流行的Ser217Leu ELAC2基因变异及其与前列腺癌在喀麦隆沿海地区的人口

文摘

背景。HPC2 / ELAC2已被确定为一个前列腺癌(PC)易感性基因。Ser -亮氨酸改变氨基酸217已经被研究最多的一个变异的基因。一些报告显示这种变体协会与PC样品的男人来自家庭遗传PC甚至散在病例。的目标。本研究旨在评估本协会和ELAC2 Ser217Leu变种的人群的患病率的喀麦隆沿海地区。方法。103病例和80随机选择控件识别研究人群参与了这项研究。2毫升的血液样本收集每个答应了参与者和用于人类基因组DNA提取,由非酶的基因的pcr ELAC2盐析和PCR-RFLP方法,分别。结果。野生型的频率(SS)、杂合的突变(SL)和(LL)突变纯合子基因型,分别为28.2%,49.5%,和22.3%的前列腺癌患者和28.8%,67.5%和3.7%的控制。比较会与SS和SS (SL + LL)表明,L等位基因的两个副本的存在赋予较高的前列腺癌的风险比的存在只有一个L等位基因的礼物没有前列腺癌的风险(或= 6.080和1.030,分别)。分析的结果也建议一个协会(P= 0.0012)的Ser217Leu变体增加前列腺癌的风险。结论。ELAC2基因的改变导致男性前列腺癌易感性喀麦隆生活在沿海地区。

1。介绍

基因突变已经被提出,证明在某些情况下是一个诱发因素的风险增加一些常见疾病包括前列腺癌(PC)。前列腺癌是第二个最常见的癌症,全世界癌症死亡的第五大原因1,2]。它是男性最常见的癌症诊断在世界大多数国家,男性癌症相关死亡的主要原因大约46个国家,尤其是在加勒比海和辅助撒哈拉非洲地区(1,3]。虽然我们不太清楚前列腺癌的病因,具有非洲血统的男性高速率表明种族和遗传倾向虽然还存在其他额外的晚期前列腺癌的风险因素。考试的模式在人口和前列腺癌发病率和死亡率随时间提供了洞察各个风险因素和人口的作用在疾病的流行病学筛查行为。在喀麦隆的电脑是最男性癌症诊断(4]。由于基础设施不足、记录和资源,对其实际喀麦隆的人口负担。然而,很少有研究,解决其epidemiomorphology [5)和城市特定的所有男性癌症患病率(6]。大多数研究表明,遗传因素是参与了前列腺癌的病因7),在这条线可能有电脑易感基因的位点已确定在过去几十年。就在最近,全基因组关联研究发现超过一百PC易感性位点虽然这些位点的遗传变异最多如何赋予疾病风险仍有待确定8]。这些位点之一ELAC2基因是第一个被确认为电脑易感性基因。蛋白质产品ELAC2已建议在细胞扮演许多不同的角色,包括调节细胞循环进展(9- - - - - -11]。许多研究协会的两个常见的错义突变(Ser217Leu和Ala541Thr)ELAC2开发PC的风险收益率进行了相互矛盾的结果(12- - - - - -14),最有可能由于不同的环境和生活方式的因素。由于标志着协会的研究结果不一致ELAC2多态性和前列腺癌在不同地理位置和种族,建立这种联系的喀麦隆人口可以把更多的光在这个协会以及揭示新见解关于疾病的管理。在此描述的研究是确定患病率和协会的Ser217Leu变体ELAC2基因在前列腺癌患者的喀麦隆沿海地区。这可能提供额外的信息可能被利用为高危个体的早期筛查和诊断早期治疗干预或易于管理。

2。材料和方法

2.1。伦理问题

本研究通过伦理审查和咨询委员会(ERCC)喀麦隆生物伦理学倡议(CAMBIN) (Ref。没有:CBI / 382 / ERCC / CAMBIN)。从所有参与者获得书面知情同意。

2.2。研究区域

这项研究是在杜阿拉Laquintinie参考医院的喀麦隆。杜阿拉是滨海地区的首都是喀麦隆的经济资本。最多的,它是最大的,在喀麦隆的大都市。它已经成为地理坐标04°03’和009°41所15]。Laquintinie医院欢迎不同种族来自喀麦隆的病人。

2.3。研究对象

这项研究涉及独特的男性前列腺癌阳性或健康志愿者年龄在40至93年之间。参加研究的所有PC病例被证实和注册从杜阿拉Laquintinie参考医院的病例。健康志愿者注册后质量敏感的季度。当时书面知情同意从志愿者填补了结构化问卷之前报名学习。

2.4。样本收集和测量血红蛋白含量

两毫升血液收集每个参与者通过静脉穿刺为EDTA -真空采血管管后严格无菌技术。使用URIT-12血红蛋白和血红蛋白水平测定H12血红蛋白测试条(广州Labon医疗设备有限公司)。样本然后运输包装在冰大学生物技术单位布埃亚他们储存在-20°C,直到所需的DNA提取。

2.5。DNA提取

从整个人类基因组DNA提取血液样本使用前面描述的非酶的盐析过程(16]。简单地说,900年μl TKM 1和50μl 1 x Triton-X被添加到300μl heparinised血液的埃普多夫和孵化37°C 5分钟溶解红细胞(红血球)。细胞被离心机在8000转3分钟,上层的丢弃。900年resuspended颗粒μl TKM1和40μl 1 x Triton-X和离心机。此步骤重复了3次减少数量的1 x Triton-X直到红细胞裂解的完整和白色颗粒白细胞(白细胞)。300年μl TKM 2和40μl 10% SDS下添加到细胞颗粒和孵化5分钟37°C。孵化后,100μl 6 m氯化钠添加和涡沉淀蛋白质。细胞在8000转离心5分钟,得到的上层清液被转移到一个新的包含300埃普多夫管μ异丙醇的l。DNA是由反相埃普多夫慢慢沉淀,然后离心法在8000转10分钟。上层清液都被丢弃而获得的DNA颗粒在70%乙醇resuspended删除任何多余的盐。最后,管子在8000转离心5分钟颗粒沿着DNA。DNA颗粒被风干,resuspended 50μl (TE缓冲,并存储在-20°C,直到所需的分析。

2.6。放大的ELAC2基因

的ELAC 2孤立的基因组DNA的基因放大所有的研究参与者的降落聚合酶链反应(降落PCR)方法。错义突变的外显子7的ELAC2(Ser217Leu)被放大为231 bp片段使用正向和反向引物5 'ggctgtcagctcaccttgtg3”和5 'gcagagaattaagaaaacgcaagc3”,分别。这些引物PCR条件曾被描述17]。引物都是来自Inqaba生物技术产业(南非)。扩增子被证实2%溴化乙锭染色琼脂糖凝胶。

2.7。限制片段长度多态性分析ELAC2扩增子

消化的PCR产物的遗传变异ELAC2(Ser217Leu)基因利用的Taqα酶和指示的制造商与一些细微的修改。0.5μ2.5 l的酶μ7.0 l相应的缓冲μl的核酸酶游离水和10μl PCR产品总量的20倍μl在65°C孵化10分钟。随后,基因型可视化在2.5%琼脂糖凝胶。

2.8。统计分析

比较患者之间的连续变量和随机选择的个体是评估使用而卡未配对t检验分类变量的协会进行了使用卡方检验在95%置信区间,被认为是明显不同的P< 0.05。基因型频率差异情况下使用标准卡方测试和控制进行了测试。优势比使用标准方法计算。所有上述统计分析进行了使用GraphPad Prism 5.0版。

3所示。结果

3.1。研究对象的社会人口特征

一群183人参加了这项研究,包括103名前列腺癌患者和80随机选择控制40 - 93岁的人。人口统计数据和信息关于生活方式态度有些前列腺癌的风险因素从每个参与者获得。表1总结了基本的社会人口特征研究的人口。

前列腺癌患者也追究前列腺癌家族史和19的87个受访者(21.84%)肯定有家族史。

3.2。基因分型的Ser217LeuELAC2基因

为了Ser217Leu基因型ELAC2基因多态性,基因组DNA从受试者血液分离的非酶的盐析的方法。DNA分离被证实1%的琼脂糖凝胶与溴化乙锭染色和可视化的紫外荧光(凝胶Doc仪器(BioRad))。所有样本的基因组DNA提取成功所显示的一个乐队的存在顶部的电泳图(图1)。

的ELAC2基因从参与者的DNA提取下一个孤立降落PCR方法。5毫升的PCR产物(扩增子)是运行在2%的溴化乙锭染色琼脂糖凝胶与100个基点DNA梯(BioRad)。的ELAC2基因被成功分离出所有参与者的DNA提取像一把锋利的乐队在231个基点(相应的大小ELAC2基因)是获得每个扩增子后电泳分析(图2)。

检测Ser217Leu突变,PCR产品183年的样本使用Taq消化α根据制造商的指示1限制性内切酶。分析消化后2.5%的琼脂糖凝胶与50个基点分子量标记的3种不同基因型(野生型(SS)、杂合的(SL),和纯合突变体(LL))是描述(图3)。

3.3。ELAC2基因型频率及其与前列腺癌

在所有的183个样本,pcr基因型频率(图建立了4)。

基因型频率的党卫军,SL,噢,分别为28.2%,49.5%,和22.3%的前列腺癌病例和28.8%,67.5%,3.7%,控制如图4。此外,有统计上的显著差异基因型之间的病例和控制。然而,在等位基因频率在两组之间无显著差异(表2)。

Ser217Leu突变在前列腺癌患者和高控制。然而,纯合突变体的频率(LL)和杂合的突变体(SL)相对较高,分别在病人和控制。

评估开发PC癌症的风险对于各种基因型(表的存在3)表明,突变等位基因的两个副本的存在(LL)授予一个患前列腺癌的风险高(p = 0.0047)。

我们继续看看突变等位基因早期疾病发作的风险增加了评估等位基因诊断和年龄之间的关系(≤65年,> 65年)但没有发现风险增加(p= 0.1320;或= 0.5748,95% CI)。知道这个突变可能参与了疾病的严重程度,我们比较PSA水平(< 10 19.99 10 - 20 - 49.99,50 - 99.99,和≥100 ng / mL)等位基因频率和获得p值为0.9807。

4所示。讨论

前列腺癌仍有不清楚病因虽然存在大量的证据表明遗传易感性因素的病因包括组合和外部风险因素(环境因素)。这些差异占全球PC事件的变化。而几个风险因素仅仅是个人选择的结果(如饮食、暴露于紫外线辐射、烟草使用)一些前列腺癌的主要危险因素是确定不变的,包括年龄、种族和家族史。遗传因素中,几个high-penetrance已确定基于遗传连锁的遗传变异和全基因组关联研究以及许多其他但一个个易感性位点。包括遗传变异的基因ELAC2基因已被证明是关键基因因素使许多人口发展中PC的风险增加。研究提供了理论水平的一些基因变异包括其中的一些基因ELAC2可以作为生物标志物的电脑检测和识别的进展以及高危个体(12,13]。这将促进疾病的早期检测和易于管理鉴于大多数PC患者在医院临床先进和积极的治疗不容易负担得起的和可用的。在这项研究中,我们调查的患病率的Ser217Leu变体ELAC2易感性基因及其与PC在喀麦隆沿海地区的人口。前列腺癌的发病率不断增加,尤其是在非洲近年来(18,19]。

的ELAC2基因是基因分型研究的183名参与者,每个基因型的频率决定。基因型频率的党卫军,SL,噢,分别为28.2%,49.5%,和22.3%的前列腺癌患者和28.8%,67.5%和3.7%的控制。有一个高频Ser217Leu突变的前列腺癌患者和控制。然而,我们发现患者和对照组之间的显著差异的Ser217Leu基因型频率ELAC2基因(p= 0.0012)。这种显著的差异归因于之间巨大的差异之间的纯合子突变情况下的频率和控制。没有显著区别个体等位基因在病例和对照。然而,比较会与SS和SS (SL + LL)表明,L等位基因的两个副本带来增加前列腺癌的风险相对于刚刚突变等位基因的一个副本(或= 6.080和1.030,分别)。年代和L等位基因的频率在这项研究中分别为52.91%和47.09%的情况下,类似于获得的几项研究结果特别是Izmirli和他的同事们(52.3%和47.7%)在2011年[20.]。但是当比较的等位基因频率情况下的控制,没有显著性差异(0.0710)而Izmirli和他的同事们发现了一个显著的差异(p < 0.001)。罗宾斯等人也获得了显著差异(21]。另一方面,研究由Vesprini和他的同事在2001年(22)以及Rokman和他的同事在2001年(23]显示没有显著差异,因此没有Ser217Leu变体和前列腺癌之间的联系(22,23]。样本的大小可能是造成这些差异的因素,但大量的荟萃分析研究也产生了冲突的结果(12- - - - - -14]。所有这些结果的差异可以归因于不同的种族背景和各种研究种群的地理位置。有几项研究显示,有相关性前列腺癌患者和他们的种族背景。这已经证明,例如,白人,黑人,亚洲人,加拿大人,American-Caucasians,英国人口Ser217Leu ELAC2基因的多态性(24,25]。

我们开始发现如果突变等位基因会增加早期疾病发作的风险通过测试等位基因和年龄之间的关系在诊断的病例。我们发现没有突变等位基因(风险增加p= 0.1320;或= 0.5748,95% CI)。确定如果这个突变可能参与了疾病的严重程度,我们比较PSA水平等位基因频率。结果表明,突变是没有参与增加了疾病的严重程度(p= 0.9807)。

5。结论

ELAC2基因的pcr在喀麦隆沿海地区的人口透露Ser217Leu变体之间的高流行病例和控制。而杂合的突变体在两组的最普遍的基因型,纯合突变基因型在很大程度上是普遍的情况下比在控制和差异是很有意义的。我们的研究结果表明,这些突变等位基因的两个副本的存在会增加电脑的风险。

数据可用性

病人的细节/控制的社会人口数据支持本研究的发现可以从相应的作者,只能向研究人员提供符合标准的访问由于道德问题(CBI / 382 / ERCC / CAMBIN)为了保护病人的隐私。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版工作。

确认

这项工作在一定程度上支持来自喀麦隆的RMA的高等教育(MINESUP) Dieudonne Lemuh Njimoh。

引用

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