文摘
香烟——(CS)诱导氧化应激和炎症肺的严重的健康问题。小学和再加工茶产品含有多种抗氧化剂,已报告对CS-induced保护肺损伤。然而,的有利影响Eurotium cristatum发酵松茶(ECT)和黑暗Eurotium cristatum粒子代谢物(ECP) CS-induced肺损伤及其潜在的肝代谢解毒仍不清楚。因此,六十小鼠随机分为六组。CS-exposed老鼠预防或治疗项目或等注入12 8周,确定抗氧化压力,抗炎和潜在的代谢解毒等项目。36个小鼠随机分为六组观察影响肝脏代谢解毒代替日常饮用水等。结果表明,CS显著减少谷胱甘肽过氧化物酶的活动(氧化酶)和超氧化物歧化酶(SOD)和调节的丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、白细胞介素- 6 (il - 6)、引发和il - 1β血清中。这些不利影响被ECP和调制等。此外,等调节的mRNA表达孕烷X受体(PXR)和细胞色素P450 (CYP450)在肝脏每日免费饮酒等老鼠组。免疫印迹分析进一步表明CS-exposed老鼠,ECP和等显著降低增殖的磷酸化蛋白激酶(MAPK)在肺,但调节蛋白的表达PXR和芳基碳氢化合物受体(AhR)在肝脏。总体而言,我们的研究结果表明,ECT和ECP保护对CS通过MAPK途径导致的肺损伤和增强肝代谢解毒通过PXR和AhR通路。因此,每日摄入ECT和ECP可以防止CS-induced氧化和炎症损伤。
1。介绍
香烟(CS)含有超过6000种化学物质,和40是致癌的1]。暴露在CS触发增加巨大的自由基和活性氧(ROS)的生产。结合,他们诱导氧化应激损害和脂质过氧化,破坏氧化/抗氧化系统(2,3]。在人类中,自由基的抗氧化系统调节积累,调节氧化损害。CS接触破坏抗氧化催化过程的超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(氧化酶)。同时,CS增加丙二醛(MDA)的表达,这是一个产品的脂质过氧化损害肺(4]。此外,氧化应激促进肺部炎症(5]。此外,从最初的神秘外源氧化应激炎症反应是内源性活性氧的次要来源。整体活性氧诱导肺损伤的恶性循环(6]。吸烟引起损害赔偿以外的器官肝脏等直接接触CS。CS包含有毒化学物质,增加氧化应激,坏死性炎症和肝纤维化7]。此外,吸烟还会破坏重要的表达异型生物质孕烷X受体(PXR配体依赖性转录因子)和芳基碳氢化合物受体(AhR)在肝脏。这反过来压制的表达细胞色素P450 (CYP450),这不利影响药物在肝脏的代谢和解毒(8,9]。这些研究强调的整体抗氧化剂在预防和逆转扮演角色CS-induced肺和肝脏损伤。与此同时,茶已被广泛证明是一个优秀的天然抗氧化剂(10]。Eurotium cristatum发酵松散黑暗茶(ECT)是一个潜在的优秀的抗氧化剂,归功于茶和真菌之间的交互。
等是一种主要的暗发酵茶(PDT)Eurotium cristatum压力和“黄金植物覆盖着。“类似于福砖茶(炉膛温度,砖型Eurotium cristatum黑暗发酵茶)等是一个日常的饮料和营养补充经常消费在中国的边境和南部地区。以前的研究已经表明黑茶降低体内血脂水平(11和参与各类典型12,抗氧化4,抗炎13),和解毒14)的过程。进一步,FBT水提物抑制增殖作用的蛋白激酶(MAPK)和核factor-erythroid两个相关因子2 (Nrf2)细胞内信号通路,从而减少氧化应激水平(4]。等含有儿茶素、生物碱、没食子酸(GA),并与大量的覆盖Eurotium cristatum粒子代谢物(ECP)。研究表明,儿茶素抑制氧化应激,脂质过氧化作用,促炎介质的表达(15]。咖啡因(CAF)中含量最丰富的生物碱茶。具有抗氧化性能和防止肺损害通过调制肺部炎症(16]。值得注意的是,遗传算法能抑制氧化应激和炎症(17]。一些研究报告,nonfungi-fermented茶包括绿茶和红茶调节氧化应激和接触不良引起的炎症反应CS (18,19]。然而,茶如何执行这些功能,单独或结合ECP,仍有待验证。
因此本研究调查等的改善效果和ECP CS-induced氧化应激和炎症通过MAPK通路和肝代谢解毒PXR/AhR在老鼠身上通路。这些发现提供了一个理论依据抗氧化作用,抗炎,代谢排毒能力等项目。
2。材料和方法
2.1。动物
九十六(实验1, ;实验2, ,还是防晒系数分别),女性C57BL / 6实验小鼠从长沙松弛Jingda购买实验动物有限公司有限公司(湖南长沙,中国)。他们饲养12/12小时的光明与黑暗交替周期。室温保持在 ,在40 - 70%的相对湿度。在整个实验周期提供了充足的食物和水。实验的协议是湖南农业大学动物实验委员会批准。在实验之前,有一周的适应期的提要。
2.2。化学药品和试剂
生PDT树叶、炉膛温度和华胡安茶(HJT)从Baishaxi购买工厂有限公司有限公司(湖南益阳,中国)。的Eurotium cristatum菌株被分离Baishaxi砖茶使用直接分离技术。Tea-lyophilized粉是湖南农业大学准备的。香烟是购自湖南中国烟草工业有限公司有限公司(湖南长沙,中国)。真空膜片泵从龟购买,KVP15-KL-1(上海,中国)。分析工具氧化酶、SOD和MDA是购自南京建成生物工程研究所(南京、江苏、中国)。ELISA试剂盒对肿瘤坏死因子-α(TNF -分析α)、白细胞介素- 6 (il - 6)、引发和il - 1β从武汉Hualianke购买生物技术有限公司(武汉、湖北,中国)。抗体p-p38(4511年代),p38(8690年代),p-Jun n端激酶(p-JNK(9251年代))、物(9252年代),p-extracellular-regulated激酶(p-ERK(4370年代))和ERK(4695年代)从细胞信号技术,购买公司(美国马丹弗斯)。单克隆抗体PXR(ab192579),AhR(ab84833)和GAPDH (ab181602)从Abcam购买(英国剑桥)。所有其他化学药品和试剂在分析级。
2.3。实验1。等提高潜在的代谢解毒调制PXR和CYP450小鼠肝脏
评估潜在的肝代谢解毒的黑暗茶,36健康小鼠被随机分为6组( ,每组):(1)控制,(2)儿茶素(EGCG), (3) PDT,炉膛温度(4),(5)HJT,(6)等。值得注意的是,EGCG的解决方案(80毫克/公斤)和暗茶输液(800毫克/公斤)被用来代替日常饮水喂养8周期间。黑茶注入准备使用冷冻干燥粉的PDT,炉膛温度,HJT,等,和无菌水。相对mRNA的表达PXR- - -CYP450有关的基因(CYP1A2 CYP2B1、CYP2C6 CYP3A1, CYP3A9,和CYP3A18)在小鼠肝脏组织中使用实时荧光定量PCR进行评估。
2.4。实验2。ECT和ECP改善通过MAPK CS-Induced肺损伤,增强肝代谢解毒通过PXR和CS-Exposed小鼠气道高反应性
确定抗氧化应激、抗炎和潜在的代谢解毒ECP和ECT CS-induced损害赔偿的性质,60小鼠随机分为6组( ):(1)控制,(2)CS模型组,(3)CS曝光和ECP预防组,(4)CS曝光和ECT预防组,(5)CS曝光和ECP治疗组和(6)CS曝光和ECT治疗组。预防集团收到项目/ ECT治疗12周,也暴露在空气/ CS整个实验周期。烟雾暴露和喂养的间隔大约是每天5个小时。治疗组,暴露在空气/ CS为8周,接到周9到12项目/等。CS-exposed组织暴露于4%(/卷卷,CS /空气)CS每天1小时(12支)12/8周使用修改后的通风CS曝光室连接到2真空隔膜泵。一个泵是连接到一个燃烧的香烟将新鲜烟(40毫升/分钟),而其他泵同时提供新鲜空气(960 mL / min)从外室。对照组暴露在新鲜空气在一个单独的通风室使用一个类似的过程。生化分析然后进行检测的影响氧化酶SOD, MDA的表达、肿瘤坏死因子-α、il - 6、引发和il - 1β在小鼠血清。免疫印迹分析检测磷酸化p38的表达/物/ ERK MAPK和表达PXR/AhR蛋白质。
2.5。表达PXR、CYP1A2 CYP2B1、CYP2C6 CYP3A1, CYP3A9, CYP3A18 mRNA在肝脏
肝的总RNA提取试剂盒使用冷试剂(Tiangen,北京)。的质量和浓度总RNA在260/280 nm被分光光度法检测。互补脱氧核糖核酸合成基于FastQuant RT工具包(Tiangen,北京)。的引物合成Sangon生物技术有限公司有限公司(上海,中国),表中列出1。放大的cDNA都使用了SuperReal预混料+工具包(Tiangen,北京)根据制造商的指示。的相对表达PXR、CYP1A2 CYP2B1 CYP2C6、CYP3A1 CYP3A9, CYP3A18 mRNA在肝脏被评估。执行的反应是使用实时PCR系统(Roter-Gene Q),在下列参数:在95°C predenaturation 10分钟,随后在95°C变性10秒,20秒退火在55°C, 72°C伸长,持续30秒。通过执行放大40周期,与目标基因的mRNA表达分析的基础上方程的平均值标准化GAPDH基因内部参考。
2.6。准备等
PDT叶子在121°C消毒20分钟,冷却,然后接种真菌悬挂。发酵是在孵化器进行在28 - 30°C下80%的湿度。干燥后90 - 120°C 60分钟,等叶子被储存在-20°C冰箱为进一步使用。
2.7。准备项目和注入等
黄金项目首次通过100 -筛网等,与该项目提取沸腾超纯水在沸水浴30分钟。该项目注入过滤压力降低。等提取使用超纯开水在沸水浴30分钟。然后等输液是过滤压力降低。ECP和ECT剂量取决于老鼠的重量(600毫克/公斤)。所有样本分为一小部分和存储在-20°C。程序是重复每周保持新鲜的样品。
2.8。高效液相色谱分析
儿茶素的浓度、生物碱和GA PDT,等,分析了ECP注入使用安捷伦lc - 1260高效液相色谱法(HPLC)(美国圣克拉拉)。高效液相色谱是配有Welchrom C18列( )。流动相是超纯水(A)和N, N-dimethylformamide:甲醇:冰醋酸= 39.5:2:1.5 (B),梯度洗脱的9 - 14% B清廉,14 - 23% B在10 - 15分钟,B在投15分钟23 - 36%,36% - -36%第27 - 31 B, B 31 - 32分钟,在36% - -9%和9% B 32-37分钟。色谱柱的温度维持在30°C所有实验。注射体积是10μl .高效液相色谱色谱监测在UV 278海里。
2.9。组小鼠血清、肺组织和肝脏组织
样本收集之前,食物的老鼠饿死了12 h。老鼠牺牲后使用戊巴比妥钠腹腔麻醉。血从血清收集的眼睑。简单地说,在室温下1 h孵化后,血液离心10分钟2500 r / min在4°C下10分钟。上血清收集和储存在-80°C,以供将来使用。肺和肝脏组织中,与预冷盐水洗3次,晒干。正确的肺组织被安置在福尔马林病理组织切片的制备。的肺不是福尔马林和肝脏组织中都存储在-80°C。
2.10。组织学评价
正确的肺组织被浸泡在福尔马林溶液3天,嵌入在石蜡,之后用苏木精和伊红染色解决方案())。在光学显微镜下观察到的部分200 x放大评估任何肺组织形态学变化。
2.11。生物化学分析
小鼠血清中氧化应激指标是评估通过测量氧化酶的催化活动和SOD,以及MDA的表达用ELISA试剂盒(南京建成、南京、江苏、中国)。另一方面,炎症反应是评估通过测量TNF -的浓度α、il - 6、引发和il - 1β使用ELISA试剂盒(Hualianke、武汉、湖北。中国)。ELISA试剂盒都严格使用根据制造商的指示。
2.12。免疫印迹分析
肺癌和MAPK的蛋白质PXR/AhR肝脏中蛋白质提取使用总蛋白提取工具包(Solarbio,北京),根据BCA蛋白质分析和量化工具(Solarbio,北京)。此后,20μ克变性蛋白质在10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后转移到PVDF膜(30分钟80 V, 120 V, 60分钟)。膜被封锁的1 h在室温下使用5%的脱脂牛奶TBS-Tween (TBST),使用TBST洗3次,然后孵化一夜之间在4°C与几个主要抗体(p-p38和p38 p-JNK物,p-ERK兵,PXRGAPDH,AhR和GAPDH (1: 10000))。与TBST三洗后,膜reincubated 1.5 h与辣根在室温下peroxidase-conjugated TBST补充5% BSA的二次抗体。与TBST 3洗后,可视化后化学发光免疫印迹。蛋白质浓度被使用图像量化J软件。
2.13。统计分析
数据分析使用棱镜version 7(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)。区别使用单向方差分析和学生的组织进行了分析 - - - - - -测试,根据费雪的迷幻药。连续变量表示为 。统计学意义是 或 。
3所示。结果
3.1。高效液相色谱分析
儿茶素、生物碱和GA PDT的主要代谢物检测(图1(一))等(图1 (b)),项目(图1 (c))。如图1 (d)发酵后,儿茶素的总含量等 ,在PDT(减少了63.54% )。然而,GA的浓度 增加的百分比85.85 ( )。三个生物碱(可可碱、theophy CAF)增加等。值得注意的是,CAF是最丰富的生物碱 在等。所有儿茶素、生物碱和GA在ECP略发现,也许是因为ECP的检测方法是不同于其他人。等多酚类物质的减少是由于发酵的茶多酚是共同生物活性theabrownins (20.]。这些发现表明,Eurotium cristatum发酵代谢产物的组成变化等与PDT相比,真菌保留几个生物活性和潜在的抗氧化物质。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2。EGCG的影响,PDT, FBT、HJT和ECT PXR——CYP450-Related基因的表达水平(CYP1A2、CYP2B1 CYP2C6, CYP3A1, CYP3A9,和CYP3A18)在肝脏组织
如图2与对照组相比,PDT和ECT的表达明显增加PXR信使rna。炉膛温度和ECT诱导显著增加CYP1A2 mRNA的表达。等显著增加CYP2B1的mRNA的表达。PDT, FBT、HJT和ECT CYP2C6的mRNA表达显著增加。EGCG和CYP3A1等显著增加mRNA的表达。PDT, HJT等显著增加CYP3A9 mRNA的表达。在所有团体CYP3A18 mRNA的表达减少。这些发现证明等发挥了重要作用,移植的表达式PXR- - -CYP450有关的基因(CYP1A2 CYP2B1、CYP2C6 CYP3A1, CYP3A9,和CYP3A18)。同时,ECT的效果优于EGCG, PDT,炉膛温度,HJT。统计学意义是 所有的分析。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
3.3。小鼠肺组织的组织学状况
老鼠暴露在CS逐渐缓慢的体重与接触的频率。皮毛变黄,控制相比,粗糙和单调。一些老鼠摆脱他们的头发,失去了食欲,和相对缓慢移动。CS曝光后,过了大约30分钟的老鼠从抑郁症状中恢复。
如图3(一个)、支气管和肺泡的小鼠与正常对照组完好无损肺泡空间。相比之下,那些CS组显示扩张肺泡空间,炎症细胞的浸润,气管腔上皮细胞脱落,堵塞在肺间质空间(图3 (b))。有趣的是,ECP和ECT治疗预防或逆转这些病理变化(数据的发展3 (c)- - - - - -3 (f))。
(一)
(b)
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(e)
(f)
3.4。项目的影响和血清抗氧化酶的活动等
ECP的影响和ECT小鼠抗氧化酶的活性,如图4(一)- - - - - -4 (c)。与控制相比,CS暴露显著降低SOD的活性和氧化酶以及调节MDA的表达。相比之下,与控制相比,ECP和ECT治疗显著提高SOD的活性和氧化酶并显著降低MDA的表达。统计学意义是设定在 所有的分析。
(一)
(b)
(c)
3.5。血清中炎性细胞因子的表达
相比之下,CS暴露显著调节TNF的表达水平α、il - 6、引发和il - 1β(数据5(一个)- - - - - -5 (d))。然而,ECP和ECT治疗授予TNF的表达水平降低α、il - 6、引发和il - 1β( )在CS-exposed老鼠。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.6。免疫印迹分析
磷酸化的p38、物和ERK proteinwere测量发现的分子机制调制CS-induced ECP和炎症反应等。与此同时,的表情PXR和AhRproteinwere评估探讨ECP的分子机制肝代谢解毒和ECT CS-exposed老鼠。与对照组相比,p38的磷酸化,物和ERK proteinwere显著( )调节肺的CS老鼠(数字6(一)- - - - - -6 (c))。然而,ECP和ECT摄入量,要么是预防或治疗干预,调控异常磷酸化p38的物,兵。此外,与控制相比,CS暴露显著( )压抑的表达水平PXR和AhR蛋白(数据6 (d)和6 (e))。然而,预防ECT治疗或治愈和ECP等显著( )调节的表达PXR蛋白质(图6 (d))。此外,治疗治疗项目,等恢复正常的表达AhR蛋白质(图6 (e))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
4所示。讨论
全球CS引起一些健康问题。持久CS暴露导致许多慢性肺部呼吸并发症如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺气肿、肺癌在严重的情况下,(21- - - - - -23]。另外,吸烟会导致直接或间接对肝脏的毒性,包括氧化应激、坏死性炎症和代谢紊乱7]。肝脏的代谢解毒相关系统性抗氧化和抗炎作用。研究表明,一些天然抗氧化剂包括茶可以调节氧化应激,炎症和肝毒性引起的CS (24- - - - - -27]。尽管茶抑制氧化应激和炎症机制被描述,如何调节代谢解毒还有待验证。因此,我们第一次模拟日常茶摄入量,在C57BL / 6小鼠,每日水摄入量被水取代EGCG, PDT,炉膛温度、HJT,等注入来评估不同的黑暗的影响肝脏代谢解毒茶。我们发现ECT的信使rna表达水平显著提高PXR和CYP450。姚等人报告了类似的结果,茶被发现增加的表达CYP450有关的基因(28]。随后,我们建立了肺损伤小鼠模型CS调查等机制和项目改善CS-induced肺损伤和它如何介导肝代谢解毒。
等是一种抗氧化剂水平较低的儿茶素,但总生物碱高、GA和theabrownins PDT[相比29日]。在这项研究中,高效液相色谱法显示,发酵后,生物碱的浓度和GA等增加,而儿茶素总量的减少。然而,只有低水平的ECP的代谢物被检测到。鉴于项目是一个Eurotium cristatum代谢物,茶的高效液相色谱方法可能不适合测量项目。在其他地方,邹等人表明,除了4俗称代谢物(echinulin, dehydroechinulin, neoechinulin, variecolorin O), cristatumin F,小说代谢物,也被检测到Eurotium cristatum原油中提取分离出傅砖茶。其中,cristatumin F表现出对自由基的清除作用[30.]。这些发现表明,ECT和项目有高水平的活跃的抗氧化剂和抗炎物质。基于这些发现,我们假设ECT和ECP可以缓解CS-induced肺损伤通过抑制氧化损伤和炎症反应,还可能有能力提高肝代谢解毒。
CS的接触大大影响小鼠的生存。与控制相比,老鼠在ECP和ECT治疗组显示一致的不健康状态前2个月。这些不良事件显著逆转后,停止吸烟和填喂法在最后一个月的开始。ECP和ECT预防组显著改善小鼠的不利地位。组织病理检查的部分显示,显示的对照组小鼠肺组织正常结构无炎性细胞浸润。相比之下,有异常改变在肺泡上皮细胞和炎症细胞的浸润CS模型组。然而,治疗和预防治疗的ECP和ECT显著逆转这些变化。ECP的保护作用等与它的抗氧化和抗炎作用有关。
氧化应激破坏抗氧化系统和增加脂质过氧化作用。因此,功能氧化酶抗氧化酶SOD和MDA过氧化反应的关键指标在体内氧化应激(4]。在这项研究中,我们发现CS暴露显著抑制SOD和氧化酶的活动。然而,ECP和ECT治疗恢复这些变化。值得注意的是,在治疗组比预防组效果优越。这些发现强调ECP的保护作用和对CS-induced氧化损害等。先前的研究表明,CS-induced肺损伤与过量的自由基和脂质过氧化作用[31日]。,CS组表现出更高的MDA水平与对照组相比显著。然而,预防和治疗组和ECP等显著降低CS-induced赔偿和MDA的表情。这些发现表明,ECP和ECT抑制CS-induced氧化应激。
进一步澄清ECP的病理生理效应和ECT CS-exposed老鼠,我们测量4炎症标记物包括TNF -的浓度α、il - 6、引发和il - 1β。在另一项研究中,人们发现肿瘤坏死因子-α和il - 1β在人类内皮细胞暴露于CS更长时间明显高于不吸烟者(32]。重要的il - 1β增加COPD患者的肺组织和诱导痰生产(33]。另一方面,CS暴露显著增加分泌引发人类支气管上皮细胞(34]。细胞因子il - 6是一个健壮的激活T细胞和B细胞的增殖和调节炎症反应。CS暴露增加炎症细胞的浸润和il - 6和TNF的表达α在支气管肺泡灌洗液(BALF) [35,36]。在这项研究中,与对照组相比,CS暴露显著调节TNF的表达α、il - 6、引发和il - 1β。然而,ECP和ECT治疗显著下调上述促炎细胞因子的表达。值得注意的是,项目的效果和ECT治疗组优于用预防组。这可能是因为CS暴露治疗组8周后停止,而预防组持续4周,因此,延长烟雾暴露严重阻碍复苏的氧化损失。有趣的是,ECP授予比ECT治疗组更好的效果。相比之下,预防组的影响等是优于项目。这种趋势可能是由于一个事实,即治疗组小鼠已经受伤之前收到项目等,急性摄入CAF可能加重肺损伤等喂养后(37]。然而预防组,与吸烟和进食长期治疗后,小鼠CAF的耐受性增加等。因此,预防组等是比项目更有效改善小鼠肺损伤由于其较高含量的茶多酚和GA。因此,我们假设使用轻度抗氧化剂如ECP的早期阶段会更有效地改善氧化应激和炎症反应停止后长期CS曝光。然而,等消费更有效地改善氧化应激和炎症反应,在长时间接触CS。
MAPK信号通路调节细胞外信号在细胞。第三MAPK激酶途径调节重要生理和病理过程包括细胞生长、分化、凋亡和炎症。它进一步调节p38的表达、物和EKR蛋白质。ERK介导细胞炎症和转录活动。在慢性阻塞性肺病的发展过程中,激活ERK促进促炎细胞因子的释放,如肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β。这加剧了呼吸道的炎症反应,提高氧化DNA和肺泡细胞损害(38,39]。p38和物通路是由应激信号和肺促炎细胞因子(40,41]。此外,最近的研究表明,肿瘤坏死因子-α激活p38 MAPK信号通路,导致哮喘和慢性阻塞性肺病的发展42]。CS代谢产物诱导的磷酸化细胞通过物H3S10组蛋白和磷脂酰肌醇3-kinase /蛋白激酶B通路,直接促进肿瘤发生[43]。在慢性阻塞性肺病和non-COPD病人,CSE治疗调节il - 6的表达和引发肺支气管细胞,激活p38和物信号通路。因此,一般来说,CS诱发炎性反应,加重慢性阻塞性肺病(44]。本研究表明CS暴露显著调节磷酸化p38的表达,物,ERK蛋白和激活MAPK信号通路。然而,预防以及ECP和ECT治疗逆转上述效果。值得注意的是,该项目和ECT防护效果优越的治疗而不是预防组。这是在协议与最近的研究表明,FBT减少UVB-induced氧化应激的水平在人类角质细胞通过调节MAPKs / Nrf2信号通路(45]。也已经证明,代谢物与GA等抗氧化和消炎作用,儿茶素,Eurotium cristatum代谢物MAPK信号通路的调节(4,46,47]。因此,我们的研究结果表明,ECT和ECP抑制肺CS-induced激活MAPK信号通路,p38的磷酸化,物,和ERK蛋白,小鼠氧化应激和炎症。
PXR核受体超家族成员NR1I2,起着关键作用的代谢解毒系统通过检测生物外源性物质和触发排毒反应,主要表现在肝脏和肠48]。正如前面提到的,PXR是一种调节xenosensor xenobiotic-metabolizing酶和转运蛋白的表达。因此,该调节消除外源性物质和内源性有毒化学物质,如胆汁酸(49]。最近的一项研究表明,暴露PXR基因敲除小鼠,2 ,4,4 ,5、5 - - - - - -hexachlorobiphenyl (pcb - 153)显著减少氧化酶的表达和氧化应激水平增加在活的有机体内。另一方面,PCB代谢物显著调节小鼠肝脏,表明氧化应激和DNA损伤小鼠肝脏(50]。Naspinski等人报道PXR增强细胞解毒代谢酶的上调表达,有效地保护细胞免受苯并芘- (BaP)诱导的DNA损伤(51]。这些发现表明,PXR防止氧化肝损伤代谢酶的调节表达和提高代谢解毒49]。AhR是一个异型生物质受体肝细胞中表达强烈。它检测到环境毒素,调节新陈代谢的异型生物质(52]。同时,AhR参与肝脏发展、调节肝脏再生和抑制肿瘤的发展。此外,小鼠模型显示AhR防止激活肝星状细胞和肝纤维发生(53,54]。很多研究也证明了AhR减轻氧化应激、炎症和CS(诱导细胞凋亡55- - - - - -57]。在这项研究中,我们发现CS暴露显著减少的表达PXR和AhR。然而,预防和治疗项目以及等的表达增加PXR和AhR蛋白质在CS曝光。因此,本研究的结果建议ECP和等潜在的抗氧化剂,可以提高肝代谢解毒。
与此同时,越来越多的证据表明MAPK之间潜在的相声,PXR,AhR和其他炎症信号通路。特别是,CS接触激活MAPK通路在肺58),与我们的研究结果一致。CS暴露也引发过度的核转录因子等炎性信号通路(NF -κBκB)和肿瘤坏死因子-α(59]。它还可以减少的表达AhR蛋白在肺,减少的防护能力AhR对炎症和氧化损害肺(60]。CS暴露的影响PXR在肺还没有报道,可能是因为PXR主要表达在肝脏和小肠。我们的研究结果表明,等和相关项目压制MAPK信号通路和促炎细胞因子。因此,我们推测ECT和真菌预防CS-induced肺损伤可能是相关的AhR、MAPK和NF -κB通路(图7(一))。CS暴露的影响PXR和AhR信号通路在肝是几乎没有报道。然而,老鼠模型显示,慢性激活MAPK和NF - CS接触κB信号通路和诱发释放促炎细胞因子在肝脏59,61年]。激活MAPK通路抑制的表达CYP450有关的基因影响药物代谢和解毒的肝细胞(62年]。NF -κB抑制表达PXR信使rna,扰乱了PXR- - - - - -CYP450基因的反应(48]。在这项研究中,等和相关项目增强的表现PXR/AhR蛋白质在肝脏引起的CS曝光。因此,它是合理的假设,CS曝光扰乱了PXR,AhR、MAPK和NF -κB信号通路,抑制肝脏药物代谢和解毒。此外,等和相关的项目是抗氧化剂,可以改变这些事件(图7 (b))。但是,我们没有评估MAPK和NF -的基因和蛋白质表达κ肝脏和NF - BκB,PXR,AhR在实验小鼠的肺。此外,表达的关键组织分子指标等炎症NF -κB和激活蛋白1没有评估。然而,这些研究在未来将继续调查。
(一)
(b)
5。结论
本研究表明,ECT和ECP显著改善健康和恢复正常的CS引起的肺部病理生理学。此外,显著提高SOD和MDA氧化酶的表达功能和表达下调,il - 6、il - 1引发β和肿瘤坏死因子-α在血清中。此外,ECT和ECP肺p38的表达下调磷酸化,物和ERK蛋白的老鼠。此外,等显著调节mRNA的表达PXR- - -CYP450有关的基因。它还调节蛋白的表达PXR和AhR在肝脏。总的来说,这项研究表明,ECT和ECP防止CS-induced氧化应激和炎症损害小鼠的肺,通过MAPK信号通路。同时,ECT和ECP也防止在肝脏代谢解毒通过调制PXR/AhR信号通路。因此,每日摄入ECT和ECP可以防止CS-induced氧化和炎症损伤。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作是由中国国家重点研发项目(批准号2018 yfc1604403)和湖南科技部门普罗旺斯(批准号2017 nk2180)。感谢聚会史先生,2019年经济与管理学院的学生,香港中文大学(深圳),本文讨论的有帮助。