文摘
大多数哺乳动物组织细胞的氧气分压的经验在活的有机体内相当于1 - 6%2(即。,physioxia). In standard cell culture, however, headspace O2水平通常不是积极监管,在这些条件下~ 18%。这个驱动器在细胞培养中氧过多媒体可以影响多种细胞活动,可能会损害的能力在体外模型复制在活的有机体内生物学。在这里,我们审查和讨论一些特定的O2消耗细胞器和酶,包括线粒体NADPH氧化酶类,transplasma膜氧化还原系统,一氧化氮合成酶、黄嘌呤氧化酶、单胺氧化酶对O的敏感性2的水平。许多这些产生活性氧(ROS / RNS)和/或氮物种为主要终端产品或副产品和极其敏感,O2水平从1%到18%不等。有趣的是,他们中的许多人也转录的目标低氧诱导因子(hif)和慢性细胞生长在physioxia 18% O2可能会改变他们的表情。水通道蛋白,促进过氧化氢扩散的细胞,也受低氧诱导因子,表明O2通过过氧化氢水平可能会影响细胞间的沟通。O2这些重要的敏感活动强调保持physioxia文化的重要性。
1。介绍
哺乳动物细胞通常氧条件下培养。虽然大多数细胞经历氧气水平的1 - 6%在活的有机体内(physioxia;表1),几乎所有的哺乳动物细胞培养在湿润大气在37°C和有限公司2增加了5%。尽管顶部空间啊2通常不是测量水平,它是18 - 19%在这些条件下由于位移O2由水蒸气和有限公司2。当阿2水平用于细胞培养的实验测量和报告,这些几乎总是那些顶空气,而不是媒体。尤其是在新陈代谢活跃的细胞生长在高密度pericellular媒体O2水平细胞经历可能大大低于顶部空间O2水平(1- - - - - -3),因为阿2不断从媒体通过线粒体呼吸和其他啊2消耗细胞的活动。
O2参与许多代谢反应,有些敏感,O2水平范围physioxia和18%之间。因此,应该培养的哺乳动物细胞在生理相关O2的水平。这不是做,重要的是要注意的潜在影响细胞功能。一个潜在的O升高的结果2在细胞培养中媒体增加细胞活性氧(ROS)的生产和氮(RNS)的物种。这可能导致高O的观察效果2水平细胞衰老、分化和凋亡,在广泛的其他特征明显更少的影响([4- - - - - -6];菲尔et al . 2007年)。
越来越多的升值的作用2在细胞生物学水平(例如,(7,8])。然而,有一个有限的机械的了解supraphysiological O2水平影响具体啊2端依赖过程。在本文中,我们考虑一下啊2灵敏度的一些重要啊2消耗在哺乳动物细胞细胞器和酶之间O physioxia和18%2(标准细胞培养条件)。我们使用Michaelis-Menten常数(K米(O2每个O))2消耗酶(这个值是可用的)作为一种方便的方法来比较2灵敏度范围广泛的不同细胞器和酶。所有啊2和K米(O2从发表作品转化为%)值2在37°C,因为% O2是在大多数使用的计量单位的描述细胞培养实验。一般来说,较高的K米(O2)值表明酶之间的差异会更敏感在活的有机体内和在体外O2的水平。我们解决生理作用(s)产生的代谢物(s)从这些O2消耗反应和O2从生理到18%不等O敏感性2的反应。我们进一步总结了有趣的观察,许多O2积极消耗和ROS / RNS-producing酶是由缺氧,在某些情况下,特别是在低氧诱导因子- 1 (HIF-1)。
1.1。氧限制在细胞培养中线粒体的呼吸
保持高的一个重要目标2文化水平是确保线粒体呼吸不受限于O2可用性。生理上的一些最全面、O相关数据2水平需要维持最大线粒体呼吸率提供了霍夫曼et al .(2009),孤立肝线粒体而系统地测量这些值不同2浓度。状态4呼吸我复杂的或复杂的第二基板(分别为谷氨酸/苹果酸或琥珀酸)或附近的棕榈酰肉碱是最大啊~ 1%2霍夫曼(2009)。Marcinek et al。(2003)表明,在骨骼肌呼吸不是O2直到有限啊2低于~ 0.5%,类似于Gnaiger观察(2001)对分离大鼠肝线粒体。了解如何与O2在细胞培养充足,我们可以比较这些值的水平O2立即出现在媒体以外的细胞(pericellular O2)或胞质(表内2)。
Pericellular O2值粘附细胞层可以使用各种各样的实时测量方法,包括Luxcel和海马平台(美国安捷伦)。我们使用PreSens OxyDish (PreSens精密传感GMBH德国)O2敏感的荧光探针浸渍到组织培养皿塑料。对于大多数细胞系播种在典型的密度和维护有限公司5%2孵化器在37°C O2控制,顶部空间啊2~ 18%和pericellular O2水平接近这个(3]。这是远远超出所需要支持的最大线粒体呼吸率。当顶部空间啊2维持在生理相关水平,然而,pericellular和细胞内阿2水平可能会显著降低,特别是媒体的变化和/或混合是罕见的。
细胞内阿2在培养细胞水平可以测量使用各种荧光探针(Zhdanov et al . 2012;(9])。使用这些工具测量表明,在较高的O2(~ 20%)的典型标准的细胞培养,细胞内O2从14 - 17%水平取决于细胞类型,介质成分(特别是燃料来源是否促进氧化磷酸化)的依赖,和播种密度(表2)。条件促进更快的O2消费低这些值,但是它们通常氧。在生理上更相关的顶部空间O25 - 9%的水平,细胞内O2典型的文化条件下水平从0.5%到5%不等。因此,在标准的细胞培养条件下,细胞内O2水平通常至少10倍是什么需要维持最大线粒体呼吸率基于V马克斯值由霍夫曼et al。(2009)等。另一方面,细胞培养在顶部空间O 5 - 6%2导致细胞内阿2可能足够低的水平限制呼吸当细胞处于高密度或生长在respiration-promoting媒体。
虽然高于生理顶部空间O2水平组织培养有助于确保线粒体呼吸不是氧气有限,这可能刺激生产的意外后果ROS和RNS的各种酶,广泛表达于常见的细胞系。增加活性氧/ RNS伴随对redox-sensitive信号事件的影响和潜在的大分子氧化损伤应该期望在这些条件下,事实上,这些都是观察。因此重要的是要了解氧气水平和利率之间的关系在培养细胞ROS / RNS的生产。在哺乳动物细胞,ROS / RNS所产生广泛的细胞器和酶,包括线粒体NADPH氧化酶(Nox)、一氧化氮合酶(NOS)、单胺氧化酶(MAO)、黄嘌呤氧化酶/氧化还原酶(XO / XOR),脂氧合酶(LOX),环氧合酶(COX)、血红素加氧酶(HOX)和transplasma膜氧化还原系统(tPMRS)。在这里,我们将讨论如何标准细胞培养的氧过多将影响所有的活动和/或表达这些细胞器和酶。氧依赖性酶不是详尽的列表,我们省略了一些oxygen-metabolizing酶,我们不容易找到数据对氧敏感的反应速率。
1.2。氧浓度和线粒体ROS生产
超氧化物/小时2O2生产的副产品氧化磷酸化在孤立的线粒体,深入研究和生产许多网站,尽管通常nonphysiological条件下,已确定(图1)。线粒体超氧化物生产的特定网站最近审查(例如,10])这里不详细。线粒体内过氧化物产生在不同网站释放到矩阵或IMS的内膜。H2O2因超氧化物在线粒体基质可以分散的矩阵。
虽然线粒体是经常说负责大部分的细胞ROS生产,这不是证明(11)事实上似乎不太可能成为普遍真正考虑到细胞总量被线粒体变化从几个百分点low-metabolic率在心肌细胞(细胞多达30%12]。同样,其他ROS的相对水平和RNS生产商如氮氧化物和NOS细胞类型和生理条件的不同而有所差异。因此,尽管它可能是真的,线粒体活性氧的生产是最重要的网站一些细胞类型,他们可能不会在别人。尽管如此,重要的是要考虑线粒体活性氧产量的敏感性细胞含氧量盛行的文化。
霍夫曼et al。(2007;提供详细的测量和计算的H。20092O2生产(原始超氧化物)从孤立的肝脏线粒体呼吸状态4在不同基质在37°C(表3)。测量了一系列O2水平,有或没有各种呼吸道毒药,允许计算K米(O2H)值2O2生产与不同呼吸基质等网站。值得注意的是,网站导致线粒体H2O2生产培养细胞,这可能是主要的复杂我第三单核苷酸FMN站点和复杂的问o网站,都是在同一低饱和O2水平呼吸。注意,ETFQOR可能不是线粒体H的主要因素2O2生产标准的细胞培养条件下因为脂肪酸不包括燃料在大多数商业媒体。复杂的生理相关性我只建立回流在缺血/再灌注13),这些会发生在正常细胞培养只有在媒体变化或使hypoxia-hyperoxia转换。因此,根据上述的观察,线粒体活性氧产量的可能不是O2召集最标准的细胞培养条件下或在顶部空间O2低至5%水平,提供细胞内O2仍然在0.5%以上。因此,小差异预计将在线粒体活性氧产量之间的5% (physioxia)和18%(标准细胞培养)O2。
1.3。NADPH氧化酶类
有七个家族成员烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶类(Nox1-5和Duox 1和2),其中一些(例如,Nox1 2和4)相当广泛分布在哺乳动物组织和细胞系(14]。氮氧化物是multisubunit membrane-spanning酶运输电子NAD (P) H跨生物膜(15]。虽然氧化氮酶定位各种细胞膜,在等离子体膜都可以找到,它们运输电子外部O2,从而导致生产超氧化物在细胞外空间(14]。过氧化物产生在细胞外和dismuted H2O2可以扩散到细胞的起源或邻近细胞。
重要的是,最近的研究表明,Nox4在几个重要方面不同于其他Nox亚型。首先,Nox4本地化(至少在一些细胞和/或生理条件)线粒体(16)在其活动似乎与呼吸道复杂我和ATP (17,18]。Nox4活动并不依赖于与附属子单元的相互作用。此外,Nox4优先生产H2O2而不是过氧化物(19]。Nox4 H2O2生产也非常敏感2水平范围physioxia和18%之间。
有很少的K米(O2)数据的氮氧化物亚型。此外,有一些疑问关于一些化验的氮氧化物活动使用的有效性隔离膜分数(20.,21]。尽管如此,可用数据表明Nox1的活动,Nox2, O Nox4都敏感2水平从5%到18%不等(表4)。Nox4, K米(O2~ 18%)价值,尤其敏感超过这个范围;O Nox4活动三元组之间的3%和12%2(19]。直接测量和培养生物C2C12细胞表明Nox1重大贡献和/或Nox4 H2O2在活细胞中生产(Amplex红色氧化),特别是在18% O2,因为这个值是强烈抑制GKT138731 (Nox1/4抑制剂;图2)。同样,在Nox1/2/4三重基因敲除小鼠皮肤成纤维细胞,H2O2生产18%啊2是在野生型成纤维细胞,只有1/10,5%啊2H2O2生产检测不到(图2)。因此,尽管有些有限,现有的证据表明,氮氧化物亚型产生H2O2利率是强烈依赖于O2的水平。这可能是观察如Nox4贡献主要细胞系细胞衰老,因为这些研究一直在进行18% O2。是否Nox4扮演同样的角色在活的有机体内阿,2水平低几倍,还不清楚,但必须考虑。
(一)
(b)
(c)
1.4。Transplasma膜氧化还原系统
transplasma膜电子转移(tPMET)系统是一个无处不在的系统将电子从胞质NAD (P) H以外的细胞,类似于氮氧化物(22]。tPMET系统的核心组件NAD (P) H-quinone氧化还原酶(NQO1) NADH-cytochrome b5还原酶(CytB5red)、辅酶Q10二硫化,ecto-NADH氧化酶硫醇换热器(ENox)。NQO1和CytB5red都分布在多个细胞内的本地化,包括与质膜。
tPMET系统使得细胞O重大贡献2消费在许多常见的细胞系(如Jurkat RAW264.7,胰腺β细胞;参见[23,24])。在respiration-deficient tPMET系统是高度调节(ρ0)细胞,它积累辅酶Q10在等离子体膜25]。在ρ0细胞,tPMRS可能的主要网站O2消费(24]。
多种细胞外终端电子受体是可能的,包括O2可以进行单电子还原生成过氧化物。纯化哺乳动物CytB5red直接产生超氧化物(26),尽管它的超表达在一些特定的情况下(有很大好处27,28]。NQO1与细胞内抗氧化功能(例如,29日]),但有助于减少细胞外的电子受体,可能包括O2在胰腺β细胞(23]。ENox蛋白质包括几个isoforms-the老年性arNox或许是最相关的ROS在细胞培养生产。这个同种型产生超氧化物和变得更在哺乳动物的组织中高度表达,在late-passage或衰老细胞在文化30.]。
tPMET系统只有被测量标准的细胞培养O2(18%),我们不知道任何数据的敏感性过氧化物生产O2浓度对系统作为一个整体或系统的各个组件。尽管如此,应该考虑的可能性tPMRS O2敏感在5 - 18%之间,O2端依赖其活动可能会影响细胞生理的变化。
1.5。水通道蛋白在跨膜H2O2和气体扩散
tPMRS和氮氧化物亚型(部分所有氮氧化物亚型定位到质膜)可以产生超氧化物或H2O2在细胞外质膜。这里,这些活性氧可能与膜反应或面临的膜结合蛋白细胞外空间的原始细胞或邻近的细胞。另外,H2O2直接生产或造成超氧化物歧化作用,可能穿过细胞膜起到细胞内的作用。H2O2磷脂的渗透性影响有限;事实上,H2O2膜渗透的低于H2O (31日]。然而,H2O2迅速平衡跨细胞膜通过水通道蛋白(aqp)。输水aqp结构研究表明,所有可能促进某种程度的H2O2细胞跨膜运动(32]。然而,经验数据模棱两可,这表明hAQP3和hAQP8特别好的H2O2转运蛋白(31日]。
有趣的是,阿2水平调节几个aqp的表达。AQP1和AQP3信使rna和蛋白质含量均增加1%和20%2([33];Hoogewijs et al . 2016年),尽管AQP5和AQP9表达式是降低低O2水平([34];Castro-Parodi et al . 2013年)。也有一些证据表明,缺氧可以通过转译后的修改(直接影响AQP8渗透率35]。最近的研究([36];Zwiazek et al . 2017年)也表明一些AQP亚型促进运输O2因此可能促进O2吸收细胞在低O2的水平。也有强有力的证据表明AQP1、AQP4可以运输其他重要的ROS / RNS,如没有(37,38]。综上所述,这些观察结果表明,媒体啊2水平可能会调整H2O2,不,和O2通过影响细胞膜的渗透性AQP表达和/或活动。这使它更加难以理解的详细动力学ROS / RNS和气体穿过细胞膜在活的有机体内当测量完成在体外在nonphysiological O2条件。
1.6。一氧化氮合成酶
号是一个家族的酶负责生产没有和L-citrulline从精氨酸和O2(39,40]。三种亚型的号已确定:内皮NOS(以挪士),神经元NOS (nNOS)和诱导NOS(间接宾语)41]。这三种NOS亚型份额约50%氨基酸身份(41),所有三个广泛表达于哺乳动物组织和细胞系。在某些情况下,包括瞬态缺氧/复氧,NOS催化一种“非耦合反应生产超氧化物而不是没有(Stuehr et al . 1991;(42,43];综述了在44])。
的第一个详细研究O2Rengasamy NOS反应的敏感性和约翰45)计算K米(O2O)值为0.63到2.31%2从牛脑NOS孤立和主动脉内皮生264.7老鼠巨噬细胞。随后,K米(O2)值已经出版的各种组织和细胞系,为特定的纯化以及NOS亚型(表4)。虽然这些值差别很大,可能由于实验条件的差异,O2亲和力nNOS和伊诺发现相对一致的范围内变化非常敏感,在O2O physioxia至18%的水平2。细胞系与高水平的两个亚型会因此产生更多标准的细胞培养条件下不到在活的有机体内。缺血/再灌注损伤的细胞培养模型通常采用缺氧附近一段之后,回到“normoxia”,后者是18%啊2。号活动可以分开在这些条件下,过氧化物生产在复氧率为18%2可能超过这将发生在回到physioxia在活的有机体内。
没有也可以减少产生的亚硝酸盐催化由几个酶包括XO / XOR (46]。这个反应是提升较低2水平和难以预测的影响2没有生产利率水平。因此,细胞之间的关系没有合成率和O2水平将取决于不同号的相对丰度亚型,具有不同的敏感性O2。
除了影响没有合成,O2水平没有影响新陈代谢([47,48];综述了在49])。没有特征通路是细胞代谢不佳。然而,众所周知,没有代谢细胞的速度更快,更高O2水平(50]。因此,高啊2从nNOS水平会影响生产速度,进气阀打开,同时增加新陈代谢的速率。再一次,很难预测这将如何影响稳态水平在所有细胞。在264.7原始细胞激活文化中,没有观察到生产的最大利率为8%2(50),尽管阿之间的关系2和没有水平在其他细胞类型是未知的。O2端依赖率没有新陈代谢会反过来影响其扩散距离,因此改变蛋白质改性的子集的细胞起源或邻近细胞。没有参与的关键蛋白质的许多监管转译后的修改,包括表观遗传修饰。鉴于这些不同的影响没有对细胞功能和O的影响2水平对合成,扩散距离,和新陈代谢的不,有明显的潜在生成nonphysiologically nonphysiological O相关的结果2的水平。
1.7。其他氧化酶类
XO和毛是两个广泛表达细胞氧化酶类的产品包括超氧化物和H2O2。XO及其前体XOR在哺乳动物细胞表达,在本地化的胞质和外部面临质膜(51]。XO和XOR都可以催化嘌呤的氧化,产生超氧化物自由基和H2O2(52]。在一些情况下,XO也从亚硝酸盐和硝酸盐催化生产,反应较低的O青睐2(46]。然而,这些后者化合物相对较低的水平在文化媒体和次要的活动可能因此在哺乳动物细胞培养。K米(O2)牛XO的价值一直在报道3 - 6%的范围2(表4)。有趣的是,超氧化物的相对产量与H2O2由O XO也敏感2水平范围内发现在细胞培养(1 - 21%),这样,在O2水平低于5%啊2H2O2形成推广[53]。此外,高啊2水平促进XOR的转译后的修改,减少其特定的活动(54,55]。因此,阿2在文化水平可能影响的相对利率ROS生产XO / XOR以及超氧化物的相对数量与H2O2生产。
毛是两个亚型,是缺氧。都是广泛分布于哺乳动物组织(56]。他们本地化的线粒体外膜催化降解的生物和饮食类,如去甲肾上腺素、多巴胺、酪胺,5 -羟色胺,苯乙胺和苄胺反应生产H2O2。报道K米(O2两亚型相差很大(表)值4)由于复杂的反应机理,O2亲和力是强烈影响单胺浓度(了57])。毛酶活性仍然预测敏感O2在5 - 18%的范围。因为H2O2由人物形象是在线粒体室附近,异常的线粒体和胞质氧化还原信号和/或大分子损伤可能是由于毛酶在O2细胞培养条件下典型的标准。
1.8。加氧酶
加氧酶催化氧的结合成一个有机基质。血红素加氧酶(HOX),脂氧合酶(LOX)和环氧合酶(COX)都是广泛表达于哺乳动物组织和细胞系。HOX血红素降解过程中很重要,虽然考克斯和液态氧协助花生四烯酸的分解通过两个独立的路径。
HOX本地化在内质网(了58])。有两种亚型,HOX-1 HOX-2,共享一个氨基酸序列的身份> 45%。虽然HOX-2持续表达,HOX-1是由内生和外生因素,如重金属、药理学药剂、炎症介质、紫外线和氧化应激。HOX酶氧化亚铁血红素生成一氧化碳、铁2 +和胆绿素。HOX纯化鸡肝的最大活动O2水平低至1.5% ([59];表4),这表明这种酶可能是O2即使在细胞培养在physioxia饱和。
考克斯加双氧酶是催化花生四烯酸、亚油酸的第一步分解导致前列腺素类衍生品的生产(了60])。考克斯酶调节细胞生长和信号通路参与癌症恶化[61年]。有两种亚型,COX-1和cox - 2 ~ 60%的氨基酸序列同源性。考克斯酶本地化内质网的膜和核膜。这些酶催化两步反应。在第一步中,环氧酶活动使用分子氧产生氢过氧化物前列腺素G2中间。过氧化物酶活动然后观察导致前列腺素的形成H2。K米(O2)值的COX-1-catalyzed花生四烯酸氧化不同O2 0.4%和3.1%之间,而K米(O2)cox - 2的价值有所降低(表4)。活动COX-1和cox - 2的浸透在10 - 20%左右2(62年,63年]。因此,这些酶也O2敏感的利益,以及他们的产品调节各种细胞活动包括细胞生长和分化61年),有可能是他们的活动增加18%2影响文化的细胞生理学的研究。
液态氧催化脱氧的多不饱和脂肪酸,产生各种各样的氧气和脂质自由基在某些条件下(了60])。有六个亚型的液态氧广泛分布于哺乳动物的组织和细胞。液态氧酶产生活性氧和脂质自由基参与细胞内的信号通路。O2水平影响脂肪氧合酶的反应在复杂的方式64年,65年),但测量K米(O2O)值是1 - 2.6%2(表4),使反应速率O2敏感的在相关范围。
1.9。ROS / RNS-Producing酶的转录调控
除了急性影响酶催化反应的活动,O2在细胞培养中可能影响不同的表达水平2消耗酶和细胞器。HIF-1和HIF-2 heterodimeric转录因子的活动是由O2通过的退化α子单元(HIF-1α,HIF-2α)。这个反应是由prolyl羟化酶催化(博士),它使用O2和2-oxoglutarate羟化HIF -α子单元导致随后的泛素化降解。第二个反应,羟基化的天冬酰胺HIF-1α催化的因素抑制HIF-1(富士康),抑制HIF-1转录活动。在一起,阿2调节的水平和活动HIF-1和/或HIF-2。两个羟基化反应是O2敏感在O physioxia至18%2的范围内。哺乳动物博士亚型有K米(O2)值~ 25% O2和富士康K米(O2)~ 11%(表价值4)。此外,博士活动可以调制产生的ROS / RNS上面讨论的许多酶标准培养条件下以更高的利率。
数百个基因转录受低氧诱导因子,有趣的是,大部分的ROS / RNS-producing酶上面讨论其中。在我们的实验中,Nox1和Nox4相对水平更高的O在5%到18%2(图3)。Nox4,三号亚型,液态氧,考克斯,毛,HOX都是转录诱导因子(表的目标5)。此外,一些aqp HIF监管,表明H2O2细胞膜的渗透性physioxia和18%时可能不同2。重要的是要注意,事实上,所有的数据收集关于这些酶的诱导调控使用18% O2O“normoxia”和1%2缺氧,但类似的结果预计为5%和18%的比较。
(一)
(b)
(c)
在对细胞培养的影响实验中,O的影响2具体活动(基于K米(O2)值)与水平的O2消耗蛋白质(基于转录upregulation)倾向于反对彼此,虽然我们测量细胞ROS生产更高的利率为18%2和5%啊2表明他们不会取消。目前还不清楚到什么程度的媒体的O2在急性代谢通量的各种O2通过HIF-1/2消耗途径和转录调控蛋白激活的组件,将影响细胞生理学。事实上,它似乎是不可能预测细胞培养的氧过多将影响许多O2敏感,2消耗代谢反应总体考虑到这些伴随特定的活动和表达的变化。
1.10。结论
在标准的细胞培养条件下,媒体啊2通常~ 18%氧水平对大多数哺乳动物细胞1 - 6%在活的有机体内(表1)。这种差异有重要影响的精确建模在活的有机体内细胞生理学,所以重要的是要有一个全面的了解2影响特定的ROS / RNS-producing流程。虽然从线粒体呼吸ROS的生成率增加O相对不敏感2水平从5%到18%2,许多广泛啊2消耗细胞酶在这个范围非常敏感。nNOS特别是Nox4的活动,以挪士,毛亚型似乎强烈诱导O更高2的水平。这些酶将产生更多的活性氧/ RNS,可能影响细胞内信号通路和下游活动调节。这可能是一个合适的起点上进一步施加压力和期望模仿一个“正常”的生理反应在活的有机体内上下文。
除了严重的影响2通量特定代谢途径,有证据表明,长期暴露在细胞培养的氧过多也会影响Nox的表达,NOS,毛和其他O2消耗酶(表5)。据推测,这是一个自我平衡的机制来优化这些反应啊2可用性。然而,再建立一个基线条件可能不准确的模型在活的有机体内状态。甚至细胞膜的渗透性H2O2,不,或者O2可能是受啊2介导的转录调节aqp,鉴于他们的角色在促进这些分子的扩散(表5)。
的具体影响2细胞ROS / RNS生产上述指出的重要性,培养细胞在生理上有关O2的水平。在大多数情况下,这需要降低孵化器顶部空间O2的水平。然而,这可能导致pericellular和细胞内缺氧,取决于细胞密度和线粒体呼吸率。因此,进一步的必要监视pericellular O2水平和采取措施来保持他们在生理上相关的范围内。我们发现站啊2渐变的媒体列pericellular地区出现在不受干扰的细胞培养,定期温和的混合(如通过摇臂板)可以废除。我们简单的解决这个问题将在以后的出版。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。