文摘

背景。蛋白激酶的水平aPKC之前在英国队列与前列腺癌预后相关。然而,前列腺癌发病率和进展,以及在这种疾病基因变化,显示强大的种族差异,尤其是在亚洲人群。客观的。本研究的目的是验证aPKC协会表达与前列腺腺癌阶段日本队列。方法。组织微阵列组成的142例恶性前列腺癌病例和21良性前列腺组织受到immunohistological aPKC染色。aPKC染色强度得分由三个独立的病理学家和归类为缺席(0),昏暗的(1 +)、中级(2 +),和明亮的(3 +)。aPKC染色强度与格里森评分和肿瘤相关的阶段。结果。在恶性前列腺癌增加aPKC染色观察,相比良性组织。此外,aPKC染色水平与格里森评分和肿瘤的阶段。我们的结果扩展与前列腺癌aPKC协会,日本人口和建立aPKC作为普遍的适用性前列腺癌跨种族的生物标志物来执行。

1。介绍

与特定的敏感性而导致的癌症基因,如慢性粒细胞白血病、前列腺癌与多个位点的变化,每个个体风险较低但累计导致前列腺癌的表现型。种族显然会影响患前列腺癌的风险。前列腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,在美国和西方国家(1]。相比之下,前列腺癌的发病率明显低于亚洲种族,包括日本(2,3]。前列腺癌发病率大约是在非洲裔美国人比亚洲人高2.8倍,而白种人构成一个中间风险集团(4]。前列腺癌的死亡率也显著降低日本人口相比白种人或非裔美国人2,3]。然而,格里森评分在诊断与白种人相比,日本男性高(3]。

可以经常懒惰和不致命的前列腺癌;然而,在一些病人可以高度积极的和致命的。最合适的低风险患者治疗疾病可能是一个积极监测方案中免于不必要的手术和治疗,改善他们的生活质量。与此同时,更致命的形式可能需要积极的治疗包括根治性前列腺切除术,体外放射疗法和近距离放射疗法。能够准确地识别前列腺癌和歧视致命不致命的形式通过预处理针吸活组织检查,通过使用生物标志物,可能允许更多疾病的治疗决策管理。组织生物标记物可以作为一个积极监测工具差别微不足道的疾病风险高的进展的时候针吸活组织检查(5]。这样biomarker-guided改善预后和/或治疗反应的预测依赖于统一的识别和可靠的分子变化的疾病。考虑到民族前列腺癌进展的变化,有必要知道特定的生物标志物是通用的应用程序在所有种族和一致的性能特征。或者生物标志物的诊断和预后价值将被限制在一个特定的种族。

一些基因改变的频率在亚洲和白人人口与前列腺癌的发病率,而其他则不然。例如,21 q22.2 - 22.3删除(的频率TMPRSS2: ERG融合)和10 q删除(PTEN失活)是中国男性显著降低,关联与降低前列腺癌发病率(6]。相比之下,等位基因失衡13 q14窝藏肿瘤抑制RB1 DBM, FAM10A4, FOXO1A包含假定的肿瘤抑制和13温度系数EDNRB和KLF5被发现在日本人口相比,德国人(3]。

Th多功能serine-threonine蛋白激酶典型的蛋白激酶C (aPKC)包括两个~ 70 kDa isoforms-aPKCζ,极微小(aPKC 和ι)和一个名为PKM的~ 55 kDa异构体 (7- - - - - -9]。两个完整的亚型,aPKC 和ι,有高度的整体序列的身份~ 86%氨基酸酶serine-threonine激酶结构域的身份。截断PKM的 同种型aPKC本质上是相同的 激酶域。表达和功能的完整的亚型已经与一些癌症有关,包括前列腺癌。增加aPKC的蛋白表达 已表现出强烈与侵略性前列腺癌的一个子集,反比于病人生存(10,11]。特征的表达,减少aPKC亚型也被报道在前列腺癌(12]。尽管如此,aPKC 也被称为肿瘤抑制前列腺癌(13),因此这个激酶与前列腺癌协会仍然是有争议的。因此,我们试图调查如果aPKC的报道增加表达在前列腺癌亚型延伸到日本群体或民族差异。

2。材料和方法

2.1。组织微阵列(TMA)和免疫组织化学

所有组织的集合被机构审查委员会批准,获得患者的知情同意。所有肿瘤病例组织学检查和代表肿瘤领域被标在相应的捐赠石蜡块。组织微阵列是由档案的福尔马林固定石蜡包埋块前列腺标本。组织足够的大小(2毫米)是蓝玉空心代表地区。从医疗记录获得的临床和病理资料。3μ米的部分已经被取消了常规苏木精和伊红染色和免疫组织化学())(包含IHC)。包含IHC蓝玉是TACMASS核心(组织收购和细胞/分子分析共享服务),亚利桑那州癌症中心。包含IHC执行与兔子anti-aPKC (sc - 216)主要抗体购自圣克鲁斯生物技术,Inc .(达拉斯,得克萨斯州),发现XT自动化应用(VMSI-Ventana医疗系统,罗氏集团的一员,图森,亚利桑那州)。这一抗体识别所有标识aPKC亚型(14]。所有步骤进行发现XT自动化应用使用VMSI验证试剂,包括deparaffinization细胞调节(抗原检索borate-EDTA缓冲区),初级抗体染色,检测和放大使用biotinylated-streptavidin-HRP和轻拍(Diaminobenzidine)系统,和苏木精复染色。染色后的仪器,幻灯片通过分级醇脱水,二甲苯和盖玻片安装介质。主要抗体是使用1:150稀释和孵化时间是1小时在37°C。适当的正面和负面的(仅二次抗体)控制每个轮免疫组织化学染色在并行。

2.2。统计分析

统计学意义是由适当的测试使用SPSS和棱镜。分布的样本在每个aPKC染色类别进行了分析通过卡方测试。

3所示。结果

我们使用组织微阵列(TMA)准备从日本接受前列腺切除术后的患者标本的机构审查委员会批准。共有163个标本包括评估后参与病理学家格里森和TNM(肿瘤、淋巴结转移)得分。142例确定为恶性前列腺癌被包括在这项研究中,那些被诊断为转移性前列腺癌8。此外,21个良性的样本作为控制。患者人群的年龄分布和标本的数量不同的格里森评分和TNM分期中描述表1。蓝玉彩色节中描述2和检查三个病理学家独立aPKC蛋白质表达水平。他们用aPKC表达水平在四categories-absent(0),昏暗的(1 +),中间(2 +),和明亮的(3 +)。微分得分的个体标本,至少两个病理学家检查和共识,确定最终的分数。

表1
病人的年龄和肿瘤TMA的特征。

前列腺癌检查aPKC蛋白质水平表明,良性的控制组织,以及良性腺发现前列腺癌组织内,并没有显示出显著aPKC染色和被描述作为aPKC缺席(0)或aPKC暗(1 +)(图1(一),用箭头显示;图1 (b))。得分TMA显示19.06%的良性样本aPKC缺席(0)和52.38%是aPKC暗(1 +)。23.81%的良性病例aPKC中间(2 +)和4.76% aPKC明亮(3 +)(图2)。相比之下,恶性前列腺癌组织显示增加aPKC染色(数字1 (c)和1 (d))。只有6.34%的情况下取得aPKC缺席(0)和8.45%得分aPKC暗(1 +)。30.99%的病例aPKC中间(2 +)和54.23%的病例aPKC明亮(3 +)恶性前列腺癌(图2)。值得注意的是,少数腺癌与缺席(0)或昏暗的(1 +)aPKC也形态无差别。样本的分布,在良性和恶性前列腺癌组织,在不同aPKC染色类别不是随机(卡方检验, )。比较不同aPKC染色样品的类别分布之间的良性和恶性前列腺癌组织显示显著正相关(x平方分布检验, )。因此,我们得出这样的结论:aPKC前列腺癌中表达明显高于日本的人口。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
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(d)
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图1
aPKC染色在前列腺组织。(c)代表aPKC染色的图片TMA前列腺组织的核心。箭头在(a)指向正常腺体,和(b) (c)恶性地区正常腺的放大视图显示暗(1 +)aPKC染色。(d)恶性区域的放大视图显示明亮(3 +)aPKC染色。

图2
协会aPKC染色强度与恶性前列腺癌。aPKC染色强度分布(缺失或0,昏暗的或1 +,中间或2 +,和明亮的或3 +)为良性 )和恶性肿瘤( 前列腺癌。 卡方检验。

格里森评分是最常用的前列腺癌分期系统,目前前列腺癌最好的预后标准(15]。以前,aPKC表达式被证明关联分别与格里森评分和前列腺癌的预后在英国的待定种族[10,16,17]。因此,我们比较了格里森评分与aPKC TMA标本的分数。我们的分析表明,aPKC分数与格里森评分(卡方检验)(图3)。此外,格里森6最多有一个中间(2 +)aPKC表达水平。此外,格里森7 - 9分数与aPKC表达水平较高,与aPKC蛋白质含量在格里森评分最高9(图3)。aPKC分数在格里森评分8和9前列腺癌的前列腺癌组织明显不同于格里森评分6(卡方检验)。总体而言,较低的格里森评分往往aPKC昏暗的(1 +),但是,得分低于6非同寻常的诊断,我们没有足够的数据来评估的意义。


图3
aPKC染色强度格里森评分的相关性。aPKC染色强度分布在前列腺癌不同格里森评分(GS)。 卡方检验。总的来说,aPKC分数与GS,卡方检验, 。

我们还分析了如果aPKC表达水平与肿瘤阶段(T),淋巴结转移(N)或远处转移(M)。aPKC分数与T阶段(卡方检验)。我们观察到T2病例主要aPKC中间(2 +),而T3例aPKC明亮(3 +)(图4)。T2的aPKC得分明显低于在T3(卡方检验)。T4案件也显示明亮(3 +)aPKC表达水平,但样本容量限制的统计学意义。相比之下,没有明确的相关性可以建立N和M得分的前列腺癌标本,更高的分数是非同寻常的诊断,我们没有足够的数据来评估的意义。总之,我们观察到的相关性aPKC表达水平与肿瘤的阶段。


图4
aPKC染色强度与肿瘤的相关性。aPKC染色强度分布在前列腺癌肿瘤在不同阶段(T)。 卡方检验。总的来说,aPKC得分与T,卡方检验, 。

4所示。讨论

前列腺癌的发病率及预后因种族而异。生活方式和环境因素可能占种族差异在这个疾病;然而关键基因差异也被报道(3]。前列腺癌在日本人口显示了白人人口(有趣的遗传差异3]。因此,我们测试了是否aPKC蛋白质含量增加,先前描述的前列腺癌,前列腺癌患者中观察到日本。我们的研究结果表明,aPKC表达也显著增加,前列腺癌和正常前列腺组织在日本病人。这些结果支持以前的报告基因增加aPKC磷酸化的网站,与活动增加,hormone-naive和阉割抗前列腺癌在日本群(18]。此外,我们将这些观察的协会增加aPKC表达水平与格里森评分和肿瘤的阶段。

我们的研究也符合报告将直接aPKC的分子功能 在肿瘤进展。雄激素刺激aPKC 这种疾病的活动androgen-dependent阶段,而aPKC 是持续激活androgen-insensitive前列腺癌(19]。aPKC 刺激增殖通过激活p70S6激酶。此外,aPKC抑制激酶活性的结果减少前列腺癌细胞增殖androgen-dependent和androgen-insensitive [19]。在前列腺癌的细胞系,aPKC 由Src-Rac1激活信号(18]。另外,保守分子aPKC的函数 在细胞迁移18)和aPKCι在NF -κB激活和增加细胞生存在前列腺癌细胞已报告(20.]。综上所述,我们的研究结果表明,aPKC可能是一个普遍的生物标志物适合前列腺癌检测和分级,影响民族遗传差异观察前列腺癌。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究是由国家卫生研究院R01 CA149258 Sourav Ghosh;TACMASS核心支持亚利桑那州癌症中心支持格兰特,NIH CA023074。