文摘gydF4y2Ba

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎性疾病与氧化应激有关。药物靶向肿瘤坏死因子-α(TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba)改善炎症和RA在大多数病人的症状。氧化应激标志物是否可以用于监测治疗效果尚不清楚。我们的研究的目的是分析anti-TNF——的影响gydF4y2BaαgydF4y2Ba在等离子体处理对氧化应激和唾液的RA患者。样本收集从26 RA患者基线以及3和6个月后启动anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗。硫代巴比土acid-reacting物质(TBARS)、高级氧化蛋白质产物(AOPP),先进的糖化终端产品(年龄)和果糖胺量化使用分光光度法和荧光光谱测定法在等离子体。TBARS测定唾液。28个关节疾病活动评分被用来评估患者的临床状态。没有发现明显的动态变化除了等离子TBARS不断下降。在6个月时开始治疗后,血浆TBARS基线相比低39% (gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba唾液浓度TBARS没有反映出等离子体的动力学。虽然观察趋势(gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba等离子体之间的显著相关性TBARS DAS28并没有发现。我们的研究结果表明,anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗降低等离子体TBARS作为脂质过氧化作用的标志。然而,缺乏显著相关DAS28表明它不能用于监测治疗。其他标记的氧化应激和抗氧化能力较低的生物差异应该在将来的研究中测试。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。并不局限于关节炎症;而是系统性(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。RA患者预期寿命减少主要是由于动脉粥样硬化及其并发症(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。硬化的低密度脂蛋白胆固醇颗粒化学改性是被巨噬细胞(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。常常被氧化或羰基应激介导的修改(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

氧化应激是dysbalance活性氧化剂和抗氧化剂之间的生产机制(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。自由基的生产过剩或降低生产的抗氧化剂会导致各种大分子的氧化,尤其是脂质和蛋白质。慢性炎症是氧化应激的常见原因gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。激活免疫细胞,主要是中性粒细胞和巨噬细胞,保持酶的产生活性氧对抗细菌和其他微生物(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。然而,在慢性无菌炎症,长期生产过剩的活性氧会导致组织的氧化损伤gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

羰基应激最出名的是它的角色在糖尿病并发症的发病机制gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。的非酶的糖化依赖葡萄糖的浓度或其他glycating代理(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。然而,氧化应激脂质过氧化导致生产丙二醛羰基和其他刺激羰基压力。化合物的最终产品是一个异构组晚期糖化终端产品,促炎(年龄)关闭的恶性循环gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

RA与氧化应激所示之前总结的研究(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。在氧化应激标记中,硫代巴比土acid-reacting物质(TBARS)是最广泛使用的评估RA患者的脂质过氧化作用[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。先进的氧化蛋白质产品(AOPP)作为标记的蛋白质氧化也发现在RA患者(高gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。同样,年龄的非特异性标记羰基压力和果糖胺的前体在RA年龄高于在控制gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

生物药物靶向肿瘤坏死因子-α(TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba)改善炎症和风湿性关节炎的症状有更高的效率和安全性比其他任何治疗在过去(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。然而,抗炎治疗是否也能减少氧化或羰基应激还不清楚。同样,目前尚不清楚标记的氧化或羰基应激是减少炎症最敏感。这可能是RA的发病机制的理解的重要性和潜在的干预措施,以防止其并发症。gydF4y2Ba

我们的研究的目的是分析anti-TNF——的影响gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗选择氧化、羰基应激标志在RA患者血浆和唾液。我们假设早期治疗将减少脂质过氧化反应和其他标记后在治疗。此外,我们预计唾TBARS可以无创性的选择,反映了等离子体TBARS动力学作为RA活动的标志。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。病人gydF4y2Ba

这项研究包括26个成人的RA患者天真的关于生物anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗。患者接受单克隆抗体或诱饵受体靶向肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba:adalimumab (gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba40毫克南卡罗来纳州每隔一周),golimumab (gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba50毫克南卡罗来纳州一个月一次),certolizumab (gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba200毫克南卡罗来纳州每隔一周),或服用依那西普(gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba50毫克南卡罗来纳州一周一次)。排除标准包括主要并发症如癌症或心脏衰竭,以及治疗anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba药物在过去。28个关节关节28分)被用来评估RA患者的疾病的严重程度。患者群的基本特征进行了总结表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。所有患者随访期间研究的整个持续时间。gydF4y2Ba

2.2。血液和唾液收集gydF4y2Ba

收集血液样本为EDTA管,如果唾液样本被收集到无菌管在三个时间点:前3和6个月后启动生物anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗。样本离心机,享年1600岁gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟,上层清液储存在-20°C到分析。gydF4y2Ba

2.3。测量标记的氧化和羰基的压力gydF4y2Ba

硫代巴比土acid-reacting物质(TBARS)作为标记的脂质过氧化作用测量如前所述[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。等离子体和唾液样本与硫代巴比土酸乙酸与混合,形成有色配合物在94°C孵化后45分钟。样品被冷却到4°C。后来,正丁醇混合添加,动摇了连续2分钟。相分离是由离心,享年2000岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟。上阶段后来仔细删除,以553年排放和515 nm激发波长。TBARS内容量化基于校准曲线用1,1,3,3-tetramethoxypropane。gydF4y2Ba

蛋白质的标记oxidation-advanced氧化蛋白产物(AOPP)是决定使用分光光度法添加磷酸盐后样品和暴露在冰醋酸为2分钟。氯胺T的混合物和钾碘用于校准曲线的建设。具体的吸光度是在340海里(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

先进的测量糖化终端产品(年龄)的标记蛋白糖化,样品被稀释在磷酸盐(1:10)和校准AGE-modified牛血清白蛋白。立即准备反应混合物的吸光度测量在440 nm发射和370海里激发波长,分别为(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

果糖胺是评估通过测量吸光度在530 nm的硝基蓝四唑溶液(硝基蓝四唑和碳酸钠缓冲区,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba的样品和孵化15分钟37°C (gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。准备校准曲线,1-deoxy-morpholino-D-fructose的混合物,氯化钠,白蛋白是使用。gydF4y2Ba

蛋白质的浓度在等离子体和商用bicinchoninic估计的唾液酸测定(BCA, Fermentas,立陶宛)。氧化和羰基应激标记的评估浓度归一化蛋白质。所有测量数据进行使用荧光谱仪蓝宝石II (Tecan、奥地利)。这些实验中使用的所有化学品和试剂购买从Sigma-Aldrich(德国)。gydF4y2Ba

2.4。统计分析gydF4y2Ba

所有的数据进行了分析使用GraphPad Prism 6.0(美国加州拉霍亚)软件使用弗里德曼为非参数测试数据集和邓恩的多重比较检验。DAS28之间的相关性和TBARS使用皮尔逊相关性测试评估。差异被认为是重要的时候gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

结果表明,中值TBARS集中在等离子体的RA患者3个月后开始anti-TNF——下降了12%gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗(从0.098到0.080gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔/ g,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba浓度明显降低(39%)TBARS评估治疗开始后6个月(到0.060gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔/ g,图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba )。gydF4y2BaAOPP患者血浆的RA anti-TNF开始6个月后下降了17%gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗没有达到统计学意义(从1.60到1.33gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔/ g,图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba年龄集中在等离子体样品一直没有重大变化3和6个月后开始anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗与基线相比中间值(图gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 3个月,gydF4y2Ba 6个月)。略微减少6%的果糖胺浓度中位数在6个月后观察生物处理在RA患者的血浆。这种差异不显著(从0.017到0.016更易与g,图gydF4y2Ba1 (d)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba没有观察到的差异的唾液浓度TBARS 3和6个月后开始anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗(0.128、0.131和0.134gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔/ g;图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba相关性分析显示积极但DAS28之间没有显著相关性和TBARS集中在等离子体的RA患者开始治疗前(图gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2BaDAS28之间的相关性和TBARS减少3和6个月后政府anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗(数据gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (c)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 和0.32)。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

我们的研究结果表明,脂质过氧化反应标记TBARS减少了抗炎治疗,而不是蛋白质氧化AOPP标志或果糖胺和年龄作为羰基应激的标记。这可以解释为脂质氧化损伤更敏感比蛋白质(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。很可能经过较长的观察蛋白质氧化、羰基化反应也可能减少。事实上,研究集中在一个特定的年龄molecule-pentosidine-showed,经过近一年的anti-TNF——增大而减小gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。我们的结果符合公布的活性氧产量的数据,后下降6个月和12个月的治疗后anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。在我们的研究中,我们没有测量了活性氧物种,但氧化应激造成的损害。这包括保护作用的抗氧化剂清除自由基的地位。gydF4y2Ba

氧化应激在RA患者,它与动脉粥样硬化的风险(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。事实上,抗炎治疗减少氧化损伤的生物标志物是兼容的假说,氧化应激是一个结果RA的慢性炎症。这个不支持抗氧化剂与抗炎治疗佐剂的使用建议之前(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。我们的研究不支持使用TBARS RA患者的治疗效果的一个标志,因为它减少了非常缓慢。TBARS之间缺乏一个清晰的显著相关性,DAS28也符合公布的数据。RA患者TBARS高于控制,但患者更高DAS28得分,因此,更糟糕的是临床状态从DAS28分数较低的患者之间没有显著性差异(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

本研究首次分析anti-TNF——的影响gydF4y2BaαgydF4y2Ba等离子体和唾液TBARS。结果表明,当等离子体TBARS减少,唾液TBARS没有。唾液TBARS是清晰的起源可能从等离子体扩散,但唾液TBARS也可以直接在口腔中产生。我们先前的研究表明,唾液TBARS可能是当地的口语而不是系统性的起源(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。另一方面,我们也发现一些系统性疾病可能反映在更高的唾液TBARS如图所示为多发性硬化(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。这些矛盾的发现可能会有一个简单的解释而唾液和等离子TBARS之间的联系是依赖于上下文和患者团体之间变化。gydF4y2Ba

RA与牙周炎(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。虽然这个协会及其方向的因果关系尚不清楚,建议慢性治疗或难治性牙周炎可以诱发风湿性关节炎在个体遗传易感性gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。牙周病原体刺激免疫细胞,尤其是中性粒细胞,产生细胞外陷阱的主要驱动力慢性系统性炎症的发病机制和地方联合在RA症状gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。唾液TBARS由于牙周炎症可能会增加,因此,反映了当地的口腔健康状况。然而,这不是监控在我们的研究中。另一方面,它已经表明,在RA患者牙周状况提高了anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗作为一个想要的副作用(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。治疗的缺乏影响唾液TBARS在我们的研究中需要进一步分析。gydF4y2Ba

我们的研究存在一些局限性。这些包括使用非特异性生物标记物的氧化应激,,但是,非常敏感和应该改变迅速氧化失衡的结果。队列是很小,和一个更大的研究需要更多的统计能力微妙的影响是否会感兴趣的。此外,更长时间随访的患者口腔健康监测相结合才能更好地理解动态唾液的氧化应激的生物标志物。gydF4y2Ba

一个潜在的方法来研究抗炎治疗生物标志物的影响可能是动物模型的使用。DBA / 1 j小鼠胶原诱导关节炎已被用于研究CXCR3拮抗剂的影响在很多标记的细胞和体液免疫反应gydF4y2Ba37gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。类似的实验关注的选中标记氧化和羰基应激结合相关基因的表达分析在免疫细胞的数量可以给人类带来翻译小说机械的洞察力与潜在患者(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba,gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。此外,使用准备好的胶原蛋白抗体使其他鼠标的使用压力,因此,还遗传模型(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

总之,这项研究表明,anti-TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba治疗降低脂质过氧化作用而不影响蛋白质氧化或羰基应激。等离子体TBARS不能用于监测治疗的效率,因为他们不能反映临床状态。未来的研究和实验应该关注其他更具体的标记生物多样性较低。诱导等离子TBARS变化是否有相关性在RA为动脉粥样硬化的发病机制还有待阐明。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

本研究由斯洛伐克研发机构(apvv - 18 - 0366)。gydF4y2Ba