文摘
背景。新的无毒有针对性的方法需要阉割抗前列腺癌患者(CRPC)。我们的临床前研究表明,激活T细胞(ATC)手持anti-CD3 x anti-Her2双特异性抗体(Her2Bi)杀死前列腺癌细胞,导致Th1细胞因子对肿瘤细胞的参与模式,防止前列腺肿瘤的发展,并在免疫缺陷小鼠延缓肿瘤生长。这些研究提供了强有力的理由我们第一阶段测试ATC手持Her2Bi剂量递增试验研究(aATC)安全与CRPC男人。方法。7 8 CRPC的男性可评价的接受每周两个注入后4周。男人收到2.5,5或10×109aATC每注入低剂量白介素2和granulocyte-macrophage集落刺激因子。结果。没有剂量限制毒性,1部分应答器和3 7患者显著减少PSA水平和疼痛分数。免疫评价外周血单核细胞免疫治疗前后2例显示增加干扰素-γEliSpot反应和Th1血清细胞因子。结论。这些结果提供了一个有利的理由为开发二期试验来确定治疗CRPC aATC是否有效。
1。背景
在2010年,估计与前列腺癌相关的死亡率是指出增加。与越来越多的前列腺癌患者前列腺特异抗原(PSA)复发,转移性疾病的人口预计将增加。虽然雄激素剥夺疗法(ADT)最初是非常有效的病人,疾病最终发展成阉割抗前列腺癌(CRPC)。ADT的失败是不可避免的与疾病进展与PSA水平上升有关,临床症状,或不正常扫描。尽管docetaxel-based化疗治疗,患者转移CRPC有一个预期的中位生存18 - 20个月。虽然阿比特龙等靶向治疗和mdv - 3100可能提高整体生存,完全缓解不太可能和患者最终发展疼痛,神经性压缩和骨折。免疫疗法是一个有吸引力的无毒CRPC患者临床策略诱导长期缓解的可能性。树突状细胞疫苗,Sipuleucel-T,已经被证明可以改善患者的总体生存CRPC [1]。Sipuleucel-T于2010年通过了美国食品和药物管理局(FDA)患者转移CRPC作为批准的治疗选择。批准Sipuleucel-T设置为其他细胞免疫疗法对前列腺癌。
Her2 /neu通过免疫组织化学方法(Her2)过度测试报告(包含IHC)在42 - 70%的前列腺癌2,3]。超表达Her2似乎不利预后因子和相关较低的存活率和复发率高于Her2阴性的前列腺癌(2]。此外,前列腺癌患者血清Her2水平显著高于对照组相比没有癌症和血清Her2水平转移性疾病患者明显高于无转移性疾病(4]。同样,在转移性疾病患者,患者血清Her2水平较高有更短的复发时间相比,那些Her2水平较低(4]。Her2过度与发展为雄激素在前列腺癌细胞也增加独立(5,6]。迫使Her2过度LAPC-4前列腺癌模型赋予androgen-independent增长androgen-dependent前列腺癌细胞(7]。这些研究提供了洞察Her2表达的临床作用在临床进展和CRPC患者的生存。
几个二期临床试验涉及针对Her2曲妥珠单抗(赫赛汀)注入前列腺癌的前列腺癌患者;然而,一项研究封闭由于无法获得足够数量的HER2 +患者(8),另一项研究未能证明受益CRPC患者(9]。使用anti-CD3激活T细胞的优势(ATC)重定向的双特异性抗体(BiAbs)使用单克隆抗体或BiAbs仅是武装的ATC BiAbs将独立的细胞毒性机制组合成一个单一的生物药物。武装ATC anti-CD3 x anti-Her2 BiAb (Her2Bi)目标T细胞Her2在肿瘤细胞上。武装每ATC Her2Bi转换到一个特定的细胞毒性T细胞针对高和低Her2表达的目标。我们的临床前研究表明,ATC手持Her2Bi表现出高水平的non-MHC限制细胞毒性针对曲泽,du - 145, LNCaP前列腺癌产生破坏瘤的细胞系和干扰素等细胞因子γ(干扰素γ),肿瘤坏死因子α(肿瘤坏死因子α)和gm - csf以及MIP1alpha咆哮(10- - - - - -22]。此外,与曲泽本地化Her2Bi-armed ATC coinjected曲泽异种移植和阻止肿瘤生长或诱导缓解严重联合免疫缺陷瘤内注射时米色老鼠(23]。评估这一战略,我们进行了第一阶段试验评价Her2Bi武装ATC注入与特定的关注CRPC队列检查安全性和初步疗效。评价免疫反应的第一阶段CRPC病人的临床试验表明,注入Her2Bi-armed ATC (aATC)是安全的,诱导抗肿瘤反应。我们的研究表明,Her2Bi-armed ATC治疗可能是一种有效、无毒,肿瘤特异性治疗her2阳性CRPC。
2。患者和方法
这项研究是第一阶段试验在罗杰威廉姆斯医院,美国罗德岛州普罗维登斯市。研究,同意被当地的机构审查委员会批准。这项研究的主要目标是完成一个阶段我剂量使用Her2Bi武装ATC前列腺癌患者0 - 3 + Her2积极性。患者的队列转移CRPC治疗在FDA批准LGL赞助的印第安纳州。
2.1。前列腺癌组的资格
阉割耐药患者的前列腺腺癌病理记录进步尽管不管他们的her - 2 /雄激素抑制治疗neu都有资格表达状态。发展是由至少以下之一:PSA上升,增加的疾病,或骨转移的新领域。患者需要测量或可评价的疾病和至少4周的休息之后化疗或放疗前入学协议。Her2染色没有执行,因为它不是标准的护理。并发放射治疗是不允许的;然而,当地的转移性疾病被允许辐照疼痛控制和/或局部病变引起的功能障碍。
细胞注入可能最早于1周完成后局部照射如果毒性解决基于评估治疗的医生。Karnofsky性能得分≥60%或ECOG评分0 - 2是必需的,最小寿命为3个月。激素治疗(LHRH类似物除外)必须停止前至少4周armed-ATC注入的起始。每个病人都必须签订书面通知后治疗的知情同意的替代品,潜在的好处,副作用,和风险。没有其他恶性肿瘤是允许的,除非它的历史原位皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌,或其他癌症缓解5年或者更长时间。
排除标准包括心肌梗死在去年12个月的历史,左心室功能受损(由蒙加LVEF≤45%),充血性心力衰竭,不受控制的高血压,或重要的肺病(DLCO > 60%)在肺功能测试。正常骨髓、肾脏和肝脏功能是必需的。条件或药物导致免疫抑制患者被排除在外。
2.2。生产Heteroconjugated双特异性抗体(Her2Bi)
Anti-CD3单克隆抗体(OKT3年会Ortho-Biotech,美国力登,NJ)是heteroconjugated anti-Her2单克隆抗体(赫赛汀,基因泰克,南旧金山,CA)生产anti-OKT3 x anti-Her2双特异性抗体(Her2Bi)如前所述24]。
2.3。Leukopheresis, T细胞扩张,并与Her2Bi武装
收集外周血单核细胞(PBMC)获得淋巴细胞从1或2 leukopheresis ATC扩张。PBMC与20 ng / mL的OKT3激活和扩大在100国际单位/毫升的生成- 2 40 - 320 ATC最多14天期间文化cGMP条件下描述(15,16]。细胞生长在透气的玻璃瓶(聚全氟乙丙烯袋型750 - c1,美国Fluoroseal公司盖瑟斯堡,MD) 1640年RPMI介质(Lonza)补充2%汇集人类热灭活血清(谷生物医学,温彻斯特)。ATC是基于细胞计数分离大约每2 - 3天。经过14天的文化、ATC收获和手持pretitrated剂量50 ng Her2Bi / 106在多个整除ATC、清洗和低温贮藏。整除的每袋被细菌和真菌文化(罗杰·威廉姆斯医疗中心病理学实验室)、内毒素检测(Lonza, Inc ., Walkersville MD)和支原体测试(Bionique测试实验室,Inc .)、萨拉纳克湖,纽约)。没有外生- 2,OKT3或其他文化试剂(如介质组件)出现在最后的低温贮藏产品。表型的可行性、扩散和反应的ATC - 2低温贮藏后并没有改变。低温贮藏前细胞毒性由ATC武装相当于那些武装解冻后冻存ATC。
2.4。注入Her2Bi武装ATC
T细胞输注后才确定低温贮藏产品的标准操作程序和病人的床边。注入率计算是基于一个注入率不超过5欧盟内毒素/公斤/小时。武装ATC是在5 - 15分钟监测生命体征,输液后每15分钟到1小时。生命体征和副作用都是记录在病人的图表使用NCI免疫治疗毒性表。病人被观察6小时后他们的注入。每个注入的剂量水平是2.5,5,10,200亿。每个病人将接受共有8支武装ATC连续4周每周两次。如果病人遇到毒性相关的武装ATC,修改所需的剂量或持有美国政府。的患者同时接受皮下注射白介素2 (2)(国际单位/ m2/天)开始前3天1日武装ATC注入和去年武装ATC输液结束后7天。gm - csf (250μg / m2每周两次)管理的第一次武装ATC输液前3天开始和结束7天后的最后剂量武装ATC(图1)。
2.5。研究设计和统计计划
三个病人进入(图在每个剂量水平1)。升级的毒性剂量是基于“细胞”定义为毒性直接归因于武装ATC的注入。剂量升级完成,如果超过80%的planned-armed ATC剂量是没有任何3级或更大的毒性归因于疗法。人群扩大到6个病人在任何特定的剂量水平如果第一批三个患者输液停止由于三年级或更高nonhematological毒性或接收不到80%的计划剂量的武装ATC。扩大的队列,如果另一个病人在这个剂量水平注入停止由于毒性或有不到80%的剂量交付计划,然后这个特定的剂量水平是被定义为一个在剂量限制毒性(DLT)发生和终止进一步剂量升级。最大耐受剂量(MTD)被定义为以下剂量水平的一个剂量限制毒性发生这是推荐的二期剂量。第一阶段试验包括转移性乳腺癌和前列腺癌患者。这是一个报告只有在前列腺癌患者登记在这个研究。反应是评估通过监测PSA每4周直到进展。由于小样本大小,只有描述性的临床参数PSA下降,时间进展,整体存活率。 Immunologic markers were assessed on the patients when cell numbers were permitted.
2.6。免疫监视
干扰素的数量γ生产从新鲜PBMC细胞从男人之前和在不同时间点之后注入武装ATC被干扰素检测γ有关酶联免疫斑点试验具体(BD生物科学,圣何塞,CA)。点被捕获并指望CTL Immunospot计数器使用Immunospot软件版本4(蜂窝技术有限公司,瓶高度,哦)。我们比较是否在活的有机体内裂解武装ATC将诱发肿瘤的记忆T细胞能诱导细胞凋亡时暴露出来在体外肿瘤细胞(召回响应)和寻找不同的前体频率(25- - - - - -29日]。意思是干扰素诱导的变化γEliSpots反应前后免疫疗法是随着时间的推移,探索制定多久他们可以居高不下。配对以及或魏克森讯号等级测试是用于这些比较。意味着,中位数,和标准差计算干扰素的数量γEliSpots。
2.7。内源性细胞因子的生产
为了确定是否武装ATC诱导免疫反应的多个输液,Th1和Th2血清中细胞因子进行评估的病人使用25-plex人类细胞因子Luminex数组(表达载体,卡尔斯巴德,CA) Bio-Plex系统(Bio-Rad实验室大力神,CA)。数据分析功能的注入(25- - - - - -29日)和在活的有机体内意思是Th响应计算1[2 +干扰素γ]/ Th2细胞因子(il - 4 + IL-5)比。
3所示。结果
3.1。病人的特点
这里我们报告试验数据8 CRPC病人从我们第一阶段临床试验;剩下的22个转移性乳腺癌患者在其它地方会报道。之一就读CRPC未接受治疗的患者由于他疾病的迅速发展。患者的平均年龄7转移CRPC治疗研究是76年(范围66 - 85年)。之前的治疗包括LHRH类似物治疗或抗雄激素治疗所有病人。一个病人收到docetaxel-based化疗之前,一个病人收到米托蒽醌化疗之前,和一个病人有多种激素组成的机动酮康唑,类固醇,顺序和雌激素(表1)。
3.2。ATC的特点
患者接受8剂量的2.5,5,10,200亿名武装ATC连续4周每周两次。ATC的特点如表所示2。
3.3。临床反应,PSA水平和毒性
有减少麻醉中使用2的7人可能由于减少骨痛。除了减少药物与转移相关的骨痛,两个CRPC笨重的疾病患者注射了40 (60202年)和80年(91760年)十亿Her2Bi-armed ATC,分别有轻微反应观察瞬态减少PSA水平(892到767 ng / mL和1140到1046 ng / mL,职责),最后细胞输注(图后短期持久性2(一个))。第三个CRPC病人(60163),接受400亿个细胞,一个部分响应在6个月内完成治疗的病人的PSA水平减少50% >(图2 (b))。两个病人显示完成后的PSA水平的增加8注入Her2Bi武装ATC preIT基线水平相比(图2 (c))。治疗耐受良好,所有患者接受至少80%的计划剂量。剂量、操作系统的结果,和毒性都包括在表中1。我们的数据显示鼓励OS与HRPC的一小群人。
(一)
(b)
(c)
3.4。诱导干扰素(干扰素γ)EliSpots
新鲜PBMC与曲泽刺激细胞产生干扰素γEliSpots。数据3(一个),3 (b),3 (c)显示增加干扰素γ表达细胞后武装ATC注入。有一个明显的增加干扰素的数量γEliSpots postinfusion # 5相对于基线(前武装ATC注入[preIT])在两个病人(FG60163和FG60202)和postinfusion # 1在第三病人(FG91760)。这些数据表明,记忆辅助T细胞或细胞毒性T细胞诱导了Her2Bi武装ATC注入,先前存在的循环外周血淋巴细胞,并立即响应直接刺激前列腺肿瘤抗原在曲泽目标。
(一)
(b)
(c)
3.5。注入武装ATC诱导内源性细胞因子的生产
的在活的有机体内意思是Th响应计算1[2 +干扰素γ]/ Th2(il - 4 + IL-5)细胞因子的比例仍然主要是Th1极化在治疗。数据4(一)- - - - - -4 (c)表明Th1和Th2患者细胞因子模式FG60163、FG60202 FG91760,分别。所有三个病人(2-MR和1-PR)显示增加2,gm - csf和干扰素-γ(Th1细胞因子)相对于基线水平(preIT)血清的顺序测试。Th2细胞因子il - 10 Th也显示了类似的模式1细胞因子。其他Th2细胞因子il - 4和IL-5不能检测到。这些发现符合增加特定的细胞毒性T淋巴细胞反应中观察到EliSpots病人postinfusion PBMC暴露于肿瘤细胞。这些观察表明,内生癌症患者的免疫系统可以转移到支持武装ATC的抗肿瘤免疫环境注入。
(一)
(b)
(c)
4所示。讨论
我们第一阶段治疗转移性CRPC Her2Bi-aATC患者进行的研究表明,武装ATC输液安全,耐受性良好CRPC导致2小,1部分反应病人剂量的40岁分别aATC。7病人的PSA水平下降3和7的一个病人> PSA下降50%低于基线(PR)。在两个病人研究干扰素-γEliSpots和细胞因子反应,显著增加干扰素-γEliSpots和血清Th1细胞因子(2、gm - csf和干扰素-γ)后5日注入(Inf # 5)在基线时在没有增加2细胞因子被观察到。
武装ATC不仅可以作为Her2特定的细胞毒性T淋巴细胞在前列腺癌患者中,但也可能分化和分泌Th1细胞因子和咆哮,MIP1 -α绑定后Her2 +肿瘤导致招聘内生T细胞和单核细胞导致的原位接种疫苗在肿瘤部位(30.]。肿瘤细胞溶解由目标T细胞一起释放- 2,干扰素-γ,gm - csf可能提供内生的环境诱导免疫免疫细胞肿瘤相关抗原(TAA)。因此,多次武装ATC注入可能最终导致系统性免疫反应,可以发现干扰素-γEliSpots在外周血单核细胞(PBMC)的病人。
最近,Sipuleucel-T / APC8015 Provenge显示无复发生存利益在第三阶段的安慰剂对照试验1]。在这项研究中,收集PBMC与前列腺酸性磷酸酶抗原和gm - csf脉冲。抗原的树突细胞丰富准备当时管理病人。最终结果涉及127名患者的安慰剂对照试验显示操作系统在3年的改善。OS是安慰剂组的11%和操作系统33% Sipuleucel治疗转移性前列腺癌组()。大三期安慰剂对照试验的结果(IMPACT1)无症状与治疗转移性CRPC患者显示一个操作系统的好处,但是没有PFS受益。代理是耐受性良好,由于整体的生存利益,FDA批准Sipuleucel-T作为第一个细胞免疫疗法FDA批准的任何癌症。
其他免疫治疗方法已经在转移性CRPC患者进行测试。与GVAX初步研究,组成的一个同种异体细胞治疗的组合两个前列腺癌细胞系(曲泽和LnCAP)与改进的gm - csf基因,似乎是有前途的。在二期试验中,GVAX耐受性良好,显示临床承诺和26个月的中位生存时间中位数的骨转移患者5个月(31日]。然而,第三期临床试验单剂GVAX与多烯紫杉醇在早期无症状CRPC关闭临时分析由于失望,和第三期临床试验多西他赛+ /−GVAX CRPC症状显示增加的死亡人数(24]。最近,PSA定向治疗疫苗(ProstVacVF)显示死亡率减少44%支持疫苗后胳膊安慰剂控制13年的随访(32]。没有变化在PFS PFS的主要终点在2004年被报道,但是经过长时间的随访,统计上显著的OS中获益。
鼓励有初步证据支持调查针对CRPC aATC。多个调查人员使用输液BiAb激活T细胞在活的有机体内和提高Her2的攻击和杀害+肿瘤(33- - - - - -38]。在二期前列腺癌和肾癌先进试验中使用BiAb MDX-H210 (15μg / m2第四)和gm - csf 5μ克/公斤/天皮下注射为6周,每周4天重复7患者20例(35%)前列腺癌有客观反应PSA下降(> 50%)[38]。
有很多这种方法的创新和新颖的组件。如前所述,aATC甚至可以目标乳腺癌细胞行(24)和前列腺癌细胞系(曲泽,LNCap) [23)较低的HER2受体表达。能力目标肿瘤表达Her2受体数量低的理由包括所有病人不管他们的Her2表达。这项研究表明,aATC诱导免疫反应的多个输液,可以检测到reexposure干扰素-前列腺癌抗原γEliSpot化验。这些数据表明,持械ATC注入“接种疫苗”病人整个数组(未知)生成自己的前列腺癌抗原和抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞或T细胞辅助活动。在早先的研究中,我们表明,在转移性乳腺癌的女性低剂量- 2,低剂量gm - csf,八个Her2Bi武装ATC注入诱导细胞毒性T细胞活动针对SK-BR-3乳腺癌细胞可以被探测到的目标免疫治疗后4个月以上(30.]。这些研究的结果表明,这部小说结合抗体针对non-MHC限制T细胞介导细胞毒性可能有很高的临床影响,在转移性CRPC患者治疗中获益。
5。结论
这个阶段我剂量升级研究表明,治疗转移性CRPC Her2Bi-aATC患者是安全,耐受性良好。CRPC病人40岁aATC剂量显示1分和2轻微的反应,以及诱导抗肿瘤免疫反应。这些数据提供了一个强有力的理由发展二期临床试验来确定治疗CRPC aATC是否有效。
利益冲突
劳伦斯·g .亮度是Transtarget Inc .的创始人Ulka Vaishampayan,医生Thakur,:拉索尔教授,和尼古拉Kouttab宣布他们没有利益冲突。
作者的贡献
Ulka Vaishampayan和阿卡纳Thakur写道。劳伦斯•g .亮度:拉索尔教授尼古拉斯Koutab参与设计、监管意见书,写的协议,临床管理的协议,和细胞注入。劳伦斯•g .亮度:拉索尔教授,尼古拉斯Koutab参与产品生产cGMP,免疫评价分析,数据管理和收集。阿卡纳Thakur和劳伦斯·g .亮度参与数据分析。阿卡纳Thakur Ulka Vaishampayan,劳伦斯·g .亮度同样对本文亦有贡献。
确认
作者承认技术的努力(Pam Davol詹妮尔史密斯和Estie Palushock)和临床协调人员(Wendy年轻,安妮特·奥尔森和Lori大厅),特殊利益协调病人护理和艾琳对峙提供护理支持临床输液。劳伦斯·g .亮度支持部分由白血病和淋巴瘤协会(TRP 6066 - 06),美国国家癌症研究所(R01 CA 092344)和罗杰·威廉姆斯医院癌症中心的启动资金。