文摘

越来越多的证据表明,中药策略显然是有利于癌症治疗,但科学研究缺乏内在的分子机制。我们报告乌索酸,生物活性成分分离基数Actinidiae对,对骨肉瘤细胞具有较强的抗肿瘤效应。功能研究表明,乌索酸抑制肿瘤细胞增殖和促进了各种各样的骨肉瘤细胞的凋亡。乌索酸有协同与顺铂对骨肉瘤细胞的细胞毒性效应。在小鼠骨肉瘤异种移植模型中,低剂量顺铂结合乌索酸显著降低肿瘤的增长。值得注意的是,乌索酸逆转小鼠体重与顺铂治疗。机械的研究表明,乌索酸降解铁蛋白通过激活自噬和诱导细胞内过量亚铁离子,导致ferroptosis。此外,乌索酸增强顺铂对骨肉瘤细胞的能损伤dna的效果。总的来说,这些发现表明,乌索酸是一种无毒的佐剂,可以提高骨肉瘤化疗的有效性。

1。介绍

骨肉瘤(OS)是一个类型的肉瘤,源于成骨细胞间充质细胞和中最常见的是儿童和青少年(15 - 19岁1]。目前的治疗策略,包括化疗结合积极的手术切除,显著提高患者的生存系统(2]。然而,复发率仍在30 - 40%,10年生存率20 - 30%是由于肺转移(3]。如顺铂(Cis),化疗是最有效的治疗癌症和操作系统(4- - - - - -6]。然而,这些化疗药物受限于收购阻力和严重的副作用在高剂量。因此,迫切需要研究替代抗癌方法,如食品和草药补充剂的使用结合当前化疗改善现有药物的治疗效果。有效的发展,无毒的治疗策略,即。,the application of natural active substances with proven anticancer effects, may be a more promising approach for the prevention and treatment of OS.

循证研究中药(TCM)癌症治疗策略表明,中药化合物目标肿瘤细胞和治疗全身。生物活性中药化合物通过多级定位起到抗肿瘤作用和影响的信号通路7]。因此,中药化合物可作为辅助治疗癌症。乌索酸(UA)是一种天然五环三萜羧酸在基数Actinidiae发现。研究表明,UA具有广泛的生物活性,包括抗病毒、抗菌、王亚南,抗炎作用[8]。此外,它参与预防和防止癌症。其抗肿瘤效应是由于它能够预防肿瘤发生,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。以前的研究已经表明UA可以抑制前列腺癌的增殖和诱导细胞凋亡,肺癌、胰腺癌、和其他肿瘤细胞9]。此外,UA抑制肿瘤进展的报道,诱导肿瘤细胞分化、抑制血管生成活性(10]。UA也被发现在不同的动物模型起到化学预防作用通过抑制肿瘤入侵。然而,UA的抗肿瘤效应,其有效性作为辅助化疗在OS细胞,和其潜在的分子机制尚不清楚。

在这项研究中,从基数Actinidiae UA组件的影响对在OS细胞被全面研究。我们使用两个操作系统细胞系和肿瘤异种移植小鼠模型来证明UA是无毒、具有较强的抗肿瘤活性,对化疗耐药性明显作用在OS细胞体外和体内结合Cis。这些发现表明,UA可以作为佐剂增强当前chemotherapy-based方案的治疗效果。

2。材料和方法

2.1。细胞培养和试剂

人类的OS细胞系居屋计划,购买了143 b细胞库的中国医学科学院(中国上海)。居屋计划和143 b细胞生长在鹰的最低基本培养基(洛杉矶Gibco CA)含10%胎牛血清(Gibco), 100 U /毫升青霉素,100μg / mL链霉素在37°C和5%的公司₂。独联体、UA desferrioxamine(柴油),3-methyladenine (3-MA)从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.2。细胞生存能力分析

坚持之前的协议(11),细胞被播种在96孔板的密度 细胞每100年μL中过夜。与试剂和细胞治疗后孵化24 h, 10μL细胞计数Kit-8 (CCK-8)试剂添加根据制造商的指示。吸光度测量在450 nm标。

2.3。单独分析

居屋计划和143 b细胞在对数生长阶段被播种到10厘米的菜每毫升200个细胞的密度。治疗后与Cis (20μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L) 2周,细胞克隆和4%多聚甲醛固定15分钟。细胞克隆与结晶紫染色溶液在室温下15分钟前拍照。

2.4。细胞凋亡分析

研究Cis的协同效应和UA凋亡,居屋计划和143 b细胞与Cis(20孵化μmol / L)或UA (35μmol / L) 24小时然后收获染色使用膜联蛋白V-PE凋亡检测设备(BD、上海、中国)。凋亡细胞的数量被流式细胞术量化。所有实验进行了一式三份。

2.5。生活/死染色试验

居屋计划和143 b细胞被播种在24-well板( /)和培养过夜。独联体(20μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L)添加到井24 h。然后,calcein-AM / PI染色工具包(Beyotime、上海、中国)被用来检测死细胞和活细胞。π坏死细胞用于染色,calcein-AM用于活细胞染色。

2.6。5-Ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷测定(EdU)合并分析

HOS细胞被播种在24-well板块,在完全培养基培养过夜。独联体(20μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L)添加到井中。治疗后24小时,细胞增殖与EdU测量细胞增殖试验设备(Beyotime、上海、中国)根据制造商的指示。细胞核染色有1μg / mL DAPI (Solarbio,北京)5分钟。EdU-incorporated细胞的比例是由荧光显微镜。

2.7。细胞周期分析

HOS细胞被播种在6-well盘子和对待Cis (20μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L)大约24小时。然后,细胞被收集并固定在冰冷的70%乙醇在一夜之间在4°C。一个细胞周期染色工具包(MultiSciences、杭州、中国)被用来分析细胞周期阶段根据制造商的协议。与冷PBS洗了三次后,这些细胞被沉浸在核糖核酸酶在室温下为30分钟,然后孵化与propidium碘(π)在黑暗中。流式细胞仪的样品进行分析。

2.8。测定活性氧(ROS)生成

HOS细胞( )镀与Cis (20 six-well盘子被孵化μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L)大约24小时,然后,媒介是替换为1毫升新鲜培养基含有5μ581/591 M BODIPY C11 (Glpbio、广州、中国)为30分钟37°C。细胞被洗两次,荧光显微镜下分析。

细胞ROS水平和超氧化物水平测量使用2 ,7 - - - - - -二乙酸二氯荧光素(DCF-DA)。根据制造商的协议,居屋计划和143 b细胞被洗PBS和沾DCF-DA (4μ在37°C M)在黑暗中30分钟。流式细胞仪是用于确定ROS生产。

2.9。检测丙二醛(MDA)和4-Hydroxynonenal (4-HNE)

脂质过氧化(MDA)试验设备(美国Sigma-Aldrich MAK085)和脂质过氧化(4-HNE)试验设备(美国Abcam ab238538)是用来测量的浓度在细胞溶解产物MDA和4-HNE根据制造商的指示。MDA检测,样品与硫代巴比土酸混合,在100°C的环境1 h。MDA浓度测定在532 nm吸光度。4-HNE检测,样品被添加到4-HNE conjugate-coated板和孵化了10分钟。然后,共轭4-HNE与anti-4-HNE抗体和二级antibody-HRP孵化。最后,添加底物溶液,在450 nm测定吸光度。在此,MDA或4-HNE计算的数量 细胞治疗后。

2.10。测量细胞内的铁^{2 +}内容

FerroOrange (Mkbio、上海、中国)被用来测量细胞内和线粒体铁^{2 +}根据制造商的协议。HOS细胞治疗与独联体、UA UA / Cis, UA / Cis /柴油,或者UA / Cis / 3-MA和沾染了1μM FerroOrange为30分钟37°C。使用荧光显微镜图像获得的。

2.11。自噬流量分析

mCherry-GFP-labelled LC3被用来分析细胞内自噬流量根据制造商的指示。与mCherry-GFP-LC3 HOS细胞转染腺病毒6 h,然后孵化与Cis (20μmol / L), UA (35μmol / L),或者独联体(20μmol / L) + UA (35μmol / L) 24 h。mCherry-GFP-LC3表达式被荧光显微镜跟踪和成像。

2.12。西方墨点法

OS细胞细胞溶解里帕缓冲区和离心机在12000 rpm 15分钟收集上层的。蛋白质样品10% sds - page分离和转移到PVDF膜(美国微孔,Billerica的)。5%的脱脂牛奶的PVDF膜被封锁1.5 h,然后孵化隔夜主要抗体在4°C。洗后TBST 3次(每15分钟),膜被孵化的HRP-conjugated二级抗体室温1 h。蛋白质的乐队是可视化Amersham成像仪600。主要抗体Beclin-1 (ab207612 Abcam) LC3 (ab192890 Abcam) P62 (ab109012 Abcam),γ-H2AX (ab81299 Abcam) GPX4 (DF6701亲和力),总和生育率(AF5343亲和力),和NCOA4 (DF4255亲和力)稀释1:1000;一个抗体GAPDH(美国CST # 5174)稀释1:2000。

2.13。透射电子显微镜法

细胞培养在6-well板用药物治疗24 h和固定2.5%戊二醛在PBS。清洗后在0.1 M PBS,细胞治疗0.1% Millipore-filtered cacodylate-buffered鞣酸和后缀1%四氧化锇在4°C 30分钟。然后,这些细胞被孵化的分级系列丙酮10分钟每一个解决方案。脱水和包埋后2 h 60°C,细胞被嵌入,嵌入组织切片厚度为50 ~ 70 nm的后续使用透射电子显微镜观察。

2.14。免疫荧光

OS细胞被播种在24-well板的密度 细胞每口井用指定的药物和治疗24 h。然后,这些细胞被固定在4%多聚甲醛20分钟和孵化主要抗体LC3 (ab192890 Abcam),γ-H2AX (ab81299 Abcam),总和生育率(AF5343亲和力)一夜之间在4°C。PBS的细胞被洗了三次3分钟,然后用二次抗体孵化1 h在室温下。DAPI用于染色细胞核为1分钟。样品被密封,荧光显微镜下观察。

2.15。人类系统的异种移植模型

所有动物实验进行了以下的指南第四军医大学伦理委员会(IACUC号2020 - 1004),并根据执行机构实验室动物保健和使用指南。被遵守的指导方针指导实验室动物保健和使用的国家卫生研究院出版86 - 23号修订后的2011人。ν/ν老鼠(第四军医大学、陕西、中国)被注入了143 b细胞(100μl 细胞/毫升,i.h)。注射后七天,小鼠被分为6种不同组( )每周两次和腹腔内注射不同的药物。28天,老鼠牺牲,肿瘤在不同组重。每3天体重和肿瘤大小测量从7天到28天。肿瘤组织与4%多聚甲醛固定,石蜡嵌入式,切成4μ米厚的部分为haematoxylin-eosin())和免疫荧光染色。

2.16。统计分析

8.2统计分析与GraphPad棱镜(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。数据呈现的 3个独立的实验。团体之间的统计学意义分析了单向方差分析(方差分析)。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。UA和Cis系统协同抗肿瘤效应细胞体外

确定最优浓度UA细胞治疗的操作系统,我们使用了CCK-8试验来确定不同浓度的影响UA的居屋计划和143 b细胞的扩散。结果表明:35μ20 M UA结合μM Cis对扩散的影响最明显的OS细胞(图1(一))。然后,CCK-8试验被用来评估独联体和UA及其组合的影响在居屋计划和143 b细胞的扩散。独联体或UA治疗显著降低细胞生存能力,这种降低是更重要的在UA和独联体联合治疗组(图1 (b))。单独试验结果还表明,OS细胞生存能力为UA + Cis组最低,其次是单一疗法组(图1 (c))。利用流式细胞术分析居屋计划和143 b细胞的细胞凋亡后各种药物治疗。结果表明,OS细胞的凋亡率最高的UA + Cis集团和UA + Cis组高于独联体或独自UA组,而是所有三组的细胞凋亡率明显高于对照组(图1 (d))。我们执行calcein-AM / PI染色进一步阐明UA的协同作用和独联体居屋计划和143 b细胞。实验表明,UA和独联体协同死细胞的数量增加和减少的数量可行的细胞(图1 (e))。

3.2。UA和独联体在OS细胞抑制增殖和诱导DNA损伤

随后,我们探索UA和独联体能否抑制OS细胞的增殖。正如所料,UA和独联体治疗中度降低EdU的百分比⁺细胞,UA + Cis治疗显著降低EdU的百分比⁺细胞,这表明UA结合Cis明显阻塞OS细胞的生长(数字2(一个)和2 (b))。进一步调查机制药物对OS细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析细胞周期分布。如数据所示2 (c)和2 (d),HOS细胞的细胞周期分布变化明显UA和Cis的治疗下,在G2期细胞的比例明显增加,G1期细胞明显减少。先前的研究已经报道,独联体的主要抗癌机制包括链内的交联的形成加合物通过Cis与DNA的相互作用,导致DNA损伤的增加和细胞周期阻滞12]。免疫荧光进行评估的表达γ-H2AX,早期DNA损伤的一个标志。结果表明,UA HOS细胞DNA损伤增加,而联合治疗进一步显著增加DNA损伤,显示的荧光强度显著增加γ-H2AX(图2 (e)和2 (f))。因此,我们的实验结果表明,UA和独联体发挥协同效应抑制OS细胞增殖和诱导的DNA损伤。

3.3。结合治疗UA和独联体协同增加Ferroptosis OS细胞

我们测试是否UA结合Cis放大在OS细胞线粒体功能障碍。我们首先关注线粒体形态、线粒体功能障碍的上游。电子显微镜分析表明,与单一疗法相比,UA + Cis治疗诱发更严重的线粒体形态的变化,如线粒体嵴和线粒体膜密度的增加(图3(一个))。UA + Cis管理后,线粒体变得无序和较小的,周围的网络崩溃(图细胞核周围的区域3(一个))。脂质过氧化物的形成和积累的自由铁ferroptosis的两个主要特征。因此,氧化应激损伤量化的测量(i)在细胞ROS总产量DCF-DA(数字3 (b)和3 (e)),(2)脂质ROS水平BODIPY C11(数字3 (c)和3 (d)),(3)脂质过氧化作用的二次产品的内容(如由免疫荧光染色MDA和4-HNE)(数据3 (f)和3 (g))。这些结果表明,ROS生产和脂质过氧化反应生产联合治疗显著增加。

3.4。联合使用UA和独联体导致铁在OS细胞内稳态的破坏

检查是否ferroptosis是由自由铁池,增加我们对UA和Cis的影响在OS细胞铁代谢。我们第一次使用选择性荧光亚铁离子探针监测细胞内自由铁水平。荧光染色显示,UA结合Cis导致重大不稳定的铁积累,如通过增加铁的荧光强度^{2 +}(数据4(一)和4 (d))。接下来,转铁蛋白受体的表达(TFR)进行免疫荧光染色(数字4 (b)和4 (e))。与上面的结果一致,总和生育率的积累,减少核受体共激活剂4的表达(NCOA4)介导autophagy-mediated铁蛋白的降解,导致大量的积累nonchelated铁在UA和Cis的治疗。我们进一步研究了关键蛋白质的表达与铁在OS细胞内稳态。结果表明,铁代谢相关蛋白的表达,如总和生育率和NCOA4受UA和OS的铁饥饿效应细胞的共同作用下进一步加强独联体和UA。此外,UA和独联体synergically诱导退化GPX4 NCOA4,自噬货物受体结合的铁蛋白降解并释放自由铁(图4 (c))。总体而言,我们的研究结果表明,联合治疗显著积累的胞内自由铁,导致ferroptosis。

3.5。UA和独联体诱发自噬在OS细胞

通过免疫荧光结果呈现在图所示5(一个)后,治疗UA + Cis,招聘LC3的自噬膜显著增加。同样,先前的研究已经报道,独联体的主要抗癌机制包括链内的交联的形成加合物通过Cis与DNA之间的相互作用(图5 (b))。超微结构的自噬小体使用TEM分析还表明,细胞内自噬小体的数量显著增加后治疗UA + Cis(图5 (c))。autophagy-related蛋白质的表达水平被免疫印迹分析。LC3和Beclin-1表达显著增加在UA + Cis组比对照组和单药治疗组,而P62表达式显示一个下降的趋势(图5 (d))。这些结果表明,自噬在OS细胞的治疗发挥了重要作用。

3.6。药物消除自由铁和抑制自噬引起的减弱Ferroptosis UA和Cis

由于显著增加细胞内自由铁水平和自噬的显著激活,我们提议,UA的协同毒性作用和独联体OS细胞可能是由于自由铁由于过度自噬的积累。我们测试了上述假设使用柴油和自噬抑制剂3-MA iron-chelating代理。证据表明,柴油和3-MA UA + Cis-induced凋亡(减少数据6(一)和6 (b)),柴油和3-MA部分逆转UA + Cis-induced细胞生存能力下降(图6 (c))。此外,UA + Cis-induced线粒体形态变化和自噬被柴油部分逆转,3-MA(图6 (d))。此外,柴油和3-MA发现减少脂质过氧化和MDA和4-HNE OS细胞(数字内容6 (e)- - - - - -6 (g)和6 (k))。值得注意的是,我们表明,柴油和3-MA有效减轻细胞内自由铁(数据的过载6 (h)和6(左))。柴油和3-MA也总和生育率诱导表达的增加减少了治疗UA + Cis(数字6(我)和6 (m))。免疫印迹结果表明表达水平的总和生育率,NCOA4,γ-H2AX, LC3下降而GPX4和P62表达增加治疗后iron-chelating代理柴油和自噬抑制剂3-MA(图6 (j))。这些数据表明,自噬诱导的增强UA + Cis治疗积累了自由铁和自由铁过载是上游的线粒体功能障碍,最终导致脂质过氧化物的产生,导致ferroptosis。综上所述,这些数据表明药理螯合铁和抑制自噬的免费有效缓解UA + Cis-mediated ferroptosis和线粒体功能障碍。

3.7。UA和Cis的治疗增加了自噬,从而诱发Ferroptosis在鼠标异种移植模型

我们建立了一个皮下肿瘤模型来研究治疗UA和Cis体内的潜力,并定期观察肿瘤生长(图7(一))。我们发现与控制治疗和单药治疗相比,UA + Cis治疗显著减缓肿瘤生长(图7 (b));肿瘤体积和重量明显减少UA + Cis治疗组与对照组相比,单药治疗组(数字7 (c)和7 (e))。如图7 (d)Cis-treated老鼠显示显著的减肥,而UA-treated老鼠的重量几乎不变,表明没有明显的毒性。值得注意的是,独联体和UA的结合不仅可以抑制肿瘤的生长,而且减少了Cis的毒性和副作用在某种程度上,使其临床使用安全。免疫荧光结果显示,UA主体性与Cis增加坏死区;总和生育率的表达增加,γ-H2AX, LC3;和减少TUNEL Ki67 GPX4 NCOA4, P62染色(图7 (f))。然而,柴油和3-MA显著逆转这些变化通过抑制ferroptosis和自噬。结果还证实,UA和Cis的结合产生了对操作系统通过促进细胞自噬细胞毒性作用,导致ferroptosis由于胞内过量的铁离子。

4所示。讨论

传统治疗操作系统主要包括手术、化疗和辐射,以及先进的替代疗法,如靶向治疗和免疫治疗(13]。然而,这些疗法疗效有限,和他们的使用是有限的副作用并最终发展的多药耐药性(MDR)。因此,必须优化癌症治疗策略。对于复杂的疾病,如癌症、中药化合物会影响多个目标而不是一个单一的目标,除了少数例外[14]。UA,天然植物中发现五环三萜系化合物,具有抗癌作用,针对多个信号通路和癌症预防和治疗正在成为一个有前途的化合物(15]。值得注意的是,我们表明,UA加强与独联体激活自噬,导致铁蛋白的降解,导致自由铁的灾难性的积累和脂质过氧化,从而ferroptosis,对操作系统有抑制作用。

据报道,UA可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的浸润和转移产生抗肿瘤效应(9,16]。然而,监管UA对操作系统的影响研究很少。研究表明,UA和独联体发挥协同抗肿瘤效应诱导细胞凋亡的肿瘤细胞,包括卵巢癌,膀胱癌,肺腺癌细胞(17- - - - - -19]。此外,UA和Cis的结合可以极大地扰乱体内平衡和抑制线粒体OS细胞增殖。进一步的实验表明,iron-chelating代理和自噬抑制剂可以阻止细胞死亡。重要的是,脂质过氧化物的积累OS细胞死亡之前检测到染色MDA和4-HNE或与BODIPY C11、荧光染色法和脂质过氧化物的积累可以逆转药理自由铁的螯合物。同样的现象在肿瘤异种移植模型。总之,我们发现UA可以有效地优化anti-OS Cis的活动,减少Cis的毒性和副作用,涉及多种机制。UA不仅增加DNA损伤,也导致OS细胞脂质过氧化反应,最终导致ferroptosis。这些结果表明,UA结合Cis的应用是一个有前途的策略来降低铁含量的操作系统。

铁在哺乳动物细胞中起着重要的作用。铁是必要的细胞复制,新陈代谢,和经济增长,因为它允许重要的血液中含铁酶功能(20.]。不稳定的铁池超载是一个生化危害。亚铁贡献电子与过氧化氢反应,生成羟基自由基,ROS (21,22]。这一过程,称为芬顿反应,不仅破坏了脂质和蛋白质,还导致DNA氧化损伤,包括修改DNA碱基和DNA链的断裂23]。因此,铁是必要的和可能有毒。铁蛋白,包括光铁蛋白肽1 (FTL1)和铁蛋白重肽1 (FTH1),是主要的细胞内铁储存蛋白质复杂。Ferroptosis可以抑制通过增加铁储存在惰性池upregulation细胞质铁蛋白表达的24]。自噬是一种进化保守的降解机制,保持体内平衡。诱导自噬促进细胞存活在应对环境压力如营养饥饿和在许多情况下,能量消耗。然而,过度和受损细胞自噬可能导致死亡25]。最近的研究表明,自噬可以降低铁蛋白,增加铁含量增加,导致芬顿反应和氧化损伤(24]。越来越多的证据表明,诱导ferroptosis是一种很有前途的治疗策略,抑制癌细胞的耐药性造成药物引起的细胞凋亡(26]。从力学上看,UA和独联体激活自噬降解铁贮藏蛋白铁蛋白受体NCOA4通过介导的货物。这NCOA4-mediated自噬铁蛋白的降解,也称为ferritinophagy,促进活性氧的积累通过维持细胞内铁含量高,从而导致ferroptosis OS细胞。在本文中,我们提出令人信服的证据,ferroptosis是一种自噬细胞死亡导致OS UA和Cis联合治疗后细胞死亡。这是指出,治疗UA和独联体加剧了OS细胞DNA损伤并逮捕了OS G2期细胞的细胞周期。这些结果表明,OS细胞的治疗UA的组合和独联体可以减轻耐药性增强DNA损伤和ferroptosis多步和multimechanism的方式。

因此,我们的研究提供了证据,UA可能是一个有前途的辅助改善Cis-based化疗患者的操作系统的有效性。我们还揭示出其潜在的机制,以进一步阐明目标ferroptosis OS的影响治疗。

5。结论

这项研究提供了强有力的证据,UA可以强烈提高Cis引起的DNA损伤。此外,UA和独联体可以在不同层面上,表现为协同作用起到监管作用通过影响多个目标同时,使OS细胞容易ferroptosis。值得注意的是,UA的属性对化疗耐药性增强其抗癌活性及其作用在操作系统,这可能是一个有前途的治疗策略。这支持它的使用作为一个辅助协同改善操作系统目前的化疗方案的疗效。

缩写

操作系统:	骨肉瘤
顺式:	顺铂
中医:	中国传统医学
UA:	乌索酸
柴油:	Desferrioxamine
3-MA:	3-Methyladenine
CCK-8:	细胞计数Kit-8
EdU:	5-Ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷测定
PI:	Propidium碘化
ROS:	活性氧
MDA:	丙二醛
4-HNE:	4-Hydroxynonenal
):	Haematoxylin-eosin
耐多药:	多药耐药性
FTL1:	光铁蛋白肽1
FTH1:	铁蛋白重肽1
DCF-DA:	2 ,7 - - - - - -二乙酸二氯荧光素
TFR1:	转铁蛋白受体1
NCOA4:	核受体共激活剂4。

数据可用性

原始数据支持了本文的结论将由作者提供,没有过度的预订,任何合格的研究人员。

伦理批准

所有动物的工作进行了指导方针后第四军医大学伦理委员会和执行机构实验室动物保健和使用指南。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

作者的贡献

李天,甄,许董,郑郭,肖鑫负责概念和设计。李天,甄,许董,宁王,王魏,鑫肖获得数据。魏甄唐、郑郭和星辉分析数据并起草了手稿。甄,吴皓,宁王,刘Yichao获取、分析和解释数据并进行统计分析。作者阅读和批准最终的手稿。甄,许董、李田和宁王本研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

我们感谢所有参与这项研究的研究人员有建设性的评论。这项工作是支持由陕西省的主要研发项目(2020 sf - 075),中国国家自然科学基金(81902897),和独立程序的癌症生物学国家重点实验室,中国(CBSKL2019ZZ21)。