脂素-2在前列腺癌中的预测和预测作用及其与Gleason评分的关联

摘要

脂磷脂-2在肿瘤进展、侵袭和转移中具有重要作用。然而，它在前列腺癌中的作用尚不清楚。本研究的目的是确定脂钙素-2在人前列腺癌组织中的表达水平，并评估其表达水平与多西他赛治疗反应、Gleason评分、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)等临床病理参数的关系。我们回顾性分析了33例转移性去病耐药前列腺癌(mCRPC)患者石蜡包埋的组织切片，这些患者在多西他赛治疗后的临床结果被跟踪。利用抗lipocalin-2抗体通过免疫组化(IHC)确定lipocalin-2的表达状态。Lipocalin-2在36%的检测标本中高表达。高脂蛋白2表达与多西他赛反应无显著相关性( ）。高脂蛋白2表达与较高的Gleason评分显著相关( ）。Kaplan-Meier生存分析未能显示脂钙素-2表达水平与OS和PFS之间的显著相关性，尽管与低水平患者相比，高水平患者的PFS和OS时间更短。因此，很明显，需要进一步的研究来评估脂磷脂-2在前列腺癌患者中的预测和预后作用。

1.介绍

前列腺癌是男性癌症死亡的主要原因[1］．尽管在治疗方面取得了进步，但许多患者在根治性前列腺切除术或最终放疗后仍会复发。所有最初对抗雄激素治疗有反应的复发和转移性患者不可避免地发展到去势抵抗状态。在这种临床情况下，多西他赛和新的激素治疗(阿比特龙和enzalutamide)是主要的治疗选择[2］．然而，这些治疗方案对所有转移性去势前列腺癌(mCRPC)并不是有效的。大约50-60%的患者不能从多西他赛中获益[3.］．因此，有必要开发预测对多西紫杉醇的敏感性的标记，以便将患者团体定义，他们将获得多西紫杉醇的好处。

Lipocalin-2（也称为癌烯24p3，嗜中性粒细胞明胶酶相关的脂肝素和Uterocalin）是最初从中性粒细胞颗粒纯化的糖基化蛋白[4，5］．脂磷脂2作为一些亲脂分子的转运体，如类维生素a、脂肪酸和胆固醇。此外，它还参与细胞分化、铁运输、细胞迁移和细胞凋亡。脂磷脂-2的最明显的功能是剥夺细菌生长所必需的铁。因此，lipocalin-2在抵抗细菌感染的先天免疫反应中起着重要的作用[6，7］．令人惊讶的是，近年来，脂钙素-2的表达在许多类型的癌症中都有所增加，包括食管癌[8，9),胰腺(10),卵巢11],乳腺癌[12)、肺(13]和胃[14] 癌症。它通过防止其自脱模，并导致肿瘤进展，侵袭和转移来增加基质金属蛋白酶9（MMP9）的活性，该酶9（MMP9），其分解细胞外基质和基底膜并导致肿瘤进展，侵袭和转移[15］．

以往的体外研究表明，脂磷脂-2过表达通过增加雄激素受体转录活性促进CRPC的进展[16］．此外，在异种移植前列腺癌模型中，Lipocalin-2过表达具有显着促进肿瘤生长。在另一个研究中，据报道，高脂质素-2表达与肿瘤分化有显着相关（）和格里森分数[17］．此外，之前的研究报告说，癌症患者脂蛋白-2的表达水平可能与存活相关。在我们的研究中，我们回顾性地评估了从PARAFE n内嵌入的人前列腺腺癌组织样品中获得的脂肪组织化化学的免疫组织化学，研究了Lipocalin-2表达在预测多西紫杉醇的治疗响应中的作用，并评估其之间是否存在关系expression levels and Gleason’s grade in the patients with metastatic prostate adenocarcinoma. Survival was also analyzed to determine the prognostic value of lipocalin-2 in these patients.

2.方法

2．1.患者和组织样本

病例是从2015-2019年期间的卡纳克莱翁塞克斯玛特大学健康研究和实践医院和卡纳克莱政府医院的记录中回顾性选取的。该研究已获得Çanakkale Onsekiz Mart大学伦理委员会的批准(批准号:2019-17)。患者诊断为腺癌的前列腺癌和管理至少三个周期的多西他赛(每平方米75毫克的多烯紫杉醇作为1 h静脉输液1天每21天一起10毫克/天强的松继续)为mCRPC排除前列腺特异抗原(PSA)耀斑的偏见来源选择的病人都被纳入研究所有患者定期测量PSA(积极治疗期间每3周)。根据对多西他赛的治疗反应，将符合资格标准的33例患者分为有反应组和无反应组。在应答者组(应答者、部分应答者、病情稳定者和发作现象者)中，PSA应答根据前列腺特异性抗原工作组共识标准定义[18]：（一世）回应：PSA下降50%的基线。（ii）部分缓解，病情稳定:PSA下降<50%，>0。(3)耀斑现象:PSA最初升高，随后低于基线(包括PSA下降的患者)从基线50％）。

多西他赛治疗下的疾病进展(无反应组)根据前列腺癌工作组(PCWG3 2015)定义[19]的标准为PSA连续、不可逆上升(PSA连续两次上升25%和2µg/l以上)，尽管治疗和/或根据实体瘤反应评价标准(RECIST)可测量的疾病进展和/或出现2个或更多新的骨病损。根据Gleason评分将患者分为1 ~ 4级(Gleason评分≤8)和5级(Gleason评分9 ~ 10)两组。

２.２.免疫组织化学鉴定

所有患者的福尔马林固定和石蜡包埋的组织标本都是从Canakkale Onsekiz Mart大学健康研究和实践医院和Canakkale政府医院的病理部门档案中获得，并且这些单盲组织用于IHC染色。这些标本被切割（4 μM)并用苏木精和伊红染色。每个病例的代表性幻灯片用lipocalin-2抗体(Sigma Aldrich克隆PA348-26.3.5,1/1000稀释)在徕卡Bond Max全自动免疫组化设备(徕卡生物系统)中染色。根据抗体和设备的制造商说明进行免疫组化染色。胃组织作为阳性对照，无一抗切片作为阴性对照。脂质蛋白2一般在细胞质中表达。由于正常前列腺上皮表现为脂钙素-2抗体弱染色，我们根据两者之和的评分来评估肿瘤细胞脂钙素-2表达情况:(a)染色强度(0，阴性(图)1（一种））;1，弱（图1（b））;2，中级（图1(c));3、强(图1(d))和(b)阳性细胞百分比(0,0%阳性细胞;1、<25%阳性细胞;2、26-50%阳性细胞;和3，>50%阳性细胞)，如别处所述[20.］．a + b的总和达到了6分。在没有任何临床资料的情况下对切片进行评分，评分3分及以上为高表达。

2.3。统计数据

比较lipocalin-2阳性表达组和阴性表达组的临床病理变量，并用X²或者Fisher的方法。使用Kaplan-Meier方法计算OS时间，即从诊断日期到死亡或最后一次随访日期的时间。用log-rank检验比较低表达组与高表达组之间的差异。 (双尾)被认为具有统计学意义。所有的统计分析都使用SPSS，版本20。

3.结果

3．1.Lipocalin-2在前列腺癌中的表达及其与多西他赛临床疗效的关系

12例(36%)肿瘤中脂磷脂-2阳性表达。在所有患者中，60%(20/33)对多西他赛有反应。在lipocalin-2阳性肿瘤患者中，41%(5/12)有多西他赛反应性疾病，而在lipocalin-2阴性肿瘤患者中，这一比例为71%(15/25)。）。在多西他赛的临床疗效方面，脂质2阳性和脂质2阴性组之间没有显著的相关性。表中总结了脂钙素-2的表达水平与临床病理参数的关系1。


变量	n	Lipocalin-2表达式		价值
		低的	高的

响应者	20.	15	5	0.09
Nonresponders	13	6	7

1 - 4年级组	14	12	2	０．０２
年级组5	19	9	10

３．２．脂蛋白2表达与Gleason评分的关系

脂素-2阳性肿瘤，83％（10/12）的GLEASES得分为9或10（第5级），与42％（9/21）的脂肝-2阴性肿瘤相比（）。脂质蛋白2表达水平与Gleason评分显著相关(表1)1）。

３．３．Lipocalin-2表达与存活的关系

PFS被定义为从多西紫杉醇到疾病进展或最后一次访问的治疗开始的时间。除了研究组中的七名患者的所有患者在分析时均显示出来。最长的PFS是37个月。中位数PFS为13,1个月，脂蛋白-2阴性肿瘤的患者为7，与脂质素-2阳性肿瘤的7个月为7个月（）。两组间无进展生存期无显著性差异。33例患者中有16例(48%)在诊断至最后一次随访期间死亡。最长的操作系统是119个月。脂素2表达阳性和阴性患者的中位生存时间分别为40.5和65.7个月(log-rank检验，，数字2）。

(一)

(b)

4.讨论

多西他赛是一种微管稳定剂，通过增加微管的聚合和抑制微管的解聚，导致纺锤体形成缺陷。纺锤体形成缺陷激活有丝分裂检查点导致细胞周期阻滞和凋亡[21］．各种分子如微管相关蛋白、tau、Aurora A、纺锤体装配检查点蛋白(MAD1-3、BUB1-3、BubR1)和III类β-微管蛋白已被报道为微管制剂的预测标记物[22］．

先前的体外研究表明，脂肪素-2基因是从父前列腺癌细胞系（PC-3）获得的紫杉醇抗性PC-3-TXR细胞中高度扩增的基因之一[23］．然而，在目前的文献中，只有一项临床研究探讨了lipocalin-2的预测作用。在本研究中，有报道称lipocalin-2是新辅助化疗后病理完全缓解的预测标志物[24在低风险的乳腺癌亚组中。在我们进行的这项临床病理研究中，我们证实了体外结果，并确定了lipocalin-2在前列腺癌患者中的预后作用，虽然高表达的患者对多西紫杉醇的耐受性更强( ）。

在一些研究中，一些临床病理参数，如肿瘤分化、肿瘤分期、淋巴结转移与脂蛋白2表达之间的关系，报道了相互矛盾的结果。胰腺癌研究[10]报道脂钙素2的高表达与淋巴结转移阴性和TNM分期早期有关。相反,颈椎(25]，结肠直肠[26),卵巢27]，乳腺癌研究报道，高水平的脂磷脂-2表达与肿瘤分化差、淋巴结转移高、肿瘤分期高相关。此外，在口腔鳞状细胞癌(OSCC)和结肠癌细胞系中进行的两项体外研究表明，lipocalin-2的表达降低了这些细胞的转移潜能[28，29］．只有两项研究调查当前文献中的前列腺癌和脂蛋白-2表达之间的关系。Tung Mc等表明，高脂素-2表达与肿瘤分化显着相关（）格里森分级和下调脂素-2抑制前列腺癌细胞的生长和侵袭[17］．在他们的研究中，与正常前列腺组织相比，lipocalin-2在37%的前列腺癌组织中高表达。同样，在我们的研究中，我们发现36%的患者高表达lipocalin-2，高表达与较高Gleason评分显著相关( ）。

关于脂磷脂-2表达与存活之间的关系也有不同的结果报道。OSCC [28]胰腺癌[10]研究报道高脂蛋白2表达与生存时间延长有关。相反，宫颈癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和乳腺癌的研究表明，高脂蛋白2表达与较短的生存时间显著相关[13，25- - - - - -27，30.］．没有临床研究，研究了前列腺癌患者的脂肪甘油蛋白-2表达与当前文献中生存的关系，不幸的是，我们未能在我们研究中表现出脂质素-2表达和PFS和OS之间的相关性。然而，与患有较低水平的患者相比，具有高脂质蛋白-2表达的患者具有数值较短的PFS和OS时间。

据我们所知，这是第一次研究脂磷脂-2表达对多西紫杉醇治疗的生存率和临床疗效的影响。然而，该研究的不足之处还包括一些局限性，如存在截尾数据、样本规模小以及难以解释免疫组化评估。

5.结论

总而言之，约36%的前列腺腺癌患者中脂钙素-2高表达。高脂蛋白2表达与较高的Gleason评分显著相关。虽然无统计学意义，但高表达的患者多西他赛的疗效较低，生存时间较短。尽管与Gleason评分有显著相关性，我们的结果并不支持脂蛋白2的预测和预后作用。很明显，需要进一步的研究来评估脂磷脂-2在前列腺癌患者中的预测和预后作用。

数据可用性

为了保护患者的隐私，用于支持本研究发现的临床病理数据受到了Canakkale Onsekiz Mart大学医学院伦理委员会的限制。对于符合获取机密数据标准的研究人员，可以从通讯作者处获得数据。

伦理批准

该研究已获得Çanakkaleonsekiz Mart大学伦理委员会（批准号：2019-17）批准。

的利益冲突

作者声明不存在利益冲突。

参考

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前列腺癌

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