文摘
最近的研究表明,维生素D缺乏可能负责肌肉萎缩。本研究的目的是调查的标记表明肌肉萎缩,信号蛋白、线粒体能力在慢性下腰痛患者关注性别和血清维生素D水平。这项研究涉及慢性下腰痛(LBP)患者行后路椎体间融合术胜任(PLIF)。患者分为三组:补充(SUPL)和维生素D(3200国际单位/天5周),安慰剂与正常水平的维生素D(进而)和安慰剂组与缺乏维生素D (DEF)。肌肉萎缩的标记,包括atrogin-1和igf - 1的蛋白质含量,Akt, FOXO3a PGC-1α和柠檬酸合成酶(CS)活动确定收集multifidus肌肉。paraspinal肌肉,igf - 1水平较高进而组相比SUPL和DEF组( )。SUPL组中,我们发现pAkt显著增加蛋白质含量( )和减少FOXO3a水平( )。男人和女人之间Atrogin-1内容明显不同( )。PGC-1的蛋白质含量α进而组明显高于比DEF集团( )。CS paraspinal肌肉活动在DEF SUPL组高于集团( )。我们的研究结果表明,维生素D缺乏与氧化应激升高,肌肉萎缩,降低线粒体功能multifidus肌肉。因此,维生素d缺乏的LBP患者可能减少了PLIF手术后早期和有效的康复的可能性。
1。介绍
骨骼肌萎缩发生在正常的肌肉结构蛋白的合成和降解之间的平衡是打扰。慢性下腰痛(LBP),现代社会中最普遍的肌肉骨骼疾患之一(1),导致paraspinal肌肉的萎缩(2]。肌肉萎缩Fbox (MAFbx / atrogin-1),被确认为一个基因的肌肉特定的泛素连接酶(E3)。这个连接酶,随着肌肉无名指1 (MuRF1),负责肌肉结构蛋白的降解在骨骼肌萎缩引起的固定(3),停止使用,饮食限制,老化、癌症等。4- - - - - -6]。特别是,这些基因已知有明显负责肌肉萎缩,因为他们的抑制减少去神经引起的肌肉萎缩。此外,他们已经被证明能够起到关键作用在肌肉萎缩的感应多个停止使用动物模型(4,5,7]。尽管这些数据,底层肌肉萎缩的确切机制尚未完全阐明。
枸杞多糖可能是由于不同的因素包括腰椎稳定性通过nonsufficient激活的腰椎稳定肌肉如multifidus肌肉(8]。因此,减少multifidus肌肉的激活其渐进式肌肉萎缩的主要原因和upregulation atrogin-1基因表达。丝氨酸/ threonine-specific蛋白激酶(激酶)/ O3 forkhead框(FOXO3)轴控制atrogin-1基因的表达(9]。FOXO转录因子被认为控制一半的基因识别的分子“共同萎缩蓝图”出现在不同的萎缩类型(10,11]。Akt蛋白激酶,是重要的信号通路参与蛋白质合成和骨骼肌肉的生长12]。同时,生产过剩的活性氧(ROS),干扰氧化还原状态,减弱抗氧化防御系统被称为主要因素对萎缩(13]。最近,我们表明,维生素D缺乏与更高的氧化应激和抗氧化酶活性升高患者的肌肉paraspinal枸杞多糖(14]。
维生素D似乎作为多功能调节器在骨骼肌15]。维生素D有助于保持骨骼健康患者在健康受试者以及显示的结合paraspinal肌肉萎缩和弱点,如腰痛患者(16]。横断面研究发现积极的维生素D状况之间的联系和总或四肢的肌肉在男性和女性17- - - - - -19]。维生素D的行动激素介导的维生素D受体(VDR),控制基因表达(配体依赖性转录因子的一个20.,21]。越来越多的研究在非人类和人类骨骼肌细胞的行为报告,维生素D也由VDR位于骨骼肌细胞(22- - - - - -24]。有趣的是,最近的研究表明,药物诱导肌肉损失- / -老鼠是在缓慢的肌肉,比如multifidus肌肉,肌肉比快(25]。维生素D的确切作用机制的肌肉仍然未知。胰岛素样生长因子1 (igf - 1),一个合成代谢激素,可以积极与25-hydroxy血清维生素D水平(26]。因此,我们认为维生素D缺乏可能与下调igf - 1在骨骼肌萎缩。最近,我们报道,长期缺乏维生素D会导致VDR消融,氧化应激和线粒体功能障碍,结果,导致肌肉萎缩(27]。
本研究的目的是评估和比较的水平选择标记的肌肉萎缩,信号蛋白和骨骼肌线粒体能力缺乏的患者和正常的维生素D水平,和患者补充维生素D或安慰剂。此外,根据最近的数据(14),我们认为维生素D的可能机制预防肌肉萎缩可能通过氧化应激介导,igf - 1 / Akt / FOXO3通路。具体来说,我们建议,肌肉萎缩与血清维生素D缺乏与降低igf - 1和失活和Akt激活和FOXO3。此外,规范化水平的血清维生素D会改善相对肌肉萎缩和维持生理线粒体功能。
2。材料和方法
2.1。腰痛患者
研究人口曾被Dzik和同事14]。简单地说,十九岁妇女和19人参与了这项研究。病人都是白种人。孕妇或哺乳期妇女不包括在内。所有经历过慢性腰痛患者继发退行性疾病和一般的不稳定和适合腰椎手术利用静态或动态植入物(后路椎体间融合术(PLIF))。疼痛持续时间和强度没有明显差异在性别之间。在所有情况下,枸杞多糖引起非特异性和机械。所有科目给他们知情同意包含之前参加了实验。研究符合赫尔辛基宣言,和当地机构生命伦理委员会批准的协议是在格但斯克(没有。NKBBN / 120/2012)。
2.2。研究设计
描述的研究设计以前Dzik和同事(14]。简单地说,患者被随机分配到组补充25 (OH) D的3200 IU35周/天(SUPL, )用植物油或安慰剂组补充。在基线和5周后采集了血样测定血清维生素D的补充浓度。基于血清维生素D浓度,安慰剂组的患者分为两组:安慰剂组与正常浓度的维生素D(进而, )25 (OH) D3水平高于50 nmol / L和安慰剂组与缺乏维生素D (DEF, )25 (OH) D3血清水平30至49 nmol / L (28]。补充5周后,multifidus肌肉样本获得的所有患者在PLIF手术。病人的特点归纳在表格1。
2.3。血液分析和收集
采集的血液样本在基线和后5周的补充。样本离心机,享年2000岁10分钟在4°C。分离血清样本冷冻保存在-80°C,直到后来的分析。包含血清样本的管子number-coded为了盲目的实验室人员对治疗组和样本集合的顺序。测定了血清中igf - 1免疫(DG100、研发系统、美国)根据制造商的指示。
2.4。人类肌肉样本
5周后补充,multifidus肌肉样本来自PLIF手术期间所有患者。第十胸椎之间的所有肌肉采集标本和第五腰椎。40 - 150毫克multifidus肌肉标本收集和立即冻结在-80°C。
2.5。肌肉均化
组织样本重组在冰冷的裂解缓冲Tris-HCl包含50毫米,1毫米EDTA, 1.15%的氯化钾,0.5毫米德勤,0.2%蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Sigma-Aldrich P834)和磷酸酶抑制剂平板电脑PhosSTOP(罗氏公司、意大利)。最后的匀浆浓度为8%。样本离心机,享年750岁10分钟4°C,上层清液分为串行整除酶活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹(WB)测量。16000年世行离心机在样本和ELISA,享年5000岁 。蛋白质浓度测定用布拉德福德试验(Sigma-Aldrich B6916)根据制造商的指示。
2.6。化验:肌肉分析
胰岛素样生长因子1 (igf - 1)和atrogin-1肌匀浆测定使用免疫测定试剂盒(IGF-1-SEA050Hu。云克隆公司;atrogin-1 EH4228,好的测试),根据制造商的指示。
2.7。线粒体柠檬酸合成酶活性
柠檬酸合成酶(CS)活动以37°C据De Lisio et al。29日]。简单地说,30μ上层清液l(最终浓度稀释至4%;750年 )添加到850μl的缓冲区(0.1米Tris-HCl 5毫米EDTA, 0.05% Triton-X100, pH值8.1),+ 100μl的新鲜DTNB(1毫米),10μl乙酰辅酶a (10μ米),10μl新鲜的草酰乙酸(10毫米)来初始化反应。反应是在重复进行,吸光度是阅读在412 nm分光光度计(CE9200,塞西尔仪器有限,剑桥,英国)。CS活动表示为nmol /分钟/毫克的蛋白质。
2.8。西方墨点法
等量的总组织溶解产物分离在4 - 20%,30岁μl Mini-PROTEAN TGX™凝胶(Bio-Rad实验室、美国)或10% SDS-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和转移到一个聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)。膜被屏蔽解决方案包含10毫米Tris-buffered盐水,渐变20 0.05%,脱脂奶粉5%或5%牛血清白蛋白(BSA) (Sigma-Aldrich),然后与初级抗体包括PGC-1孵化α(圣克鲁斯,sc - 13067,稀释1:500),Akt 1/2/3,(圣克鲁斯,sc - 8312,稀释1:500),P-Akt 1/2/3 (Ser473年)(圣克鲁斯,sc - 7985 r,稀释1:500),FoxO3a(细胞信号,2497,稀释1:500),P-FoxO3a (Abcam ab154786,稀释1:500),Fbx32 (Abcam ab168372,稀释1:1000),和β微管蛋白(细胞信号,2146,稀释1:500)一夜之间在4°C。膜处理二级anti-rabbit, anti-mouse抗体(稀释1:20000)在室温下1 h。以适当的二次抗体治疗后,乐队可视化使用ImageQuant拉斯维加斯500(通用电气医疗集团)。蛋白质水平的变化是由密度测量方法使用量化LASImage软件。β微管蛋白被用作车道加载控制。免疫印迹进行至少两次。
2.9。统计分析
使用一个软件包进行统计分析(Statistica v 13.1, StatSoft Inc .,塔尔萨,好吧,美国)。结果表示为 。男性和女性之间的差异在同一组被学生的测试 - - - - - -测试。识别组织之间的显著差异,结果分析了方差分析其次是最小显著差(LSD)测试。差异与的价值至少 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
数据与病人的血清25 (OH) D3水平前后补充以前发表的(14),在表中做了总结1。简单地说,血清25 (OH) D3水平明显不同的安慰剂组之间,DEF,进而组,前后补充。五周的补充每天3200国际单位的维生素D3提高血清维生素D水平平均53 nmol / L SUPL组,血清25 (OH) D水平387 nmol / L以上,这是12 nmol / L高于表示作为最优的阈值水平维生素D水平为成人(28,30.]。
循环进而组织中igf - 1的含量明显高于DEF和SUPL组相比之前和之后的补充。补充前,血清igf - 1的内容 , ,和 SUPL ng / mL, DEF,分别,进而组织(图1(一), )。是补充后,血清igf - 1水平 ng / mL SUPL组, ng / mL DEF组 ng / mL进而组(图1(一), )。我们没有观察到任何差异之前和之后的补充和男女之间在特定的组织。进而组肌肉igf - 1的浓度最高, ng / mL。在DEF和SUPL组显著降低(图1 (b), )。DEF组igf - 1的水平 和 ng / mL SUPL组。我们没有发现任何区别男性和女性在肌肉igf - 1水平。
(一)
(b)
免疫印迹分析肌肉萎缩标记Fbx32 (atrogin-1)表明,在DEF atrogin-1内容比一口组高38.7%和22%高于进而组(图2(一个))。与ELISA肌肉atrogin-1浓度,测量,是最高的DEF集团( ng /毫克蛋白)。见sub和SUPL团体,atrogin-1的内容 和 分别为ng /毫克(图2 (b))。有一个显著差异atrogin-1肌肉男人和女人之间的整体内容。肌肉atrogin-1水平女性比男性高出50% ( ng / mg和 分别为ng /毫克)。没有区别男性肌肉atrogin-1内容( , ,和 DEF ng /毫克的蛋白质,进而和SUPL组,分别)。然而,有一个三组之间的差异观察女性。女性在DEF组明显高于atrogin-1水平相比进而组(图2 (b), )。维生素d缺乏的女性平均 ng / mg和女性足够的维生素D平均的 ng /毫克。女性补充维生素D, atrogin-1的蛋白质含量 ng /毫克。此外,女性在DEF和SUPL组明显高于atrogin-1内容与相应的男人(图组2 (b), )。男人和女人之间没有差别,进而组。
(一)
(b)
柠檬酸合成酶的活性(CS)的肌肉,这是常用的标记线粒体功能(31日),明显高于SUPL组相比,DEF组。进而组,CS活动往往高于DEF组,但差异不显著。在所有患者CS的活动 , ,和 nmol / SUPL最小/毫克的蛋白质,进而分别和DEF组(图3, )。在女性中,我们没有观察到任何差异组,而在男性有更高的CS活动SUPL组相比,DEF组(图3, )。
线粒体蛋白质含量的生物起源转录factor-PGC-1α——进而显著的高于组相比DEF组(图4, )。在PGC-1 SUPL集团α内容也高于DEF组,但差异未达到意义。
确定维生素D在肌肉萎缩的可能机制,我们研究了一种蛋白激酶的磷酸化状态和FOXO3a。磷酸化蛋白质含量的一种蛋白激酶(pAkt)和磷酸化FOXO3a (pFOXO3a) DEF,进而组相似。SUPL组中,我们观察到的水平明显高于pAkt(图5, )和减少FOXO3a(图的水平6, )。
4所示。讨论
我们研究的主要发现是,腰痛患者血清维生素D缺乏显示减毒CS活动,atrogin-1内容的增加和减少PGC-1αmultifidus肌肉中蛋白质含量。此外,我们注意到更高的igf - 1的内容,患者血清和肌肉,足够的维生素D水平。此外,我们观察到显著增加pAkt水平和减少患者补充维生素D的FOXO3a水平在一起,我们的研究结果表明,维生素D在肌肉的作用可能是通过FOXO3a / Akt通路或PGC-1触发α由于活性氧生成。
迄今为止,维生素D和igf - 1之间的相互作用,显示这种激素合成代谢对骨骼肌的影响,根据他们的描述很流通水平。魏和同事表明,igf - 1引起的血液水平的增加1,25 (OH)2D3激素活性维生素D代谢产物,通过刺激hydroxylase-1的表达式和活动α生产1,25 (OH)2D3在肾脏32]。此外,维生素D管理人类的时候,血液中igf - 1水平增加(33]。另一方面,另一项研究表明,高剂量维生素D补充剂的一年并没有显著改变女性血清igf - 1在一个较高的患乳腺癌的风险(34)也在前驱糖尿病受试者(35]。我们的研究结果显示,进而组患者血清igf - 1水平高于病人在DEF和SUPL组,前后补充。患者正常的维生素D水平提供大约20%的血清igf - 1浓度高于那些缺乏维生素D或补充。然而,我们没有观察到任何更改有关补充自己在特定的组织。肌肉igf - 1内容更高的患者足够的血清维生素D水平与其他组相比,这是符合循环igf - 1水平。令人惊讶的是,我们没有发现任何区别患者补充维生素D缺乏和病人。最近,sessue Hayakawa和同事发现,不直接影响igf - 1 1, 25 (OH)2D3在骨骼肌。他们建议维生素D刺激组织中igf - 1的生产除了诱导的骨骼肌和igf - 1能进入体循环和施加肥厚性影响肌肉组织或支持影响肌肉功能15]。在这项研究中,我们显示升高血清和肌肉igf - 1含量LBP患者足够的维生素D缺乏SUPL组中igf - 1的增加表明,igf - 1没有直接影响维生素D或感应与时间有关。这就引发了一个有趣的观点,应该在将来的研究中得到解决。值得注意的是,足够的维生素D水平多长时间必须出现在循环为了增加肌肉igf - 1的内容在以前缺乏维生素D的人吗?重要的是要注意,我们没有发现任何igf - 1与atrogin-1之间的相关性,这表明,维生素D对骨骼肌肉萎缩的作用机制可能涉及其他因素。
在目前的研究中,我们分析了肌肉atrogin-1内容和显示atrogin-1最高的病人缺乏维生素D和最低的病人足够的。维生素D补充似乎击退萎缩性改变,因为我们观察到几乎低含量atrogin-1 SUPL组进而组。尽管,这些结果并不重要,当我们认为男人和女人在一起。目前的研究表明,男性和女性有不同的反应缺乏维生素D和补充。男人似乎对维生素D对于paraspinal肌肉萎缩。值得注意的是,在女性中,有一个高水平的atrogin-1集团缺乏维生素D相比足够。似乎缺乏维生素D升级女性肌肉萎缩。我们的研究结果是一致的最新研究长期补充维生素D的影响在全球转录组剖面显示维生素D调节女性要比男性更多的基因(3.2倍36]。在此,我们可以检测维生素D补充剂的强势影响女性相比,男性的基因表达。此外,我们观察到几乎相同级别的atrogin-1女性女性足够的维生素D的补充了维生素D缺乏维生素D的人在基线,其血清维生素D水平提高到正常水平。这个观察可能表明需要补充维生素D对女性为了延缓肌肉发生萎缩。
线粒体功能障碍的维生素d缺乏的个体是归因于intramitochondrial缺钙(37氧化途径[的]或缺乏酶功能38]。在目前的研究中,我们报告,线粒体功能是改善患者补充维生素D和那些患者相比,正常水平的维生素D缺乏。CS的活动在DEF组低32%比进而集团和相比SUPL组低38%。我们的数据是一致的症状的研究开展,维生素D缺乏的个体,这表明,维生素D治疗增强肌肉线粒体氧化磷酸化最大运动后(39)和骨骼肌CS活动增加和exercise-mediated心肺功能40]。同时,瑞恩和同事的最近的研究证明增加骨骼肌细胞的耗氧率与维生素D治疗后,表明维生素D动作调节线粒体氧消耗和动力学(41]。此外,我们的研究表明,CS活动最高SUPL组男性和女性,与其他群体相比相同性别的。男性和女性在DEF组最低CS活动以及其他组在相同的性。我们还发现PGC-1蛋白质含量下降α,一个转录辅激活参与slow-twitch纤维的形成和线粒体生物起源42]。这表明,维生素D诱导PGC-1α合成,从而可能参与通过增强线粒体功能减缓肌肉萎缩。虽然已是不争,蛋白质合成的减少导致废弃萎缩,到目前为止,还没有数据表明PGC-1α信号直接介导蛋白质合成途径(43]。然而,PGC-1α转录活动显示,防止肌肉蛋白质降解。这是首先证明了Sandri和同事,他们表明,PGC-1超表达α在老鼠身上阻止denervation-induced肌肉萎缩的预防关键基因的表达泛素蛋白酶体途径和自噬44]。同时,对人体骨骼肌的一项研究显示,PGC-1α信使rna显著下调在immobilization-induced肌肉萎缩的早期和晚期阶段(45]。更重要的是,PGC-1的表达吗α从年龄和骨骼肌保护denervation-induced肌肉萎缩,以及延迟线粒体肌病的发病46]。最近,我们表明,维生素D缺乏引起的氧化应激和更高的抗氧化酶的活性:锰超氧化物歧化酶(MnSOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)肌肉(14]。综上所述,CS和酶活性降低PGC-1越低α蛋白质含量和更高的活动肌肉的MnSOD表明维生素d缺乏的腰痛患者的线粒体功能受损。
正如上面提到的,通过论述维生素D的行为。VDR基因表达是受多种激素包括甲状旁腺激素、视黄酸(47),和糖皮质激素(48]。同时,HuLM细胞上最近的一项研究表明,雌激素抑制VDR,维生素D有可能抑制雌激素受体的表达α(49]。维生素D的另一项研究报道,16周干预诱导人类骨骼肌VDR基因表达增加了20%在老,mobility-limited、维生素D-insufficient女性(50]。以前,我们提出了VDR肌肉含量较高患者充分补充维生素D。此外,我们表明,VDR患者缺乏维生素D的含量低于唤起ROS生成标记较高的过氧化脂质和蛋白质,以及增加肌肉抗氧化剂酶活性(14]。为了研究维生素D和肌肉萎缩之间的可能联系,我们检查了PGC-1αFOXO3a, Akt肌肉蛋白质含量。FOXO蛋白质是肌肉萎缩的一个重要因素,导致蛋白酶体基因的表达,MuRF1 atrogin-1。重要的是要注意,PGC-1升高α内容,除了它的功能的线粒体生物起源,防止FOXO3a[转录活动44),因此,线粒体可能参与骨骼肌萎缩的进展。
Akt的功能块FOXO3磷酸化的守恒的残留,导致他们封存在细胞质中远离目标基因(51]。磷酸化FOXO3a不把原子核,因此,atrogin-1的表达和MuRF FOXO的目标基因,抑制。结果表明:FOXO3也可以由过氧物酶体的作用proliferator-activated受体γ共激活剂1α(PGC-1α)[44),这是被广泛接受的主控制器线粒体生物起源以及监管机构的许多基因参与能量代谢52]。在目前的研究中,我们发现增加水平的一种蛋白激酶和减少蛋白质含量的FOXO3a组添加了维生素D和DEF,进而组。此外,我们观察到PGC-1的蛋白质含量更高α肌肉的LBP患者正常的维生素D水平与维生素D补充后这个观察表明,补充充足维生素D和维生素D可能导致萎缩性变化的回归。可能的维生素D在骨骼肌的作用机制仍需要在将来的研究中得到解决。根据提出的模型,在与停止使用相关肌肉萎缩的情况下,减少igf - 1引起一种蛋白激酶的抑制和FOXO3a脱磷酸作用。脱去磷酸FOXO3a把原子核和加速atrogin-1 MuRF1和随后的表达促进肌肉蛋白的降解10]。我们的数据证实,维生素D的可能作用在肌肉萎缩的预防可能通过igf - 1 / Akt介导FOXO3a途径。然而,在没有补充患者血清igf - 1的变化,我们的观察表明PGC-1α和线粒体可能起到至关重要的作用在肌肉萎缩通过调节线粒体功能。另外,如前所述,PGC-1α可能灭活FOXO3a因此有助于抵抗肌肉萎缩,恢复线粒体的生理功能。此外,结果表明,FOXO3a激活引起的upregulation MnSOD基因表达的差别,对这些线粒体基因表达(53]。我们先前公布的数据证实了这一观点。我们报道MnSOD活动增加维生素d缺乏的病人。综上所述,我们的研究结果表明,维生素D的作用可能是通过igf - 1 / Akt介导FOXO3途径或通过PGC-1α独立和FOXO3a(图7)。
总之,我们表明,维生素D缺乏与减毒CS活动有关,PGC-1的蛋白质含量下降α,以前公布的氧化应激在multifidus腰痛患者的肌肉14]。我们发现atrogin-1蛋白质含量的增加,维生素D水平较低的女性的肌肉。这些结果表明,维生素D缺乏引起肌肉萎缩和减少线粒体功能paraspinal肌肉。另外,我们观察到更高的患者血清和肌肉中igf - 1的内容足够的维生素D水平。我们的研究结果表明,维生素D在肌肉的作用可能是通过FOXO3a / Akt通路或PGC-1触发α和线粒体。与维生素D补充足够的腰痛患者的血清维生素D水平增加线粒体功能和抑制multifidus肌肉萎缩的肌肉,和它可能有一个有益的对一个有效的腰痛患者早期康复的影响。然而,未来的研究对肌肉功能还应该考虑病人的补充足够的维生素D和患者不同BMI和年龄更好地了解维生素D函数的机制。应该有病人的分层根据BMI和不同激素和生理性别反应。
缩写
| 一种蛋白激酶: | 丝氨酸/ threonine-specific蛋白激酶 |
| 铜/ ZnSOD: | 铜/ zinc-dependent歧化酶 |
| CS: | 柠檬酸合成酶 |
| FOXO3: | Forkhead盒O3 |
| GPx: | 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| igf - 1: | 胰岛素样生长因子1 |
| 腰痛: | 腰痛 |
| MnSOD: | Manganese-dependent超氧化物歧化酶 |
| PGC-1α: | 过氧物酶体proliferator-activated受体γ共激活剂1α |
| PLIF: | 后路椎体间融合术 |
| ROS: | 活性氧 |
| 论述: | 维生素D受体。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果中包括补充信息文件。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。
确认
这项研究是由美国国家科学中心、波兰(UMO-2012/05 / B / NZ7/02493)。我们想谢谢詹尼·麻省理工博士的修订和专门的评论,帮助改善我们的手稿。
补充材料
格:组织;DEF:缺陷;进而:足够的;SUPL:足够的血清维生素D水平;血清igf - 1:血清胰岛素样生长因子在补充维生素D;后血清igf - 1:补充维生素D后血清胰岛素样生长因子;igf - 1:肌肉胰岛素样生长因子在补充维生素D和安慰剂;CS:柠檬酸合成酶活动后的肌肉补充维生素D和安慰剂;atrogin-1;肌肉atrogin-1浓度,用ELISA测定; Akt: the ratio of phosphorylated and dephosphorylated serine/threonine-specific protein kinase versus loading control,β微管蛋白,以补充维生素D和安慰剂后肌肉;FOXO3:磷酸化的比率和脱去磷酸forkhead盒O3和加载控制,β微管蛋白,以补充维生素D和安慰剂后肌肉;PGC-1α:肌肉过氧物酶体proliferator-activated受体γ共激活剂1α和加载控制,β微管蛋白,以补充维生素D和安慰剂后肌肉;Fbx32 (atrogin-1): atrogin-1的肌肉蛋白质含量和加载控制,β微管蛋白,测量后的肌肉补充维生素D和安慰剂。(补充材料)