Ocoxin调节癌症干细胞和M2巨噬细胞极化在胶质母细胞瘤

文摘

胶质母细胞瘤(GBM)是最常见的和毁灭性的原发性脑瘤。癌症干细胞的存在(二者)一直与他们的治疗抵抗。分子和细胞成分的肿瘤微环境也起到了重要的作用在这些肿瘤的侵犯。特别是,高水平的缺氧和活性氧参与GBM生物学的几个方面。此外,“绿带运动”含有大量的巨噬细胞,通常表现为免疫抑制tumor-supportive细胞。事实上,两个的存在,缺氧和M2-like巨噬细胞,与恶性肿瘤和神经胶质瘤预后不良。抗氧化剂代理,作为营养补充剂,可能有抗肿瘤活性。Ocoxin®口服溶液(OOS),特别是,有抗炎、抗氧化,以及抗肿瘤特性在一些肿瘤,没有已知的副作用。在这里,我们描述OOS如何影响干细胞属性在某些本,减缓肿瘤的生长。同时,对巨噬细胞极化OOS有着直接的影响在体外和在活的有机体内,抑制protumoral M2巨噬细胞的功能。因此,OOS可能是一个可行的候选人中使用联合疗法在治疗“绿带运动”,因为它可以目标高度弹性二者以及他们支持免疫微环境,在不增加毒性的常规治疗。

1。介绍

件(本研究)是最激进的形式主要的脑瘤。组织学特点是明显的肾小球内,异常的血管和坏死区域(1]。“绿带运动”的标准治疗包括最大安全手术切除其次是焦点,分次放疗、并发和辅助化疗结合DNA烷化剂temozolomide (TMZ) [2]。在任何情况下,预后依然严峻,只有不到10%的GBM患者诊断后存活5年,所以急需新型治疗方法。

GBM癌症干细胞(二者)能够自我更新、分化和增殖的整个体积肿瘤,和他们与治疗后肿瘤复发有关(3]。维护一个未分化状态的“绿带运动”二者似乎从他们的利基市场,由信号控制血管主要的区域和低氧区域(4,5]。自相矛盾的是,缺氧与增加活性氧(ROS) (6]。事实上,分子诱导内源性减少ROS水平最近与抑制CSC-like属性相关联的“绿带运动”(7,8]。

膳食补充剂(包括抗氧化剂)被广泛应用在癌症患者中,与潜在的抗癌和抗毒素的药物,减少副作用。而一些作者报道不良相互作用与传统疗法,其他人则提出了一个协同效应(9,10]。Ocoxin®口服溶液(OOS)是一种与公认的抗氧化营养增补剂,抗炎和免疫调节特性。解决方案是由等,绿茶提取物,glyzyrrhicic酸,和维生素C、B6和B12,经历了一个分子活化过程,提高他们的抗氧化和生物活动。这是通过结合两种产品,合成Viusid®和Ocoxin®。Viusid组件显示有利影响的病人患有慢性丙型肝炎和肝硬化,显示抗氧化和免疫调节作用[11,12]。OOS也被测试在一些癌症的临床试验,导致显著的改善患者的生活质量,更好的宽容传统疗法,和增加生存指数(13)(NCT01392131)。此外,OOS抗肿瘤效果验证在体外和在活的有机体内在临床前乳腺癌[14)和急性髓系白血病模型(15],发挥抑制作用的大肠癌肝转移癌(16,17]。在所有情况下,当管理的动物模型,OOS没有不利影响。事实上,它甚至改善整体健康状态的老鼠。

在这里,我们已经测试了OOS GBM模型的影响。我们使用主要的细胞系,来自患者样本。我们发现,OOS的双重作用,它减少了肿瘤生长在某些GBM CSC的调制特性,它显示了一个引人注目的能力抑制M2-like巨噬细胞极化,两者兼而有之在体外和肿瘤的环境。此外,预处理OOS减少protumoral M2巨噬细胞的功能。因此,OOS是个不错的候选人可以在GBM联合疗法治疗,特别是如果我们考虑它多年来一直销售没有任何副作用的报告。

2。材料和方法

2.1。“绿带运动”细胞培养

GBM1 (L0627)是由罗塞拉加利(圣拉斐尔科学研究所、意大利米兰);GBM2 (12 o15)和GBM3 (12 o01)被分离获得的人类GBM手术标本在医院治疗的患者12 de Octubre大学(马德里,西班牙)。我们得到来自病人的参与研究的知情同意。没有一个是18岁以下的。这项研究是批准执行,遵守医院的研究伦理委员会的指导12 de Octubre (CEI) 14/023。主要“绿带运动”在Neurobasal培养基培养细胞(表达载体)补充B27(1: 50,表达载体),Glutamax(1: 100年,表达载体),penicillin-streptomycin(1: 100年,Lonza), 0.4%肝素(Sigma-Aldrich), 40 ng / ml EGF (PeproTech)和20 ng / ml bFGF₂(PeproTech)后,通过酶解集使用Accumax(微孔),如前所述[18]。

2.2。“绿带运动”在体外化验

可行性分析,5000个细胞被播种一式三份96多井的井板涂层与基底膜基质(becton dickinson 15毫克/毫升原液稀释1:100年DMEM培养基(Lonza))。24小时后,细胞处理OOS(1: 100)(催化S.L.)和72 h(治疗后生存能力测量。,细胞被孵化与赫斯特33342年(1:200年,Sigma-Aldrich)和propidium碘(1:1000年,默克公司)和荧光测量在Cytell细胞成像系统(通用电气医疗集团生命科学)。井包含参与细胞被认为是100%为每个测试可行性细胞系。自我更新化验,GBM neurospheres被分解成单个细胞和镀在新鲜培养基在缺乏OOS克隆细胞密度为2.5 /μl一式三份的96 -多井板。24小时后,“绿带运动”细胞系处理OOS (1: 100)。自我更新的细胞的百分比确定6天治疗后通过计算个人neurospheres镀源于细胞的数量。参与细胞被用作控制。

2.3。巨噬细胞隔离和文化

腹膜巨噬细胞分离中描述(19]。总之,巨噬细胞隔离,2.5毫升的3%巯乙酸(Sigma-Aldrich)注入C57BL / 6小鼠腹膜。四天后,腹膜细胞收获和15000个细胞/被播种在96多井板的可行性和ROS化验。否则, 细胞/被播种在6-multiwell RNA隔离板。细胞培养在RPMI 1640(费舍尔科学)10%的heat-inactivated胎牛血清(的边后卫,费舍尔科学)和penicillin-streptomycin(1: 100年,Lonza)对3 h。的边后卫的数量被减少到2%的隔夜细胞饥饿。隔夜饥饿后,细胞治疗有或没有1:100 OOS,分化诱导物的存在:有限合伙人(200 ng / ml, InvivoGen) IL4 (20 ng / ml, PeproTech)或GBM1条件培养液(厘米,1:1)(72 h后获得孵化GBM1细胞neurosphere媒体)。控制细胞保持在2%的边后卫的媒介。24小时后,有限合伙人和IL4被移除,但OOS维护另一个24小时之前巨噬细胞分析。

2.4。巨噬细胞在体外化验

巨噬细胞生存能力评估使用AlamarBlue试剂(费舍尔科学)。试剂添加到媒体(1:10)和孵化有限公司4 h在37°C和5%₂,受光。样品测定的荧光(激发在560 nm,排放在600海里)200年无限PRO标(Tecan)。井只包含文化媒体用作背景控制所有的样品测量,和富国包含参与细胞被认为是100%的可行性。ROS测量是使用dihydroethidium执行(她)试剂(开曼化学)。她被添加到媒体(1:800)和孵化1 h在37°C和5%的公司₂,受光。样品测定的荧光Cytell细胞成像系统。井只包含文化媒体用作背景控制所有的样品测量,和富国含有活性氧参与细胞被认为是100%。coculture实验, 巨噬细胞每6-multiwell板被播种。隔夜饥饿后,细胞治疗有或没有1:100 OOS IL4的存在(20 ng / ml, PeproTech)。控制巨噬细胞保持在2%的边后卫的媒介。24小时后,IL4但OOS保持24小时删除。OOS去除后,巨噬细胞被洗和新鲜分离GBM1细胞(表达荧光素酶记者)(250000细胞)被添加的巨噬细胞(GBM媒体没有生长因子)。三天后,添加了荧光素(150μg / ml)和luminiscence测量在一个新设备(珀金埃尔默)。

2.5。鼠标异种移植化验

动物保健和实验过程进行按照欧盟和国家指南使用动物研究和综述了研究道德和动物福利委员会批准在我们机构(Instituto de Salud卡洛斯三世马德里)(PROEX 244/14)。异位和原位异种移植进行如前所述[20.]。异位异种移植, 细胞被resuspended与基底膜基质培养基(1:10,BD)然后皮下注入无胸腺的裸体Foxn1^ν老鼠(哈伦Iberica)。皮下肿瘤明显时(约4毫米直径),OOS或水口服接种小鼠(100μl /天,5天/周)。在治疗期间,肿瘤用测径规测量老鼠每周两次,直到牺牲。肿瘤体积计算为1/2(长×宽²)。计算相对肿瘤生长与肿瘤体积在治疗的第一天。对于原位异种移植,stereotactically引导颅内注射在无胸腺的裸体Foxn1^ν老鼠被管理执行 GBM1细胞resuspended 2μl培养基。纹状体注射制成(坐标:p, -0.5毫米;马丁,+ 2毫米;和dv, 3毫米;有关前囱)使用汉密尔顿注射器。老鼠口头处理OOS或水(200μl /天,5天/周)3周后颅内注射到老鼠牺牲在出现症状。

2.6。肿瘤组织分析

端点,皮下肿瘤或脑部肿瘤的解剖和组织是新鲜冷冻的分子分析、流式细胞术分析分离或固定o / n在4%多聚甲醛(默克公司)和嵌入石蜡。石蜡包埋组织削减了切片机(徕卡微系统)(3μ部分),部分沾hematoxylin-eosin())或孵化与特定的抗体免疫组织化学-(包含IHC) DAB染色。

2.7。免疫印迹(WB)

免疫印迹分析,细胞在寒冷的PBS收集和清洗。样本resuspended 0.1% SDS-RIPA缓冲补充了一个蛋白酶抑制剂鸡尾酒(罗氏),孵化20分钟在冰和离心机在4°C 14000 rpm 15分钟。蛋白质浓度测定使用商用比色测定(皮尔斯BCA蛋白质化验设备,热科学)。大约20μ克蛋白质被12% sds - page和转移到解决硝化纤维膜。膜被封锁在室温下1 h在5% BSA TBS-T(10毫米Tris-HCl, pH值7.5,100毫米Tween-20氯化钠和0.1%),然后孵化o在4°C / n中相应的初级抗体稀释5% BSA在TBS-T。与TBS-T洗3次后,膜被孵化1小时在室温下与相应的二次抗体在TBS-T稀释。检测是由增强化学发光与发射极耦合逻辑(微孔)。初级和二级抗体增刊。表所示S1和S2,分别。

2.8。实时定量PCR(存在)

RNA提取来自两个冻结颗粒的细胞或冷冻组织部分高纯RNA隔离设备(罗氏)后,制造商的指示。总RNA (1μg)与PrimeScript RT反转录试剂盒(豆类)总量的20倍μl。这个retrotranscription 10倍稀释的产品定量PCR分析。实时定量PCR(存在)都使用了光周期计480(罗氏)SYBR预混料交货Taq(豆类)LightCycler®480多井板使用10μ正向和反向引物和2μl (cDNA模板(10倍稀释)。循环条件包括初始变性10分钟95°C,紧随其后的是45周期10 s在95°C, 10在底漆杂交温度和10年代72°C。量化的基因表达是由δCt方法,和Ct值计算后,制造商的指令(LightCycler软件,罗氏公司)。管家基因的表达肌动蛋白或RPII作为一个内部控制表达式。引物所示增刊。表S3。

2.9。流式细胞术分析

肿瘤细胞被分解成单个细胞与Accumax(5分钟,RT)和红细胞溶解了Quicklysis (RT 15分钟;染色前Cytognos)。细胞被沾anti-CD44-FITC (ImmunoTools补充表S1在PBS稀释+ 0.5% BSA + 2毫米EDTA(染色缓冲区)20分钟在冰上和对待π(5μg / ml, Sigma-Aldrich) 5分钟在冰上。染色后,细胞被染色缓冲清洗和分析流式细胞术(FACSCalibur Becton Dickinson)使用FlowJo软件。

2.10。免疫组织化学分析(包含IHC)

肿瘤固定o在4°C / n在4%多聚甲醛(PFA,默克公司),冲洗0.1磷酸盐缓冲剂(PB)和乙醇脱水的梯度在石蜡包埋切片机切片。肿瘤被削减,切片机(徕卡微系统)和石蜡部分(3μm)脱蜡、水化。抗原检索是通过微波加热部分10毫米柠檬酸钠(pH值6.0)和内源性过氧化物酶被0.3%过氧化氢。组织部分被封锁与5% BSA + 10%的边后卫PB-Triton x - 100(0.1%)和孵化o在4°C / n anti-Activated半胱天冬酶3阻断缓冲区。部分是孵化与二次抗体标记生物素(在室温下2小时)在孵化前ABC-Peroxidase解决方案(热科学)在室温下30分钟。过氧化物酶活性与民建联(向量)和部分发达与苏木精复染色。图像与徕卡DM4B显微镜获得和分析利用ImageJ软件。使用的初级和二级抗体增刊。表中表示S1和S2,分别。

2.11。统计分析

kaplan meier裸体小鼠的生存分析的方法和评估一个双边生存率较。学生的 - - - - - -测试进行了统计分析在体外研究。图中的数据意味着±SEM。 ; ; 。统计值 不被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。OOS抑制一些GBM二者的自我更新能力

探索OOS我们使用三种不同的抗肿瘤活性主要GBM细胞系来源于人类样本,生长在没有血清生长因子的存在,浮动neurospheres浓缩在二者的形式21]。三天的孵化的OOS(1: 100)没有产生显著改变细胞的生存能力(图1(一))。然而,相同浓度的OOS抑制的能力GBM1 GBM2细胞高度稀释的条件(自我分析)(图1 (b)二者相关),这是一个功能和肿瘤起源属性(22]。有趣的是,我们没有观察到显著的影响OOS GBM3细胞的自我更新能力。同意这些结果,我们观察到显著抑制CSC-related标记GBM1细胞处理OOS 24 h(图1 (c)),而补充并没有改变这些基因的表达在GBM3细胞(图1 (d))。

“绿带运动”是一个异质群体的肿瘤。事实上,我们知道GBM1的行为和GBM2不同于GBM3前两个生长在一个高度血管生成方式的老鼠的大脑,而第三个生成非常侵入性肿瘤(Gargini et al .,手稿准备)(23]。我们还观察到GBM3细胞的代谢轮廓的差异,与GBM1和GBM2细胞相比,明显upregulation糖酵解酶LDHC1(Lactate-dehydrogenase-C1)表达和显著减少线粒体酶的表达ACSS1(酰coa合成酶短链family-member1)(图1 (e))。此外,OOS诱导几种抗氧化酶的表达GBM1 GBM2,但不是在GBM3(图1 (f))。我们也检查的状态排毒Nrf-2(核转录因子erythroid-2-related因子2)系统。Nrf-2可以调制在氧化还原反应的不平衡(24),它导致几种抗氧化基因的表达像hemoxygenase-1 (HO-1)和NAD (P) H醌脱氢酶1 (NQO-1) [25]。OOS增强Nrf-2蛋白质的水平在三个细胞系,尽管其目标的表达诱导在GBM1和GBM2细胞而不是GBM3线,被GBM1响应的低水平的OOS在短时间(图1 (g))。所有这些结果强调GBM3细胞的代谢和氧化还原概况,GBM1和GBM2细胞相比,有很大的不同,这可能是导致他们缺乏应对OOS。此外,结果表明,这些蛋白质的表达可以作为生物标志物的应对OOS。

3.2。一些本的增长受损OOS的系统性管理

二者在“绿带运动”与肿瘤发生和发展。为了测试如果自我更新的抑制引起OOS在体外对肿瘤的生长有影响,我们三个主要GBM线注入免疫缺陷的侧翼(裸体)老鼠。当肿瘤可见,动物收到胃内的OOS和肿瘤生长监测卡尺。结果表明,在肿瘤的生长有显著减少GBM1,虽小但不显著抑制GBM2增长,也没有减少GBM3肿瘤(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。GBM1肿瘤的组织学分析显示没有变化的有丝分裂的数量或数量的激活半胱天冬酶3-positive细胞(增刊。图S2),这表明OOS并不影响整体肿瘤生长或生存,这与缺乏影响细胞的生存能力(图1(一))。此外,我们观察到significan改变GBM1肿瘤标志物的表达巢蛋白,“绿带运动”二者,GBM3肿瘤(图中观察到2 (d))。这加强了OOS的想法减少某些本研究的干细胞特性,影响肿瘤的生长。

测量目标的OOS在原位环境的影响,我们执行一个颅内注射GBM1细胞裸鼠的大脑。我们发现系统性管理OOS减少肿瘤负荷(图3(一个))。为了进一步量化肿瘤生长,我们解剖正确的从老鼠的大脑半球,我们测量的表达β-tubulin,识别特别是人类的序列的引物。我们比较它的表达式RNA聚合酶subunit-2(RPII),测量与引物同样意识到人类和老鼠序列。解剖大脑,我们观察到显著减少人类组件(图3 (b)),确认OOS的影响在大脑中是可见的。我们也分离注入的半球,我们使用流式细胞仪分析细胞,减少测量一个强大CD44的百分比⁺细胞(图3 (c))。CD44是GBM二者的标志(26,27),加强的观点通过损害二者OOS GBM1影响肿瘤的生长。

3.3。OOS GBM肿瘤刺激巨噬细胞变化的组成部分

其他作者认为OOS增加炎症细胞因子的水平(15]。检查如果OOS影响免疫组成部分本研究,我们进行了小组的存在分析标记的小鼠髓细胞和淋巴GBM1解剖和GBM3肿瘤。我们发现巨噬细胞极化标记OOS治疗后的变化,显著降低M2(免疫抑制)基因的表达在GBM3 GBM1肿瘤以及肿瘤(图4(一))。我们还发现增加一些M1(炎症)基因OOS治疗后,但只在GBM1肿瘤(图4 (b))。“绿带运动”可以包含大量小胶质细胞和肿瘤浸润的巨噬细胞,和他们的密度与神经胶质瘤级别呈正相关,这表明他们支持肿瘤恶化[28]。事实上,药物或基因抑制巨噬细胞招聘和M2极化块神经胶质瘤生长(29日]。Glioma-associated巨噬细胞与proangiogenic, proinvasive和免疫抑制功能,类似于或者激活M2巨噬细胞(30.]。

为了解释如果OOS对巨噬细胞有直接的影响,我们培养的腹膜巨噬细胞的存在和没有补充。M1和M2诱导极化,我们使用有限合伙人(脂多糖)和IL4(白介素4),分别。我们也培养的巨噬细胞的存在glioma-conditioned媒体(CM)(从GBM1)。它已被证明,神经胶质瘤细胞释放多种因素,招募和促进巨噬细胞的生长(28,31日]。我们首先确定,巨噬细胞的生存能力仅略受OOS的存在,虽然有一个明确的刺激在glioma-CM的存在(图5(一个)),并没有能够诱导M1分化(数据没有显示)。OOS没有显著变化的表达M1标记(在没有或有限合伙人的存在)(图5 (b)),虽然一个小的增量在control-treated细胞( )。然而,OOS明显抑制了M2的upregulation IL4孵化和标记,在较小程度上,glioma-CM(图5 (c)),这表明OOS对这些肿瘤炎症细胞有直接影响。此外,我们发现OOS能够减少巨噬细胞中活性氧的水平,独立于分化刺激(图5 (d))。

巨噬细胞浸润神经胶质瘤组织密切参与肿瘤微环境的诱导血管生成的发展,免疫抑制和入侵28]。此外,它已建议他们可以直接促进肿瘤细胞增殖。为了分析如果巨噬细胞极化的变化引起OOS可能影响其次神经胶质瘤细胞,我们孵化GBM1细胞巨噬细胞之上,先前由IL4极化,在存在或缺乏OOS。结果在图5 (e)表明,确实有protumoral M2巨噬细胞对神经胶质瘤细胞的功能,因为他们支持GBM1增长甚至在缺乏生长因子。更重要的是,预处理与OOS严重受损的这种增长归纳。

总之,这些数据加强OOS的抗癌潜力,因为它可能目标二者及其免疫抑制微环境的支持。然而,在异种移植设置,这个一般M2极化变化似乎并不足以抑制肿瘤生长,OOS没有影响GBM3肿瘤(图2),即使M2标记减少(图4(一))。

4所示。讨论

在这项研究中,我们评估OOS的抗肿瘤作用在GBM使用几个人类主要的细胞系。OOS能够减少在活的有机体内增长的“绿带运动”行测试。我们没有发现任何变化扩散或在最敏感的肿瘤细胞死亡(GBM1细胞)(补充图S1),这表明OOS没有影响整个肿瘤细胞生存能力,正如我们所观察到的在体外化验。然而,在干细胞标记(有明显降低巢蛋白或者在应对OOS CD44表达)在体外和在活的有机体内。此外,“绿带运动”的自我更新能力的抑制细胞进一步证实,OOS抑制干细胞属性。因此,我们不能丢弃,OOS可能影响扩散或GBM CSC人群的生存。

神经胶质瘤二者丰富区域的高氧化应激(4,5]。矛盾的是,有人建议,低水平的ROS所需干细胞保持静止和自我更新,在正常组织和肿瘤(32]。在神经胶质瘤,二者似乎产生的ROS和ROS-scavenging更高容量比分化肿瘤细胞(33]。事实上,增加线粒体ROS也与干细胞标记物的损失(34]。相反,我们的结果表明,抗氧化剂OOS的主要作用是减少“绿带运动”的具备干细胞特性。这个观察最近同意结果与几个ROS-scavenging化合物(7,8]。基于这些数据,它可以是假设某种程度的ROS可能需要保持在GBM细胞,二者虽然过多的氧化应激也可能是有害的。因此,抗氧化剂可以解除这种氧化压力平衡,影响干细胞属性和肿瘤生长。

并不是所有的“绿带运动”二者对OOS似乎敏感。补充没有抑制GBM3克隆生长的细胞,它没有减缓GBM3肿瘤的增长,这表明二者从GBM3更敏感比从GBM1或GBM2 OOS。是很重要的话,OOS能够诱导多种抗氧化酶的表达,但只在GBM1和GBM2细胞。此外,一些代谢酶的表达是非常不同的在GBM3细胞相比其他两行,这表明神经胶质瘤细胞的氧化还原和代谢状态可能决定他们对OOS的反应。这将是有趣的测试,在一个更大的队列研究,如果这些酶的表达可以作为预测标志的功效OOS或其他抗氧化化合物。

除了OOS GBM肿瘤细胞的直接影响,我们的数据反映,有一个肿瘤的炎症组件的变化,一个较弱的M2巨噬细胞在肿瘤标志物的表达处理OOS。神经胶质瘤细胞在一般情况下,尤其是二者,释放几个因素,招募和促进巨噬细胞的生长(28,31日]。因此,二者的性质的变化引起OOS会影响周围的髓细胞。尽管我们不能抛弃这样的间接影响,我们的研究结果在体外清楚地表明,OOS影响巨噬细胞极化以直接的方式,减少M2标记在回应一个经典的表达像IL4还针对glioma-CM诱导物。我们还证实,OOS减少巨噬细胞中活性氧的水平在所有的条件下测试。虽然ROS生产通常是与M1巨噬细胞的激活和功能(28),最近在M2表明,活性氧是重要的但不是在M1巨噬细胞分化。因此,抗氧化剂叔丁基羟基茴香醚(叔丁基羟基hydroxy-anisole) [35],dihydroxycoumarins [36),或咖啡酸37)抑制M2但不是M1极化和防止肿瘤的生长和转移的形成。此外,绿原酸,一个产品的抗菌和抗氧化性能,抑制GBM的复极化的发展从M2巨噬细胞M1表型(38]。因此,OOS可以发挥他们的抗癌作用,至少在某种程度上,通过抑制M2分化。其他作者观察到的增加促炎细胞因子如白细胞介素6在急性白血病小鼠模型处理OOS [15),这表明macrophage-polarization OOS可以扩展到其他癌症的效果。在我们的手中,然而,OOS不引起显著增加在LPS-treated巨噬细胞M1标记物的表达,虽然IL18(但不NOS2)过表达与OOS GBM1肿瘤治疗。IL18是另一个M1巨噬细胞分泌的细胞因子,参与激活T细胞介导的炎症反应(39]。有趣的是,在GBM3肿瘤,M2标记也抑制而IL8不诱导表达应对OOS。这可能参与缺乏响应这些细胞的膳食补充剂。此外,这些结果表明,神经胶质瘤的其他组件(包括肿瘤细胞)可能调节巨噬细胞的反应OOS,做一些肿瘤比其他人更容易受到这些变化。

评论是很重要的,在我们的手中,OOS治疗没有任何明显的毒性作用,因为没有观察到动物的体重和行为差异控制和治疗老鼠。一些肿瘤学家避免使用抗氧化补充剂治疗期间,因为据报道,他们可能有不利影响,甚至不良的相互作用与某些疗法。然而,几篇文章得出结论,抗氧化补充剂不破坏细胞毒性治疗的有效性(10]。因此,它将会是很有趣的发现如果OOS之间有协同作用,传统的化疗(TMZ),因为它已被证明在其他类型的癌症15,40]。OOS的事实已销售多年没有任何副作用的报告将有助于验证这种合作在诊所。此外,这将是有趣的OOS是否会有类似的有益效应结合放疗甚至小说免疫疗法目前在早期临床阶段。

5。结论

(我)的存在Ocoxin®口服溶液(OOS)抑制的自我更新能力的百分比原发性胶质母细胞瘤(GBM)细胞系(2)全身治疗的OOS减少肿瘤负荷比例的主本研究(3)OOS抑制M2 protumoral巨噬细胞的极化在体外(iv)全身治疗与OOS抑制M2 protumoral glioma-associated巨噬细胞的极化(v)OOS是一个可行的候选人中使用联合疗法在GBM患者的治疗

数据可用性

小鼠模型和分子和细胞数据用于支持本研究的结果都包含在这篇文章,在文件的补充信息。

的利益冲突

作者宣称,这部分工作由催化ES是当前催化员工S.L.作者声明没有其他非金融相互竞争的利益。

作者的贡献

EHS的执行在体外和在活的有机体内实验;RG和BS的世行分析antioxidant-related分子;TC进行了流式细胞术分析;PNH执行一些IHC如果肿瘤的分析;RH的执行在活的有机体内小鼠肿瘤生长分析;JMS、AHL和APN发达的主要神经胶质瘤细胞系;ES OOS,并帮助提供写手稿;PSG监督所有的实验和写的手稿。

确认

作者要感谢Atanasio Pandiella批评的手稿,罗塞拉捐赠GBM1加利,杰奎琳·古铁雷斯,达妮埃拉Moiseev,丹尼尔Batzan,马里奥特别为他们的技术支持。RG一直由Fundacion Cientifica Asociacion诺拉魂斗罗el癌症。研究经费由Fundacion拨款Cientifica Asociacion诺拉魂斗罗el癌症JMS (18/006);从MINECO: Accion Estrategica en Salud (AES) PI13/01258 AHL;AES PI17/01621 JMS;红色Tematica de Investigacion Cooperativa癌症(RTICC) RD12/0036/0027 AHL, JMS、比例导引,和PSG;和MINECO-RETOS /菲德尔saf2015 - 65175巴黎圣日耳曼。

补充材料

补充图S1:全身墨迹图1 (g)。GBM细胞处理OOS(1: 100或1:50)2或24小时和表达Nrf-2和NQO-1 HO-1衡量世行。参与球体被用作控制和GAPDH加载控制的表达。补充图S2: OOS不会引起整体扩散的变化或在GBM1肿瘤细胞死亡。石蜡的部分GBM1侧面肿瘤沾hematoxylin-eosin数的数量有丝分裂(上半部分)或沾激活半胱天冬酶3抗体计数凋亡细胞(下图)。在这两种情况下,图形表示的数量每个肿瘤细胞数在10个领域( )。补充表S1:列表主要抗体免疫组织化学DAB染色(包含IHC)、流式细胞术(FC)和免疫印迹(WB)。补充表S2:免疫组织化学DAB染色的二次抗体列表(包含IHC)和免疫印迹(WB)。补充表S3:用于rt - pcr引物列表。(补充材料)

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