文摘
干细胞的基本技术已经开发和创建瀑样,在再生医学建立了浓厚的兴趣。不同的细胞被用来生成脑瀑样,包括中间神经元和少突胶质细胞(OLs)。OLs是大脑发育的根本。丰富的研究显示,大脑瀑样可以概括人类大脑的基本和重要功能,如细胞的调节和分配,神经元网络电活动和生理结构。瀑样包含必要的腹侧脑域和功能皮层中间神经元,类似于发展中皮层和内侧神经节隆起(兆欧)。因此,大脑瀑样提供了一个单一的模型来研究和探讨神经紊乱机制和治疗。此外,血脑屏障(BBB)瀑样建模有助于加速治疗发现治疗一些神经病理学。在这次审查中,我们总结了大脑的进步瀑样应用调查神经紊乱机制如神经发育和神经退行性疾病,精神疾病,脑癌,脑病毒感染。我们讨论了大脑瀑样的治疗应用程序作为潜在的独特治疗方法和突出细节瀑样模型的挑战和障碍。
1。介绍
人类诱导多能干细胞(hiPSCs)和人类胚胎干细胞(为其快速和先进的进步,这对神经系统疾病的研究提供了新的见解和人类大脑的发展1]。创建了三维(3 d)瀑样通过干细胞的发展的基本技术,建立了一个强大的再生医学的兴趣。脑瀑样用于模拟人类大脑不同区域,复制特定的大脑结构,包括小脑(2),中脑(3,4),下丘脑(5),海马(6),和脑下垂体7]。3 d模型住长时间,可能超过25个月,(8)使它伟大而溢价模型探讨大脑发育和脑疾病机制(9- - - - - -13]。最近,尖端技术包括单细胞测序和基因编辑进步已经应用于3 d模型,为神经系统疾病建模产生了无与伦比的可能性。在本文中,我们强调大脑中的最新进展瀑样和他们的应用程序作为有前途的模型为研究大脑发育和脑疾病的机制。然后我们讨论大脑瀑样的治疗应用程序作为一个潜在的独特治疗方法。尽管大脑瀑样的巨大承诺的应用程序模型中,我们解释了当前重大挑战,障碍,和瀑样模型的局限性。此外,我们显示未来可行的和建设性的建议,将有助于发展医学研究。
2。专门的大脑瀑样
不同类型的细胞的发展技术已经被用来生成瀑样,包括中间神经元和少突胶质细胞(OLs) [14]。OLs是大脑发育的基础,包括电隔离神经轴突和髓鞘脉冲传播,以及代谢支持神经元和提供营养。然而,皮质单细胞测序的结果参考瀑样有缺陷少突细胞祖细胞(8,15]。一些研究暴露先进瀑样打败这些问题通过少突细胞生长因子在皮质球状体诱导髓鞘OLs和少突细胞祖细胞16]。有一个协议OLs的观察和加速成熟,瀑样9周后形成。促进和提高髓鞘形成,少突细胞生产和髓鞘形成缺陷疾病的表型使用promyelinating药物监测生产OLs通过OLIG2-green荧光蛋白(GFP)信号和创建前脑瀑样采用GFP干细胞记者一行(17]。还有另一个协议瀑样文化发展产生神经元,星形胶质细胞和OLs。协议使用研究髓鞘形成,OLs的发展,和主要细胞类型相互作用在中枢神经系统,它适用于一组生长因子和小分子(18]。中间神经元调节皮质网络过程中发挥核心作用。一些研究已经建立了瀑样概括人类内侧神经节隆起(兆欧)发展。这些瀑样包含必要的腹侧脑域,神经网络,和功能皮层中间神经元,这类似于发展中皮层和兆欧19]。小脑疾病基因的富集被调查在小脑瀑样截然不同的细胞群。证明人类小脑xeno-free瀑样作为一个独特的有价值的模式来洞察小脑发展及其相关疾病(20.]。
3所示。应用程序的大脑瀑样
大量研究显示,大脑瀑样可以概括人类大脑的基本和重要功能,如细胞的调节和分配,神经元网络电活动和生理结构。因此,大脑瀑样提供了一个单一的模型来研究和探讨神经紊乱机制(表1)。
4所示。神经退行性疾病
4.1。阿尔茨海默病
逐步恶化的物理功能,行为障碍,和认知能力下降是阿尔茨海默病(AD)的明显表现,这是最常见的神经退行性疾病。一些报道表明,创造了一个文化系统由淀粉样蛋白- 3 dβ前体蛋白(APP)和presenilin 1 (PSEN1)调节人类神经干细胞;显然,观察病理-淀粉样蛋白的聚合β和τ,表明3 d文化优势。(47,48]。有观察到自发的和持久的聚合的Ab神经瀑样来自家族唐氏综合症患者(时尚)。明显高pTau免疫反应性已显示在时尚瀑样的后期文化与对照组相比。τ磷酸化作用引起的病理变化和淀粉样蛋白b在时尚瀑样已经减少β和γ分泌酶的抑制剂49]。对神经退行性疾病治疗化合物筛选、大脑瀑样有许多特点和可能是有用的。最近的发现显示,可以直接建立新模式的广告通过感染疱疹病毒进入3 d类人脑组织,它可以模拟功能恶化的形成在AD病理过程中,神经炎症,神经胶质过多症,淀粉样斑块50]。
4.2。帕金森病
帕金森病(PD)是最常见的神经退行性疾病。黑质多巴胺能神经元损伤是帕金森病的主要特征;典型的运动症状包括步态和姿势障碍,静止震颤,肌肉僵硬,动作迟缓。目前,PD的动物和细胞模型模拟PD表型有一些限制,比如动物体内基因LRRK2基因突变的突变不能显示明显进步的证据路易体形成或中脑多巴胺神经元的损失(51,52]。瀑样中脑具体来自病人的零星的PD与LRRK2-G2019S突变由中脑多巴胺神经元(mDAN),体内基因LRRK2但瀑样mDAN较少的复杂性和数量与对照组相比,这是和谐与PD患者的表型(53]。杂合的LRRK2-G2019S点突变已插入hiPSC导致同基因的中脑瀑样(MOs)创建,使用CRISPR-Cas9技术[51]。研究结果,相应的标记包括DAT, VMAT2, AADC和表达被抑制,缩短了多巴胺能神经元的神经突长度变异莫(51]。除此之外,还有一些病理透析相关迹象中发现的金属氧化物半导体也异常的间隙等α-核蛋白和增加聚合。基因表达分析结果表明有许多相似之处一个PD患者的脑组织和突变体金属氧化物半导体。突变体,金属氧化物半导体,确切地说,是TXNIP过度,和TXNIP抑制可以抑制体内基因LRRK2 MOs引起的表型,所以也许LRRK2-related零星的PD与TXNIP相关性(51]。所有这些结果暴露有价值的进展和治疗PD病理生理学的见解。此外,有一个早期改变LIM同源框转录因子-α表达和后期改造酪氨酸羟化酶标记的MOs源自特发性帕金森病病人。在形式的PD特发性,许多相关FOXA2等关键基因已经被确定,LMX1A, PTX3,神经元标记基因(54]。最近,据报道,midbrain-like瀑样,新类型,已经被开发出来,它可以产生mDANs均匀和稳定的结构,神经胶质细胞和其他神经元亚型(55]。这些研究结果表明,金属氧化物半导体可能是惟一的熟悉和零星的PD模型。
4.3。Ataxia-Telangiectasia
Ataxia-telangiectasia (t)是一种遗传性疾病导致的缺乏功能性ATM激酶,特点是神经退化,神经缺陷,过早老化的特性,和慢性炎症56]。t的神经缺陷之间的关联关系和有害的炎性签名尚不清楚57]。从力学上看,需要cGAS-STING通路感应的senescence-associated分泌表型(SASP)和微核的识别大脑瀑样。此外,有证明注册会计师和斯汀抑制有效地抑制星形胶质细胞衰老和神经退化,抑制self-DNA-triggered SASP表达t大脑瀑样,和改善t大脑中的神经病理学瀑样(58]。
4.4。脑癌
成神经管细胞瘤(MB)是一种最积极的儿童恶性脑瘤,主要发生在小脑和高死亡率(59]。最激进的子群的MB是组3,原癌基因过度表达。报告表明,OTX2 /原癌基因是一种新的驱动基因通缉3 MB肿瘤发生在小脑瀑样3 MB。OTX2 /原癌基因在肿瘤发生瀑样已经被使用EZH2抑制剂治疗tazemetostat [60]。因此,瀑样的人类大脑可以有效的模型应用于调查角色和治疗神经胶质瘤患者的遗传机制。胶质母细胞瘤(GBM)占54%的神经胶质瘤和被认为是最恶性脑瘤61年]。有脑瀑样用于体外研究主要人类“绿带运动”模型。神经胶质瘤脑瀑样(格力高)模型已经获得coculture后神经胶质瘤干细胞与瀑样(gsc)。gsc cocultured瀑样显示深入渗透并转移到瀑样内区和在宿主组织迅速生成肿瘤密切相关(GBM患者的组织62年),这表明格力高模型表示的恶性“绿带运动”的特点。
5。神经发育障碍
5.1。自闭症谱系障碍
神经发育障碍的影响行为和交流是自闭症谱系障碍(ASD)是由各种致病因素,如环境因素、表观遗传修饰、基因突变。偏好对gaba ergic神经元分化已经证明在皮质瀑样来自ASD患者;然而,glutamatergic神经元没有改变,导致GABA-Glutamate神经元的不平衡,造成FOXG1表达式变更(63年]。multiomics调查iPSC-derived皮质瀑样却展现出了外遗传性和转录组模式类似于胎儿大脑的同系的组织,特别是在5到16周妊娠的64年]。此外,细胞类型的前脑瀑样是类似于胚胎前额叶皮层;RNA序列瀑样的转录概况与多个前脑结构相关性最高的胎儿脑组织BrainSpan转录组数据库(65年]。此外,受到49640活跃转录因子对于皮质神经元的规范(64年),和基因表达差异与Wnt / b-catenin有关信号通路(66年]。脑与RAB39B突变瀑样的体积大而控制和显示过度增殖和分化npc受损。AKT-mTOR-PI3K信号通路激活诱导了,差别RAB39B对这些基因和表型救援可以通过AKT-mTOR-PI3K信号抑制67年]。与金正日的报告结果一致的et al .,显示过量体积和增厚的皮层瀑样的CNTNAP2基因突变与总细胞数的增加,由于增加了神经发生和神经祖细胞(npc)扩散65年]。CHD8 ASD相关基因;它已经表明,CHD8调节其他基因与自闭症有关,如AUTS2和TCF4。CHD8变异大脑瀑样来自万能,ASD包括macrocephaly-autism障碍,和功能缺乏RAB39B突变导致癫痫,ASD,巨头[67年]。一些有趣的事实开始使用瀑样模型展开,如最近的一项研究显示,自闭症基因的表达,尤其是语言difficulty-related FOXP2基因过表达在一个自闭学者(68年]。
5.2。Lissencephaly
最严重的形式lissencephaly 1型是米勒Dieker综合症(MDS),特点是癫痫发作,脑容量减少,精神发育迟滞,颅面畸形(36]。脑瀑样来自MDS患者显示减少垂直分裂和细胞凋亡增加69年]。此外,观察到外放射状胶质细胞的拖延——(oRGCs)特定的胞质分裂,细胞自治,和缺陷的神经元径向迁移。这些结果显示oRGCs缺陷的参与有丝分裂的人类lissencephaly发病机理。心室放射状胶质细胞(vRGCs)瀑样的前脑源自MDS患者还显示从对称不对称细胞分裂(36]。此外,在MDS瀑样,有许多变化,已发现心室利基组织,包括收回的不规则的情况下细胞顶膜和vRGC组织拥有低密实度(36]。规范β连环蛋白/ N-cadherin途径可以治疗这些表型,这表明Wnt信号MDS中起着至关重要的作用。
5.3。唐氏综合症
唐氏综合症(DS)是一种遗传性疾病,是最常见的痴呆症的人< 50岁和学习困难是最常见的原因(70年]。把DS dementia-causing因素分为两类,神经退行性和神经发育障碍,抑制和兴奋性神经传递的不平衡主要是有助于DS认知缺陷。DS瀑样生产各种SSTC gaba ergic和CRC神经元和众多OLIG2C npc (71年]。有一些文化冲突的2 d和3 d指出;不同亚型的神经元可以生成3 d OLIG2C npc的文化,而2 d文化只能获得CRC神经元(71年]。这些结果表明,OLIG2 DS疗法可能是一个潜在的目标。广告的一些表型观察患者的DS。报告发现,瀑样来自家族广告(时尚)患者和DS患者自发展示τhyperphosphorylation淀粉样斑块沉积,在广告比时尚更重要(72年]。此外,延迟性痴呆的患者约30%的DS,潜在的机制可能是由于BACE2三倍(73年]。同样,T21-hiPSC瀑样所受早期广告淀粉样斑块病理BACE2三染色体的水平(74年]。这些发现表明,BACE2生理作用在抑制广告,可以治疗的目标广告。
5.4。新生儿低氧损伤
新生儿残疾和死亡的最常见原因是新生儿缺氧损伤(覆盖),幸存者通常患有认知障碍、癫痫、脑瘫(75年]。有氧气的影响,研究不同浓度的公司建立了大脑瀑样调查。这些结果显示表达式的遗传标记CLIP2 DCX1,迁移和FOXG1皮质神经元,神经胶质细胞,OLs、和前脑抑制缺氧,可以抑制使用二甲胺四环素。此外,使用二甲胺四环素减少细胞凋亡在大脑缺氧引起的瀑样76年]。
5.5。室周的异位
在哺乳动物大脑皮层演化过程是高度一致的,依赖于神经元的成熟,移民和精确的一代。室周的异位是一种最常见的畸形皮层进化和FAT4和DCHS1密切相关77年]。万能的构造,和脑瀑样用体细胞FAT4或DCHS1突变的病人。npc的形态学过程瀑样来自万能的健康人仔细体现,直接和安排。然而,过程神经元经常显示一个扭曲和破坏形态与FAT4瀑样基因敲除或突变78年]。
5.6。主要的头小畸型
最主要头小畸型的原因是遗传的,这是调节引起的纤毛常染色体隐性突变,如CENPJ CPAP, MCPH1, ASPM, CDK5RAP2, WDR62基因调节中心体大会(79年]。最近,已经生成了特定的大脑瀑样先天性头小畸型,WDR62, ASPM, CDK5RAP2, CPAP突变(15,79年,80年]。主要的头小畸型脑瀑样模型已经建立。截断的体细胞突变杂合的已经从CDK5RAP2万能干细胞重新编程。从万能的患者神经上皮组织的创建小与对照组相比,后转移到神经感应。大脑瀑样建立了包含许多神经元和几个放射状胶质细胞(该公司),表示CDK5RAP2的减少会导致过早的神经分化的祖细胞失去(81年]。CPAP突变会导致头小畸型和塞克尔梨的综合症。从Seckel综合症患者CPAP突变,大脑瀑样已经派生显示过早神经元分化和更小的尺寸82年]。此外,证明增加的长度和数量的纤毛Seckel瀑样与控制相比,表明纤毛击穿延迟(82年]。这些结果证实,CPAP负监管在纤毛长度和表明纤毛npc维护起着至关重要的作用。与WDR62 iPSCs-generated突变的瀑样表现出过早npc分化,减缓了纤毛延长和分解,减少增殖和细胞周期的进展。机制的研究表明,WDR62与CEP170并提高CEP170定位在初级纤毛矩阵,在CEP170分解纤毛通过微管解聚作用因素KIF2A激活(79年]。这些结果显示新的见解主要小头畸形发病机理。头小畸型瀑样ASPM基因突变显示可怜的纹理和几个vRGCs,神经上皮的组织和外部RGCs。已经注意到ASPM基因突变,瀑样减少电活动和成熟,证实了该模型的相关性和作用突变先天性精神发育迟滞患者(80年]。最近的一项研究已经关注的调查暴露microcephaly-related NARS1突变和whole-exome测序5000年>神经发育障碍的病人。大脑皮质瀑样,病人派生NARS1突变,创建,而结果显示抑制细胞周期和增殖RGCs和更小的尺寸38]。
5.7。进步的头小畸型
另一个头小畸形症是二级头小畸型,由感染引起,外部环境,以及其他因素。Zika病毒(ZIKV)感染是二级头小畸型的原因之一,已被广泛研究。绑定ZIKV粒子在细胞细胞膜和本地化的囊泡,线粒体导致抑制neurosphere形成和细胞死亡(83年]。一些研究已经开发出一种瀑样的前脑与ZIKV感染在不同怀孕阶段。腔的大小有显著增加心室结构的暴露后ZIKV瀑样在早期阶段(14天),同时显著降低(VZ区大小和厚度5]。这是非常相似的胎儿大脑的中央心室扩张感染ZIKV及其临床表型(84年]。
6。中枢神经系统感染性疾病
6.1。脑型疟疾
脑型疟疾是一种严重的临床表现,这与严重神经系统并发症(85年]。溶血是最疟疾的并发症之一,产生一个副产品称为血红素,提高万能自发分化和凋亡诱导大脑伤害有关生物标志物瀑样的变化,BDNF, CXCR3和CXCL-10表达增加,而ERBB4表达减少。此外,神经影响heme-treated瀑样被neuregulin 1所示(86年]。因此,大脑瀑样的模型可以用来研究溶血的影响胎儿大脑的进化。
6.2。病毒感染
大脑瀑样发展极其导致亲神经的病毒的研究推广和提供替代ZIKV感染模型的二维细胞培养和动物模型87年]。最近的一份报告显示大脑enoxacin瀑样暴露可以通过预防ZIKV感染避免microcephalic表型。这些发现揭示了RNAi-mediated抗病毒免疫生理意义在人类大脑的发展尤其是在早期阶段,发现新的策略来促进RNAi的阻力减少先天性人类病毒感染(34]。除此之外,已经调查ZIKV神经毒性研究其机制和可能的功效在GBM溶瘤细胞的病毒,“绿带运动”的发现皮质瀑样表明ZIKV gsc优先目标,显示有效的溶瘤细胞的影响。GBM瀑样应用在临床前研究中增加选择性肿瘤靶向和可能提供溶瘤病毒治疗积极影响(88年]。最近的报告显示的ACE2表达功能所需SARS-CoV-2感染已经证明了大脑瀑样。此外,大脑中的SARS-CoV-2感染瀑样显示之间的关系对于缺血性梗塞,显示区域更容易受病毒的入侵是缺血性梗塞区域(89年]。瀑样模型研究脉络丛(ChP)开发了最近,它概括ChP细胞的上皮分化探讨病毒SARS-CoV-2在中枢神经系统的各种细胞的趋向性。瀑样显示SARS-CoV-2而高效的热电联合感染的易感性,导致转录放松管制和细胞死亡易感性lipoprotein-producing细胞(90年]。流行性乙型脑炎(乙脑)感染仍然是一个具有挑战性的问题在世界各地造成不可逆的脑损伤(91年]。JEV感染瀑样的发展,针对oRGCs和星形胶质细胞受损和npc和诱导细胞死亡92年]。
7所示。精神障碍
精神分裂症是一种最严重的精神障碍与神经发育起源,分子神经病理学和复杂环境/遗传原因。有一个挑战的精神疾病表型观察啮齿动物由于结构和功能不同的大脑区域与人类相比(93年]。瀑样的前脑源自精神分裂症DISC1突变患者显示修改RGCs扩散。NDEL1和DISC1相关性起着至关重要的作用在人类神经干细胞维护前脑发展(94年]。WNT信号通路overactivation已经检测到的同基因的DISC1变异大脑瀑样。DISC1瀑样形态学检查显示一个受损的扩散和混合结构形态,可以治疗WNT对立(95年]。大脑瀑样来自精神分裂症则显示减少神经元增殖和发展和减少FGFR1在皮层细胞表达,共轭nFGFR信号损失。皮质增长逮捕可以生成类似于精神分裂症与FGFR1击倒对手PD173074控制瀑样。此外,这可以减少通过FGFR1激活大脑皮层神经元发育异常(96年]。最近的一项研究表明,精神分裂症的发现多个机制在大脑瀑样和这些不同的机制联系在原始大脑发育生长因子等途径支持,生存,和神经分化,整合促进精神分裂症的内在风险(97年]。
8。瀑样治疗应用
物种的差异可能表明使用动物进行治疗的发展,药物调查和疾病建模并不代表人类的生物反应。此外,传统的细胞培养2 d可能并不代表建模人类疾病。因此,使用瀑样模型探讨病理和监管的分子机制是一种很有前途的战略选择。瀑样与标准的治疗,化疗,显示如在实践中通过相对较低的反应。治疗瀑样显示一般治疗抵抗凋亡和抗增殖效果不同的生物机制的2 d文化(98年]。大脑瀑样的模型可以用来研究某些化合物对神经发育障碍,如ZIKV抗病毒药物。报告的研究调查了两种潜在的药物化合物,阿莫地喹盐酸盐,脱水和hippeastrine氢溴酸盐,可以防止感染ZIKV皮质npc和救援ZIKV-induced分化缺陷和增长的影响在人类fetal-like前脑瀑样(99年]。最近的一项研究表明,被植入大脑瀑样病变的创伤性脑损伤,分化成皮质神经元,产生长期预测和拯救赤字在记忆和学习;这将创建一个潜在的独特治疗方法治疗脑损伤(One hundred.]。体外血脑屏障(BBB)的模型研究是一个重要的挑战可以到达中枢神经系统的药物开发和BBB运输(101年]。创建了BBB瀑样代表成本有效,多才多艺,和准确,体外工具。BBB瀑样建模会加速治疗发现治疗一些神经病理学(102年]。脑瀑样模型可能在不久的将来能够模拟血流跨血脑屏障器官联系文化与肝脏文化,这将是一个质的转变在药理学和治疗在神经科学领域。此外,它将使我们有现实的治疗选择,实现有效的干细胞干预恢复或细胞替代治疗神经退行性疾病。
9。使用3 d模型的优点相比,二维模型脑调查
(一)有一些2 d的文化之间的冲突,和3 d指出;不同亚型的神经元可以生成3 d OLIG2C npc的文化,而2 d文化只能获得CRC神经元(b)大脑三维模型发展极其导致亲神经的病毒的研究推广和提供替代ZIKV感染模型的二维细胞培养和动物模型(c)脑3 d模型具有重要的功能相比,2 d古典文化,而3 d模型非常部分模拟生成神经退行性疾病的病理特征(d)2 d细胞培养可能并不代表建模人类疾病。因此,使用3 d模型探讨病理分子机制和监管是一个有前途的战略选择(e)治疗3 d模型显示一般治疗抵抗凋亡和抗增殖效果不同的生物机制的2 d模型
10。瀑样的挑战
推进高在过去十年中在文化、一代,用人类的大脑,被称为“脑瀑样”或“大脑瀑样”在实验室研究和调查。脑瀑样提供一个独特的模型来理解人类的大脑和老龄化进程的演变。脑瀑样到现在为止,已经应用于研究神经系统疾病机制,药物疗效等。研究人员理解一些问题域虽然脑瀑样拥有比2 d古典文化的重要特征。首先,大脑瀑样非常部分模拟生成神经退行性疾病的病理特征。其次,它仍然是一个巨大的挑战模仿人类大脑的复杂性在大脑发育和衰老,在时空模式,如不同细胞之间的交叉传播、成熟、结构、动态的细胞成分,等。第三,直到现在,大脑瀑样不模仿人体组织在典型环境中如身体;特别是,大脑肿瘤必须在一个特殊的免疫抑制微环境。第四,由于文化方法仍然不能满足需要,瀑样室可以有一些变化之一。这之间的数量和大小的变化patient-derived瀑样和控制绝对会影响结果。第五,瀑样中的功能血管生成是一个重要的挑战是没有实现;因此,这种瀑样技术应用程序将需要在未来功能性血管生成的可能性。 Sixth, to culture and generate cerebral organoids, it required multiple reagents and is technically challenging. Additionally, more challenging for healthy organoids to get if culture time increases. Seventh, there will be a need in the future to rediscuss some ethical issues concerning the use of reprogrammed human cells iPSC derived and the complex brain organoid generation that will smooth the way for decreasing dramatically animal use for experiments, especially in drug discovery investigations. Hence, technical advances and more research can decrease challenges and resolve these issues in the future. Furthermore, spatial profiling, single-cell transcriptomics, and therapeutics will be major fields for research in the soon future. Finally, the establishment of unified guidelines as a catalog for human organoids that include an atlas and cultural techniques for organoids could be a great and valuable help in improving and developing medical research.
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
所有作者列出了手稿的编写和审核。小东李和阿卜杜拉Shopit贡献同样这项工作。李x和a . Shopit负责研究概念、设计、绘图的手稿,文献搜索和审查。李x负责表设计。j .王被分配的重要修订手稿。李x和j·王被指控为数据提取。j .王、李x和a . Shopit负责重要的知识内容。