Sailuotong胶囊防止大脑Ischaemia-Induced神经炎症和损伤识别的记忆通过抑制LCN2表达式

文摘

背景。Astrogliosis可能导致星形胶质细胞与肥厚性形态学损伤后,显示的扩展过程和肿胀的细胞体。Lipocalin-2 (LCN2)分泌糖蛋白属于lipocalin总科,据报道发挥的作用在缺血性脑和神经退行性疾病。Sailuotong (SLT)胶囊是一个标准化three-herb准备由人参、银杏、藏红花治疗血管性痴呆。尽管最近的临床试验证明在血管性痴呆SLT的有益作用,其潜在的细胞机制尚未充分探讨。方法。男性成人Sprague-Dawley (SD)老鼠受到microsphere-embolized脑缺血。免疫染色和免疫印迹反应进行评估病患。人类的星形胶质细胞暴露于oxygen-glucose剥夺(OGD)被用来阐明SLT-induced炎症和星形反应的影响。结果。记忆恢复的效果被发现与脑相关ischaemia-induced炎性蛋白的表达和抑制LCN2表达式在大脑中。此外,SLT病患减少了反应,LCN2表达式,磷酸化STAT3和JAK2。为在体外实验,OGD-induced表达炎症和LCN2也减少了在人类SLT星形胶质细胞的治疗。此外,LCN2超表达显著增强上述效果。SLT下调这些影响被LCN2增强超表达。结论。SLT介导神经炎症,从而预防缺血性脑损伤通过抑制astrogliosis并通过抑制神经炎症LCN2-JAK2 / STAT3通路,提供一个新的想法缺血性中风的治疗策略。

1。介绍

中风的发病率在世界各地已达到流行病的水平。在过去的二十年里,有明显增加中风,中风患者的生活,生活的群体的损失(称为残疾调整生命年计),和中风相关的死亡人数1]。持久的身体衰弱和认知恶化大多数中风幸存者(有经验的2]。中风患者,他们忍受急性梗死的时期,必须应对持续的神经炎症和相关的神经损伤。炎症是一种严重的缺血性中风的疾病发展和其他类型的缺血性脑损伤。这些伤害是由于血液循环,减少血管内的激活白细胞和随之而来的炎性细胞因子的释放缺血性脑实质和内皮,所有这些都有可能增加对中枢神经系统(CNS)的组织(3]。

中枢神经系统包含许多居民细胞起源于神经上皮细胞,统称为神经胶质。神经胶质细胞亚型包括星形胶质细胞、少突胶质细胞和polyglia [4]。星形胶质细胞积极维护中枢神经系统缺血后的免疫应答通过补充组件的生产,等炎症介质白介素- IL - 6和IL - 1β趋化因子和趋化因子,包括C-X-C图案配体12 (CXCL12),处于受控,CXCL10,单核细胞化学引诱物蛋白(MCP) 1,和lipocalin-2 (LCN2) [5,6]。长期激活后,活性astrocytosis(也称为astrogliosis)结果的结构称为胶质瘢痕,缺血性核心之间的分界线,大脑周围的健康组织(7]。激活星形胶质细胞释放糖蛋白LCN2,调节某些生物过程,包括细胞死亡(8),细胞迁移(9),和先天免疫(10]。最近的研究表明,脑损伤或感染,可能导致神经炎症可能会鼓励释放LCN2星形胶质细胞(11,12]。同样,研究也表明,持续和不成比例的免疫反应会加剧炎症细胞因子的分泌,如LCN2,与随后的海马的神经不平等加剧,导致长期行为障碍(13,14]。因此,针对病患LCN2可能是一个潜在molecule-level治疗临床医生治疗炎性中枢神经系统障碍。

使用草药治疗脑血管疾病在亚洲已持续了几个世纪。Sailuotong (SLT)胶囊是一个标准化的草药组成的准备人参(人参),银杏叶(银杏)番红花(藏红花)三个特定的剂量用于治疗血管性痴呆(VaD) [15]。这些草药成分已被证明,以避免和/或治疗循环系统疾病如高血压和中风。例如,一个标准化的提取g . biloba(银杏叶提取物761)具有抗氧化和抗血小板特征,可以减少脑缺血性损伤16- - - - - -20.]。其他研究已经表明,人参皂苷的Rg1, Rb1, Rg2有神经保护作用[21- - - - - -24]。

尽管最近的临床研究表明,SLT改善认知和监测患者(25],许多临床研究证明脑血管保护作用的单个组件,SLT的机制调节星形胶质细胞通过其抗炎作用的活动以前没有研究。在这里,我们研究了两个问题:SLT治疗缓解反应性星形胶质细胞,因此,调解神经炎症,如果是这样,做的好处SLT治疗涉及抑制Janus kinase-2 (JAK2)信号传感器和催化剂transcription-3——(STAT3)介导LCN2表达吗?

2。材料和方法

2.1。鼠模型Microsphere-Induced脑栓塞

成年男性Sprague-Dawley老鼠(重220 - 250克)被用于这项研究(北京重要河流实验动物技术有限公司,北京,中国)。动物协议进行了根据中国医学科学院的建议委员会实验动物使用和护理。程序被设计用来减少或降低动物测试的数量和不适。所有老鼠都保存在一个12小时的光/暗周期在标准条件( 和 湿度)提供水和食物随意。

46个成年SD大鼠被随机分为四组。脑栓塞是诱导使用微球方法如前所述20.]。简而言之,老鼠与水合氯醛麻醉(40毫克/公斤),颈总动脉、颈内动脉、右颈外动脉分离使用钳。颈总动脉与动脉钳夹,和颈外动脉的远端结扎与一个线程。荧光微球(106 - 212年μ美国米直径,UVPMS-BY2 Cospheric)是用注射器注入颈外动脉,动脉夹同时被释放,使微球到大脑的各种动脉和引起栓塞。颈外动脉的近端结扎与一个线程,伤口缝合一层一层地。在对照组,大鼠接受相同数量的血清没有微球。

2.2。药品监督管理局

提供了SLT双汇制药集团(石家庄,中国)。人参提取物(20170301,人参c.a Meyer),银杏(20170122,银杏)和藏红花(20170320,番红花l .)准备好制造Practice-certified设施(双汇制药集团、河北,中国)。紫外线光谱或HPLC-UV用来测量的组成成分调节原料的质量。总皂苷含量的读数显示,77%被发现在人参提取物(紫外线),与人参皂苷Rg1,再保险公司和Rb1为5.5%,3.2%,和13.1%,分别(HPLC-UV);总额的49%提取的黄酮被发现(紫外线);28.7%的总苷提取物中被发现,包括槲皮素糖苷配基、异鼠李亭,和山柰酚(HPLC-UV);总数的11.6% ginkgolides A、B和C, bilobalide,银杏提取物中发现,有3.3%的ginkgolide (HPLC-UV)其中;和65%的总藏红花素被发现藏红花提取(UV),其中包括27%的crocin-1 (HPLC-UV) [26]。SLT准备从上面三个提取到一个特定的配方,然后管理intragastrically剂量的16.5和33毫克/公斤为28天。每个老鼠在对照组和模型组给予相同体积的生理盐水intragastrically每一天。

2.3。评估神经赤字

神经赤字分数计算局部贫血后2小时和24小时每组使用以前公布的五点系统[27]。具体地说,一只老鼠表现出正常的自发运动(没有明显的神经缺陷)收到了一个0,一只老鼠,不能完全扩展其右爪收到了1,老鼠圈顺时针收到了2,一只老鼠跌至正确的收到了3,和一只老鼠,不能走了4。赤字分数交办的侦探不知道组。

2.4。莫里斯水迷宫测试(微波加工)

微波加工是用来评估三维空间记忆和学习在所有四组大鼠(28]。水迷宫是一个圆形池(直径330厘米,高60厘米包含水在45厘米的深度 )。介绍了无毒的黑色墨水水不透明。池被划分为相等的象限,每个片段包含4分(北、东、南、西)。一个圆形平台(直径10厘米)是漆成黑色,隐藏被淹没在西南象限1.5厘米。培训平台的位置保持不变的实验。老鼠的游泳路径记录与数字成像设备。

2.5。测量脑梗死

性脑缺血的成功的评价模型,大鼠与水合氯醛麻醉(40毫克/公斤)手术后24小时( 在控制和测试组)。血液被斩首前从腹主动脉和大脑的快速删除。大脑被存储在一个冷的,含氧生理盐溶液。冠状切片(1毫米)获得和固定在prewarmed 10分钟2%氯化三苯基四氮唑(TTC)。30分钟的片被固定在10%多聚甲醛。

2.6。文化和人类星形胶质细胞的转染

人类星形胶质细胞(ScienCell研究实验室、钙、美国)在星形胶质细胞培养媒体(AM)(美国ScienCell)湿润,5%的公司₂气氛在37°C。融合后的细胞达到70%,使用LCN2星形胶质细胞是稳定转染基因的表达载体(EX-m0282-Lv201),控制表达载体(EX-NEG-Lv201)和7.5μ慢病毒载体的l /毫升(垂直距离- m0282 lv201 - 100)(美国罗克维尔市GeneCopoeia) 24小时。转染后的细胞保持新鲜而慢病毒载体48小时。

2.7。Oxygen-Glucose剥夺(OGD)管理和治疗

OGD实验进行基于前一个方法(20.]。净化和转染后,这些细胞被放置在一个预先混合气体(94% N₂,5%的公司₂,1%的人啊₂)文化框和培养缺氧没有葡萄糖和胎牛血清的DMEM(的边后卫)6小时。6小时后,正常是有10%的边后卫血清,和细胞被转移到一个大气孵化器为12小时。与正常对照组细胞培养。在OGD刺激,细胞治疗与2.5,6小时5或10 mg / l SLT。

2.8。西方墨点法

蛋白质提取从缺血性半影里帕缓冲区(Beyotime生物科技、上海、中国)性脑缺血后28天,结合蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(美国新泽西州多国评价)。组织切成碎片,完全与声波降解器均质,然后离心机(10000 - 14000 g, 3 - 5分钟),和上层清液收集后续实验。同等分子量的蛋白质加载到井和sds - page凝胶从凝胶转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)。特异性的网站被封锁了60分钟5%牛血清白蛋白(BSA) TBST缓冲区,然后这些墨迹是孵化一夜之间在4°C抗体LCN2 (Abcam, 1: 2000稀释)磷酸化- (p) JAK2 (Tyr1007/1008) (Abcam, 1: 1000)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP);Proteintech, 1: 2000), JAK2 (Abcam, 1: 2000), p-STAT3 (Tyr705)(细胞信号技术,1:2000),STAT3(细胞信号技术,1:2000)β肌动蛋白在TBST(σ1:5000)。抗体绑定与anti-rabbit检测辣根过氧化物酶(合)共轭免疫球蛋白G(免疫球蛋白;1:1000)在TBST(60分钟,室温)。反应乐队被发现使用ECL检测试剂/制造商的指令(美国马热费希尔科学)。细胞蛋白质的提取过程和上面的步骤一样。

2.9。免疫荧光分析和Hematoxylin-Eosin(他)染色

石蜡的大脑进行解剖和固定。(20冠低温恒温器部分μ米)都沾染了他和immunofluorescent染料。大脑部分被固定在4°C 24小时在4%多聚甲醛在PBS(0.01米,pH值7.4),脱水的一系列梯度酒精脱水,石蜡和固定。组织切片(5μ与徕卡m)®RM1850旋转式切片机(德国徕卡微系统)。石蜡切片是干60°C,脱蜡,并受抗原检索。的部分暴露1小时在37°C到初级抗体针对以下蛋白质:LCN2 (Abcam, 1: 200), GFAP (Proteintech, 1: 200), p-JAK2 (Tyr1007/1008) (Abcam, 1: 100)和p-STAT3 (Tyr705)(细胞信号技术,1:200)。部分被洗两次与冰冷的PBS然后饱和荧光二次抗体(细胞信号技术,1:100)在黑暗中1小时。DAPI (4 ,6-diamidino-2-phenylindole)(1: 1000)在黑暗中添加了2分钟。DAPI和PBS冲洗3次1分钟。细胞的染色过程同上。因为他染色,部分被他沾明矾。彩色图像获得使用20 x激光扫描共焦显微镜(奥林巴斯FV1200、东京、日本)。

2.10。趋化因子/细胞因子表达在大脑中提取,测定血清样本,星形胶质细胞

一个MILLIPLEX®地图大鼠细胞因子/趋化因子磁珠包(美国微孔)每个制造商的指示使用量化趋化因子和细胞因子的浓度在大脑半球提取物,血清样本,星形胶质细胞。大脑半球的蛋白质浓度由BCA量化蛋白质的测定(表达载体)。蛋白质含量是量化16毫克/毫升。趋化因子和细胞因子在脑缺血后缺血性半影组织收集28天EMD微孔的缓冲区。血清收集从腹主动脉。星形胶质细胞的趋化因子和细胞因子的条件在中等收集OGD归纳。下列细胞因子进行分析:肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),il - 1α,il - 1β、il - 12、il - 6和趋化因子CXCL10 (IP-10)。FLEXMAP 3 d™系统被用来确定平均荧光强度。脑匀浆细胞因子和趋化因子水平,血清样本,和细胞样本进行5个参数逻辑分析。

2.11。统计分析

数据管理和分析进行了使用GraphPad棱镜软件(CA)圣地亚哥。的所有数据 。每个实验重复三次。单变量方差分析(方差分析)是用于多个比较。学生的 - - - - - -测试分析组间进行比较。双向方差分析是用于神经系统研究和微波加工测试比较组之间的时间函数。值< 0.05被报告为显著。

3所示。结果

3.1。保护大脑Ischaemia-Induced脑损伤

SLT intragastrically管理28天。脑梗死体积测量的TTC方法手术后24小时。结果神经赤字分数表明SLT的防护功能。脑缺血组相比,slt - 16.5(16.5毫克/公斤,每日)和SLT-33(33毫克/公斤,日报)组显著降低分数( )。此外,SLT-33组的得分低于slt的- 16.5。所有组的分数2,24小时后手术和性脑缺血的发生率在图所示1 (c)。手术模型按预期运行,老鼠和显示明显的诱导脑缺血脑梗死,而对照组的老鼠显示没有脑损伤的迹象。

数据1(一)和1 (b)显示控制和测试组的梗死体积性脑缺血后24小时。纹状体、海马和皮层显示广泛的损伤模型组,而大脑区域SLT组(33毫克/公斤)显示,模型组的显著差异,与神经赤字协议的分数。

3.2。SLT减少脑损伤手术后

28天后手术,他在大脑组织染色确定组织学偏差(图2)。对照组的神经元排列有序的圆形细胞,淡染细胞核,核膜清晰,明显的核仁。不变性、坏死或其他病变。模型组,观察局灶性梗死区域的皮质,海马,白质,大梗死病灶,没有坏死物质的吸收。组织细胞(泡沫细胞)和神经细胞变性是显而易见的。的数量和大小梗死SLT组明显低于模型组。坏死的梗塞SLT组不明显,和坏死物质的吸收。SLT组表现出没有明显的神经细胞变性。

3.3。SLT对脑缺血引起的记忆障碍的影响在微波加工测试

微波加工是用来测量变化的学习,记忆,在老鼠和战略确定SLT的影响。在5天的培训,所有老鼠发现隐藏的平台。在这个训练,每组大鼠的平均游泳速度相当,表明所有感觉器官组织正常功能和生存动力(图3(一个))。日常训练,越狱slt - 16.5组的延迟和SLT-33组显著降低更多的比模型组( ,模型组与对照组; ,SLT-33组比模型组)(图3 (b))。检索试验期间,记忆力是评估通过计算平台过境点的数量和时间为每个老鼠在目标象限。老鼠轨迹的图像显示平台较少地区口岸在模型组比对照组(图3 (e))。然而,slt - 16.5组和SLT-33集团保留程度大大高于模型组,测量更平台口岸( ,模型组与对照组; ,SLT-33组比模型组)(图3 (d))。此外,我们发现大剂量SLT,老鼠花更多的时间在目标象限。所花费的时间的目标象限slt - 16.5组和SLT-33组比模型组,甚至达到值观察对照组( ,模型组与对照组; ,SLT-33组比模型组)(图3 (c))。这些结果表明,SLT改善缺血性脑损伤后情景记忆。

3.4。SLT对炎症标志物的影响

手术后细胞因子水平有显著差异。28天后,促炎细胞因子il - 6、il - 12、il - 1α和趋化因子CXCL10 (IP-10)常数在对照组,同时增加侧半球模型组的il - 6、il - 12, CXCL10显示显著增加( )。然而,这些细胞因子水平明显和剂量依赖性降低SLT治疗( ,SLT-33组与模型组; ,SLT-33组与模型组)(数据4(一)- - - - - -4 (c))。此外,在血清中发现了相同的结果。进一步分析表明,il - 1的水平α在模型中,il - 12和CXCL10组高于对照组( 对il - 1α、il - 12和CXCL10)(数据4 (d)- - - - - -4 (f))。同样,细胞因子水平在缺血性SLT-33组低于集团( ,SLT-33组与模型组; ,SLT-33组比模型组)。

3.5。SLT减少LCN2 Upregulation性脑缺血的啮齿动物模型

在一个在活的有机体内研究中,SLT预防脑ischaemia-induced神经炎症了。我们进一步研究了抗炎作用使用免疫荧光显微镜和免疫印迹分析。胃内的28天SLT管理减少LCN2分泌由于脑缺血。GFAP和LCN2量化的分析,提出了它们的相对比例β肌动蛋白表达,和p-JAK2 p-STAT3量化在总JAK2和STAT3的表达。LCN2和GFAP免疫荧光染色显示LCN2蛋白表达在GFAP-positive星形胶质细胞诱导,和老鼠和比大鼠大脑皮质星形胶质细胞在脑缺血对照组(图5)。然而,免疫染色显示SLT(33毫克/公斤)在缺血性脑半球压抑的星形胶质细胞。p-STAT3和p-JAK2染色后在星形胶质细胞明显强局部贫血但SLT治疗后下降(数字5(一个)- - - - - -5 (c))。观察相同的模式对GFAP、LCN2 p-STAT3, p-JAK2使用免疫印迹分析(数据5 (d)- - - - - -5 (h))。最后,SLT剂量依赖性LCN2的表达减少,p-STAT3, p-JAK2老鼠暴露在局部贫血( )。

3.6。SLT减少OGD-Induced星形胶质细胞的损伤

CCK8试验表明,OGD导致显著减少细胞的可行性。SLT(3.125 ~ 100毫克/升)毒性对人类存在剂量依赖的相关性显示星形胶质细胞(CCK8试验),然而SLT的低浓度(2.5 ~ 50 mg / l)造成的损害OGD减少。因为保护作用明显为2.5 mg / l ( ,与OGD组),没有使用的浓度更高在体外测试(图S1)。

进一步调查LCN2的具体影响,人类星形胶质细胞在受到表达载体LCN2通过慢病毒前24小时OGD感应。的细胞诱导OGD环境模拟缺血和SLT治疗明显减少促炎细胞因子il - 6的水平,il - 1β和CXCL10 ( )。LCN2过度增强这种差异( ,与对照组)(数据6(一)- - - - - -6 (c))。

星形胶质细胞的形态学观察到GFAP染色(数字7(一)- - - - - -7 (c))。延长细胞突起的证实OGD-induced星形胶质细胞激活,LCN2过度增强这种效果。OGD集团表现出更高水平的GFAP LCN2, p-JAK2, p-STAT3比对照组( , )(数据7(一)- - - - - -7 (h))和超表达LCN2增强这些影响(图7)。然而,这些增加后OGD感应(SLT否定 , )。

4所示。讨论

高水平的LCN2引发炎症,后来减少认知活动,使LCN2可能目标在抗炎治疗29日,30.]。我们已经证实了SLT的功效在调节反应性星形胶质细胞和LCN2表达式在脑缺血性模型。我们发现SLT可以保护认知功能,显著降低中风损伤和保护大脑皮层的损伤减少老鼠在缺血性脑梗死体积。此外,SLT改善星形胶质细胞活化,减少STAT3和JAK2磷酸化,减少LCN2的表达在体外和在活的有机体内。这些结果表明SLT扮演一个强大的性脑缺血的治疗作用,通过减少病患LCN2释放和抑制神经炎症损伤通过JAK2 / STAT3通路。

神经炎症已成为一个至关重要的元素在中风,一开始和后期。最近的评论指出,淋巴细胞和炎症介质传播发展的神经病变和赤字,尽管大多数的这些发现从实验中风模型(31日- - - - - -34]。其他研究已经表明,炎症也可能扮演一个角色在轻度认知障碍(MCI)的病因学35,36]。所介绍,各种中药配方治疗中风,SLT等开发(15]。SLT由人参提取物(人参总皂甙),g . biloba提取(g . biloba总类黄酮)和藏红花提取(番红花总苷)。药效的报告表明,SLT显著改善脑缺血产生的问题以及学习和记忆性脑缺血实验模型的能力。神经认知和心血管功能改进后在正常的成年人一周政权SLT (15]。此外,从2012年到2014年,一个国际多中心II期临床试验的SLT轻度至中度患者使用VaD表明SLT改善认知和日常运作在中国患者25]。据说SLT阻止H₂O₂全身的血管内皮细胞损伤通过直接减少细胞内活性氧(ROS)生成和提高超氧化物歧化酶(SOD)活性(37]。在我们目前的研究中,SLT脑缺血性模型大鼠的认知功能改善微波加工测试。在脑缺血性神经赤字也减毒老鼠SLT处理。因此,这些结果提供了第一个证据,SLT减轻记忆障碍动物模型。

促炎细胞因子和趋化因子与众多小(8 - 12 kDa)蛋白质的目的。在中枢神经系统、促炎细胞因子和趋化因子促进先天和适应性免疫反应,表明白细胞招募的必要性以及星形胶质细胞激活(在神经炎症38,39]。虽然细胞因子/趋化因子函数从外周免疫细胞的炎症反应和招聘帮助去除有害刺激,趋化因子参与某些神经系统疾病涉及到神经的炎症,包括神经退行性痴呆、阿尔茨海默氏症、多发性硬化症、创伤性脑损伤,和某些类型的脑膜炎40,41]。在当前的研究中,SLT明显减少促炎细胞因子和趋化因子的水平,包括il - 6、il - 12,和CXCL10组织相邻的损伤和血清。此外,SLT减少星形浮在表面的这些促炎细胞因子和趋化因子。

Astrogliosis会导致延长细胞过程和肿胀细胞受伤后的身体。反应性胶质增生已被证明是持续60天之后控制损伤大鼠大脑皮层的影响,标志着持续星形胶质细胞的反应脑损伤(42]。然而,缺乏有效的治疗astrogliosis已成为临床治疗的焦点。LCN2,分泌的糖蛋白lipocalin总科,据报道发挥有害作用在缺血性脑和神经退行性疾病14,43- - - - - -45]。神经炎症由于脑损伤或神经退行性疾病发起的分泌LCN2星形胶质细胞、小胶质细胞、内皮细胞和神经细胞。炎症介质释放激活星形胶质细胞扮演着重要的角色在细胞迁移和神经胶质细胞的损伤的招聘网站。我们的数据表明,星形胶质细胞性脑缺血后明显激活,LCN2调节整个脑缺血性皮层。SLT治疗显著地抑制星形胶质细胞激活和减少LCN2表达式。OGD-induced星形胶质细胞也发现了相同的现象。

多年来,研究相关的细胞和分子途径astrogliosis未来治疗方法提供了一个依据记忆障碍。LCN2病患中起关键作用的反应(46]。JAK2-STAT3激活涉及造血作用[47),免疫反应(48],形态发生[49],gliogenesis [50),和记忆形成的监管。先前的研究已经表明,JAK2 / STAT3至关重要的感应LCN2 [51]。具体来说,upregulation CXCL10的JAK2 / STAT3通路在星形胶质细胞在LCN2-induced细胞迁移中起着核心作用。因此,神经炎症通路可以被抑制LCN2的本构分泌调节。在这些实验中,星形p-STAT3和p-JAK2高度激活性脑缺血后缺血性脑在活的有机体内之后,OGD在体外。然而,SLT抑制JAK2-STAT3激活的脑缺血模型和OGD-related神经炎症改变。与此同时,p-STAT3和p-JAK2被LCN2调节过度在体外,但SLT抑制这种效应。这些研究表明,LCN2部分介导JAK2 / STAT3通路upregulation GFAP的表达在星形胶质细胞(51]。因此,失活的LCN2 SLT带来重大antineuroinflammatory和antiastrogliotic角色在大脑中。这些结果不能解释SLT的所有机制保护,尽管减少LCN2表达被认为是一个关键机制,SLT,多组分药物,可能有其他间接的神经保护作用。此外,尽管大多数的数据实验表明,LCN2的影响主要是通过JAK2-STAT3抑制介导的,我们不能排除一些LCN2的非特异性反应的可能性。

5。结论

总的来说,这项研究表明SLT antiastrogliosis和antineuroinflammatory效果和改善神经元生存和记忆缺陷模型和OGD-induced星形胶质细胞在脑缺血。作为一个标准化的草本配方,SLT神经炎症疾病的潜在应用,如和监督,通过LCN2的失活。

缩写

CCK8:	细胞计数kit-8
中枢神经系统:	中枢神经系统
CXCL:	趋化因子配体(C-X-C主题)
计:	残疾调整生命年
DAPI:	4 ,6-Diamidino-2-phenylindole
的边后卫:	胎牛血清
GFAP:	胶质原纤维酸性蛋白
他:	Hematoxylin-eosin
高效液相色谱法:	高效液相色谱法
il - 1α:	Interleukin-1α
il - 1β:	Interleukin-1β
il - 6:	白细胞介素- 6
JAK2:	Janus激酶2
LCN2:	Lipocalin-2
OGD:	Oxygen-glucose剥夺
草甸植物:	外周动脉闭塞疾病
SLT:	Sailuotong胶囊
STAT3:	信号传感器和转录激活3
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α
TTC):	氯化三苯基四氮唑
紫外线:	紫外线
监督:	血管性痴呆。

数据可用性

所有的数据和材料支持本文的结论提供的手稿,其中包括文章和额外的文件。一些图片的图7从张复制等。20.](下知识共享归属许可/公共领域)。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

张Yehao进行研究。其中姚明和Jianxun刘设计研究。本·杨,文婷的歌,和郑Yongqiu导致了数据分析。李Mingqian太阳,徐,丹尼斯Chang和李郝导致的起草和修订手稿并接受最后的手稿。

确认

作者感谢美国杂志专家有用的建议和高素质的英语编辑。本研究的赠款支持国家基础研究计划(973计划,中国)(2015号cb554405)和国家科技重大项目(2018号zx09737 - 009)。

补充材料

图S1: SLT的影响在星形胶质细胞细胞生存能力。(A) MTT试验检测细胞生存能力接受不同剂量的SLT 24 h。(B) MTT试验检测细胞生存能力接受不同剂量的期间为6 h SLT OGD感应。数据表示为 ( )。 , ,和 与对照组;^# ,^{# #} ,和^{# # #} 与OGD组。图S2:分析显示促炎介质的相对水平il - 1β、il - 6和CXCL10 (IP-10)控制单元和LCN2超表达细胞条件培养基没有OGD剥夺。图S3:星形LCN2体外的表达没有OGD剥夺。(补充材料)

引用

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