文摘
神经炎症存在于多种疾病的病理生理机制,影响中枢神经系统(CNS)。小胶质细胞在启动和维持有重要作用的炎症过程。Epiisopiloturine (EPI)是一种咪唑生物碱作为副产品的毛果芸香碱提取获得Pilocarpus microphyllus(毛果芸香)和显示有前途的抗炎和antinociceptive属性。在目前的研究中,我们调查了EPI对小胶质细胞的炎性反应的影响(BV-2细胞)引起的脂多糖(LPS)和探索公认的潜在的分子机制。细胞生存能力没有受到EPI (1 - 100μg / mL)作为评估LDH活性和MTT测试。EPI的预处理(25、50、100人μg / mL)显著降低LPS诱导的促炎反应,所观察到的减少亚硝酸盐氧化生产和进气阀打开蛋白质的表达。EPI (25μil - 6和TNF - g / mL)减少α生产,分别为40%和34%。然而,没有观察到抗il - 10的生产变化。从力学上看,EPI抑制TLR4的表达和NF -磷酸化κB p65 MAPKs物和ERK1/2)引起的有限合伙人,但是没有观察到变化在LPS-stimulated TREM2受体表达细胞。总之,我们的数据显示了强有力的抗炎特性EPI的小胶质细胞。这些影响与减少TLR4表达和抑制细胞内的信号级联,包括NF -κB和MAPKs物和ERK1/2)。
1。介绍
炎症反应中起着至关重要的作用在许多神经退行性疾病的发展和发展(ND)与衰老密切相关,如帕金森病(PD)和阿尔茨海默病(AD),这是进步的慢性疾病,导致病人死亡1- - - - - -3]。然而,当前美国食品和药物管理局批准的药物治疗主要是有症状的,有一定的局限性。因此,高优先级的研究新的药物来预防或改善这些疾病的治疗(4]。
小胶质细胞是中枢神经系统(CNS)巨噬细胞,”构成5 - 10%的脑细胞,并与大脑中几乎所有的细胞类型(例如,星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元)导致大脑发育,可塑性和维护的体内平衡5]。小胶质细胞调节神经活动,作为回报,也可能干扰小胶质神经元的功能。在压力条件下,小胶质细胞可能获得不同的活化表型,根据不同微环境包括(i)经典激活M1表型特征的促炎介质的生产,包括il - 1β肿瘤坏死因子-αil - 6,增加表达的诱导一氧化氮合酶(间接宾语)和表面标记,CD16/32, CD86,和CD40),和(2)或者激活M2表型与凋亡细胞的吞噬作用和抗炎介质释放(TGF il - 10β和galectin-3) (6- - - - - -8]。在ND, M1 / M2支持M1的失衡。
在中枢神经系统中,小胶质细胞与有关分子交互模式(抑制)(细胞碎片,修改后的蛋白质,包括β物种和α-突触核蛋白,氧化脂质)或其分子模式(pamp)有限合伙人等的革兰氏阴性细菌外膜的一个组成部分。这PAMP时行为通过激活先天免疫toll样受体4 (TLR4)小胶质细胞中高度表达。LPS激活胞内信号通路相关的转录因子如NF -κB二聚体(p50和p65)和增殖蛋白激酶(MAPKs),产生炎症介质。相比之下,在髓细胞触发受体表达2(托马斯2)和小胶质细胞表达有相反的效果,表达下调促炎介质的生产,如肿瘤坏死因子-α(9- - - - - -11]。
NF -的激活κB在LPS-TLR4和随后的易位从细胞质,细胞核转录因子导致转录的基因参与炎症酶的生产(如间接宾语),TNF -α,il - 1β、il - 6等化学介质,而激活MAPK家庭成员等物,ERK1/2, p - 38结果激活的激活蛋白1 (AP-1)家族转录因子调节各种炎性蛋白的表达(9,12- - - - - -15]。因此,几项研究已经评估小胶质的调制函数作为治疗和策略。治疗方法与小胶质激活有关,通过瞄准先天免疫受体和胞内信号通路包括TLR, MAPKs和转录因子,直接参与生产的神经炎症介质和氧化剂的物种(例如,一氧化氮和活性氧)关联到ND (16- - - - - -18]。的重要性,各种植物的生物碱,如黄连素和咖啡因,也表明神经保护作用,减少神经炎症和调节小胶质细胞功能(19]。
Epiisopiloturine (EPI)(见图1)是一种咪唑生物碱作为副产品的毛果芸香碱提取获得Pilocarpus microphyllus。最近,我们表明,EPI减少炎症反应在人类中性粒细胞通过抑制NF -κ激活,肿瘤坏死因子α、il - 6和活性氧的生产(20.]。我们还演示了一个antinociceptive效应的生物碱carrageenan-induced急性炎性疼痛模型在啮齿动物20.,21]。额外的药理作用已被描述为EPI包括抗菌、抗增殖、抗炎和antinociceptive老鼠(22- - - - - -24]。在目前的研究中,我们调查了EPI对LPS诱导的炎症反应的影响在小胶质细胞细胞系。特别是,我们专注于生产和MAPK的磷酸化和NF -细胞因子κB通路。
2。材料和方法
2.1。生物碱Epiisopiloturine
epiisopiloturine生物碱(EPI)(纯度99.7%)得到的副产品毛果芸香碱提取p . microphyllus和凭证标本(HDELTA2869)标本三角洲的沉积做巴纳伊巴,Piaui联邦大学。EPI是溶解在二甲亚砜(DMSO) 0.1%的水。
2.2。化学和生物材料
N - (1-Naphthyl)乙二胺盐酸盐(需要)(Sigma-Aldrich,欧洲大学协会),牛血清白蛋白(BSA) (Sigma-Aldrich,欧洲大学协会),无水乙醇(Dinamica、巴西),3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT) (Sigma-Aldrich,欧洲大学协会),氯化钠(Dinamica、巴西),氯化钾(Dinamica、巴西),DMSO (Sigma-Aldrich欧洲大学协会)、十二烷基硫酸钠(SDS) (Biorad,欧洲大学协会),钠脱氧胆酸盐(Bio-Rad,欧洲大学协会),单碱的磷酸钠(Dinamica、巴西),磷酸二钠(Dinamica、巴西),甘油(Dinamica、巴西),脂多糖(LPS) (Sigma-Aldrich,欧洲大学协会),甲醇(Dinamica、巴西),罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)(由生活Gibco技术,欧洲大学协会),胎牛血清(的边后卫)(由生活Gibco技术,欧洲大学协会)、磺胺(Dinamica、巴西),Tris-HCl (Dinamica、巴西),特里同x - 100 (Sigma-Aldrich,欧洲大学协会)。
胎牛血清(的边后卫)和细胞培养基rpmi - 1640是从Gibco购买,美国。鼠小胶质细胞(BV-2细胞株)从细胞生物,获得巴西里约热内卢。Anti-TLR4和anti-TREM2从表达载体,卡尔斯巴德,CA,美国。Anti-p-P65 NF -κB, anti-p-NF -κB总anti-p-JNK anti-p-total物,anti-p-ERK1/2得到从细胞信号技术®,丹弗斯,美国马。Anti-ERK1/2总得到Abcam®、剑桥、并从Bio-Rad anti-mouse二级抗体得到实验室、钙、美国、或得到anti-rabbit Sigma-Aldrich,纽约,美国。
2.3。细胞培养条件
细胞被镀poly-L-lysine-coated 96 -或24-well板、密度 细胞/毫升或 细胞/毫升rpmi - 1640培养基,补充10%的边后卫在37°C下5%公司的氛围2。
2.4。MTT试验
BV-2细胞( 细胞/毫升)与不同浓度的EPI孵化(1、10、25、50和100μg / mL)、车辆/对照组(0.1% DMSO水),或Triton x - 100细胞毒性标准(0.01%)。24小时后,MTT溴盐(3 (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴)被添加到细胞悬液浓度为0.5毫克/毫升。90分钟的孵化后,板在800 g离心机,浮在表面的被丢弃。最后,150年μL(添加DMSO溶液的溶解代谢甲瓒盐。板是不断搅拌15分钟使用一个振动器,和吸光度测量在560海里(标25]。
2.5。乳酸脱氢酶活性
分析都使用了LDH工具包(Liquiform、米纳斯吉拉斯、巴西)根据制造商的指示。分析是基于测量样品的吸光度下降由于氧化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、LDH活性成正比。小胶质细胞BV-2 ( 细胞/毫升)在96孔板和镀后1小时孵化EPI稀释在DMSO 0.1%(1、10、25、50和100μg / mL)、车辆/对照组(0.1% DMSO),或Triton x - 100组细胞毒性标准(0.01%)。24小时后,LDH酶的底物被添加到细胞上清液。吸光度(340海里)测定在37°C。
2.6。没有测量
一氧化氮(NO)生产的亚硝酸盐浓度评估使用格里斯反应。小胶质细胞BV-2 ( 细胞/毫升)和EPI孵化(1、10、25、50和100μg / mL)或车辆/对照组(0.1% DMSO)一小时,其次是LPS刺激(0.5μg / mL)。接下来,100年μL H格里斯试剂(1%磺胺的1%3阿宝4/ 0.1% N - H (1-naphthyl)乙二胺盐酸盐/ 1%3阿宝4/蒸馏水,1:1:1:1)被添加到100μ细胞培养上清液的L。吸光度测量使用板读者在560海里。获得了亚硝酸盐浓度的吸光度值使用亚硝酸钠(1μM - 100μ米)的标准曲线(26]。
2.7。测定il - 1β、il - 6、TNF -α,il - 10水平
细胞因子的生产进行酶联免疫吸附试验(ELISA)。BV-2细胞( 细胞/毫升)用EPI预处理,25岁μg / mL,或车辆/对照组(0.1% DMSO)一小时37°C,其次是LPS刺激(0.5μg / mL)。24小时后,il - 1β,il - 6、il - 10和TNF -α测定细胞上清液中根据制造商的指示(BD Biosciences-San迭戈、钙、美国、和研发Systems-Minnesota, MN,美国)。光密度测定的吸光度使用标450海里。
2.8。免疫印迹分析
小胶质细胞( 细胞/毫升)和EPI 25孵化μg / mL或车辆/对照组(0.1% DMSO)一小时37°C,其次是LPS刺激(0.5μg / mL) 1 h或24 h。潜伏期后,细胞收获与冰冷的缓冲盐(PBS)和离心机在4°C, 130克5分钟。总细胞溶解产物得到使用radioimmunoprecipitation分析缓冲区(里帕缓冲区)补充蛋白酶抑制剂(美国纽约P2714, Sigma-Aldrich)和磷酸酶抑制剂(ab201112, Abcam®,剑桥,英国)。总溶解产物是通过离心10分钟4°C 12000克、颗粒是丢弃。蛋白质浓度测定采用BCA试剂盒(Bio-Rad实验室、CA、美国)。总蛋白(30μg)分离10% SDS-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Bio-Rad实验室、CA、美国)。非特异性结合位点被封锁nonfatty奶粉5%可溶性与渐变Tris-buffered生理盐水1 h在室温下为0.01%。一夜之间,膜被孵化在4°C以下主要特定抗体:anti-iNOS 1: 3000 (ab178945),反β肌动蛋白1:100 (ab8226)和anti-total-ERK1/2总1:1000(从Abcam ab36991);anti-TLR4 1: 500(482300年)和anti-TREM2 1: 500 (PA587933)从热科学;anti-phospho-NF -κB P65 1: 1000 (Ser536 # 3033年代),anti-total-NF -κB P65 1: 1000(# 6956年代),anti-phospho-JNK 1: 1000 (Thr183 / Tyr185, # 9255年代),anti-total-JNK 1: 2000(# 9252年代),和anti-phospho-ERK1/2 1: 1000 (Thr202 / Tyr204, # 9101年代)从细胞信号。接下来,膜与二次抗体anti-mouse TBS-tween清洗和孵化(# 170 - 6516,Bio-Rad)或anti-rabbit (SAB3700956 Sigma-Aldrich)(合1:3000)为2小时。蛋白表达是可视化使用免疫印迹清晰™发射极耦合逻辑(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)。化学发光免疫反应性的信号检测的照片资料员ChemiDocTM议员成像系统(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)。光密度是衡量图像实验室™5.1软件(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)。
2.9。统计分析
统计分析,GraphPad Prism 6.0版本项目(美国圣地亚哥GraphPad软件)使用。数据表示为 。数据正常使用Shapiro-Wilk测试分析。数据显示分析了正态分布的方差分析(单向或双向方差分析)其次是Bonferroni期末测验。差异被认为是重要的时候 。
3所示。结果
3.1。细胞生存能力不受EPI的影响
EPI的添加浓度增加(1、10、25、50和100μg / mL) BV-2细胞并不影响细胞的生存能力评估LDH酶活性( ;9.1 - 0.8; ; ,和 分别为U / L)相比,汽车集团(DMSO 0.1%: U / L)(图2(一个))。在肝癌和细胞生存能力的评估,EPI的添加浓度增加(1、10、25、50和100μg / mL) BV-2细胞悬液没有显著减少细胞生存能力(Abs 560海里: ; ; ; ; ,)相比,汽车集团(Abs 560海里: )(图2 (b))。这些结果表明,EPI并不影响小胶质细胞的生存能力和指导研究调查的延续这个生物碱的抗炎和免疫调节效应在BV-2细胞。
(一)
(b)
3.2。EPI减少一氧化氮/亚硝酸盐生产LPS-Stimulated BV-2细胞
小胶质细胞处理有限合伙人(0.5μg / mL)上层清液中表现出更高的亚硝酸盐浓度( μM)与对照组(0.1% DMSO溶液: μ米)(图3)。与LPS处理、添加EPI(25、50和100μg / mL)显著降低亚硝酸盐水平( ; ; μ分别为M)相比,只有LPS-treated集团( μ米)。低浓度的EPI(1和10μg / mL)无法降低亚硝酸盐水平( ; μ分别为M)引起LPS刺激。这个发现显示了一个潜在的EPI的抗炎作用,这可能与抑制细胞内途径如伊诺,NF -κB, MAPKs。
3.3。EPI减少诱导一氧化氮合酶的表达(间接宾语)和il - 1的生产β、il - 6和TNF -α在小胶质细胞与LPS刺激
小胶质细胞处理有限合伙人(0.5μg / mL)表现出增加一氧化氮合酶的表达。然而,细胞EPI的预处理(25μ(进气阀打开/ g / mL)β肌动蛋白带强度: )相比显著降低LPS组(伊诺/β肌动蛋白带强度: )(图4)。
根据获得的结果到目前为止,EPI的浓度选择进一步的研究是25μ克/毫升。细胞暴露于LPS显示il - 1增加两倍β浓度( pg / mL)。预处理和EPI显著降低il - 1β生产( pg / mL)与LPS组时,最终值类似如果BV-2细胞( pg / mL)(图5(一个))。EPI的加法(25μg / mL)细胞培养在有限合伙人也显著降低il - 6生产( pg / mL)显示40%的平均抑制LPS组相比, pg / mL)。同样,TNF -的增加α生产观察照射后细胞有限合伙人( pg / mL)部分逆转EPI ( pg / mL)相应减少约34%(见图5(一个)和5 (c))。这也是评估il - 10的EPI对生产的影响,抗炎细胞因子。细胞暴露于LPS减少约5倍il - 10的生产( pg / mL)时,如果相关BV-2细胞( pg / mL)和EPI ( pg / mL)不干涉的减少风险敞口有限合伙人(图后细胞因子水平5 (d))。综上所述,这些数据表明,EPI行为减少没有生产通过直接的行动在这个中介的生物合成。此外,这个生物碱的抗炎效应似乎有关减少促炎细胞因子的生产而不影响il - 10水平,抗炎细胞因子。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.4。EPI干扰TLR4 / NF -κB-MAPK信号通路
与LPS刺激小胶质细胞(0.5μg / mL) 1小时增长了大约两倍TLR4蛋白表达( )相比汽车集团( )。然而,用EPI预处理(25μg / mL),显著地降低了蛋白表达( )当与LPS组(图6(一))。EPI的加法(25μg / mL)的细胞抑制约40%的磷酸化p65 NF -亚基κB ( )相比,LPS组( )。也观察到类似的结果MAPK信号通路的激活。EPI预处理降低磷酸化物( )和ERK1/2 ( )相比LPS-treated组( 和 分别为物和ERK1/2)(数据6 (c)和6 (d))。这些数据表明,EPI的抗炎效果通过抑制TLR4 / NF -发生κB-MAPK (ERK和物)信号通路在BV-2小胶质细胞,影响炎症介质的产生。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.5。EPI并不影响对骨髓细胞触发受体表达的表达2 (TREM2)
的有限合伙人(0.5μg / mL) BV-2小胶质细胞悬液的蛋白表达显著降低抗炎TREM2标志( )相比汽车集团( )。然而,细胞治疗EPI 25μ克/毫升( )没能显著干扰受体表达LPS刺激后( )(见图7)。因此,这些数据表明,EPI的抗炎作用与调节效应在TREM2受体介导的抗炎机制。
4所示。讨论
本研究调查的抗炎效应epiisopiloturine (EPI),一个咪唑生物碱分离p . microphyllus在LPS-stimulated小胶质细胞。异常活化的小胶质细胞起着至关重要的作用在负责的开发和发展神经炎症进步的神经元在神经退行性疾病。生物碱EPI显示强力的抗炎活性降低LPS-induced促炎细胞因子(M1表型)机制与MAPK和NF -κB信号通路。
神经炎症是一种炎症过程限制在中枢神经系统(CNS)和周围神经系统(pn),高度参与一些中枢神经系统疾病,包括帕金森病、多发性硬化症、阿尔茨海默病(AD),以及最近神经性疼痛,由于生产的促炎介质(细胞因子和趋化因子)的神经胶质细胞(27- - - - - -29日]。产品的氧化应激等炎症介质导致这些疾病的发展和发展,如一氧化氮(NO)。
一氧化氮(NO)是一个多才多艺的中介与几个自我平衡的角色,主要在心血管和神经系统;然而,它也是由先天免疫细胞在炎症过程生产(30.,31日]。在中枢神经系统,没有生产与神经元的激活合成酶(nNOS)和内皮(以挪士),这是既定的脊髓的神经元中表达/大脑的血管和血管系统周围的运动神经元,分别。相比之下,诱导同种型(间接宾语)出现在星形胶质细胞和小胶质细胞是调节炎症反应(32]。因此,在中枢神经系统的炎症过程,研究表明,任何由进气阀打开导致神经细胞死亡的机制依赖于线粒体功能障碍,DNA损伤和释放谷氨酸顺向excitotoxic细胞死亡(33- - - - - -37]。在这里,我们表明,治疗小胶质细胞与EPI减少一氧化氮产量和进气阀打开表达式由有限合伙人。此外,这些效应与细胞毒性的影响没有关联EPI没有观察到变化的线粒体活动或细胞膜渗透率MTT测试和评估LDH酶活性,分别。这些数据表明,EPI减少生产代理直接在其生物合成和可能影响其他活性物种的形成的氮(RNS),如过氧亚硝基(ONOO -)。在高浓度时,ONOO -在中枢神经系统导致脂质过氧化,从而影响神经Ca2 +体内平衡,分子标记的广告。这些数据证实了先前的研究[38EPI)显示,减少生产伊诺表达式从大鼠肠道受到实验克罗恩氏病引起的三硝基苯磺酸(TNBS)。
促炎介质的生产(不,il - 1β肿瘤坏死因子-α和il - 6)的经典激活小胶质细胞(M1)是一种常见的过程中存在(39]。这种炎症的慢性表型概要(M1)会使neurorepairing小胶质概要(M2)负责恢复体内平衡大脑实质通过抗炎介质的生产如il - 10、il - 4, TGF -β,arginase-1 [40]。EPI的增加减少LPS-induced炎性细胞因子在小胶质细胞。更高的il - 1β观察照射后细胞水平有限合伙人被EPI逆转,也阻止了TNF -α生产过剩和il - 6。这些数据证实了之前的调查,EPI能够减少促炎细胞因子的生产在人类中性粒细胞(20.),从小鼠腹腔提交carrageenan-induced腹膜炎模型(22),肠道炎症实验TNBS-induced克罗恩氏病(38]。
考虑到有前景的结果,EPI的有效性在干扰TLR4受体表达的LPS诱导小胶质细胞研究。在先天免疫激活(toll样受体发挥重要作用16,17]。其为病原体相互作用的分子模式(pamp)包括有限合伙人和内源性分子(有关分子模式(抑制))导致促炎介质的表达(41]。有限合伙人是TLR4的强有力的激活,这是表示在一些免疫细胞,血管,和中枢神经系统。TLR4刺激诱发促炎涉及适配器分子级联激活,激活的NF -κB和MAPK通路和细胞因子的生产,包括il - 1β肿瘤坏死因子-α,il - 6。在中枢神经系统,激活TLR4与microglia-mediated神经毒性和ND治疗被认为是治疗42- - - - - -47]。EPI的诱导显著减少TLR4的表达,这就解释了生物碱的抗炎效果。因此,对于进一步的描述EPI的作用机制,评估其影响MAPK和NF -κB通路BV-2小胶质细胞。
NF -κB和MAPKs是重要的细胞内炎症反应的激活途径(48- - - - - -55),路径由TLR4强有力地激活。EPI治疗抑制p65 NF -的表达κB亚基与LPS刺激小胶质细胞。p50和p65二聚体的形成是最常见的NF -κB细胞存在于细胞质中的一种活动形式。LPS-induced NF -κB活化分子通过TLR4和适配器(MyD88和TRIF)导致我的磷酸化κB通过IKK复杂。在细胞核,NF -κB二聚体启动转录的许多不同的基因包括趋化因子、粘附分子,TNF -α,il - 6 (56]。因此,结果表明,EPI减少炎症介质的产生通过调节编码促炎基因的转录,如il - 1β,肿瘤坏死因子-α,和il - 6。我们的结果证实了之前的研究(20.),我们证明了这种生物碱还能抑制p65亚基的迁移fMLP细胞核在人类中性粒细胞刺激。此外,我们首次展示EPI的抗炎作用也依赖于其对MAPK激活抑制性影响,尤其是ERK 1/2和物。ERK和物信号通路控制几个细胞功能,和物也在激活转录因子,包括AP-1,激活转录因子2 (ATF-2) [57]。研究显示ERK 1/2和物的关键作用在中枢神经系统多种生理和病理过程。ERK抑制剂和物研究了作为药理工具治疗广告(58]。因此,这些激酶EPI的规定是一种很有前途的药物治疗的广告。
综上所述,我们的研究结果表明,EPI减少神经炎症反应在两个不同的礼仪:(1)减少TLR4表达和(2)干扰下游激酶(ERK 1/2和物和NF -κB通路(见图8)。
没有其他先前的研究提出这对这个生物碱分子的作用机制。尽管一些研究在文献中已经强调的能力其他生物碱抑制BV-2细胞相似的细胞内信号通路,如protopine获得延胡索延胡索(59)和isotalatizidine物种乌头carmichaeliiDebx [60在中药)。
TREM2 M2-activation表型是microglia-specific受体。的差别,对这些受体有助于TLR4-mediated MAPK信号通路和增加β在啮齿动物蛋白质的积累和神经炎症61年- - - - - -66年]。有趣的是,EPI无法扭转TREM2表达诱导的抑制LPS激活BV-2细胞。这些数据表明,EPI调节小胶质细胞的炎症反应作用于TLR4、不影响TREM2的表达(见图8)。
在炎症条件下,活化的小胶质细胞分泌各种趋化因子,导致白细胞游走,如中性粒细胞,从postcapillary小静脉迁移到大脑,穿越血脑屏障。激活中性粒细胞释放多种化学介质包括细胞因子、蛋白酶,ROS, RNS (67年,68年]。因此,EPI的能力调节小胶质和人类中性粒细胞的促炎的机制决定之前我们实验室20.EPI)使一个潜在的治疗工具,通过调节神经炎症疾病的治疗中心和外围先天免疫。
5。结论
本研究首次展示了咪唑生物碱的抗炎活动epiisopiloturine (EPI)p . mycrophyllus通过抑制小胶质细胞的LPS-induced炎症反应。机制这些影响与抑制TLR4表达和信号转导,干扰下游激酶(ERK1/2和物,以及NF -κB通路与顺向减少炎症介质生产(不,il - 1β、il - 6、TNF -α)。此外,没有观察到影响TREM2表达式和il - 10的生产。
缩写
| 广告: | 阿尔茨海默病 |
| AP-1: | 激活蛋白1 |
| BSA: | 牛血清白蛋白 |
| 中枢神经系统: | 中枢神经系统 |
| DMSO溶液: | 二甲亚砜 |
| 背景: | 脱氧核糖核酸 |
| 兵: | 细胞外signal-regulated激酶 |
| 以挪士: | 内皮细胞一氧化氮合酶 |
| EPI: | Epiisopiloturine |
| 的边后卫: | 胎牛血清 |
| FMLP: | N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine |
| 干扰素-γ: | 移行细胞 |
| IKK: | IkB激酶复杂 |
| IL: | 白介素 |
| 伊诺: | 诱导一氧化氮合酶 |
| 物: | c-Jun n端激酶 |
| LDH: | 乳酸脱氢酶 |
| 有限合伙人: | 脂多糖 |
| MAPKs: | 增殖蛋白激酶 |
| 麻省理工: | (3)- 4 5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyltetrazolium溴离子 |
| NADH: | 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 |
| 需要: | N -乙二胺盐酸盐(1-Naphthyl) |
| NF -κB: | 核factor-kappa B |
| 没有: | 一氧化氮 |
| ND: | 神经退行性疾病 |
| nNOS: | 神经元一氧化氮合酶 |
| pamp: | 其分子模式 |
| PBS: | 磷酸盐 |
| PRRs: | 模式识别受体 |
| 里帕: | Radioimmunoprecipitation分析缓冲 |
| PMA: | 佛波醇12-myristate-13-acetate |
| pn: | 周围神经系统 |
| RNS: | 活性氮物种 |
| ROS: | 活性氧 |
| SDS: | 十二烷基硫酸钠 |
| TLR4: | toll样受体4 |
| 肿瘤坏死因子-ɑ: | 肿瘤坏死因子-α |
| TGF -β: | 转化生长因子β |
| TNBS: | 三硝基苯磺酸 |
| TREM2: | 髓细胞2受体表达。 |
数据可用性
使用的实验数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作得到了巴西国家研究委员会(CNPq)研究奖学金(316948/2021-7)和改善高等教育的协调人员(披肩),西阿拉的国家研究基金会(FUNCAP)。作者感谢巴西Anidro Extracoes SA和Phytobios研究开发创新LTDA的收获Pilocarpus microphyllus和支持的提取、净化、epiisopiloturine和隔离。