或buthionine sulfoximine (BSO)治疗前24小时为各种时间点。治疗方法是在一个完整的RPMI媒介。
2.4。测定细胞谷胱甘肽
的monochlorobimane荧光法用于确定细胞谷胱甘肽的水平。短暂,收集细胞治疗,用PBS洗净,用在裂解缓冲(50毫米三羟甲基氨基甲烷、液pH值7.4,5毫米EDTA和0.001% 3、5-di-tert-butyl-4-hydroxytoulene(二叔丁基对甲酚))。样品在14000 g离心10分钟4°C。1毫米monochlorobimane和10 U /毫升的谷胱甘肽S-transferase 50毫米三,pH值7.4,被溶解,添加到得到的上层清液中。200年μL的混合物被转移到一个黑色的96孔板和孵化24°C 30分钟。样品的荧光测量使用SPECTRAmax标(分子设备公司,桑尼维尔CA)激发在485 nm,排放在645海里。
2.5。Dansylcadaverine化验
monodansylcadaverine (MDC)测定标签之前自噬小体被描述(28]。治疗后,细胞被孵化与0.05毫米MDC自由RPMI血清培养基在37°C 30分钟。之后,细胞收获和细胞溶解在10毫米Tris-HCl, pH值7.4,含1% Triton x - 100。积累的MDC自噬空泡测量使用SPECTRAmax标(分子设备公司,桑尼维尔CA)激发在365 nm,排放在525海里。细胞的数量在每个被添加0.2归一化μM溴化乙锭,DNA荧光测量励磁530 nm和发射590海里。公司争取民主变革运动的表示为特定的活动。
2.6。透射电子显微镜法
细胞生长在盖玻片和固定2%戊二醛2% (w / v)和多聚甲醛(w / v) 0.1钠甲次砷酸盐缓冲,pH值7.2,48小时在4°C。样本在PBS洗,然后四氧化锇固定在1% 0.1甲次砷酸盐缓冲室温1小时。样本然后在一系列分级脱水乙醇,清除超纯丙酮,嵌入式使用修改后的环氧树脂环氧树脂(嵌入812;电子显微镜,宾夕法尼亚州华盛顿堡)。尸块被聚合为48小时70°C。厚和超薄部分生成使用徕卡UC6超微切片机(利兹精密仪器、明尼阿波利斯、锰)。超薄部分收集到铜网格和图像使用了杰姆2100 200千伏扫描和透射电子显微镜(日本电子光学实验室,皮博迪,MA)。
2.7。西方墨点法
治疗细胞收获,洗1 x PBS (pH值7.4),和细胞溶解在冰里帕缓冲区(σ)。在冰上样本用15秒,离心机在14000 g×20分钟在4°C。上层清液从每个样本收集和10 - 15% sds - page分离。蛋白质被electroblotting转移到硝化纤维膜在4°C下100 V为90分钟。膜被封锁了一个小时,孵化与兔多克隆LC3B(1: 4000),小鼠单克隆3-nitrotyrosine (3 nt)(1: 1000),和山羊多克隆4-hydroxynonenal (4-HNE)(1: 500)作为主要的抗体在一夜之间在4°C。平等蛋白质检测,鼠标单克隆β肌动蛋白(1:5000)是使用。后,细胞膜被洗了几次和孵化红外染料800 -共轭antirabbit免疫球蛋白g(1: 5000)或Alexa萤石680 -共轭anti-mouse免疫球蛋白g (1: 10000;分子探针,英杰公司)作为一个小时在室温下的二次抗体。膜是用奥德赛红外扫描成像系统(LICOR)和图像与奥德赛2.0软件进行了分析。
2.8。DNA碎片分析
测量使用细胞死亡的DNA碎片进行ELISA检测+分析工具(29日]。过程类似于我们最近的出版物中描述的过程(30.]。简单地说,细胞resuspended裂解缓冲和孵化在室温下30分钟。溶菌产物在200×g离心10分钟。20μL的上层清液是被仔细地转移到streptavidin-coated微型板块和孵化2小时HRP-conjugated抗体的混合物的鸡尾酒,认识到核小体的样品。彻底清洗后的部件,一个合衬底,abt是添加到井。最终反应产物使用分光光度计测量在405 nm和490 nm的参考阅读。
2.9。数据分析
结果给出了(棱镜软件、GraphPad圣地亚哥,CA)折叠感应,与对照组相比。结果代表的意思是S.E.M.统计分析是由使用单向方差分析之后,学生Newman-Keuls事后测试(棱镜软件)组间比较。值< 0.05被认为是重要的。
3所示。结果
3.1。马诱发自噬
首先,我们为马形态变化的影响在我们的中脑多巴胺能神经元模型。如图1马(A), 2毫米大幅度增加N27多巴胺能细胞的细胞质液泡的形成。自噬的特点包括自噬小体的存在,以双膜结合包含胞质材料和/或细胞器空泡。检查是否引起的细胞空泡形成马诱导的自噬相关,N27多巴胺能细胞接触后被处理马(2毫米)12小时,然后使用电镜超微结构的分析。如图1(B),大量的自噬小体含有胞质材料和/或细胞器N27细胞的观察治疗(图1(B), c)。
LC3,自噬标记蛋白,酵母的哺乳动物相同器官ATG8蛋白质。在诱导自噬,ATG8蛋白质共价修改和重组自噬空泡。特别是,共价修改检测通过sds - page分析,即从LC3-I转向LC3-II证明在细胞发生自噬(31日]。增加LC3-II水平观察开始3小时和12小时岁到达顶峰后马治疗(图1(C))。马同意电子显微镜分析、处理时间的方式增加LC3-II的表达,从而确认自噬小体的形成在马在多巴胺能神经元细胞毒害神经的侮辱。
3.2。MA-Induced抑制N27细胞谷胱甘肽水平的减毒(NAC)的防治作用
减少谷胱甘肽保护神经元免受氧化损伤引起的过氧化物、过氧化氢和其他活性物种。因此,我们研究了马是否改变了多巴胺能细胞谷胱甘肽水平。如图2(一个)内的谷胱甘肽明显减少,细胞内的商店马3到24小时的治疗。虽然治疗2毫米的马3小时生产谷胱甘肽水平降低了70%,6、12、18、24小时治疗诱导大约42%,40%,35%和25%减少gh水平,分别为(图2(一个))。接下来,我们检查是否谷胱甘肽前体NAC可以保护细胞免受MA-induced谷胱甘肽耗竭。N27多巴胺能细胞进行预处理与防治作用1小时(5毫米),然后接受额外的18小时马(2毫米)。MA-induced损耗N27细胞中谷胱甘肽水平在南汽的存在衰减,表明马曝光严重的损害了谷胱甘肽抗氧化还原体系。
(一)MA-induced与时间有关的谷胱甘肽水平的变化
(b) NAC对MA-induced耗竭谷胱甘肽水平的影响
3.3。南汽和BSO对MA-Induced自噬的影响
探讨增强谷胱甘肽和自噬的关系,我们与南汽N27细胞治疗,谷胱甘肽前体,自噬泡形成的程度取决于MDC荧光测定。预处理与南汽大幅减少MA-induced MDC积累在自噬空泡大约50%(图3(一个))。争取民主变革运动试验的主要限制是它标签组成的酸性隔间endosomal和溶酶体隔间最近与自噬空泡融合,即晚期自噬小体,因此,结果使用MDC作为自噬的标志应该仔细地解释。由于这个原因,我们执行LC3免疫印迹分析,进一步阐明南汽在MA-induced自噬的作用。图3 (b)显示了NAC(5毫米)治疗部分逆转MA-induced LC3-II表达式,进一步证实了NAC的抑制性影响MA-induced自噬。在平行实验中,N27细胞进行预处理和2毫米L-buthionine - 24小时年代,R-sulfoximine (BSO)、谷胱甘肽的生物合成的抑制剂,然后接受额外的18个小时了马(2毫米)。MA-induced自噬增强BSO的存在,表明观察到自噬可能与内源性谷胱甘肽的耗竭池。
(一)NAC对MA-induced MDC积累的影响
(b) NAC对MA-induced upregulation LC3-II
(c) BSO对MA-induced upregulation LC3-II
3.4。NAC对氧化应激标志物增加MA-Induced N27细胞
过氧亚硝基硝酸盐蛋白结合的酪氨酸残基生产3-nitrotyrosine (3 nt)。蛋白结合的3 nt是由西方分析使用一个anti-3-NT抗体。图4(一)表明马增长水平的蛋白结合的3 nt与对照组相比,和南京有抑制作用MA-induced upregulation 3 nt。NAC独自没有影响蛋白质绑定3 nt水平N27细胞。马暴露诱导upregulation 4-hydroxynonenal——(4-HNE)蛋白加合物,所揭示的免疫印迹分析(图4 (b))。这样upregulation降低了预处理与南汽。NAC仅对N27 4-HNE水平细胞没有影响。
(一)NAC对3元的水平
4日(b)的NAC hne水平
3.5。NAC对MA-Induced细胞死亡的影响
我们确定MA-induced神经元细胞凋亡的DNA碎片酶免疫分析法。马N27多巴胺能细胞治疗2毫米24小时增加了2倍DNA碎片,比的控制(图5)。确定NAC MA-induced细胞凋亡有抑制作用,我们把细胞与南京1小时前马治疗。而NAC本身没有效果,NAC治疗显示部分逆转MA-induced细胞凋亡()。总的来说,这些数据表明,NAC可以减弱MA-induced凋亡的死亡可能通过恢复多巴胺能细胞谷胱甘肽的水平。
4所示。讨论和结论
在这项研究中,我们评估了神经保护潜在的NAC MA-induced在中脑多巴胺能神经细胞自噬和细胞凋亡模型。我们还研究了细胞氧化还原状态之间的关系,自噬和凋亡细胞死亡后马曝光。马产生大量减少幸存的多巴胺能神经元,以谷胱甘肽的耗竭,早期诱导自噬,upregulation氧化应激标记,即3 nt和4-HNE。事实上,MA-induced氧化应激已被证明是一个关键事件在神经毒性。南汽被选在这项研究中,因为它有效的thiol-based抗氧化效果。NAC能部分减弱MA-induced凋亡细胞死亡,上调谷胱甘肽水平,部分减弱自噬LC3-II标志,完全废除氧化应激标记。有几个可能的机制NAC可以防止多巴胺能神经细胞的死亡。例如,NAC可以防止神经细胞死亡通过其抗氧化作用可以减少活性氧(ROS)。另外,南京也可以提高细胞内的谷胱甘肽水平和作为还原剂。然而,我们的研究强调了核心作用的细胞氧化还原状态的神经保护机制和自噬的调制。 Previous studies have shown that NAC suppresses MA-induced neurotoxicity in striatal neurons [32和在人类大脑内皮细胞永生化33),但与保护作用的机制没有探索。我们的研究结果表明,NAC治疗恢复MA-induced失衡在细胞氧化还原状态,从而阻止了神经细胞的死亡。
马的细胞机制proapoptotic影响多巴胺神经元仍然知之甚少。多种机制,包括线粒体功能异常、氧化应激和细胞凋亡参与MA-induced神经毒性(1]。的氧化应激参与MA-induced神经毒性已被广泛的研究,即氧化损伤积累脂质,蛋白质和DNA被证明发生在大脑区域以及动物模型在体外细胞培养的神经退化模型(34- - - - - -36]。事实上,氧化应激在多巴胺能退化已被确定为早期活动因为神经毒性已被证明是由抗氧化剂如Trolox和减毒谷胱甘肽(37]。此外,谷胱甘肽耗竭也已被证明导致蛋白质巯基的损失,包括转运蛋白(38]。符合这些发现,我们发现MA-induced凋亡细胞死亡之前是早期和明显的谷胱甘肽的耗竭。预处理与南汽MA-treated细胞恢复了谷胱甘肽水平,减少凋亡细胞死亡,表明南汽在这些细胞补充谷胱甘肽水平,从而衰减MA-induced氧化神经细胞死亡。在细胞水平,减少谷胱甘肽的评估被认为是一个标记的细胞抗氧化防御,减少谷胱甘肽的水平是氧化应激的指标(39]。减少谷胱甘肽本身可以作为一个诱导的凋亡事件。例如,在以前的报告BSO-induced细胞内谷胱甘肽耗竭发现诱导活性氧生成和PKCδ激活,从而导致细胞死亡在神经母细胞瘤细胞40]。同时,B细胞淋巴瘤细胞中谷胱甘肽耗竭已被证明诱导ROS-mediated凋亡[41]。因此,我们的研究提出了一种可能性,氧化stress-dependent谷胱甘肽耗竭可能发挥作用在MA-induced神经毒性。马的确切性质对内源性谷胱甘肽水平的影响仍然是有争议的。例如,马被发现增加海马,frontocortical,纹状体的谷胱甘肽水平在大鼠和小鼠(42与马短暂治疗后;然而,其他研究发现纹状体的减少谷胱甘肽后,马英九政府(43- - - - - -45]。以类似的方式,在后期的马施虐者的大脑,一个戏剧性的亏损达尾状伴随着GSSG谷胱甘肽,增加,减少谷胱甘肽的氧化形式(46]。持续增加的证据表明马管理会导致氧化应激反应,著名,反过来,导致严重的黑多巴胺能神经毒性,就是明证的纹状体多巴胺转运体(DAT) [1]。在这种背景下,已经提出ROS-dependent氧化应激机制在动物接种马(47- - - - - -51]。几个在活的有机体内研究显示神经元一氧化氮合酶的参与(nNOS) MA-induced神经毒性。例如,马的老鼠缺乏nNOS或nNOS药理抑制剂治疗被发现显著减弱MA-induced纹状体DA和DAT损耗47,49]。其他的研究表明NOS的过度MA-treated鼠纹状体(51]。因为ROS和RNS半衰期都很短,一个可靠的方法来演示一氧化氮、超氧化物之间的相互作用是过氧硝酸盐的形成,可由测量3 nt残留的水平。在我们的研究中,水平的提高3 nt马后表明,细胞功能障碍与过氧亚硝基的过度生产。马3 nt水平的同时,增加产量在积极治疗与细胞死亡。过氧亚硝基的角色MA-induced神经毒性已经记录使用selenium(清道夫的两电子氧化剂),这表明神经保护效应在MA-induced神经毒性(52]。此外,过氧硝酸盐抑制DAT和,因此,抑制影响DAT胞质DA积累有利,这将导致增加多巴胺神经元内ROS的生成。还有可能,早期的谷胱甘肽的耗竭可能诱发nitrosative损伤线粒体蛋白质,导致mitochondria-mediated激活细胞死亡信号事件。的确,可能参与蛋白质硝化complex-1抑制谷胱甘肽过氧亚硝基的耗尽细胞的报道(53]。也不可能是主要的代理参与线粒体功能障碍在多巴胺能细胞急性谷胱甘肽耗竭后(54]。
氧化应激增加的另一个标志是脂质过氧化(9]。马治疗导致水平的提高4-HNE马经过18个小时的治疗。脂质过氧化作用可以持续24小时后,马英九政府在啮齿动物55- - - - - -57]。此外,谷胱甘肽共轭可能没有结合,形成nitrosoglutathione和脂质过氧化作用加合物4-HNE [58,59]。另外,过氧硝酸盐是一种强氧化剂,被发现导致脂质过氧化(独立58,60]。在目前的研究中,NAC治疗显著降低4-HNE的水平和细胞凋亡,表明氧化应激机制的重要性MA-induced细胞死亡。事实上,在最近的一项研究[57马)被发现导致脂质peroxidation-mediated损害帕金和26 S蛋白酶体,从而导致泛素蛋白酶体的早期损失(UPS)函数(57]。最近,我们证明了马治疗损害UPS函数和触发器自噬在细胞培养和动物模型(61年]。此外,我们表明,基因消融或siRNA-mediated基因沉默的氧化还原敏感的激酶,蛋白激酶cδ(PKCδ),赋予抵抗MA-induced多巴胺在N27细胞凋亡细胞死亡,暗示PKC的因果作用δ在MA-induced多巴胺能神经退化。另外我们实验室的研究也表明,活性氧是不可或缺的组成部分,一个氧化还原敏感的激酶PKC的激活δ因为超氧化物清道夫MnTBAP减毒帕金森毒物MPP-induced蛋白水解激酶的活化和细胞死亡62年]虽然prooxidants过氧化氢63年)和6-hydroxydopamine通过PKC诱导细胞凋亡δ激活N27多巴胺能细胞(61年]。综上所述,改进MA-induced氧化侮辱的NAC可能与抑制PKCδ蛋白水解活性和凋亡信号相关事件。研究表明急性马管理导致醛积累在动物模型中增加MA-induced神经退化(9,42,64年]。MA-induced氧化应激功能与mitochondria-dependent细胞凋亡有关。线粒体作为不可或缺的力量的细胞和线粒体呼吸链中消耗大量的氧气通路,导致生产活性氧的主要来源的一代。此外,最近的一项研究[65年)表明,自噬通过氧化诱导Atg4失活。我们的结果与MA-induced 3 nt和4-HNE水平表明,代nitrosylated氧化物种和脂质过氧化物可能与激活PKC delta-dependent mitochondria-mediated凋亡细胞死亡事件,这可能是中央MA-induced多巴胺能神经毒性。
ROS-mediated事件可能不是唯一redox-related事件参与调节自噬。其他因素,如谷胱甘肽氧化还原状态,也可以调节自噬(65年,66年]。在目前的研究中,我们建议改变细胞内谷胱甘肽含量可以调节自噬,因为马(i)治疗与早期的谷胱甘肽的耗竭内容;(2)的NAC补充细胞内的谷胱甘肽水平和部分避免自噬;和(3)细胞谷胱甘肽的耗竭BSO增加自噬的水平。NAC预处理这一事实显著增加谷胱甘肽水平说明初始细胞氧化还原状态的意义影响细胞响应马曝光和支持这样的结论:观察到的变化可能通过细胞内氧化还原状态的转变。
总之,目前的结果显示,失去细胞谷胱甘肽水平的关键机制之一MA-induced神经毒性和中脑多巴胺能神经元细胞自噬,NAC治疗部分逆转MA-induced凋亡细胞死亡,可能通过补充谷胱甘肽的水平。我们的研究结果还表明,MA-induced神经毒性与增加4-HNE水平和3 nt加合物的形成。此外,清除自由基,如RNS和ROS使用NAC还部分减毒MA-induced upregulation自噬。我们所知,这是第一个报告证明NAC预处理可以改善MA-induced自噬,突出的重要性在MA-induced多巴胺能神经退化细胞的氧化还原状态。需要进一步的研究来证实南汽在氧化还原状态和自噬的影响,和相关性MA-induced多巴胺能变性动物模型。
确认
这项工作是由美国国立卫生研究院的资助NS74443 (a·g·Kanthasamy) NS65167 (a . Kanthasamy)和ES10586 (a·g·Kanthasamy)。w·尤金·劳埃德和琳达赋予椅子a . g . Kanthasamy也承认。