文摘
苯乙基异硫氰酸酯(PEITC),一种十字花科vegetable-derived化合物,是一个多才多艺的癌症chemopreventive代理显示启动期间抑制肿瘤生长的能力,促进和发展阶段在几个致癌作用的动物模型。在这个报告中,我们解剖noncytotoxic PEITC浓度引起的细胞事件在人类脐静脉内皮细胞(HUVECs)。在早期阶段,PEITC治疗引起细胞的形态学变化,包括减少细胞体积和修改的肌动蛋白组织与快速PI3K / Akt通路的激活。下游PI3K, PEITC也诱发Rac1和激活的活动c-Jun n端激酶(物),著名的肌动蛋白细胞骨架动态监管机构。有趣的是,PEITC修改的肌动蛋白细胞骨架被与物抑制剂预处理,废除SP600125。物信号也导致c-Jun转录因子的激活,这是参与upregulation几个基因;其中是BAG3蛋白质。这种蛋白质,袋的家庭成员热休克蛋白(Hsp) 70 cochaperones,能够维持生存在不同肿瘤细胞系和neoangiogenesis通过直接调节内皮细胞周期。此外,BAG3参与维持肌动蛋白折叠。我们的发现表明BAG3蛋白表达是诱导内皮细胞在接触PEITC noncytotoxic浓度及其表达式是要求恢复正常细胞的大小和形态后,紧张刺激。 This assigns an additional role for BAG3 protein in the endothelial cells after a stress event.
1。介绍
一些流行病学研究支持的假设十字花科蔬菜的摄入量可能保护作用对不同类型的癌症的风险(1- - - - - -4]。Chemopreventive和十字花科蔬菜抗癌的效应归因于有机异硫氰酸酯(itc),这自然发生在各种食用十字花科蔬菜,如西兰花、豆瓣菜,卷心菜,他们被存储为芥子油苷前体(5]。异硫氰酸酯是有效的在各种各样的组织和阻断致癌作用,抑制血管生成在体外和体内6- - - - - -8]。
苯乙基异硫氰酸酯(PEITC)是研究美国国际贸易委员会的家人之一,由于其抗癌的抗血管新生活动报道骨髓瘤(7和肺9)和前列腺癌(10,11]。
特别是,抗血管新生的属性PEITC可能主要与抑制血管内皮生长因子(VEGF)分泌,downregulation血管内皮生长因子受体2蛋白(VEGF-R2),和一种蛋白激酶失活(12,13]。
此外,一些研究表明,异硫氰酸酯可以调节低氧诱导因子(HIF)表达水平的肿瘤(14和内皮细胞15];事实上,PEITC抑制低氧诱导因子转录(16]。诱导的低氧诱导因子在缺氧条件下增加proangiogenic因素的水平,包括白介素8 (IL8),检验2 (Ang2), VEGF。此外,HIF1的转化效率降低α亚基可能导致PEITC antiangiogenetic效应(7]。PEITC也可以诱导细胞氧化应激迅速接合的谷胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽的耗竭之后,迅速积累ROS可能与PEITC-mediated凋亡细胞死亡(9,17]。PEITC的另一个更有趣的属性和萝卜硫素(SFN)认为确定破坏微管聚合的能力在体外和在活的有机体内。事实上,PEITC与微管微管蛋白可以形成共价结合,导致在A549细胞微管细胞骨架的崩溃。这个属性可以解释ITC-induced有丝分裂细胞周期阻滞和细胞凋亡在癌症和癌13,18]。这是BAG3感兴趣的,唯一stress-inducible袋cochaperones家族的成员,据报道宣传HPV18 +海拉细胞恢复p53 PEITC-induced凋亡水平(19]。事实上,BAG3也被描述的能力来维持neoangiogenesis作用于内皮细胞周期(20.),通过其与胞质交互调节肌动蛋白折叠chaperonin有条件现金转移支付(含TCP-1) (21]。
在这项研究中,我们首次报告,f -肌动蛋白细胞骨架发生重构在HUVECs PEITC治疗的早期阶段。我们的数据表明,这种效应与立即PI3K / Akt激活和PI3K / Rac1 /物通路。与物抑制剂预处理SP600125逆转PEITC-induced肌动蛋白丝重构,从而提供直接的证据JNK-mediated肌动蛋白细胞骨架发生修改后立即PEITC管理。压力诱导的BAG3蛋白被发现增加的水平在PEITC归纳。我们还发现明显colocalization BAG3与f -肌动蛋白、肌动蛋白定位从而维持其作用和细胞形态学变化在PEITC治疗。
2。结果
2.1。PEITC诱发肌动蛋白细胞骨架变化和HUVECs PI3K / Akt通路的激活
人类内皮细胞静脉脐是一个著名的模型用于研究内皮功能和疾病的许多方面,如正常、异常、肿瘤相关血管生成,氧化应激,hypoxia-related通路endothelia在正常和病理条件。我们已经观察到的细胞毒性效应的PEITC 20和40μM浓度作为MTT试验进行了两种不同的HUVEC捐助者。特别是,我们观察到减少75%以上的可行的细胞浓度控制在20μ24和48 h后(图1(一)),在与小和辛格发表的证据22),展现出2的浓度μM细胞毒性。事实上,在我们的手中,HUVECs 10的治疗μM PEITC没有细胞毒性,但我们观察到影响细胞周期如图1 (b);HUVECs从两个不同的捐赠者,我们观察到,在24小时内,细胞积累和G2 / M期。然而,这对细胞周期的影响并不显著影响细胞治疗后48小时数(图24小时1(一)),从而表明细胞激活的生存途径克服PEITC侮辱。相差的观察HUVECs透露,PEITC诱导一个戏剧性的变化在细胞形态(图15和120分钟的治疗1 (c)a - c)。此外,控制HUVECs显示高度发达的肌动蛋白细胞骨架清晰可见,众多压力纤维(图1 (c),D)。120分钟PEITC治疗后,我们观察到明显的细胞形态的变化和重组肌动蛋白丝(图1 (c)E),细胞体积减少,导致细胞间接触的面积减少(图1 (c)抵扣)。Phalloidin染色显示消失的肌动蛋白纤维和短纤维或小聚合形成压力。粘着斑激酶(FAK)已经被广泛报道的控制参与焦点粘连组织和应力纤维的形成,通过磷酸化和去磷酸化的酪氨酸残基(23]。因此,我们进一步调查是否PEITC治疗调节FAK磷酸化;图1 (d)显示了一个降低FAK磷酸化后治疗10μPEITC的120分钟。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
在癌细胞,PEITC已知表达下调PI3K / Akt prosurvival通路通过明显降低Akt Ser473磷酸化和随后的细胞凋亡13)和PI3K / Akt通路参与肌动蛋白丝重构和细胞迁移是众所周知的24- - - - - -26]。为了验证,在内皮细胞原代细胞模型中,一个可能的联系Akt活动和影响肌动蛋白重塑PEITC治疗后,我们首先关注PI3K和Akt磷酸化/激活动力学。如图1 (e)、细胞暴露在10μM PEITC 15、30、60和120分钟的phospho-Akt phospho-PI3K开始增加早15分钟,获得的最高水平2 h后PEITC管理。没有明显的变化发生在总PI3K和Akt的表达。这些结果表明,高的激活PI3K / Akt prosurvival途径可以观察到与细胞形态和肌动蛋白再分配的变化。
2.2。通过PI3K PEITC诱发Rac1活动,Rac1反过来激活物
PI3K和Rac1是关键分子的活化细胞迁移带来的肌动蛋白细胞骨架的动态变化(27,28]。PI3K Rac1是一个重要的催化剂(28,29日]。值得注意的是,在HUVECs Rac1是PI3K的下游效应但Akt的上游不采取行动30.]。此外,Rac1活动是极大地降低了HUVECs p110枯竭的境地α(我π3-kinase催化亚基类)(31日]。Rac1活动试验进行调查是否诱导PEITC治疗后的蛋白质。观察图2(一个),增加Rac1活动出现在10μM PEITC-treated细胞2 h而控制细胞。意外,我们也观察到,PEITC诱导增加总Rac1蛋白质,因此提出一个新颖的机制Rac1 upregulation。这些结果表明,Rac1可能充当一个下游PI3K效应。
(一)
(b)
(c)
(d)
c-Jun n端激酶(物,也被称为压力激发了蛋白激酶1 (SAPK1))强烈激活细胞应激诱导物。紫外线照射、hyperosmolarity和炎性细胞因子刺激的活动物(32]。PEITC诱发物激活剂量依赖性的方式(33]。确定10μM PEITC诱导激活物的设置,免疫印迹分析,如图2 (b),PEITC引起显著增加phospho-JNK激活2 h后药物暴露。没有对总物的表达水平的影响。这些结果表明物磷酸化参与PEITC-mediated细胞骨架肌动蛋白丝(图的重构3(一个))。
(一)
(b)
评估是否Rac1 PI3K的下游效应器PEITC-treated HUVECs,我们执行一个下拉试验GTP-bound Rac1隔绝控制细胞或细胞进行预处理1 h和10μM LY294002 PI3K抑制剂(p110α催化亚基抑制剂),在控制或PEITC-treated细胞。抑制PI3K Rac1活动和差别导致随之而来的对这些物磷酸化水平,如图2 (c)。相反,PI3K抑制剂没有影响总Rac1 PEITC-mediated增加蛋白质含量。调查是否Rac1行动物的上游,HUVECs培养没有/存在特定Rac1-GEF抑制剂(NSC23766, 100μ米)为4 h,随后接受PEITC额外2 h。如图2 (d),抑制Rac1下调物激活。相比之下,Rac1似乎没有Akt的上游,因为Rac1 PEITC-treated NSC23766并不影响一种蛋白激酶磷酸化的抑制细胞。总的来说,这些结果表明,PI3K / Rac1 /物在PEITC-treated通路被激活内皮细胞表现出细胞骨架的修改。
2.3。物活动参与肌动蛋白重塑过程PEITC治疗期间
评估是否参与物激活肌动蛋白细胞骨架的修改,1 h PEITC政府之前,HUVECs使用无毒浓度(10μ米)的具体物抑制剂SP600125 [34]。相衬显微镜的观察表明,物抑制剂显著降低PEITC-induced形态变化(图3(一个)模拟)。肌动蛋白染色表明,预处理的共焦分析物抑制剂恢复细胞骨架由PEITC(图进行修改4(一),情况)。的水平phospho-JNK phospho-c-Jun,核基质活性物,检测通过免疫印迹分析确认物抑制的有效性。Rac1激活的细胞对PEITC SP600125的存在证实Rac1行动物的上游(图3 (b))。综上所述,这些数据强烈建议phospho-JNK参与PEITC-mediated肌动蛋白细胞骨架重塑。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
2.4。PEITC治疗诱发BAG3表达式及其在HUVECs移位
BAG3是唯一的成员包家庭压力的刺激引起的,主要是通过热休克因子1的绑定bag3基因启动子(35)和物途径激活(36]。BAG3蛋白质也是高度表达在不同肿瘤类型(37- - - - - -42)和调节neoangiogenesis相互作用和调节ERK活性(20.]。此外,它已经表明,BAG3扮演着一个重要的角色在细胞粘附和细胞迁移43和直接参与维护肌动蛋白折叠21]。间接免疫荧光试验进行调查的细胞定位BAG3 PEITC治疗后(图4(一))。共焦显微镜的分析表明,BAG3 HUVECs,生理生长条件下,似乎主要是胞质本地化;2 h突出PEITC治疗蛋白质移动的结束与f -肌动蛋白与细胞膜,可以观察到在合并后的图像(图4(一),H)。综上所述,这些数据表明,BAG3蛋白质受到它的表达和本地化PEITC治疗期间的变化。其移位f -肌动蛋白在细胞膜附近显示角色BAG3蛋白质在细胞的形态学变化,曾被观察到。
评估是否PEITC能够诱导BAG3蛋白水平的变化,进行蛋白表达分析。如图4 (b),BAG3 16 h治疗后表达水平增加。这个结果也表明PEITC调节BAG3表达水平及其upregulation可能是一个直接后果物激活(36]。此外,实时PCR实验表明,BAG3蛋白质水平的增加与增加bag3信使rna(图4 (c))。相差的观察HUVECs透露,PEITC诱导一个戏剧性的变化在细胞形态(图120分钟后治疗4 (d)A和B);然而,长时间暴露于PEITC (16 h)似乎显示出复苏的细胞形态类似于控制(图4 (d)a - c)。这个条件的同时,增加蛋白质的表达中观察到的数据4 (b)和4 (c)。为了证明BAG3蛋白质是直接参与细胞形态学的复苏,我们进行蛋白质使用特定siRNAs沉默实验。我们可以看到在图4 (d)E BAG3蛋白沉默时,细胞,治疗16 h后,不显示复苏,而不属预定目标的核(NT),用作控制,没有效果。免疫印迹分析如图4 (e)证实蛋白质BAG3的沉默。这些数据表明,BAG3表达对经济复苏至关重要的细胞形态。
3所示。材料和方法
3.1。试剂和抗体
内皮生长介质(EGM-2 BulletKit)从Clonetics购买(Walkersville博士),和血管细胞基础培养基(临时Kit-VEGF)从写明ATCC购买。苯乙基异硫氰酸酯(PEITC) SP600125,赫斯特33342年,蛋白酶抑制剂的鸡尾酒,异硫氰酸phalloidin-tetramethylrhodamine B从σ(密苏里州圣路易斯和购买nsc - 23766从默克化工有限公司(达姆施塔特,德国)。化学发光检测试剂(ECL加上西方墨点法)从Amersham购买生物科学(皮斯卡塔韦,NJ)。LY294002和抗体phospho-Akt (Ser473),一种蛋白激酶,SAPK /物,phospho-SAPK /物(Thr183 / Tyr185),和phospho-FAK (Tyr397)从细胞信号技术(丹弗斯,MA);抗体BAG3来自BIOUNIVERSA s.r。l (Montoro、AV、意大利),PI3K抗体,phospho-PI3K, GAPDH和圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国),并从微孔anti-Rac1抗体(贝德福德,MA)和皮尔斯(罗克福德,IL)。正常山羊血清,辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体,增强化学发光试剂,anti-mouse免疫球蛋白,和488 -共轭Dylight anti-mouse免疫球蛋白是购自杰克逊ImmunoResearch实验室(英国萨福克郡)。
3.2。细胞培养条件
购买人类脐静脉内皮细胞(通过传代形成细胞从国家癌症研究所(意大利热那亚)。所有实验进行低细胞培养。细胞生长在EGM-2或临时Kit-VEGF 37°C的5%的股份有限公司2的气氛。实验没有/ PEITC (10μ米)和没有/ LY294002 (10μNSC23766(100米)μ米),SP600125 (10μ米)预处理、使用0.01% DMSO作为控制。
3.3。细胞生存能力分析
MTT(3 -(溴化4 5-dimetiltiazol-2 5-diphenyl-2H-tetrazolium))试验是为了评估使用细胞生存能力比较的潜在细胞毒性的影响PEITC控制条件。这样的分子是减少线粒体琥珀酸脱氢酶的酶甲瓒盐,沉淀为蓝色/紫色晶体。这是一个比色测定,甲瓒的数量产生测量spectrophotometrically和可行的细胞的数量成正比。
执行分析,细胞,从两个不同的捐赠者,是生长在96孔板,5×10的数字3/厘米224小时后,处理浓度增加PEITC从2.5μM - 40μ一式三份24和48 h。在治疗结束时,板块在1200转离心5分钟,中被100人μl(1毫克/毫升MTT添加到每个好,和板保持在37°C的盐甲瓒的形成所必需的。解决方案被删除从每个好,细胞内的甲瓒晶体溶解有100μDMSO的l。吸收在490 nm为每个评估Multiskan光谱热电子公司的读者。这样获得的数据规范化的控制和用于构造剂量反应柱状图44]。
3.4。流式细胞术分析
分析了细胞凋亡propidium碘化公司在permeabilized细胞,流式细胞术。细胞(5×103/厘米2)培养在12-well盘子。24小时后,PEITC添加浓度的10μM和细胞recultured为不同时间(24小时)。细胞凋亡分析,permeabilized细胞被贴上了propidium碘在4°C(π)孵化30分钟解决方案包含0.1%柠檬酸钠,0.1% Triton x - 100和50毫克/毫升π(Sigma-Aldrich、圣路易斯、钼)。这些细胞被随后通过流式细胞术分析FACSCalibur流式细胞分析仪(,正北方莱德、新南威尔士、澳大利亚)。
评价细胞周期分布、控制和治疗细胞收获和核被贴上π为描述通过流式细胞术对细胞凋亡检测和分析。每收集样本数据从2000事件,相对比例的细胞G0 / G1, G2 / M, sub-G0 / G1细胞周期的阶段是决定使用ModFit软件(美国加利福尼亚州圣何塞,正欲)。每个决心重复了三次(45]。
3.5。微
扫描微的乐队进行图像扫描(SnapScan 1212;Agfa-Gevaert NV)。每个乐队相关的区域使用ImageJ软件决定。要减去背景值计算。结果表达的意思是至少两个独立的实验。意义是由未配对的学生t以及。
3.6。西方墨点法
细胞收获和立即细胞溶解里帕缓冲区(50毫米玫瑰,10毫米EDTA, 150毫米氯化钠,NP-40 1%, 0.5%钠脱氧胆酸盐,和0.1% SDS (pH值7.4))补充了蛋白酶抑制剂鸡尾酒。免疫印迹分析,20μg样本提取的解决在10 - 12% SDS-polyacrylamide凝胶使用minigel装置(Bio-Rad实验室、里士满、CA)。硝基的屁股被封锁与三羟甲基氨基甲烷缓冲液脱脂奶粉10%盐水渐变20 (TBS-T)(20毫米Tris-HCl (pH值7.4),500毫米氯化钠,和0.01%渐变20)和孵化一夜之间在4°C适当稀释的抗体主要为10%(重量/卷)牛奶TBS-T缓冲或5%牛血清白蛋白。免疫反应性是由连续的孵化与HRP-conjugated二级抗体检测和增强化学发光试剂根据常规的协议。
3.7。Rac1活动分析
Rac1激活化验进行使用商用EZ-Detect Rac1激活工具包(皮尔斯,罗克福德,IL)。试验使用GST-fusion蛋白质包含p21-binding短暂快速脉冲刺激导致蛋白蛋白激酶1 (PAK1) 21的域选择性地结合活性Rac1整个细胞溶解产物。溶菌产物(500μg总蛋白)与谷胱甘肽琼脂糖珠孵化。积极收集Rac1谷胱甘肽琼脂糖珠和量化使用anti-Rac1单克隆抗体免疫印迹分析。在一个单独的免疫印迹,总Rac1从细胞溶解产物规范化和表达为GAPDH Rac1总额的比率。
3.8。免疫荧光
HUVECs被播种到12毫米玻璃盖玻片和融合为24 - 48 h,直到60 - 70%增长。治疗后,细胞被洗在PBS和固定在3.7% formaldehyde-PBS在室温下(30分钟)。洗后,盖玻片是治疗10分钟与0.1 glycine-PBS permeabilized 0.1% Triton x - 100 10分钟。透化作用后,盖玻片再次洗和孵化屏蔽解决方案(10%正常山羊血清在PBS)在室温下1 h。固定细胞的肌动蛋白细胞骨架染色与异硫氰酸phalloidin-tetramethylrhodamine B(0.05执行μg / ml) 40分钟在室温下,紧随其后的是三个在PBS冲洗。细胞被贴上一个anti-BAG3 (3μg / ml)小鼠单克隆抗体AC-1 2 h在室温和赫斯特33342 (2μ15分钟的g / ml)核染色。盖玻片在PBS然后洗3次,在蒸馏水冲洗,glycerol-mounted幻灯片。蔡司LSM 510激光扫描显微镜(卡尔蔡司缩微成像GmbH)是用于数据采集。检测到细胞核,样本兴奋与409 nm激光。488海里Ar或555海里氦氖激光是用来探测发射信号从目标污渍。63 x (1.40 NA) Plan-Apochromat油浸的目标是使用。酒吧生成图像和规模与蔡司禅宗共焦软件(卡尔蔡司、缩微成像GmbH)和作为一个堆栈。使用ImageJ图像处理软件(NIH)和Adobe Photoshop CS版本5.0,和数字组合使用Microsoft PowerPoint(微软公司)。
3.9。信使rna隔离和实时rt - pcr
总RNA隔离(mRNA)是由使用QIAzol裂解试剂(试剂盒)。RNA (1μg)被使用reverse-transcribed QuantiTect逆转录工具包(试剂盒)。实时PCR进行LightCycler 480(罗氏)通过使用LightCycler 480 SYBR绿色主人混合,2μl (cDNA (~ 50 ng),和以下引物对0.3的最终浓度μM: BAG3-human弗兰克-威廉姆斯:5-CCTGTTAGCTGTGGTTG-3和BAG3-human RW: 5-AACATACAGATATTCCTATGGC-3对目标基因β肌动蛋白弗兰克-威廉姆斯:5-AAAGACCTGTACGCCAACAC-3和β肌动蛋白RW: 5-GTCATACTCCTGCTTGCTGAT-3管家的检测。成绩单数量比较使用相对Ct方法,规范化的数量目标的内生控制(β肌动蛋白)和相对于对照试样是由2(−ΔΔCt)。结果提出了均值±SD的实验一式三份。意义是由单向方差分析(方差分析)与Dunnett事后测试使用SigmaPlot12.0软件。
3.10。转染
HUVECs转染与特定的核目标bag3信使rna (50-AAGGUUCAGACCAUCUUGGAA-30)或NT-siRNA (50-CAGUCGCGUUUGC GACUGG-30)。细胞转染,5×103细胞/厘米2镀,在内皮生长medium-2媒体含2%胎牛血清和生长因子,给30 - 40%融合。细胞转染的最终核浓度100海里使用TransFectin (Bio-Rad实验室Inc .)、大力神、钙、美国)。转染效率在每个实验评估免疫印迹分析。
4所示。讨论
细胞增殖是一个严格监管的过程,组织的支持和抗增殖信号。一般来说,proproliferative信号被激活时需要新细胞替代受损细胞。持续的增殖信号是癌细胞的主要特征,和PI3K / Akt激活对细胞增殖至关重要,而他们PEITC-mediated抑制抑制肿瘤的生长。PEITC抑制一种蛋白激酶,Ras抑制肿瘤生长的信号的一个组成部分,在一些癌症类型(13,46]。PEITC也是抑制EGFR和HER2,重要的生长因子和监管机构的一种蛋白激酶在不同的癌症模型(47,48]。Akt的抑制作用也可能是由于抑制表皮生长因子受体或HER2 [47]。
总的来说,从这些例子很明显,PEITC可以支持通过替代途径的抑制肿瘤细胞生长。
不幸的是,到目前为止,对PEITC在正常细胞的活动,尽管以对比的方式我们的数据是第一个试图澄清这种活动的细节。
为了研究PEITC在内皮细胞的活动,我们分析了PI3K / Akt通路作为肿瘤细胞的描述。然而,令人惊讶的是,第一个结果矛盾与最初的假设和文学。事实上,在我们用于HUVECs PEITC浓度,我们没有观察到细胞死亡,但生存PI3K / Akt通路的激活。此外,相差显微镜下观察显示明显的形态学变化,如体积减少的细胞在第一分钟,16个小时后,细胞再次出现在他们的正常大小没有显著损失细胞生存能力,即使在48小时的治疗。
这些观察建议Rac1调查活动,在第一分钟PEITC治疗,这是需要调节肌动蛋白聚合和膜突出(49),我们观察到的增加Rac1活动和意外我们也观察到PEITC诱导Rac1总蛋白质的增加。
自物通路被激活,以应对各种刺激但尤其是后细胞暴露于各种生物或非生物压力的事件,如感染、炎症、氧化应激、DNA损伤、渗透压力、或细胞骨架变化(32),我们的研究表明一个显著增加物的活动。
几项研究表明,Rac1激活依赖PI3K活动,PI3K / Akt抑制剂阻止Rac1激活(23,32]。此外,抑制Rac1减少物活动的活动(50,51]。在我们的研究中,的活动Rac1 PI3K / Akt抑制剂LY294002被废除,和活动物被废除的Rac1inhibitor NSC23766表明PI3K / Akt-Rac1有助于物激活。
我们的研究结果表明,在HUVECs PEITC活动的一个关键目标是由物。事实上,抑制激酶的废除PEITC对细胞骨架的影响。这一发现符合报告物参与细胞骨架重塑(52]。
物信号也导致c-Jun转录因子的激活,这是参与upregulation几个基因,其中,BAG3蛋白(36)发挥了重要的作用在肿瘤内皮细胞的生存和生长和neoangiogenesis [20.]。事实上,PEITC诱发HUVECs BAG3水平的增加。支持这一假设的事实的表达增加BAG3对应于一个复苏后的细胞形态PEITC初始损伤的治疗。
Downmodulation BAG3蛋白水平的小干扰rna产生一个特定的,经过16个小时的治疗,在复苏的损失对正常的细胞形态的控制。这些数据表明角色BAG3 PEITC引起的事件描述。
BAG3也利用其WW领域从事YAP /小胡子信号。通过这个途径,BAG3刺激维持肌动蛋白细丝蛋白转录锚固和交联机械张力下,通过整合张力传感、确保组织内稳态和调节基本细胞过程如附着力、迁移和增殖53]。
总之,我们的研究结果表明,治疗PEITC导致HUVEC损伤的细胞骨架和诱导激活PI3K / Akt-Rac1-JNK prosurvival途径。c-Jun,物的基质,激活的转录bag3由此增加BAG3蛋白质,使肌动蛋白的重折叠,因此复苏的细胞形态(图5)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
西尔维亚Franceschelli和安娜Paola布鲁诺的贡献同样这项工作。