文摘
溃疡性结肠炎(UC)是一种多因素与发病率增加肠道疾病。最近,多效性的药物和精确的生物安全迫切需要。和厚朴酚(HKL)是中国传统医学的主要生物活性成分“Houpu”,几乎没有毒性作用和批准的抗炎、抗氧化剂、解痉等作用。本研究调查了治疗效果在葡聚糖硫酸酯钠HKL - (DSS)诱导实验性结肠炎。体内,C57BL / 6小鼠收到3% DSS七天生成加州大学,和HKL了整整五天,在预处理DSS-induced时期。体外,RAW264.7巨噬细胞被刺激与脂多糖(LPS)诱导炎症,和鼠标结肠上皮细胞(MCEC)处理HKL或用HKL预处理,然后用LPS-induced刺激巨噬细胞上清液研究势垒增强角色。HKL显著改善疾病活动指数(DAI),在DSS-induced结肠炎结肠长度、和组织病理学评分。的炎症介质白介素1β(il - 1β)、白介素6 (il - 6)、肿瘤坏死因子α(肿瘤坏死因子-α),诱导一氧化氮合酶(间接宾语),和cyclooxygenase-2 (COX2)减少,并紧密结合蛋白增加HKL-treated组的体内和体外。首先,HKL可以减轻实验加州大学通过抗炎、抗氧化和增强上皮屏障的角色。这些影响与过氧物酶体有关proliferator-activated受体γ(PPARγ)/核因子-κB (NF -κB) p65 sirtuin3 (SIRT3) /腺苷5 - - - - - -一磷酸(AMP)激活的蛋白激酶(AMPK)和核因子红细胞两个相关因子2 (NRF2) /血红素加氧酶1 (HO1)信号通路。总之,经过进一步的临床研究,HKL可能是一个有前途的治疗UC的药物。
1。介绍
溃疡性结肠炎是一种慢性炎性疾病复发局限于结肠的粘膜层(1]。加州大学的确切发病机理仍然未知;最广泛接受的观点,它是多因素的,包括免疫反应特异表达,改变肠道微生物群,遗传易感性和环境因素1- - - - - -3]。加州大学的全球负担继续增加,例如,在美国市场上,从50亿年的2020美元到2026年建立11 - 12美元(4]。加州大学的新药治疗近年来令人印象深刻。然而,没有一个是有效的在大多数患者中,更不用说biologic-experienced患者(5]。在一个全国性的研究在以色列,结肠切除术和类固醇依赖利率保持不变在UC患者(生物时代6]。的大部分主要nonresponders每个分子靶向代理可能是由于不同的主要细胞因子水平取决于病人疾病阶段和特征(7]。加州大学的病理学是非常复杂的。到目前为止,没有治疗,可能有一个治疗适合所有。所以,迫切需要低成本、副作用少,和多效性的药物来丰富目前的治疗方案。
HKL是一个简单的联苯neolignane木兰物种中发现(8]。其结构方案所示1。布朗是白色的细粉,芳香,辛辣的味道,略苦。这是溶于一般有机溶剂;很容易在苯、乙醚、氯仿、乙醇、等;和不溶于水9]。这是一个有效的生物活性化合物Houpu中医”。“根据中医经络理论,Houpu”返回到大肠子午线和被广泛用于治疗胃肠道疾病。现代调查证实,HKL抗炎(10),抗菌11,12),抗氧化剂(13- - - - - -15),抗痉挛(16,抗癌8,17- - - - - -19),抗血栓形成的(20.),抗抑郁药,抗焦虑药21),和其他操作22,23]。众所周知,合成药物有许多副作用,包括损害内分泌系统,免疫系统和胃肠道。对于众多HKL的药物福利没有明显的副作用,我们假设HKL可能对UC的治疗的影响。
在目前的研究中,我们调查了抗炎,抗氧化,增强肠道屏障的角色HKL UC治疗在体外和体内。负责其行动的机制也被探索。
2。材料和方法
2.1。动物模型和治疗
六到八周大的女性C57BL / 6小鼠重15 - 20克,购自山西省人民医院的实验动物中心(山西、中国动物许可证号码:SYXK(金),2019 - 0003年),保存在指定的无菌(SPF)条件在22日至23日°C标准12 h光/暗周期。所有的老鼠都免费的食物和水。四十小鼠随机分为四组( 每组)。对照组给予正常饮食;HKL组收到HKL(40毫克/公斤wt.纯度≥98%,原液,中国)溶解在橄榄油(原液,中国)通过口服填喂法(10 ul / g)从D1到D12;DSS组DSS (3% w / v, g / ml, 36-50 kDa, Yeasen,中国)通过饮用水D6-D12;DSS + HKL集团使用HKL 5天,然后收到3% DSS七天HKL填喂法一天一次。控制和DSS组收到橄榄油(10 ul / g)每天一次在实验期间填喂法。动物伦理委员会批准的所有动物山西医科大学第二医院的手续(批准号DW2022051)。
2.2。宏观分级和结肠炎的组织学分析
DSS-induced结肠炎的宏观分级是基于一个标准评分系统称为疾病活动指数(DAI) [24]。细节如表所示1。体重,粪便一致性和直肠出血每天实际上每个老鼠都被记录下来。所有小鼠麻醉和牺牲颈椎脱位24小时后药物治疗。他们的冒号被切除,及时测量长度。远端结肠组织固定在4%多聚甲醛溶液(Servicebio,中国),嵌入在石蜡(Solarbio,中国),切片,然后用苏木精和伊红染色(他)(中国Solarbio)光学显微镜观察(CKX53、奥林巴斯、日本)。根据前面的标准组织病理学评分测定(25表所示)2。
2.3。免疫组织化学
脱蜡石蜡包埋后结肠部分,柠檬酸(Solarbio,中国)是用于抗原修复。然后,片冲洗H为3%2O2(中国)Solarbio 25分钟在室温下阻断内源性过氧化物酶活性和孵化3%牛血清白蛋白(Solarbio,中国)30分钟阻止非特异性结合。其次是设置与第一抗体(美国Proteintech)在湿盒4°C一夜之间,与相应的二次孵化的部分抗体:anti-rabbit免疫球蛋白抗体结合辣根过氧化物酶(1:200)(美国Proteintech)。然后,刚做好的diaminobenzidine (DAB)(中国Solarbio)显色溶液滴在染色的切片。在显微镜下着色时间控制(CKX53、奥林巴斯、日本),用自来水清洗停止。对比染色进行使用他(Solarbio,中国),密封的部分合成树脂(Servicebio,中国)。最后,我们进行显微镜检查和布朗所示的积极的结果。
2.4。细胞培养
RAW264.7巨噬细胞,从希伯来文名字文化收藏、购买和MCEC从Bluefbio购买,都是在杜尔贝科的修改鹰培养基培养(DMEM)(澳大利亚Gibco)含10%胎牛血清的边后卫(Gibco、澳大利亚),维持在37°C调湿室(HF100,治愈力量,中国)5%的股份有限公司2。细胞被播种到10厘米板和亚文化每2 - 3天当细胞融合了90%。为进一步实验,细胞被播种在6-well板和对待HKL或有限合伙人(Solarbio,中国)当RAW264.7细胞融合和MCEC 100% 80%融合,分别。
2.5。细胞生存能力分析
RAW264.7细胞或MCEC被播种到96孔板(鸟巢、中国)(103-10年4细胞/)和处理各种浓度的HKL 24 h。然后,10 ul的细胞计数Kit-8 (CCK-8)(博士德,中国)被添加到每个反应;15 - 30分钟后,标仪(美国BioTek时代)是用来测量每个在450 nm的OD值。细胞生存能力计算以下制造商的指示。
2.6。Transepithelial电阻(te)
MCEC被暂停和播种密度的105细胞/好吧,0.5毫升悬挂了参议院的Transwell板(12毫米直径插入和0.4微米孔隙大小)(美国康宁合演)和1.5毫升的培养基添加到众议院,3 - 4天形成细胞单层培养。同等体积的培养基代替D-Hank的解决方案(博士德,中国)和孵化为20分钟37°C。然后,电阻值通过使用一个上皮电压表(EVOM收购2美国WPI)和插入两个氯化银电极两侧的Transwell膜。每隔一天测量电阻的值。值稳定时,LPS组增加了上层的12 h-lps-induced RAW264.7巨噬细胞;HKL组添加HKL 14 h (40 uM);HKL + LPS组添加HKL (40 uM) 2 h,然后添加12上层清液h-lps-induced RAW264.7细胞12 h,分别下议院。如图所示的细节1 (e)。之后,每组的电阻值测量如上所述。te的计算公式如下: (是测试的电阻值是空白的电阻值和表面吗 厘米2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
2.7。细胞免疫荧光
当相应的条件对细胞,他们用37°C 1 x PBS (Meilunbio,中国)两次,然后用4%多聚甲醛固定(Servicebio,中国)10分钟,和洗了三次1 x PBS。然后,孵化0.1% Triton x - 100(微型生物,中国)15分钟,洗了三次1 x PBS。他们封锁了5%的牛血清白蛋白(Solarbio,中国)在室温下一个小时。然后,细胞主要抗体孵育NF -κB p65(美国Proteintech), NRF2(美国Proteintech) ZO1(美国Proteintech) occludin(美国Proteintech)和Claudin1(美国Proteintech)稀释1:500一夜之间在4°C和洗冷PBS足够三次。然后二次抗体的细胞被孵化(美国ABclonal)(1: 500)在室温下一小时三次洗和PBS。随后,细胞被沾染了4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)(中国Solarbio) 5分钟。图片是使用尼康Ni-U直立荧光显微镜。
2.8。免疫印迹分析
蛋白质提取使用里帕从结肠组织匀浆和细胞裂解缓冲(Solarbio,中国)含1% phenylmethyl磺酰氟(Solarbio,中国)和1%的蛋白质磷酸酶抑制剂(Solarbio,中国),离心法在4°C 12000 g 15分钟(离心机5430 r,埃普多夫,德国),并收集悬浮液体。蛋白质浓度测定用bicinchoninic酸工具包(美国热费希尔)。等量的蛋白质提取样本(40 - 50μg)是由10%或12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -)和转移到一个聚乙二烯二氟化物(PVDF)膜(Immobilon-P平方、微孔、爱尔兰)。挡住了PVDF膜后5%脱脂牛奶(Solarbio,中国)一小时在室温下,用Tris-buffered盐水洗净渐变(TBST)解决方案两次,细胞膜与主要的抗体(NF -孵化κB p65(美国Proteintech), NRF2(美国Proteintech) HO1(美国Proteintech) phosphorylation-AMPKα(Thr172)(细胞信号,美国),AMPK(美国Proteintech), SIRT3(美国Proteintech), COX2(美国Proteintech),伊诺(美国Proteintech) ZO1(美国Proteintech) occludin(美国Proteintech) Claudin1(美国Proteintech)和GAPDH(美国Proteintech)(稀释1:1000))在一夜之间在4°C和洗TBST三次,接着是孵化HRP-conjugated anti-mouse或anti-rabbit二级抗体(美国ABclonal)(稀释1:2000)在室温下一小时和冲洗三次TBST缓冲区。最后,蛋白质乐队是一个增强化学发光反应的解决方案(博士德,中国)和检测使用Bio-Rad图像实验室系统(美国Bio-Rad ChemiDoc XRS +)。乐队的强度是量化使用ImageJ软件,和GAPDH规范化的结果相对蛋白质表达水平。
2.9。实时定量聚合酶链反应(存在)
从结肠组织匀浆中提取总RNA,并使用RNAiso RAW264.7细胞或MCEC +(豆类、日本)和他们的浓度测定。白介素il - 1的引物序列β、il - 6、TNF -α、ZO1 occludin, Claudin1如表所示3。1μg RNA reverse-transcribed成互补DNA使用商业rt - pcr试剂盒(豆类、日本)。rt - PCR分析进行使用2 x M5 HiPer SYBR绿色qPCR SuperMix (Mei5生物技术,中国)CFX96实时PCR检测系统(美国Bio-Rad只连接)。分析了每个样本一式三份。目标mRNA的表达水平正常化β肌动蛋白和计算2- - - - - -ΔΔct方法。
2.10。统计分析
所有的数据显示为 。GraphPad棱镜的统计分析软件8.0版本。组之间的差异的重要性分析了单向方差分析其次是图基的多个范围测试。 被认为是具有统计学意义。对于每一个在这项研究中,结果等于或大于三个生物学重复进行。
3所示。结果
3.1。戴HKL改善并在DSS-Induced结肠炎小鼠结肠长度
DSS-induced实验性结肠炎是经典的溃疡性结肠炎动物模型的类似症状和组织病理学特征。在这项研究中,HKL治疗组疾病活动指数较低,由减肥,凳子的性格,和粪便隐血,相比之下,DSS组(图2 (c))。在这些指标中,体重变化是一个可量化的视觉指示器状态的老鼠。如图所示,模型组小鼠的体重明显降低的第五天当他们收到特殊的水含有3% DSS。相比之下,HKL预防组显示减轻体重下降(图2 (b))。结肠长度的缩短了DSS-induced结肠炎的严重程度。HKL + DSS小组展示了衰减程度的这种趋势与DSS组(图2(一个))。
(一)
(b)
(c)
3.2。HKL治疗减少炎症介质DSS-Induced老鼠
存在结果表明,il - 1的水平β(图3(一个)),il - 6(图3 (b))、肿瘤坏死因子-α(图3 (c)),进气阀打开(图3 (d)),和COX2(图3 (e))显著增加在结肠组织匀浆的DSS组与对照组相比。相比之下,上述炎症介质的水平显著降低HKL治疗组与DSS组。这些数据表明,HKL体内发挥了抗炎作用。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.3。HKL治疗提高了DSS-Induced老鼠的组织病理学特征
的组织病理学特征HE-stained部分显示明显的炎性细胞浸润,隐窝,隐窝脓肿的形成,粘膜层的破坏,增厚的肌肉层DSS组。相比之下,DSS + HKL组显示,减轻病理损伤的上述特性(图4(一))。这也是衡量组织学评分显示更直观地(图4 (b))。HKL可以减轻实验性结肠炎的组织病理学损伤从这项研究中,也是临床治疗的黄金标准。
(一)
(b)
3.4。HKL DSS-Induced老鼠的屏障功能的改善
(图的基因水平5(一个)(图)和蛋白水平5 (b))ZO1、occludin Claudin1急剧增加的DSS + HKL组与DSS组。此外,结肠组织免疫组织化学显示MUC2的表达,MUC3,和三叶草因素3 (TFF3)减少DSS-induced老鼠;然而,HKL治疗改善上述蛋白质(图的水平5 (c))。这些结果表明,HKL改善屏障功能DSS-induced结肠炎部分通过恢复紧密连接蛋白,黏蛋白,TFF3的水平。
(一)
(b)
(c)
3.5。HKL LPS-Stimulated巨噬细胞抑制促炎细胞因子的表达
细胞生存能力分析表明,对RAW264.7细胞,HKL并不影响细胞生存能力10μM;MCEC,浓度是40μ米无显著差异(图6(一));结合之前的研究(22),10μM和40μM浓度选择RAW264.7细胞和MCEC,分别为后续实验。存在分析表明,促炎细胞因子,包括il - 1、il - 6和TNF -α,显著增加6 h-lps-induced RAW264.7细胞(图6 (b))和免疫印迹分析表明,伊诺和COX2的表达也显著增加12 h-lps-induced RAW264.7细胞(图6 (c))。相比之下,有限合伙人+ HKL组显示,基因和蛋白质表达水平降低的上述炎症介质。总的来说,这些数据表明,HKL体外抑制炎症反应的影响。
(一)
(b)
(c)
3.6。在MCEC HKL保持正常上皮屏障
调查的保护作用HKL肠上皮屏障体外,MCEC被刺激的上层清液12 h-lps-induced RAW264.7细胞。中存在的数据表明,相比之下,LPS-stimulated上层清液集团的HKL ZO1预防组平均水平和occludin mRNA表达(图1(一))。免疫荧光也用来显示更直观地ZO1, occludin, Claudin1蛋白质表达水平的MCEC细胞刺激相同的条件(图1 (b))。此外,免疫印迹分析显示,ZO1 occludin, Claudin1蛋白表达显著增加HKL治疗与对照组相比。然而,最优效应发生在不同的时间点不同的蛋白质(图1 (c))。
Transwell板也用来观察t形变化。上层清液的数据显示,12 h-lps-induced RAW264.7细胞显著减少的阻力值MCEC单层,而预处理HKL显著地抑制这种减少效应(图1 (d))。
最重要的是,这些数据表明,HKL施加一个加强和MCEC肠上皮屏障的修复作用。
3.7。HKL监管DSS-Induced PPAR的激活γ/ NF -κB信号在老鼠身上
众所周知,NF -κB是一个至关重要的核转录因子,调节炎症反应。所以,p65 HKL的磷酸化水平的影响在结肠组织匀浆使用免疫印迹分析。与对照组相比,DSS治疗组p65磷酸化水平升高引起的。DSS + HKL组显示明显减少了p65蛋白的磷酸化。关于PPARγ信号通路对NF -至关重要κB激活(26),HKL已被证明是一个PPARγ受体激动剂(27]。PPAR的表达γ进一步调查。如图所示在这项研究中,PPARγDSS的结肠组织组显著降低,而HKL治疗可以恢复这一趋势。此外,HKL就可以刺激PPAR的表达γ(图7)。
3.8。HKL在PPAR的影响γ/ NF -κB p65, SIRT3 / AMPK, NRF2 / HO1信号通路在体外
类似于体内发现,HKL治疗显著降低了p65磷酸化水平的提升和规范化PPAR的水平γ(图8(一个))。进一步探索底层机制的上皮屏障钢筋HKL的角色,SIRT3 / AMPK和NRF2 / HO1信号通路。在目前的研究中,所示的磷酸化水平在Thr172 AMPK, SIRT3, NRF2,和HO1表达是在不同的时间点MCEC显著增加,由HKL治疗(图8 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
Immunofluorescent染色也被用于调查的核易位p65 NRF2。当RAW264.7巨噬细胞融合增长到80%,使用10μM HKL一小时,然后与LPS刺激(1μg / ml)为6个小时,图像显示,有限合伙人阻塞NRF2的核转位,而HKL补偿这种影响(图8 (c))。相比之下,有限合伙人大大刺激了NF -核易位κB p65, HKL抑制这一过程(图8 (d))。
4所示。讨论
如今,加州大学一直被视为一个多局限于粘膜表面疾病,其中包括近端扩展的风险,直肠顺应性降低,增加肿瘤的风险,应对医疗治疗的可能性降低,黏膜下层纤维化,改变了运动性,重叠功能性症状影响肌间神经丛,甚至增加心血管发病率的风险(28]。加州大学的深入了解,急需新的个性化的治疗。目前,histo-endoscopic缓解粘膜愈合的可能是一个完整的定义,这是一种理想的治疗目标在加州大学(29日]。HKL显示显著影响临床表现和组织病理学恢复DSS-induced加州大学的研究。此外,化学诱导模型模拟人类的一些关键的免疫和炎症性肠病的组织病理学特征。急性模型的优点是类似的屏障功能,改变先天免疫效果,耀斑(24]。所以,目前的结果提供了一个潜在的治疗策略加州大学临床设置。然而,进一步的调查关于HKL UC的慢性模型应该进行。以前,HKL已被证明影响干细胞生存能力抑制结肠肿瘤发生通过抑制致癌YAP1函数(30.]。在这个研究中,一个急性中耳炎/ DSS-induced colitis-associated癌症模型使用。
无论加州大学的不清楚病因,症状是极限中断,所以恢复肠道屏障功能是主要的治疗目标,这可以通过促进炎症的决议和加速黏膜修复(2,31日]。因此,抗炎和肠粘膜修复的角色HKL被观察到在这个研究。在抗炎方面,炎症介质,如伊诺和COX2和炎症基因,如il - 1β、il - 6和TNF -α,增加LPS-treated RAW264.7巨噬细胞,而有限合伙人+ HKL集团降低了水平。类似的效果也被观察到在DSS和DSS + HKL体内组。抗炎作用可能通过PPAR工作γ/ NF -κB信号通路。的过氧物酶体proliferator-activated受体γ(PPARγ)是一个冒号的核受体高表达。它已被建议作为一个重要的抑制剂结肠炎的核因子-衰减κB (NF -κ(B)活动26,32]。许多研究对自然代理,如PPARγ受体激动剂,可以保护小鼠免受DSS-induced加州大学通过其抗炎作用[33- - - - - -37]。PPAR的激活γ响应元素(PPRE)在核是PPAR之间基于异质二聚体形成γ类维生素a X受体(RXR)。所以,代理对PPAR协同作用γ/ RXR异质二聚体可能比纯PPAR的效果更佳γ受体激动剂。有趣的是,HKL,除了PPAR的激活γ,也可以作为RXR受体激动剂(38这个条件),巧合的会议。
除了炎症,绝大ROS生成和有缺陷的抗氧化剂防御为IBD的发展作出贡献。氧化应激是现在被视为一个致病性和启动的关键因素,发展,和炎症性肠病的严重程度,而不是在肠道粘膜慢性炎症的结果39]。NRF2是逆境应答的转录因子与细胞内稳态,推测对UC的保护作用通过调节氧化应激反应和抑制炎症40- - - - - -42]。稳态平衡时中断,NRF2把原子核和激活不同的表达基因,其中一个是抗氧化酶:HO-1 [43]。我们的研究结果显示,MCEC NRF2 / HO-1表达式的激活和易位NRF2 RAW264.7巨噬细胞的细胞质核被HKL时,表明HKL的抗氧化作用。如前所述,AMPK和NRF2轴之间的相声,NRF2的上游,AMPK的作品(44- - - - - -46]。的激活AMPK可能能量稳态的维护和氧化间隙的角色。
AMPK是一个至关重要的细胞能量传感器(47]。AMPK能促进自噬是一个过程,维护肠道屏障功能通过调节紧密连接蛋白(48]。此外,AMPK已被证实加强肠道屏障功能和通过促进上皮分化尾型同源框2 (CDX2)表达式49]。先前的研究表明,线粒体脱乙酰酶SIRT3激活AMPK加强macroautophagy, chaperon-mediated自噬保护肝细胞免受lipotoxicity [50];SIRT3 HKL以来明显激活,SIRT3和之间的相互作用的潜在机制AMPK在肠上皮屏障增强可以进一步调查。除了其在肠道屏障的角色维护,AMPK活化剂可以减少巨噬细胞炎症通过多种信号通路,如AMPK / MAPK [51),AMPK SIRT1 / NF -κB (52],AMPK / NRF2 HO-1 [44),这表明HKL作为抗炎剂通过进一步调查的AMPK激活。最重要的是,调节紧密连接蛋白的水平MCEC单层时被HKL和冒号的DSS + HKL-treated老鼠相比DSS-induced科目可以通过AMPK行动/ NRF2 HO-1抗氧化途径和SIRT3 /能源调控AMPK途径。应该进一步研究这些通路之间的串音。
除了新药,先进colon-targeting交付系统,它利用多个特征的结肠环境和发挥他们的行动并行实现更加健壮和可靠的特有的药,也可以用来获得更好的治疗效果(53]。这个系统可以用来实现目标交付HKL结肠病灶区在未来更好的溃疡性结肠炎的治疗作用。
5。结论
总之,目前的研究表明,HKL可以缓解DSS-induced结肠炎通过减少炎症,抑制氧化应激,加强肠道屏障的完整性。底层信号通路可能涉及PPARγ/ NF -κB, NRF2 / HO-1, SIRT3 / AMPK(图9)。明显的缓解效应表明,HKL是一种很有前途的治疗溃疡性结肠炎的预防策略。
缩写
| 加州大学: | 溃疡性结肠炎 |
| HKL: | 和厚朴酚 |
| 决策支持系统: | 葡聚糖硫酸酯钠 |
| 有限合伙人: | 脂多糖 |
| MCEC: | 上皮细胞 |
| 戴: | 疾病活动指数 |
| il - 1β: | 白介素1β |
| il - 6: | 白介素- 6 |
| 肿瘤坏死因子-α: | 肿瘤坏死因子α |
| 伊诺: | 诱导一氧化氮合酶 |
| COX2: | Cyclooxygenase-2 |
| PPARγ: | 过氧物酶体proliferator-activated受体γ |
| NF -κB: | 核因子-κB |
| SIRT3: | Sirtuin3 |
| AMPK: | 腺苷5 - - - - - -monophosphate-activated蛋白激酶 |
| NRF2: | 核转录因子2红细胞两个相关因素 |
| HO1: | 血红素加氧酶1 |
| 防晒系数: | 指定的病原体免费 |
| 他: | 苏木精和伊红 |
| 轻拍: | Diaminobenzidine |
| DMEM: | 杜尔贝科鹰介质的修改 |
| 的边后卫: | 胎牛血清 |
| CCK-8: | 细胞计数Kit-8 |
| te: | Transepithelial电阻 |
| DAPI: | 4 ,6-Diamidino-2-phenylindole |
| SDS: | 十二烷基硫酸钠 |
| PVDF: | 聚乙二烯二氟化物 |
| TBST: | Tris-buffered盐水渐变 |
| 存在: | 实时定量聚合酶链反应 |
| TFF3: | 三叶草因素3 |
| PPRE: | PPARγ响应的元素 |
| RXR: | 类维生素a X受体 |
| CDX2: | 尾型同源框2。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现都包含在这篇文章中,所有的数据是可用的。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突的存在。
作者的贡献
王陆进行实验,分析数据,并写了初稿。耿军王完成了审查和修改了手稿。所有作者已阅读及同意发布版本的手稿。
确认
我们感谢山西省人民医院的实验动物中心提供繁殖实验动物。本研究由四批山西省科技创新计划的基础(批准号2021 xm03)和山西省重点实验室医学科学和技术。