文摘

白细胞介素- 10”(IL10)是最好的研究对免疫细胞的抑制作用,抑制抗肿瘤免疫反应的能力。但IL10也对多发地细胞产生直接影响,如前列腺癌上皮细胞。血清水平升高的IL10观察前列腺癌和其他癌症患者与不良预后有关。一线雄激素阻断治疗后,前列腺癌患者接受雄激素受体拮抗剂如enzalutamide androgen-dependent抑制前列腺癌细胞的生长。然而,阻力的发展不可避免地发生,这是与肿瘤相关的更为激进的形式如神经内分泌分化表型特征的表达神经元特异性烯醇酶和synaptophysin。我们发现,治疗前列腺癌的细胞系在体外IL10或者enzalutamide诱导标志的神经内分泌分化和抑制雄激素受体记者活动。同时也调节PDL1的水平,从而促进肿瘤的生存在活的有机体内通过其相互作用与免疫细胞抑制性受体PD1抑制抗肿瘤免疫。这些发现表明,IL10对前列腺癌细胞的直接行动可能导致前列腺癌进展独立IL10抑制宿主的免疫细胞。

1。介绍

前列腺癌(PCa)是全世界癌症死亡率的主要原因之一。在早期阶段,PCa扩散主要是androgen-dependent [1- - - - - -4];因此,PCa细胞最初接受雄激素阻断疗法(ADT) [2,5- - - - - -8]。一旦肿瘤发展androgen-independent增长,患者治疗AR通路抑制剂(ARPI)如enzalutamide(劳动部)。而先进的PCa最初控制荷尔蒙疗法针对雄激素受体(AR)通路,复发发生由于具有耐药性的劳动部,致命castration-resistant PCa (CRPC)。解剖表明,多达25%的系列CRPC患者抵抗ARPI,摆脱了对基于“增大化现实”技术的依赖,表现出连续的特性与神经内分泌(NE)血统9]。

值得注意的是,NE表型可以增强等环境因素在肿瘤细胞因子如白细胞介素- 6(白细胞介素6)[10]。对PCa细胞白细胞介素6的作用已被广泛研究[11)、白细胞介素6受体信号诱导NE分化报道通过不同的机制包括STAT3的规范化激活转录因子(12]。另一种细胞因子,通过STAT3信号是白细胞介素- 10”(IL10)。事实上,IL10和白细胞介素6已报告在转移性androgen-independent PCa细胞过度表达(13)和血清IL10和白细胞介素6的升高患者抵抗劳动部治疗敏感的患者相比(14]。这些观察结果表明,这两种细胞因子可能导致更多的恶性肿瘤的发展与NE表型(15,16]。

IL10是最好的研究作为一个抗炎、免疫抑制细胞因子(17- - - - - -19),有助于促进癌症侵犯通过作用于免疫细胞抑制抗肿瘤免疫反应(20.]。IL10癌症患者的血清水平与前列腺癌患者预后不良(21和与格里森评分呈正相关22]。IL10产量的增加可以通过肿瘤细胞自身(13,23- - - - - -25)或肿瘤tumour-infiltrating引出,IL10产生免疫细胞(26,27]。IL10抑制的抗肿瘤免疫反应包括骨髓抑制(巨噬细胞和树突状细胞)T效应细胞的功能(27- - - - - -30.]。IL10也上调表达PDL1 (CD274)骨髓细胞(31日]。PDL1抑制性受体结合PD1在T细胞导致失活的T细胞和抑制宿主T细胞抗肿瘤免疫反应(32,33]。

然而,在2000年代早期,斯登等人报道,IL10也直接行动PCa细胞(34- - - - - -36]。IL10治疗PCa细胞系增加TIMP1 [34和可以和MMP2合成减少35]。如何IL10 TIMP1的监管和MMP1 / MMP2表达有助于PCa过程还不清楚,但TIMPs升高和基质金属蛋白酶与更高的年级PCa (37]。没有工作已经完成的直接影响IL10以来PCa斯登集团发布的研究,但我们感兴趣的直接行动IL10 PCa细胞因为有趣的观察报告的主教et al。16]关于PDL1表达细胞耐劳动部的病人。

主教等人发现,在肿瘤活检劳动部耐药患者,PDL1对PCa细胞主要是增加而不是在肿瘤免疫浸润细胞(16]。这促使我们研究是否IL10直接诱发NE-associated蛋白质的表达和PDL1 PCa细胞在体外。我们比较的效果与白细胞介素6 IL10或劳动部治疗不同AR-dependent和AR-independent PCa细胞。我们也评估了IL10和白细胞介素6的调节能力的基于“增大化现实”技术的游戏活动LNCaP细胞稳定表达转导AR控制GFP记者(38]。我们发现增加IL10 PCa细胞在体外NE-like提升发展的特点,提高了表面的表达PDL1蛋白质。这牵涉到的潜在疗法,涉及使用IL10 PCa的治疗。

2。材料和方法

2.1。细胞

前列腺癌LNCaP细胞系(39)是维护在rpmi - 1640(犹他州洛根HyClone)补充9%的边后卫(犹他州洛根HyClone)。LNCaP细胞表达ARR2PB-eGFP请提供的保罗·兰尼博士(温哥华前列腺中心,温哥华,不列颠哥伦比亚)。劳动部耐药和劳动部敏感42 dENZR和16 dCRPCCRPC细胞系分别被阿米娜Zoubeidi博士请提供(温哥华前列腺中心,温哥华,不列颠哥伦比亚)。这些细胞产生在活的有机体内LNCaP异种移植前面描述的(15]。16 dCRPC细胞保持LNCaP细胞。42 dENZR细胞被保持在10µM劳动部,rpmi - 1640, 9%的边后卫。所有的细胞都保存在一个37°C,湿度5%二氧化碳、95%孵化器。

2.2。试剂

抗体使用包括1:1000稀释EP4 (c - 4)小鼠抗体(圣克鲁斯生物技术、圣芭芭拉分校CA), 1: 1000稀释神经元特异性烯醇酶(5)小鼠抗体(了无,圣克鲁斯生物技术、圣芭芭拉分校CA), 1: 500稀释synaptophysin (H-8)小鼠抗体(SYP,圣克鲁斯生物技术、圣芭芭拉分校CA), 1: 5000年GAPDH兔抗体(σ,奥克维尔),1:5稀释PDL1 (MIH1)小鼠抗体(BD Pharmingen、加拿大),和25µ克/毫升FC块(BD Pharmingen、加拿大)。人类IL10和白细胞介素6(加拿大温哥华)来自干细胞的技术。Enzalutamide多维距离特征向量之间(3100)从开曼群岛化学公司(安阿伯市MI)。IL10和白细胞介素6(干细胞技术)股重组在无菌水10000 ng / mL按照制造商的指示。准备工作的解决方案是在生长介质和使用浓度表示。劳动部股票是10000年在DMSO溶液溶解µM集中,准备工作的解决方案是在生长介质和使用的最终浓度10µM。

2.3。细胞刺激

免疫印迹研究细胞被播种在3×104每在24-well细胞组织培养板前1天开始治疗的生长培养基补充的边后卫LNCaP细胞1%或5%的边后卫16 dCRPC或42 dENZRCRPC细胞。细胞被单独处理媒体(治疗)或100 ng / mL IL10,白细胞介素6、10µM劳动部刺激方案,准备使用7天的生长介质。流式细胞仪实验,细胞被镀在1×105每在6-well细胞组织培养板使用生长培养基补充的边后卫LNCaP细胞1%或5%的边后卫16 dCRPC或42 dENZRCRPC细胞刺激前1天。第二天,细胞被未经处理或处理50 ng / mL IL10,白细胞介素6、10µM劳动部为7天。42 dENZR细胞培养的细胞,劳动部被镀的时间来研究不同刺激对劳动部耐药细胞的直接影响。

ARR2PB-eGFP细胞被播种在1%的边后卫媒体一段背景GFP表达降到最低。细胞被镀在8×104细胞每一夜之间在1% RPMI 24-well媒体。第二天,细胞被刺激单独与媒体(治疗)或20 ng / mL IL10,白细胞介素6、10µM劳动部刺激解决方案所需的时间点。

2.4。免疫印迹分析

细胞被冲洗与冷PBS和细胞溶解热2 x Laemmli样本缓冲区。蛋白质sds - page分离12.5%,其次是electroblotting到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(微孔,体态)。膜被封锁1小时3%牛血清白蛋白在20毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸/液pH值7.5,150毫米氯化钠(TBS),冲洗20 / 0.05%渐变TBS (TBST,洗缓冲区),和探测主要抗体准备3%阻断缓冲区在室温下过夜。第二天,膜清洗3×10分钟,孵化1小时在室温下用Alexa萤石®660 anti-mouse免疫球蛋白或Alexa萤石®680 anti-rabbit免疫球蛋白抗体TBST缓冲区(ThermoFisher, Nepean),清洗,并使用LI-COR漫游成像仪成像。

2.5。流式细胞术分析

PDL1测量的表面表达,细胞刺激IL10,白细胞介素6、劳动部,单独或媒体如上所述冲洗冷PBS紧随其后的2毫米EDTA / PBS每5分钟。200年µL(流式细胞仪缓冲区(3%的边后卫在PBS)添加和细胞收集和旋转1000 x 5分钟在4°C。细胞被resuspended 25µ我25µ克/毫升FC块(BD-Pharmingen、米西索加、加拿大)在流式细胞仪的缓冲和转移到尖底96孔板在4°C,持续15分钟。反PDL1 PE-conjugated抗体(BD-Pharmingen、米西索加、加拿大)添加了1小时。细胞然后缓冲3次用流式细胞仪分析细胞内的(最低10 K事件门)在第二章(BD-Biosciences、米西索加、加拿大)。流式细胞仪数据分析与FlowJo_V10 (BD-Biosciences、米西索加、加拿大)。细胞被封闭的基础上向前散射高度(FSC-H)和侧散射高度(SSC = H)模式(“电池门”),和PE (FL2)荧光的细胞在这个单元门。

测量的GFP阳性表达细胞ARR2PB-eGFP LNCaP,细胞被收集在指定的时间点和冲洗冷PBS紧随其后的200年µL 2毫米EDTA对每个提升细胞。200年µL(流式细胞仪缓冲区添加细胞开始分化为1000 x g在4°C为10分钟。细胞颗粒在流式细胞仪resuspended缓冲和数据获取(5000细胞内的门事件)如上所述。16 dCRPC细胞被用作控制定义GFP -人口GFP通道(FL1)。

2.6。统计分析

量化带强度的免疫印迹进行使用LI-COR奥德赛成像系统和图像工作室™Lite软件(LI-COR生物科学、林肯、NE)。GraphPad棱镜6 (GraphPad软件公司,拉霍亚,CA)被用来执行所有统计分析。统计图传说中可以找到的细节。值意味着±标准差。单向方差分析进行,需要用适当的多重比较测试。差异被认为是重要的时候 。

3所示。结果

我们检查了IL10对PCa细胞系的影响表示癌症发展的不同阶段。LNCaP细胞是一种基于“增大化现实”技术的积极、雄激素敏感细胞系来源于肿瘤转移性淋巴结PCa (39]。白细胞介素6感应LNCaP形态交替之前已经报道过的10,40),和劳动部治疗已被证明诱导神经内分泌分化(NED)细胞在体外和在活的有机体内(15]。42 dENZR和16 dCRPC细胞系仍表达AR和来自LNCaP异种移植的连续通道被阉割的老鼠,这是治疗与否,分别与劳动部。42 dENZR细胞株抗劳动部和表达比LNCaP基底PDL1和16 dCRPC细胞和代表积极的神经内分泌表型(15]。16 dCRPC细胞株是一个androgen-independent (CRPC),劳动部敏感细胞(15]。

3.1。IL10诱导形态转换和NE蛋白质与神经内分泌分化一致

NED表型的特点是不同的形态学特征(40]。我们检查了治疗的效果与IL10 LNCaP细胞,白细胞介素6、劳动部细胞形态学上7天。IL10治疗导致截然不同的形态变化,出现4天后,这些交替变化更明显(图经过7天的治疗1(一))。IL10治疗细胞变得长而分支,neuritic-like扩展。这些形态变化与白细胞介素6和劳动部(图1(一))。我们下一个检查16日IL10 d的影响CRPC和42 dENZR细胞。的16 dCRPC细胞,IL10、白细胞介素6、劳动部治疗显示相似的表型观察LNCaP细胞(图1(一))。研究IL10对42 d的影响ENZR细胞,我们首先将劳动部从他们的文化媒体之前一天的实验。第二天,细胞处理媒体,IL10,白细胞介素6、劳动部。7天治疗后,未经处理的细胞是长方形的形状虽然IL10,白细胞介素6、劳动部治疗细胞更平面(图1(一))。

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图1
IL10感应的形态变化和表达分析了无和SYP在PCa神经内分泌标记细胞。PCa细胞生长在体外与100 ng / ml IL10,刺激白细胞介素6 100 ng / ml,或10吗µM劳动部为7天。LNCaP形态变化引起的不同的治疗,16 dCRPC和42 dENZR耐药细胞使用光学显微镜成像(a)表达水平的研究或SYP测定细胞溶解产物的免疫印迹LNCaP (b), 16 dCRPC(c)和42 dENZR耐药细胞(d)。数据绘制代表了无和SYP乐队强度归一化GAPDH蛋白质水平。未经处理之间的差异统计学意义(联合国)和不同的治疗由单向方差分析测试图基的修正。 , , ,和 。数据是代表三个独立的实验。

接下来,我们测试了IL10能否诱导表达神经元标记的神经元特异性烯醇酶(了无)或synaptophysin (SYP),已观察到在PCa细胞诱导白细胞介素6或劳动部在体外(15,40]。如图1 (b),分析了无SYP表达水平明显增加了IL10 LNCaP细胞比未经处理的细胞。增加了无和SYP水平与细胞白细胞介素6处理或劳动部。这些结果表明,IL10和白细胞介素6可能同样在PCa雄激素敏感细胞,导致NED表型与NE蛋白的表达有关。在劳动部敏感细胞16 dCRPC,IL10和劳动部诱导类似水平的研究和SYP蛋白质(图1 (c))。相反,白细胞介素6治疗显著调节SYP蛋白质但适度增加了无表达式(图1 (c))。白细胞介素6的低能力,增加了无水平也被描述DU145 C4-2 PCa细胞(41]。像预期的那样在劳动部耐42 dENZR细胞,劳动部感应了无和SYP蛋白低于LNCaP和16 dCRPC细胞(图1 (d))。IL10和白细胞介素6治疗了无和SYP水平升高(图1 (d)与劳动部)高于,但低于观察LNCaP和16 dCRPC细胞。这些数据在表中做了总结1。

表1
总结分析了无,SYP PDL1表达式与IL10 PCa细胞治疗,白细胞介素6、劳动部。“+ +”、“+”、“+ / -”表示非常强大,强大,和温和的表情,分别比未经处理的细胞。“−”表示没有明显的表达比未经处理的细胞。
3.2。IL10-Induced AR激活的抑制

我们下一个检查是否IL10治疗可能会导致基于“增大化现实”技术的游戏活动,在LNCaP细胞系稳定表达GFP记者AR监管probasin启动子的控制下(加勒比海盗2PB) [38]。IL10、白细胞介素6、劳动部所有抑制GFP表达LN-ARR2PB-EGFP细胞(类似的动力学数据2(一个)和2 (b))。然而,AR活性抑制的程度似乎是最大的由劳动部IL10和白细胞介素6紧随其后,如图2 (c)。IL10和抑制白细胞介素6的基于“增大化现实”技术的活动是否负责收购NE特征需要确定。

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图2
抑制的AR transactivation IL10、白细胞介素6和劳动部细胞治疗。LNCaP细胞(联合国)未经治疗或治疗100 ng / mL IL10,白细胞介素6、10µ劳动部。流式细胞术分析细胞被收集在指定的时间点。(一)控制策略和% GFP细胞是如何决定的。(b)直方图来自三个代表实验之一。(c) % GFP阳性细胞,如面板所示(一个),绘制了不同治疗组。未经处理的区别和不同的统计学意义治疗是由双向方差分析测试图基的修正。 , , ,和 ;ns =不显著。
3.3。IL10效应、白细胞介素6和劳动部在PCa癌细胞PDL1水平

据报道最近,PDL1蛋白质含量非常高的PCa细胞肿瘤活检从enzalutamide耐药患者16]。确定IL10或白细胞介素6治疗可以直接改变PDL1 PCa细胞蛋白表达,我们测量PDL1表达水平与IL10 7天的治疗后,白细胞介素6、劳动部使用流式细胞仪。如图3(一个),IL10和劳动部治疗LNCaP细胞增加PDL1比未经处理的细胞表面表达。白细胞介素6治疗显示,只有适度的感应PDL1表达式被证实是统计微不足道。我们还研究了IL10的影响,白细胞介素6、劳动部PDL1 16 d水平CRPC雄激素敏感细胞和42 dENZR抗雄性激素的细胞。在16 dCRPC细胞,我们发现IL10和劳动部的白细胞介素6但不治疗显著增加PDL1水平比未经处理的细胞(图3 (b))类似的LNCaP细胞。最后,我们研究了IL10的影响,白细胞介素6、劳动部治疗42 dENZR劳动部细胞被培养。IL10,白细胞介素6、劳动部治疗显著调节PDL1表达式(图3 (c))。

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图3
IL10效应、白细胞介素6和劳动部在PCa PDL1水平细胞。表面的表达PDL1 7天的治疗后50 ng / mL IL10或白细胞介素6和10µ劳动部在LNCaP (a)、16 dCRPC(b)和42 dENZR(c)细胞。柱状图所示为代表的三个实验。酒吧图表显示意味着折叠MFI变化三个独立实验(MFI的未经处理的细胞被标准化为1,MFI样本归一化的未经处理的细胞)。实验重复三次。意味着MFI褶皱的变化绘制在面板(c)。未经处理的统计显著性差异和不同治疗方法是由单向方差分析与图基的修正。 , ,和 ;ns =不显著。
3.4。前列腺素E受体EP4亚型(EP4)稍微调节IL10治疗不同PCa细胞

自分泌/旁分泌产生前列腺素E2 (PGE2)与前列腺素E2受体4 (EP4)和可以支持的PCa细胞增殖刺激PI3K / Akt和cAMP-dependent PKA通路(42]。PGE2报道诱导NED PCa细胞表型(43与巨噬细胞),在我们的工作我们发现IL10诱导EP4 IL10行动所需的蛋白质是这些细胞(44]。因此,我们研究是否IL10白细胞介素6可能促进PGE2-induced NED上调EP4表达式。如图4(一)IL10和白细胞介素6(劳动部)治疗轻微增加EP4 LNCaP细胞水平。然而,无论是IL10、白细胞介素6或劳动部诱导EP4蛋白质含量在16 dCRPC或42 dENZR7天的治疗后细胞比未经处理的细胞(数字4 (b)和4 (c))。

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图4
轻微的EP4 upregulation IL10、白细胞介素6和劳动部LNCaP细胞治疗。(一)LNCaP, (b) 16 dCRPC,(c) 46个dENZR耐药细胞被刺激与100 ng / mL IL10,白细胞介素6、劳动部溶解产物收集前7天。表达水平的EP4测定细胞溶解产物的免疫印迹。数据绘制代表EP4带强度归一化GAPDH蛋白质水平。实验重复3次。未经处理的区别和不同的统计学意义治疗由单向方差分析与图基的修正。 , ,和 ;ns =不显著。

4所示。讨论

在治疗前列腺癌是一个具有挑战性的方面,即使是那些病人接受新的雄激素受体拮抗剂如劳动部、一线治疗失败后(45,46),也对这些药物产生抗药性47- - - - - -50]。一些复发和耐药肿瘤与更积极的发展东北表型(51)39%的前列腺癌肿瘤分为中间或纯神经内分泌(NEPC) [52]。AR拮抗剂行动导致NEPC肿瘤细胞,但细胞因子如白细胞介素6 PCa升高的患者还可以直接诱导NED [10在LNCaP细胞。我们报告IL10,另一个细胞因子调节PCa患者,也能导致NE-like特征。

我们选择研究LNCaP细胞系和16 dCRPC或42 dENZR行来源于阉割和劳动部耐药在活的有机体内LNCaP肿瘤分别由主教et al。16]。我们选择这些细胞有两个原因。首先,所有的文件在文献中描述的影响对前列腺癌细胞LNCaP使用细胞白细胞介素6 (10,12,40,53- - - - - -56])。第二个是我们感兴趣的潜在变化IL10和白细胞介素6 PCa细胞的响应能力成为阉割或enzalutamide耐药。因此,我们的研究是一个经典的检查强度PCa细胞在活的有机体内代表了后期的PCa派生的衍生品,这是第一个演示像白细胞介素6的IL10 PCa细胞。但有一个限制我们的研究是我们只用这些LNCaP相关细胞线。我们观察的普遍性将需要调查其他PCa细胞系和PCa肿瘤活检。

总结如表1IL10治疗导致的表达分析了无LNCaP, 16 dCRPC和42 dENZR细胞水平相似诱导白细胞介素6。IL10、白细胞介素6、劳动部治疗也增加了SYP水平在所有三个细胞系,与IL6-induced SYP 16 d水平CRPC细胞高于IL10或劳动部。未来的研究将确定这些NE的机制增加标记。IL10受体(IL10R) (57]和IL6R [58)信号包括STAT3转录因子的使用,但每个受体途径独特也被描述。例如,IL6R信号包括激活MAPK级联(10在PCa细胞。也许MAPK途径有助于增加SYP表达诱导白细胞介素6的16 dCRPC细胞。另一方面,IL10R信号主要研究在免疫细胞SHIP1肌醇磷酸酯酶有助于IL10抑制巨噬细胞激活(59,60]。SHIP1仅表现在造血和免疫细胞,所以信号通路下游IL10R的上皮细胞,除了STAT3,仍有待特征。

以来有一种强烈的逆关系基于“增大化现实”技术的游戏活动和NE-like特点的归纳9,15,61年- - - - - -64年),我们看着IL10和白细胞介素6是否抑制基于“增大化现实”技术的活动。我们测试了IL10和白细胞介素6的影响基于“增大化现实”技术激活使用LNCaP细胞表达AR记者构造,加勒比海盗2PB-EGFP [38),发现两个抑制GFP表达在2天的治疗。值得注意的是,白细胞介素6的程度和IL10抑制AR活性低于劳动部治疗。劳动部直接绑定到基于“增大化现实”技术(65年),可能抑制雄激素AR激活的媒体。劳动部的基于“增大化现实”技术的直接行动可能解释了更迅速和更强的劳动部对加勒比海盗的影响2PB推广活动。白细胞介素6的影响是与之前的报道相一致38,66年]。贾庆林等人报道,白细胞介素6抑制AR-dependent PSA雄激素调节基因的表达通过防止p300的招聘共激活剂PSA启动子和依赖这种抑制STAT3 (66年]。是否IL10信号还能抑制共激活剂招聘仍有待确定。

相比之下,其他调查人员得出的结论是,白细胞介素6激发AR活动在其他实验设置67年- - - - - -70年),基于“增大化现实”技术的游戏活动是评估通过瞬态传导的细胞系AR表达向量和一个报告基因构造(67年- - - - - -70年]。然而,如前所述38,71年),这些瞬态传导的方法可能不准确概括生理信号,因为他们并没有反映出精确的雄激素受体水平可以影响招聘共激活剂。此外,AR的表达不同复制相同的分析,根据细胞的健康和传导的效率。这可能是一个有问题的因素自CRPC肿瘤已被证明含有改变水平的基于“增大化现实”技术和AR辅活化因子激活基于“增大化现实”技术的信号(72年- - - - - -74年]。为了避免这些并发症,我们使用稳定表达的LN-ARR2PB-EGFP细胞系AR-responsive GFP记者构造(38]。

我们还研究了IL10或白细胞介素6是否移植PGE2受体,促进PGE2-induced NED EP4。IL10行动在巨噬细胞细胞的研究,我们发现IL10 EP4诱导蛋白表达需要IL10抑制巨噬细胞炎性细胞因子的生产(44]。在PCa细胞,激活EP4 PGE2的报道增加metastatic-related蛋白质的表达(42]。这些蛋白质介导的EP4 upregulation cAMP-dependent PKA依赖的方式(42]。EP4也显示在进展显著调节阉割电阻(75年,76年]。其他报告还表示PGE2的参与(43,营10],和营地依赖激酶,尤其是PKA [77年),在促进东北PCa细胞表型是已知介导通过PCa EP4受体激活细胞(42]。然而,我们发现EP4水平既定的高度表达,和IL10,白细胞介素6、劳动部治疗只略微增加EP4 LNCaP细胞中蛋白质含量。没有EP4 upregulation发生在应对这些代理在16 dCRPC或42 dENZR细胞。这些观察表明,IL10和白细胞介素6不可能提高NE分化通过增加EP4蛋白质水平。

我们发现IL10, PCa患者升高,可能直接作用于一些PCa细胞增加PDL1表达式(表1)。IL10和劳动部治疗增加PDL1表达我们测试在所有三个PCa行。相反,白细胞介素6显示轻微upregulation PDL1只有42 dENZR细胞。我们观察到体内增加白细胞介素6只弱诱发PDL1三PCa的细胞系我们测试了不同于高表达PDL1许等人报道C4-2表达细胞白细胞介素6 (78年]。然而,许等人慢病毒转导C4-2细胞白细胞介素6和长时间暴露于自分泌白细胞介素6,可能改善PDL1表达式(78年]。长时间暴露于白细胞介素6 PDL1可能需要确保适当的糖基化。陈等人表明,在肝癌细胞中,IL6-activated JAK1磷酸化酪氨酸Y112 PDL1,这增强了协会的PDL1内质的reticulum-associated (ER-associated)N糖基转移酶同种型STT3A [79年]。STT3A的催化亚基oligosaccharyltransferase N-glycosylation和稳定所需的复杂PDL1 [79年]。然而,目前尚不清楚N-glycosylation PDL1需要自IL10 PCa细胞中表达,劳动部既能诱导白细胞介素6 PDL1水平即使不能。

广泛的临床使用更强的雄激素受体通路抑制剂药物,如劳动部、治疗CRPC肿瘤的出现增加了更积极的肿瘤类型,例如NEPC [15,80年- - - - - -83年]。免疫检查点建立免疫治疗方法包括anti-PDL1疗法已成功地其他癌症类型(84年]。不幸的是,临床试验在前列腺癌(使用anti-PDL1没有成功85年- - - - - -87年,这被认为是由于缺乏PDL1表达在前列腺癌细胞87年- - - - - -89年]。然而,主教et al。16)最近表明,劳动部LNCaP抗肿瘤表达PDL1。还需要进一步的研究来确定人类劳动部抗肿瘤移植PDL1,如果是这样,这个子集的患者可能受益于anti-PDL1治疗。值得注意的是,Ihle等人最近表明,在骨转移性肿瘤PCa, PDL1 PCa中高度表达的细胞比溶解再结晶的类型病变损伤(90年]。

另一个新颖的癌症免疫疗法临床评估涉及IL10管理。IL10最好研究巨噬细胞等免疫细胞的抑制作用,但IL10也可以刺激CD8+T细胞抗肿瘤免疫力,在临床试验中测试多个肿瘤类型(91年]。奈等人表明,增加CD8 IL10治疗+活动和延长病人生存在一些癌症类型(91年]。IL10和anti-PDL1也显示良好的响应(92年在其他癌症患者)。然而,使用IL10在使用前需要仔细考虑PCa病人因为我们显示在这项研究中,IL10可以增加NED在PCa细胞表型。

总之,我们的研究表明,细胞因子的作用导致的NED PCa肿瘤需要进一步调查。这包括检查其他的PCa细胞系,主要PCa细胞和小鼠肿瘤模型。PCa肿瘤已经转移到骨头里已报告被免疫细胞渗透(90年)这可能是白细胞介素6和/或IL10的来源。作者指出,PCa细胞和免疫浸润细胞之间的相互作用应该检查。

数据可用性

的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢Paul兰尼博士请提供LNCaP细胞表达ARR2PB-eGFP。这些研究是由操作从加拿大卫生研究院资助研究(拖把- 133415)和自然科学和工程研究委员会(rgpin - 2014 - 05662)。