文摘

Ferroptosis是最近发现iron-dependent氧化程序性细胞死亡形式有别于caspase-dependent细胞凋亡。在这项研究中,我们调查的影响ferroptosis neomycin-induced毛细胞损失通过选择性ferroptosis抑制剂liproxstatin-1 (Lip-1)。细胞生存能力被CCK8试验确定。活性氧(ROS)水平测定DCFH-DA和cellROX绿色染色。线粒体膜电位( )被TMRM染色评估。发现了细胞内铁和脂质过氧化物和Mito-FerroGreen Liperfluo调查。我们发现两HEI-OC1 ferroptosis可以诱导细胞和新生小鼠耳蜗外植体,就是明证Mito-FerroGreen Liperfluo染色。进一步的实验表明,预处理与Lip-1显著缓解neomycin-induced增加活性氧生成和中断在HEI-OC1细胞。并行,Lip-1显著减毒neomycin-induced新生小鼠耳蜗毛细胞损伤的外植体。总的来说,这些结果显示一个新颖的机制neomycin-induced耳毒性和表明ferroptosis抑制可能是一个新的临床干预以防止听力损失。

1。介绍

听力损失可能是由于耳毒性的医药代理,过量的噪音、遗传疾病和衰老。氨基糖苷类抗生素是一个最大的类有价值的临床药物毒性副作用(1,2]。脊椎动物的毛细胞可以再生相同,这样耳毒性的损害不是永久的在这些类群,而毒性药物会导致不可逆转的损害哺乳动物内耳中的毛细胞导致听力丧失。关键的机制负责aminoglycoside-induced耳毒性氧化应激(3]。生产过剩的活性氧(ROS)造成氧化应激了活性氧防御和扰乱氧化还原平衡,触发线粒体去极化,激活caspase-3,最终导致毛细胞损伤(1,4]。然而,这种机制不是专门负责aminoglycoside-induced头发细胞死亡(5- - - - - -7]。因此,更好的理解机制aminoglycoside-induced耳毒性的关键是开发一个新的有前途的治疗策略,防止听力损失。

Ferroptosis是最近发现的小说类型的iron-dependent程序性细胞死亡的特征是细胞内活性氧的生产过剩和脂质过氧化反应,但独立于caspase-mediated细胞死亡,自噬,坏死(8,9]。多个抗病诱导剂、监管机构和ferroptosis抑制剂已被证明在iron-dependent调节活性氧的积累方式(10]。已知的抗病诱导剂ferroptosis可以分为两类:类1 ferroptosis抗病诱导剂,包括erastin、柳氮磺胺吡啶,索拉非尼,可以触发ferroptotic X细胞死亡通过抑制系统的活动_c⁻,谷氨酸/胱氨酸逆向转运,从而导致细胞内谷胱甘肽(GSH)的损耗,主要细胞抗氧化,并导致失活的谷胱甘肽peroxidase-4 (GPX4),一个氢过氧化脂质所需的解毒酶清除内源性脂质ROS (8,10,11];二班ferroptosis诱导物,包括Ras-selective致命3 (RSL3)和FIN56,可直接抑制GPX4没有耗尽谷胱甘肽(8,10,11]。失去GPX4活动诱发脂质ROS overaccumulation并最终导致细胞死亡(10,11]。此外,几个小分子化合物被确定作为ferroptosis的抑制剂,包括Lip-1 ferroptosis抑制剂和脂质活性氧清除剂、去铁胺(柴油)、铁螯合剂,o₂,一个铁氧化抑制剂(8]。Ferroptosis已被确定在不同的病理过程,如缺血再灌注(I / R)损伤(12),急性肾损伤(13- - - - - -15),神经毒性(13),和癌症(12]。此外,最近的一份报告(12)建议ferroptosis与I / R损伤的病理机制有关,抑制剂对ischemia-reperfusion-induced glutaminolysis保护心脏的损伤,因此是一个潜在的治疗目标。然而,的具体分子机制诱导ferroptosis毛细胞生存仍未知。本研究的目的是探讨如果ferroptosis与aminoglycoside-induced HEI-OC1细胞系和耳毒性在体外新生小鼠耳蜗模型。

2。材料和方法

2.1。HEI-OC1细胞培养

众议院耳朵Institute-Organ螺旋器1 (HEI-OC1)细胞株是一种广泛使用的听觉HC线(16- - - - - -20.]。细胞培养在high-glucose DMEM(美国Gibco BRL,马里兰州)补充5%的边后卫(Gibco BRL)在可接受的条件下(33°C, 5%的公司₂)。

2.2。产后耳蜗移植组织

动物实验是医学实验动物管理委员会批准的上海。Cochleae C57BL / 6小鼠在产后2天(P)解剖在磷酸盐(PBS)。耳蜗外植体是坚持一个玻璃盖玻片涂Cell-Tak (BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)。耳蜗移植组织孵化在DMEM / F12培养基补充与N2 / B27(表达载体)和氨苄青霉素在37°C公司5%₂每个治疗前一夜之间/ 95%空气气氛。

2.3。药物治疗

酰胺RSL3 Lip-1,防治作用,z-VAD-FMK从Selleck购买化学品(休斯顿,德克萨斯州)和最初在DMSO溶液溶解和稀释培养基(DMEM补充5%的边后卫)最终浓度。新霉素是购自Sigma-Aldrich(圣路易斯,美国)。

2.4。细胞生存能力

细胞计数Kit-8 (CCK8)是用于检查细胞生存能力根据制造商的指示。总之,HEI-OC1细胞被播种密度5000细胞/ 96 -孔板在一夜之间三个复制和孵化。治疗后,CCK8(美国圣路易斯σ)添加到每个4 h。光密度(OD)测量值在450 nm使用板读者(Bio-Rad)。

2.5。膜联蛋白V-FITC /π化验

膜联蛋白V-FITC和propidium碘(PI)试验检测通过流式细胞术使用膜联蛋白V-FITC /π(美国新泽西州BD生物科学,皮斯卡塔韦)根据制造商的指示。是通过离心收集细胞 5分钟和resuspended轻轻1 x绑定缓冲的浓度 细胞/毫升。膜联蛋白V-FITC (5μl)和π(5μ轻轻l)与细胞悬液混合和孵化在黑暗中在室温下15分钟。这些细胞被立即通过流式细胞术分析。

2.6。ROS化验

ROS生产检测用cellROX绿色试剂(美国生活技术分子探针)和DCFH-DA(美国分子探针)。我们跟着他的方法等。21]。短暂治疗后,细胞被洗prewarmed PBS和沾染了5μM cellROX绿色或50μM DCFH-DA 30分钟或10分钟,分别和赫斯特(1μg / ml)为15分钟37°C。使用荧光显微镜荧光被观察到。所有图片是代表三个独立的实验。

2.7。线粒体跨膜电位测量

线粒体膜电位( )被TMRM估计(分子探针、表达载体、英国)染色。样本处理指定的条件,然后用20 nM TMRM孵化为30分钟37°C。

2.8。线粒体形态分析

线粒体形态测量20 nM MitoTracker绿色调频探针(分子探针、表达载体、英国),根据制造商的指示。简单,细胞被沾染了MitoTracker绿色30分钟和赫斯特(1μg / ml)为15分钟37°C。

2.9。铁染色

在线粒体铁标签,样品与Mito-FerroGreen孵化(Dojindo、熊本、日本)按照制造商的指示。简单地说,样本与无血清DMEM洗两次。Mito-FerroGreen刚在DMSO溶液溶解,添加在最后一集中5μm .样本孵化与试剂为30分钟37°C。

2.10。脂质过氧化的测量

检测脂质过氧化物,样本暴露为30分钟37°C Liperfluo (Dojindo、熊本、日本)的最终浓度5μ按照制造商的指示。

2.11。TUNEL分析

TUNEL分析确定原位电池检测设备(美国新泽西州罗氏,新泽西州)根据制造商的指示。简单,细胞与TUNEL染色反应混合物在37°C 30分钟在潮湿的气氛中。

2.12。免疫荧光

Cochleae固定在4%多聚甲醛(PFA)冲洗三次与PBS permeabilized PBS Triton x - 100 1% (PBST)在室温下30分钟。Permeabilized外植体被封锁在PBST驴10%血清1 h与anti-myosin 7其次是孵化一个抗体(美国普罗透斯生物科学,雷蒙娜,CA), anti-cleaved caspase-3抗体(细胞信号技术,Inc .,丹弗斯,妈,美国),和anti-parvalbumin抗体(Abcam、剑桥、马、美国)一夜之间在4°C。外植体被洗了三次PBS和孵化与二次荧光抗体在黑暗中1 h在37°C。核与DAPI标记10分钟在室温下,样本和可视化在徕卡SP8共焦荧光显微镜(Biberach徕卡微系统公司、德国)。

2.13。免疫印迹分析

Cochleae与冷•瑞帕裂解缓冲+ PMSF细胞溶解。等量的蛋白质样本通过12% sds - page分离和转移到PVDF膜(Immobilon-P,微孔、Schaffhausen、瑞士)。与5%的脱脂牛奶1 h,阻塞后细胞膜与anti-GPX4探测(Abcam 1: 1000年,剑桥,妈,美国)和anti-GAPDH一夜之间(1:4000)在4°C。蛋白质乐队使用化学发光检测解决方案,ECL工具包(美国微孔)。每个实验重复三次,蛋白表达是GAPDH的规范化。

2.14。细胞计数

毛细胞贴上肌凝蛋白7被认为是幸存的毛细胞。整个耳蜗毛细胞量化,我们成像使用×40蔡司显微镜镜头,使用ImageJ软件量化肌凝蛋白7阳性细胞。毛细胞每200的平均数量μ米在中间的耳蜗从每组计算。耳蜗的确切数字外植体( )所示的传说。

2.15。统计分析

统计分析使用GraphPad棱镜统计软件(版本6,GraphPad软件公司,圣地亚哥,CA)。对比分析了两组未配对的学生 - - - - - -由单向方差分析测试和对比多个组。一个值< 0.05,对于所有的测试被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。Ferroptosis HEI-OC1中可以诱导细胞

在HEI-OC1测试ferroptosis是否诱导细胞,24小时HEI-OC1细胞培养开始后,我们与RSL3取代新鲜的培养基中,ferroptosis诱导物,增加浓度为12 h, 24小时和48小时(数字1(一)- - - - - -1 (c))。与RSL3 CCK8化验显示,治疗浓度大于3μM 24 h显著降低细胞生存能力~ 50%参与;因此,RSL3浓度3μ米被用于后续的实验。来确定抑制剂ferroptosis可以保护HEI-OC1 RSL3-induced细胞死亡的细胞,细胞cotreated Lip-1浓度(0),2、5、8、10μ米24 h。我们观察到的一个重要保护作用Lip-1 5以上μ米,而文化对待RSL3(图1 (d))。

3.2。Lip-1保护对新霉素HEI-OC1细胞损伤的可行性

HEI-OC1细胞第一次接触浓度增加新霉素(0、2、4、6、8或10毫米)(17,22)三个不同的时间(12小时、24小时和48 h)确定最优在体外新霉素耳毒性模型。如图2,新霉素显著减少剂量的细胞生存能力和时间的方式(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。基于细胞生存能力数据,我们选择了10毫米新霉素治疗24小时作为一个适当的条件HEI-OC1细胞损伤研究新霉素耳毒性,为生存能力明显下降到~ 50%参与对照组。为了测试如果Lip-1能够保护HEI-OC1细胞neomycin-induced耳毒性,这些细胞被cotreated Lip-1和新霉素。使用CCK8分析,我们证实,细胞生存能力的Lip-1确实明显高于没有Lip-1(图2 (d))。基于这些数据,我们选择了5μM Lip-1作为后续实验的最佳浓度。接下来,探讨是否Lip-1部分是由于细胞凋亡的保护机制,我们测量通过流式细胞术HEI-OC1细胞的凋亡率。结果表明,死亡,凋亡细胞的比例明显增加新霉素组与对照组相比。Lip-1显著减少细胞死亡,而没有显著的影响在减少凋亡细胞(补充图。1得了)。此外,Lip-1减少引起的细胞死亡新霉素衡量TUNEL标记(补充图。1 d和E)。

Mito-FerroGreen,小说mitochondria-targeted荧光探针检测的亚铁离子(Fe^{2 +})在活细胞线粒体和Liperfluo,荧光探针检测脂质过氧化物,用于监控ferroptosis。如图3、新霉素暴露诱导细胞内铁的增加^{2 +}和脂质过氧化作用可显著降低Lip-1 cotreatment(图3)。这些发现表明,抑制ferroptosis能够改善neomycin-induced HEI-OC1细胞受损。

3.3。Lip-1减轻Neomycin-Induced ROS生成

确认是否Lip-1与ROS生成活性氧产量被免疫荧光和流量测量仪分析DCFH-DA HEI-OC1细胞染色。我们发现DCFH-DA强度显著增加在新霉素治疗组与控制相比,表明新霉素损伤诱导生产过剩的活性氧(数字4(一)和4 (c))。相比之下,DCFH-DA强度显著降低在Lip-1 cotreatment组与新霉素相比只有组(数字4 (d)- - - - - -4 (f))。此外,生产使用活性氧ROS也可以检查指标染料cellROX绿色标签的一系列细胞内的隔间。免疫荧光法和流式细胞术结果显示cellROX信号显著增加在新霉素治疗组与未损坏的控件(数字4 (g)和4(我)),cotreatment新霉素和Lip-1显著减毒cellROX HEI-OC1细胞荧光与新霉素独自(数字4 (j)- - - - - -4(左))。新霉素也增加了活性氧积累时间的方式;相比之下,Lip-1治疗显著地抑制neomycin-induced ROS生成的细胞HEI-OC1(补充图。2)。这些结果表明Lip-1显著缓解neomycin-induced生产过剩的活性氧HEI-OC1细胞,这可能有助于改善细胞的观察能力。

3.4。Lip-1减轻Neomycin-Induced线粒体功能障碍

接下来,为了评估是否Lip-1提供保护对新霉素治疗减轻线粒体功能障碍,我们测量了线粒体膜电位( )由TMRM荧光染色分析。与未经处理的控制相比,TMRM荧光强度明显下降后新霉素曝光(图5(一个)和5 (c))。相比之下,Lip-1 cotreatment很大程度上阻止neomycin-induced线粒体功能障碍(数字5 (d)- - - - - -5 (f))。观察TMRM强度无显著差异仅在细胞接受Lip-1(图5 (b))。总的来说,这些结果表明,Lip-1可以减轻新霉素exposure-induced线粒体功能障碍。

3.5。Lip-1保留线粒体形态Neomycin-Treated HEI-OC1细胞

此外,mitochondrion-specific染料MitoTracker绿色标签是用来专门HEI-OC1细胞的线粒体(补充图。3)。我们的研究结果表明,纤维状的线粒体减少,而点状的线粒体在neomycin-treated细胞增加,由Lip-1明显恢复(补充图。3)。这些结果表明,Lip-1能够保护线粒体形态。

3.6。Lip-1保护小鼠耳蜗毛细胞对Neomycin-Induced损伤

为了评估ferroptosis是否有助于新霉素exposure-induced毛细胞损伤,耳蜗外植体处理1毫米新霉素6 h沾Mito-FerroGreen Liperfluo探针。如图6损伤控制相比,Mito-FerroGreen和Liperfluo信号与新霉素治疗后显著增加,这些增加明显抑制Lip-1 cotreatment(图6)。我们下一个调查是否对neomycin-induced Lip-1保护毛细胞损伤耳蜗外植体培养在断奶后(P) 2天老鼠。毛细胞与正常细胞核和肌凝蛋白7一个标记,一个特定的头发细胞标记(23,24),被认为是现存毛细胞计数。我们的研究结果表明,耳蜗外植体处理1毫米新霉素6 h显示广泛的变性高碳钢的耳蜗(数字7(一)和7 (c))。相比之下,cotreatment Lip-1和新霉素展出保护作用对neomycin-induced高碳钢(数据的损失7 (d)和7 (e))。耳蜗外植体处理Lip-1独自没有表现出任何损害高碳钢(图7 (b))。调查的机制在neomycin-treated Lip-1耳蜗移植组织的保护作用,我们检查GPX4的表达25]。结果表明,新霉素显著降低GPX4的表达与对照组相比,用免疫印迹分析。(补充图Lip-1治疗显著降低赤字。4)。

DCFH-DA和cellROX用于调查的影响Lip-1治疗后细胞内ROS水平耳蜗毛细胞新霉素治疗。免疫组织化学结果显示,ROS水平提高后新霉素曝光的控件(数据相比8(一个)- - - - - -8 (j)),Lip-1治疗显著降低ROS水平仅在耳蜗毛细胞与新霉素相比(数字8(一个)- - - - - -8 (j))。进一步确认是否铁失调与ROS生产和头发新霉素引起的细胞死亡,我们使用cellROX染色调查ferroptosis诱导物的影响RSL3 ROS的生产在耳蜗毛细胞新霉素治疗或没有(NAC)活性氧清除剂防治作用。免疫荧光结果显示RSL3治疗显著增强活性氧产量neomycin-damaged耳蜗毛细胞。尽管如此,活性氧抑制剂NAC治疗显著地抑制RSL3-induced ROS生成的细胞neomycin-damaged(补充图。5)。我们接下来用TMRM染色调查的影响Lip-1治疗后耳蜗毛细胞的线粒体功能新霉素曝光。我们的免疫组织化学结果显示,当治疗Lip-1, TMRM强度显著增加neomycin-damaged耳蜗毛细胞(数字8 (k)- - - - - -8 (o))。

调查是否减少细胞凋亡导致耳蜗毛细胞的敏感性降低新霉素损害Lip-1治疗后,我们对耳蜗毛细胞与Lip-1没有或存在z-VAD-FMK (pan-caspase抑制剂)。凋亡蛋白的表达裂解caspase-3耳蜗毛细胞的调节与免疫细胞化学检测时新霉素的挑战后,这种效应显著逆转了预处理和50μM z-VAD-FMK。相比之下,Lip-1剂量的5μ米没有显著影响的裂解caspases-3(图9)。值得注意的是,虽然小清蛋白的数量,一个特定的头发细胞标记(26,27),阳性毛细胞z-VAD-FMK预处理组相比增加新霉素治疗后耳蜗移植组织暴露于新霉素没有z-VAD-FMK预处理,更在耳蜗毛细胞观察外植体比人工耳蜗使用Lip-1外植体用z-VAD-FMK预处理。总的来说,这些发现表明ferroptosis和细胞凋亡导致细胞死亡引起的耳蜗毛细胞新霉素,但Lip-1-mediated毛细胞保护是半胱天冬酶独立,至少在我们的实验条件。

4所示。讨论

氨基甙类抗生素广泛应用于治疗严重感染;然而,耳毒性是一个严重的副作用患者(28]。减少这种aminoglycoside-induced耳毒性的影响对听力的研究是一个重要的问题。目前的研究提供了证据表明ferroptosis抑制可能作为新目标以减少aminoglycoside-induced耳毒性。

Ferroptosis是一种新发现的iron-dependent细胞程序性死亡的特征是细胞内活性氧的生产过剩和脂质过氧化反应,但独立于caspase-mediated细胞死亡(9]。近年来,积累研究报道ferroptosis发生在多种病理情况下,如神经退行性疾病(13]。先前的研究已经提出了一个新颖的机制氨基糖苷类耳毒性,是基于观测的铁螯合和自由基生成(29日- - - - - -31日),这表明氨基糖苷类庆大霉素是一个铁螯合剂,iron-aminoglycoside复杂的形成是一个初步介入自由基生成和随后的头发细胞死亡。此外,歌曲和沙赫特(32)表明,铁螯合剂的效率比各种激进的食腐动物衰减gentamicin-induced听力损失在活的有机体内在豚鼠。铁螯合剂的事实去铁胺有效减另一个氨基糖苷类neomycin-induced听力损失进一步证实,铁可用性的确是一个关键因素在氨基糖苷类耳毒性(33]。研究这种机制导致有前途的治疗预防aminoglycoside-induced使用耳毒性的铁螯合剂和激进的食腐动物。到目前为止,ferroptosis在aminoglycoside-induced耳毒性是未知的。由于活性氧积累与耳毒性病理生理学有关,我们推测ferroptosis可能是与aminoglycoside-induced耳毒性。

在这项研究中,我们发现RSL3治疗诱导细胞内铁的增加^{2 +}和脂质过氧化作用可显著减少治疗liproxstatin-1 (Lip-1),第一个在活的有机体内有效ferroptosis抑制剂,如使用Mito-FerroGreen和Liperfluo调查评估。因此,这些数据强烈表明,ferroptosis可以诱导HEI-OC1细胞。我们下一个ferroptosis和新霉素之间的相关性分析。我们发现头发细胞凋亡并不是唯一neomycin-induced损伤的类型。进一步的实验表明,ferroptosis发生在neomycin-damaged HEI-OC1细胞系和耳蜗毛细胞。治疗Lip-1可以挽救ferroptosis新霉素引起毛细胞,表明ferroptosis抑制剂可能成为新的治疗策略防止听力损失造成的氨基糖苷类耳毒性。

它已经表明,线粒体耳毒性的药物引起的耳毒性的主要角色(服务21,34]。例如,先前的研究表明,抑制PRMT6使用药物和基因干预明显阻止毛细胞氨基糖苷类和cisplatin-induced伤害减少ROS生成和保护线粒体功能的结果,支持这一概念,针对线粒体可能提高防范ototoxicity-induced听力损失(21]。在目前的研究中,观察到新霉素促进细胞死亡,ROS生产,和铁HEI-OC1细胞中积累,这是一致的与之前报道(21,34]。预处理与Lip-1显著降低neomycin-induced细胞死亡和ROS生产HEI-OC1细胞线粒体膜电位增加,暗示ferroptosis代表的核心机制aminoglycoside-induced耳毒性和ferroptosis抑制剂可以保护线粒体功能,从而减轻头发细胞死亡次要新霉素曝光。

普通ferroptotic机制源于系统X_c⁻抑制谷胱甘肽耗竭,GPX4失活,脂质过氧化反应,铁失调。GPX4是脂质修复酶,它可以降低磷脂氢过氧化物膜和脂蛋白和抑制ferroptosis的起始11,35]。失活的GPX4活动或退化GPX4诱发快速积累脂质过氧化物和导致ferroptosis,敲出GPX4 embryonically是致命的(10,36,37]。GPX4也已被证明能够防止细胞凋亡(38,39]和necroptosis [40),这表明它在细胞死亡中起着保护作用。减少谷胱甘肽,GPXs基底代数余子式,在抗氧化防御中发挥作用,谷胱甘肽/ GPX4轴的关键氧化还原的规定(10]。谷胱甘肽耗竭减少GPX4的活动,这是一个关键事件的上游线粒体功能障碍,导致ferroptosis [10,41]。进一步的研究需要分析这些潜在的时空分布模式ferroptosis监管机构通过使用适当的药物和基因抑制方法neomycin-triggered毛细胞损伤,如GPX4、谷胱甘肽,xCT。

更完整的分子机制neomycin-induced ferroptosis头发细胞需要进一步探索。先前的研究已经报道,增殖蛋白激酶(MAPK)和AKT通路被卷入erastin-induced ferroptosis在癌细胞41,42)和氧化应激的头发细胞损伤(43,44]。Erastin可以激活物和p38 MAPK信号通路和触发ferroptosis,抑制物和p38 MAPK激活显著降低erastin-induced细胞毒性,进一步证实MAPK的角色erastin-induced ferroptosis HL-60细胞(41,45]。MAPK信号也涉及OGD / R-induced ferroptosis塞尔托利氏细胞(46]。p38 MAPK的失活是证明防止OGD / R-induced细胞ferroptosis确认ferroptosis p38 MAPK的角色。然而,这些信号通路是否服务角色neomycin-induced ferroptosis毛细胞仍然是一个悬而未决的问题。此外,尽管ferroptosis有助于新霉素毛细胞的耳毒性,不能排除其他细胞死亡途径在这些化验。未来的研究将集中在如何ferroptosis交互与其他细胞死亡,如细胞凋亡、坏死,自噬,在分子水平上如何集成这些途径在毛细胞。

5。结论

总之,我们的研究结果显示,Lip-1保护毛细胞aminoglycoside-induced毒性损伤的抑制ferroptosis在养殖HEI-OC1细胞系和新生小鼠耳蜗移植模型。因此我们的研究结果表明,ferroptosis抑制衰减的可能的临床应用aminoglycoside-induced听力损失。进一步的研究扩展这些发现在活的有机体内小鼠模型利用多个耳毒性的代理需要提前ferroptosis抑制剂作为一个潜在的otoprotectant病人。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

瓦轴、DMT和LPZ进行了实验。瓦轴、西城、JHH和BH分析结果。GHN和YZH写的手稿。GHN YZH构思实验。所有作者阅读和批准最终的手稿。再次给郑Dongmei唐,力平赵贡献同样对这工作和co-first作者。

确认

这项工作是支持由中国国家自然科学基金(号。81870728,81970875,81800912),上海新星计划(19 qa1401800),广东省自然科学基金(2019 a1515011495),深圳市科技创新委员会(JCYJ20170413162242627、ZDSYS201707281114196和JCYJ20180508152528735),医学和三明项目在深圳(SZSM201612031)。

补充材料

补充图1:lip-1对neomycin-induced凋亡的影响inHEI-OCI细胞。补充图2:Lip-1减少neomycin-induced HEI-OCI细胞ROS生产时间的方式。补充图3:LIP-1对线粒体形态的影响在neomycin-damaged HEI-OC1细胞。补充图4:影响LIP-1 GPX4表达式在新霉素受损的耳蜗外植体。补充图5:RSL3对活性氧的生产的影响在耳蜗毛细胞新霉素有或没有NAC治疗。(补充材料)