钠Tanshinone花絮Silate施加微循环对脊髓损伤保护作用在体外和体内

文摘

脊髓微循环涉及功能在血脊髓屏障内皮细胞(BSCB)和保持正常运作所需的脊髓神经元,轴突和神经胶质细胞。保护内皮细胞的功能和完整性以及预防BSCB破坏可能是一个强有力的策略治疗脊髓损伤(SCI)的情况。钠Tanshinone花絮silate (STS)是用于冠心病的治疗和改善微循环。是否STS展品SCI微循环的保护作用还不清楚。本研究的目的是探讨STS的保护作用oxygen-glucose剥夺——(OGD)诱导脊髓损伤内皮细胞(SCMECs)在体外并探讨影响BSCB和神经与血管的保护在活的有机体内。SCMECs治疗与不同浓度的STS (1μ米,3μ10 M,μ米)与或没有OGD-induction 24小时。细胞生存能力,管的形成、迁移和Notch信号通路的表达组件进行评估。组织病理学评价()),尼氏小染色,BSCB渗透率、血管性血友病因子的表达水平(vWF)、CD31 NeuN, Notch信号通路组件进行了分析。STS发现改善SCMEC OGD后功能,减少炎症介质。STS也松了一口气组织病理学损伤,增加zonula occludens-1 (ZO-1),抑制BSCB渗透率、微血管获救,保护电机神经瘤,SCI模型和改进的功能恢复。此外,我们发现了Notch信号通路在这些过程起着重要的作用。这些结果表明,STS保护微循环在SCI,这可能被用作治疗SCI战略在未来。

1。介绍

脊髓损伤(SCI)是一个主要的医疗问题,可能导致永久性的截瘫(1]。只有14%的护士和医生采取有效抢救措施SCI后病例的37% (2]。科学不仅影响患者的身心健康,也影响治疗(3- - - - - -5]。尽管各种治疗方法包括手术和药物是用于科学,目前还没有治愈这伤害6- - - - - -8]。

脊髓微循环中扮演一个重要的角色在维持正常功能的脊髓神经元,轴突,胶质细胞(9,10]。在主要的机械损伤阶段,压缩破坏和内皮细胞,周围的周骨折血管,和扰乱血脊髓屏障(BSCB),导致血管失衡,导致严重的二次损伤和功能障碍(11,12]。BSCB功能类似于血脑屏障(BBB),基于内皮细胞及其附属结构的完整性。SCI后,BSCB分解和神经毒性产品和免疫细胞渗透到受伤的实质,导致二次伤害(13- - - - - -15]。这些二次损伤导致神经元和神经胶质的死亡和永久性的神经障碍15,16]。因此,保护内皮细胞的功能和完整性和防止BSCB中断是必要的减少严重的二次损伤,这可能对SCI作为一种很有潜力的治疗策略。

丹参源自粉末的Salviae miltiorrhizae或干根知母是中国传统中药材的主要组成部分17]。Tanshinone花絮是最活跃在丹参二萜奎宁色素。许多研究表明Tanshinone花絮有药用作用对心血管、脑血管、内分泌和神经系统疾病(18- - - - - -21]。钠Tanshinone花絮silate (STS,结构如图1(一))是一种水溶性的导数Tanshinone花絮”(22]。STS是用于治疗冠状动脉心脏疾病在中国。一些研究还表明,STS预防炎症,氧化应激和细胞死亡23- - - - - -26]。然而,背后的机制Tanshinone花絮SCI后微循环影响STS-mediated保护作用仍不清楚。

在这项研究中,我们调查了STS的保护作用oxygen-glucose剥夺——(OGD)诱导脊髓损伤内皮细胞在体外和探索改进BSCB和神经与血管的保护在活的有机体内。

2。材料和方法

2.1。材料

健康成年雄性C57BL / 6小鼠购买从广州中医药大学(广州)。所有研究进行根据广州中医药大学提供的指导方针。研究伦理委员会批准广州中医药大学。内皮生长介质2 (EGM-2)从LONZA获得,(美国加州)。胎牛血清DMEM(的边后卫),胰蛋白酶,青霉素和链霉素获得Gibco(美国纽约)。WST-1细胞生存能力检测设备获得了来自南京凯基生物生物技术有限公司有限公司(中国南京)。STS ( 使用高效液相色谱)购买从成都Herbpurify有限公司有限公司(中国成都),在无菌水溶解(圣路易斯,密苏里州,美国),和稀释介质。

2.2。内皮细胞隔离

脊髓微血管内皮细胞(SCMECs)孤立如前所述通过收集从10脊髓微血管4-5-week-old老鼠的27,28]。内皮细胞被镀成文化菜包含EGM-2补充5%胎牛血清,1%青霉素,链霉素的1%。盘子在37°C(孵化有限公司5%₂)。媒介取代每隔两天。内皮细胞较低的段落(3 - 5)被用于实验。

2.3。免疫荧光分析

SCMECs在4%多聚甲醛固定,permeabilized 0.3% Triton x - 100,封锁在5%正常山羊血清在PBS稀释。一夜孵化后主要抗体vWF(1: 200年,圣克鲁斯生物技术)、CD31(1: 200年,Abcam),喜欢的《忍者外传2》(1:200年,Abcam)和GFAP(1: 200年,Abcam)在4°C,细胞被洗了三次PBS为5分钟,随后孵化fluorescein-conjugated二级抗体。核与DAPI染色。荧光显微镜(日本奥林巴斯)被用来分析结果。

2.4。在体外OGD模型

模仿SCI条件在体外,OGD模型(29日,30.]。SCMECs洗在PBS,取而代之的是glucose-free介质(rpmi - 1640没有的边后卫)。SCMECs被转移到一个缺氧室(BioSpherix Lacona,纽约),包含94% N₂,5%的公司₂,1%的人啊₂7小时。终止OGD SCMECs被安置在介质(EGM-2 5%的边后卫,青霉素链霉素1%和1%)包括STS在不同浓度(1μ米,3μ10 M,μ米)和孵化37°C, 5%的公司₂孵化器。SCMECs没有接触OGD被用作控制。RO4929097 (1μ米)是用作Notch信号通路的抑制剂。

2.5。细胞生存能力

细胞生存能力是衡量使用WST-1试验[31日]。简而言之,SCMECs被添加到96孔板的密度 /好。SCMECs治疗与不同浓度的STS (1μ米,3μ10 M,μ米)24小时或处理各种浓度的STS (1μ米,3μ10 M,μ后24 h OGD M)。孵化后,10μl WST-1的解决方案是添加到板为2 h 37°C。标仪(美国Bio-Rad)被用来分析吸收波长450纳米。所有的实验都是在生物一式三份。

2.6。管的形成

SCMECs被播种在基底膜基质基底膜基质(美国CA BD)检查管形成。基底膜基质(50μl)添加到每个中心的96孔板。板当时允许固化为30分钟37°C。与STS接触OGD和孵化后24 h, 细胞/被镀成管。细胞被允许孵化为一个适当的时间37°C(5%股份有限公司₂)。照片是获得使用一个倒置显微镜(200 x)。连接的数量和使用ImageJ管的总长度计算。

2.7。迁移分析

SCMECs的迁移是评估使用transwell插入钱伯斯(美国BD)包含一个聚碳酸酯过滤膜8μ孔隙大小。与STS接触OGD和孵化后24 h,细胞密度调整 细胞/毫升EGM-2补充1%的边后卫。transwell试验,200年μl细胞被播种到参议院,在那里EGM-2补充5%的边后卫是添加到众议院。24小时的潜伏期后,细胞迁移的多聚甲醛固定30分钟和结晶紫染色4 h。细胞在参议院被使用cotton-tipped拭子。照片是获得使用光学显微镜(100 x)和迁移的细胞数和平均在5个随机视觉领域。

2.8。抓伤口愈合

SCMECs被添加进6-well板的密度 细胞每口井。与STS接触OGD和孵化后24 h,轻轻刮伤是使用200年创建μl无菌吸管在一层均匀的细胞。细胞也被冲洗PBS清除残骸和漂浮的细胞。伤口愈合被拍到在0、12和24小时使用一个倒置显微镜在同一地区。所有的实验都是在生物一式三份。

2.9。测定炎症介质

根据制造商提供的说明,il - 6的浓度,TNF -α,il - 1β在文化媒体测量使用商用ELISA试剂盒(南京凯基生物生物技术有限公司,南京,中国)。

2.10。动物保健和SCI模型的建立和实验小组

健康成年雄性C57BL / 6小鼠获得广东省医学实验动物中心(佛山,中国,证书No.44007200047868)和安置在严格控制的环境条件与12:12光/暗周期 和 相对湿度和免费的食物和水。机构批准的所有动物实验动物保健和使用委员会执行的广州中医药大学,根据“国家卫生研究院的指导实验室动物保健和使用”。

共有30只成年雄性C57BL / 6小鼠(20 - 25克)被随机分为3组( 每组)包括sham-operated SCI模型,STS-treated组。艾伦的方法用于建立SCI模型与一个温和的挫伤,根据以往的方法(32]。老鼠用戊巴比妥钠麻醉(30毫克/公斤,i.p)。脊髓受到通过T9-T10椎板切除术在无菌条件下,后跟一个挫伤的冲击速度0.5米/秒,0.6毫米,深度和持续时间80毫秒。SCI模型的成功建立观察了脊髓拥堵,腿摇摆,尾巴摆动反射,而缓慢的瘫痪。接下来,膀胱是手动压一天两次。STS(溶于生理盐水,20毫克/公斤)是通过腹腔内注射接种2 h SCI后一天一次一个星期。类似的方法应用到车辆组。治疗后,小鼠牺牲用戊巴比妥钠(80毫克/公斤,i.p。)和脊髓(5毫米的脊髓病变部位集中在)提取并存储在-80°C免疫荧光和免疫印迹实验与多聚甲醛灌注或组织病理学评价())和尼氏小染色。这项研究的详细的实验设计是补充材料(图所示1)。

2.11。功能范围

低音部,比蒂,Bresnahan (BBB)规模,衡量运动能力4分钟根据不同标准21下肢的运动,被用来评估功能恢复1,3,5,7、14、21日和28天post-SCI [33,34]。两个训练有素的调查员蒙蔽实验条件分析了规模,和最终的分数平均为每个组。

2.12。他走时和尼氏小染色

石蜡切片(5μ米厚度)deparaffinized使用二甲苯和接受)和尼氏小染色根据制造商提供的说明(35]。使用光学显微镜照片拍摄(德国徕卡)。受伤神经元数,灰质的组织病理学改变是6个量表上得分)染色 , 包含5 - 10嗜酸性神经元, 包含> 10嗜酸性神经元, 灰质面积梗死, - - - - - -1/2的灰质区域梗死 灰质面积梗死[36]。组织学检查都是盲目地执行。

雷克斯的灰质板系统是用于分类和计数神经元尼氏小染色(37]。病理评分计算所有部分从单一的平均每个动物的脊髓。组织学检查都是盲目地执行。

2.13。BSCB渗透率

伊文思蓝染料(阿拉丁,中国)泄漏评估分析的渗透性BSCB [38,39]。总共2毫升2%伊文思蓝染料混合在盐水由静脉注射在SCI后7天。三小时后,小鼠麻醉和PBS和4%多聚甲醛灌注intracardiacally直到伊文思蓝染料没有跑出右心房。总值的定性检查伊文思蓝外渗、照片视图改变被观察整个脊髓。此外,paraformaldehyde-fixed脊髓被切割的厚度20μm。伊文思蓝的相对荧光强度测量使用荧光显微镜(日本奥林巴斯)。相对荧光强度使用ImageJ量化。

2.14。免疫荧光

Ten-micrometer-thick横向冰冻切片在室温下加热30分钟,特里同x - 100 permeabilized使用0.3%,封锁在5%正常山羊血清在PBS稀释1小时。接下来,在4°C片在一夜之间被孵化主要抗体针对vWF(1: 200年,圣克鲁斯生物技术)或NeuN(1: 300年,Abcam)。脊髓随后被孵化在二级抗体fluorescein-conjugated 1 h在室温下。核用DAPI染色,荧光显微镜(日本奥林巴斯)被用来分析结果。

2.15。西方墨点法

免疫印迹实验根据先前的研究40]。简单地说,蛋白质(50μg)加载到10% sds - page凝胶和electrotransferred聚乙二烯二氟化物膜(美国微孔)。一夜之间,膜被孵化在4°C主要抗体识别Jagged-1(1: 1000年,细胞信号技术),notch 1(1: 1000年,细胞信号技术),Hes-1(1: 1000年,细胞信号技术)、CD31(1: 1000稀释,Abcam) zonula occludens-1 (ZO-1)(1: 1000稀释,Abcam)和vWF(1: 500年,圣克鲁斯生物技术)。膜在TBS洗和孵化在二级抗体结合辣根过氧化物酶(合)(1:1000年,细胞信号技术)在室温下2 h。GAPDH(1: 1000稀释,Abcam)作为内生加载控制。ImageQuant LAS 4000迷你检测系统(通用电气医疗集团,白金汉郡,英国)是用于量化光密度分析、和ImageJ软件(National Institutes of Health),马里兰州贝塞斯达)是用于分析的结果。

2.16。统计分析

所有的数据提出的 。使用SPSS 24.0统计分析软件SPSS Inc .)、美国)。学生的 - - - - - -(正态分布)或Mann-Whitney测试测试(非正态的分布)是用来确定两组之间的差异,和单向方差分析(正态分布)或克鲁斯卡尔-沃利斯(非正态分布)测试随后Bonferroni或者邓恩事后测试进行比较三个或更多组。值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。表征SCMECs

扩散SCMECs隔绝船只在图中进行了描述2(一个)。CD31免疫荧光分析显示,SCMEC标记和vWF表达。然而,外膜细胞标记NG-2和星形胶质细胞制造商GFAP表达(图2 (b))。这些结果表明,没有周或星形胶质细胞混合SCMEC文化。

3.2。STS改善下SCMECs OGD的生存

首先,细胞毒性SCMECs处理STS在不同浓度(1μ米,3μ10 M,μM) 24小时使用WST-1试验测定。如图1 (b),没有显著增加细胞毒性与STS SCMECs治疗与对照组相比。然后,我们研究了STS的保护作用SCMECs暴露OGD。STS (3μ米)显著提高SCMEC存活率(图1 (c)OGD组相比)。

3.3。STS促进管在SCMECs OGD形成

基底膜基质血管生成(管形成能力)试验是用来说明是否STS促进管在SCMECs OGD形成。有一个减少的数量后OGD管状结构,在STS治疗有效提升管形成。RO4929097、切口信号传导抑制剂显著封锁了STS管形成(图的保护作用3(一个))。

3.4。STS增强SCMECs暴露OGD的迁移

迁移是内皮细胞的血管生成的重要一步。伤口愈合,transwell分析被用来评估SCMECs的迁移后与STS OGD治疗。transwell化验,迁移的数量SCMECs OGD后显著降低,在治疗STS增加移植相比,OGD组(图3 (b))。类似的结果也观察伤口愈合化验。如图4,SCMECs STS迅速迁移到受伤部位后12 h和24 h后,OGD组相比。此外,RO4929097部分屏蔽的迁移SCMECs处理STS中观察伤口愈合划痕和transwell化验。

3.5。后SCMECs OGD STS减少炎症介质

探讨STS的抗炎作用与OGD SCMECs, il - 6的浓度,TNF -α,il - 1β在文化媒体测量。如图5OGD组相比,表达水平的il - 6、TNF -α,il - 1β与STS治疗后明显下降,RO4929097屏蔽了这些影响。这些结果表明,STS发挥抗炎功能对抗OGD SCMECs。

3.6。STS发挥保护作用后SCMECs OGD Notch信号

调查Notch信号通路是否参与STS的保护作用与OGD SCMECs, Jagged-1的表达水平,Notch 1, Hes-1蛋白进行了分析。表达水平的Jagged-1、Hes-1 notch 1 OGD组明显减少。然而,这种效应显著逆转时处理STS(图6)。此外,RO4929097屏蔽保护作用观察对抗OGD SCMECs STS对待时。

3.7。STS减轻组织病理学损伤和改善SCI后功能恢复

探讨STS在组织病理学损伤的保护作用,他走时染色被用来评估组织病理学改变。染色(图7 (b)SCI(后)揭示了重要的组织病理学变化 )而虚假的集团。这些组织病理学变化包括弥漫性出血,水肿,充血,嗜中性粒细胞浸润和神经,破坏。然而,STS治疗后,这些影响是减毒( )。评估功能恢复,BBB评分。如图7 (d)SCI组相比,BBB评分显著增加在SCI + STS组在14、21、28天。这些结果表明,STS减轻组织病理学损伤和改善SCI后功能恢复。

3.8。STS抑制BSCB SCI后渗透率和增加紧密连接蛋白

伊文思蓝试验被用来确定STS影响BSCB渗透率损伤后7天。如图8(一个)、高渗透区域科学组相比,虚假的组。治疗后与STS,渗透面积显著抑制。与此同时,伊文思蓝染料的荧光强度外渗也评估表明,STS治疗显著降低染料的荧光强度外渗后7天受伤SCI集团(数据相比8 (b)和8 (c))。

紧密连接蛋白结构蛋白在BSCB至关重要。进一步评估BSCB STS的保护效应,分析了ZO-1的表达蛋白免疫印迹。如图8SCI组相比,(d)的表达ZO-1在SCI + STS组显著增加。这些结果说明STS阻止BSCB破坏和保护的完整性BSCB SCI后功能。

3.9。STS SCI后微血管救援

内皮标记蛋白质vWF和CD31免疫荧光和免疫印迹分析。如图9(一个)vWF的荧光强度标记的抗体较低的SCI组相比,虚假的组。显著增加的比例与STS vWF-labeled血管治疗后观察。此外,STS治疗显著增加vWF的表达和CD31蛋白质损伤相比,SCI后7天组(图9 (b))。

3.10。STS保护SCI后运动神经元

确认是否存在神经保护作用的STS SCI后,我们评估了神经元标记NeuN和尼氏小染色损伤后7天。如图10(a),较低的运动神经元观察SCI组相比,虚假的组。与STS治疗后,运动神经元的数量显著增加。尼氏小体的表达减少SCI组(虚假的( )对SCI ( )),结果逆转STS治疗(STS ( )对SCI ( ))(图10(b))。

3.11。STS对微循环的保护并通过Notch信号SCI后神经保护作用

确认是否STS SCI后微循环的保护和神经保护效应通过Notch信号被激活,Jagged-1的表达水平,Hes-1, Notch 1在损伤后脊髓组织分析了3天。如图11、蛋白质的表达Jagged-1、Hes-1 notch 1在SCI组显著降低。与STS治疗之后,这一效应显著逆转。

4所示。讨论

SCI导致不可逆的神经损伤,影响全球每年180000例(41]。有更多的SCI患者在中国与其他国家相比42]。最初的机械挫伤是SCI的主要原因,导致出血、缺血,障碍microhemodynamics以及BBB的破坏(43- - - - - -46]。此外,脊髓微循环中扮演一个重要的角色在维持正常功能的脊髓神经元,轴突,胶质细胞(9,10]。脊髓微循环也逐渐退化的关键因素和后续功能损伤后SCI (45,47,48]。

钠Tanshinone花絮silate (STS)是一种水溶性的导数Tanshinone花絮在微循环中发挥作用。许多研究表明Tanshinone花絮展品抗血管新生的影响在正常或杂草丛生的条件,如肿瘤。李等人。49)报道,Tanshinone花絮抑制血管生成VEGF-induced管形成人类内皮祖细胞。蔡et al。50]表明Tanshinone花絮”通过反血管增生抑制癌症发展和肿瘤血管生成的影响。然而,在缺血再灌注损伤,Tanshinone花絮改善缺血后血管生成和微循环,促进经济复苏51- - - - - -53]。

在这项研究中,我们发现STS治疗改善后OGD SCMEC功能在体外。OGD条件下,STS治疗显著降低炎症介质(il - 6、TNF -α,il - 1β),改善生存、提升管的形成和增强SCMECs的迁移能力。同时,类似的保护微循环效果演示与STS在治疗后在活的有机体内SCI模型。与STS SCI和治疗后,组织病理学损伤松了一口气,BSCB渗透率是抑制,微血管获救,运动神经元的保护,提高功能恢复。此外,Notch信号通路被发现参与这些过程在体外和在活的有机体内。这是第一个研究说明,STS对SCI通过Notch信号通路有保护效应。

OGD模型模拟缺血在体外并广泛应用于研究大脑和脊髓损伤(54- - - - - -56]。因此,OGD模型用于这项研究确定STS能够保护SCMEC SCI复苏的关键功能。我们表明,OGD显著降低SCMECs生存能力和功能,这是与其他研究结果一致28,57- - - - - -59]。然而,STS治疗逆转这些影响和表明STS保护SCMEC功能。与此同时,许多研究报道,炎症是第二个主要组件影响SCMEC函数和BSCB完整性(60,61年]。炎症介质白介素、肿瘤坏死因子-α,il - 1β可以招募炎症细胞通过损坏BSCB侵入中枢神经系统。因此,我们测量炎症介质(il - 6、TNF -α,il - 1β)在体外,结果表明,il - 6的表达水平,TNF -α,il - 1β当暴露在STS明显减少。

血液vessel-specific标记CD31和vWF反映血管结构和功能38,39]。SCI后,脊髓修复和重建需要血管供给营养和氧气(62年- - - - - -64年]。与先前的研究一致的(38,39),减少血管区域和低水平的CD31和vWF SCI中观察到的老鼠。STS治疗显著增加血管面积和CD31 vWF蛋白质水平。这些发现说明,STS改善血管生成。

BSCB限制血细胞和血浆成分进入脊髓保护中枢神经系统(65年,66年]。当BSCB中断,毒害神经的产品和免疫细胞渗透到受伤的实质造成二次伤害(13- - - - - -15]。因此,我们评估了BSCB SCI老鼠处理STS或车辆。BSCB更大的渗透伊文思蓝区SCI后,之前所示(38,39,67年,68年]。此外,这是与STS治疗逆转。类似的结果显示伊文思蓝染料的荧光强度外渗。紧密连接蛋白位于interendothelial周围空间,密封BSCB [69年]。紧密连接蛋白的破坏可能导致BSCB渗透率在SCI (60]。ZO-1细胞质紧密连接蛋白,在紧密连接蛋白维护中起着重要的作用,形成70年]。在这项研究中,ZO-1表达式是STS治疗后显著增加。完全,这表明STS保护BSCB完整性、SCI后最终保护中枢神经系统。

此外,神经保护效应在SCI STS治疗小鼠衡量分析NeuN蛋白质的表达和尼氏小体在脊髓组织。我们发现NeuN-positive STS治疗后神经细胞和尼氏小体增加,这是符合更大血管面积与STS治疗如图所示。这些研究结果提供的证据表明,增加血管有益影响神经元生存。

Notch信号通路的关键细胞分化,增殖和凋亡71年- - - - - -73年]。有四个级距受体(Notch1-4)可以激活一种膜结合配体(2 / delta-like-1 Jagged-1, 3、4)。通路被激活时,切口胞内域研究所把毛的核和调节基因表达和增强剂的分离(他)和Hairy-related(嘿)家庭成员74年]。大量的研究表明,通过动脉或静脉切口激活调节血管生成规范,血管生成重构,和内皮细胞分化[75年,76年]。一组(77年)表明,缺口配体Jagged-1 (Jag1)出现在内皮细胞对邻近血管平滑肌分化至关重要。另一组(78年]表明Notch1 SCI后增加的表达,调节时,用药物治疗。在这项研究中,水平的notch 1, Hes-1, Jagged-1蛋白质在STS明显高于治疗组相比,科学组手术后3天。这些发现表明,缺口在改善血管生成信号通路起着重要的作用。此外,Notch 1的水平,Jagged-1 Hes-1蛋白质减少后OGD曝光,由STS逆转,证明了Notch信号对SCMECs有保护作用在体外。进一步了解Notch通路参与了这一过程,RO4929097 Notch信号通路的抑制剂,用于人类临床试验(79年),研究表明,STS的保护作用是相反的。

总之,本研究发现STS改善微循环在体外和在活的有机体内通过切口信号通路的激活。这些影响进一步发挥神经保护SCI小鼠模型。这是第一个报告证明STS保护微循环在SCI的情况下,表明STS可能是一个潜在的治疗。

缩写

BBB:	血脑屏障
BSCB:	血脊髓屏障
中枢神经系统:	中枢神经系统
EGM-2:	内皮生长介质2
的边后卫:	胎牛血清
他:	组织病理学评价
他:	毛和增强剂
嗨:	Hairy-related
镍镉:	切口胞内域
OGD:	Oxygen-glucose剥夺
PBS:	磷酸盐
PFA:	多聚甲醛
科学:	脊髓损伤
SCMECs:	脊髓内皮细胞
STS:	钠Tanshinone花絮silate
vWF:	血管性血友病因子
ZO-1:	Zonula occludens-1。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

邢李和丹罗的贡献同样本文。王Dingkun林和Le同样支持这个项目。邢李和丹罗的贡献同样这项工作。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(81673992),广东省自然科学基金(2020号a1515011349),和中国博士后科学基金会(2019号m662876)。

补充材料

辅料的简洁描述:图1 s:体内实验协议的原理图。如这个图所示,不同的实验测量了在不同时间点(28天)。实验方法的细节参考材料和方法。(补充材料)

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