文摘
nod样受体蛋白3 (NLRP3) inflammasome激活不仅作为细胞内机械触发炎症,也会产生uncanonical效果超出了炎症,如改变细胞代谢和细胞膜通透性增加。本研究旨在测试是否NLRP3 inflammasome激活导致的“两面夹攻”非酒精性脂肪肝(NASH)期间的伤害,以及它是否能治疗目标Fufang珍珠调脂的作用(保税区),一种广泛使用的草药治疗高脂血症和代谢综合征在中国。我们首先证明NLRP3 inflammasome形成和活化以及脂质沉积发生在以高脂肪食物的老鼠的肝脏(HFD),如图所示,增加NLRP3聚合,增强il - 1的生产β和高机动组盒1 (HMGB1),肝细胞脂质沉积显著。保税区提取物不仅显著降低NLRP3 inflammasome形成和激活减弱肝脏脂肪变性和纤维发生的表型变化。在在体外研究中,棕榈酸(PA)被发现增加colocalization NLRP3组件和caspase-1活动增强,肝星状细胞(hsc),显示增强的形成和活化NLRP3 inflammasomes PA。爸爸也增加了脂质沉积。Nlrp3 siRNA可以扭转这种效应通过沉默Nlrp3 inflammasome和两个保税区。FTZ-treated细胞,不仅inflammasome形成和活化大幅减毒,但也在肝星状细胞被脂质沉积。保税区的抑制脂质沉积是类似于甘草甜素的影响,HMGB1抑制剂。从力学上看,刺激膜筏氧化还原信号平台形成和增加O2•−生产PA激活NLRP3 inflammasomes在肝星状细胞被保税区治疗。得出保税区提取物抑制炎症反应和纳什的行动肝脏脂质代谢与NLRP3 inflammasome形成和激活。
1。介绍
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是最常见的肝脏疾病在世界各地。非酒精性脂肪肝可以出现作为一个简单的脂肪变性(非酒精性脂肪肝)或发展对其炎症并发症(10 - 20%),也就是说,非酒精性脂肪肝炎(纳什),这可以进一步进展肝硬化和肝细胞癌,发生并发症,越来越noncirrhotic NAFLD人群(1]。人们普遍认为纳什的发病机制是一个两步的过程,这被称为“两面夹攻”模型。第一个“冲击”与过度的甘油三酸酯或其他脂质积累在肝脏,第二个“打击”会导致肝脏炎症和纤维化的发展,这是归因于几个重要的致病因素,最终能导致肝损伤如炎性细胞因子,氧化应激、线粒体功能障碍,和/或内质网压力。最近的研究表明,nod样受体蛋白3 (NLRP3) inflammasome激活可能在纳什的发展发挥着基础性的作用[2,3]。自NLRP3 inflammasome一直报道不仅激活炎症反应,还拥有经典之中检测不到发炎或迹象行动可能导致某些慢性退行性或纤维化疾病的进展4- - - - - -7),可能激活NLRP3 inflammasome介导纳什开发通过“两面夹攻”机制。我们假设不仅肝炎和顺向纤维化肝脏脂肪变性纳什的进展可能会引发或调制NLRP3 inflammasome激活。确实在这方面,最近的研究表明,除了古典炎性细胞因子il - 1等β和地震,释放HMGB1在NLRP3 inflammasome激活也是重要的是与肝脏脂肪变性和随后的肝炎或肝纤维化(8- - - - - -10]。这些炎症和uncanonical检测不到发炎或迹象的影响NLRP3 inflammasomes纳什的发展一直是本研究的主题。
不在经典里的影响在NLRP3 inflammasome激活可能回答一个持久的问题为什么经典的抗炎药物,如常用的吲哚和arylpropionic酸衍生品,不是很有效的预防或治疗许多退化性疾病包括纳什,在慢性炎症是它的特点。也许承诺目标NLRP3 inflammasome从而阻止在纳什的“两面夹攻”机制。在这方面,一个候选人可能Fufang珍珠调脂(保税区),一种广泛使用的草药治疗高脂血症和代谢综合征在中国,显示其鸡尾酒治疗效率。保税区的专利在美国和中国都是一个混合物提取中草药处方,组成的黄连,等•女贞子,草cirsii参,基数丹参杜仲,基数三七果实Citri Sarcodactylis,和基数白术macrocephala。那些已经被规定在过去的15年里用于治疗高脂血症和代谢综合征及相关并发症如动脉粥样硬化和纳什(11,12]。在最近的一项研究中,发现了一些组件的保税区,防止脂肪肝的发展大鼠(13]。然而,中介的作用机制仍然未知。在目前的研究中,特征的角色NLRP3 inflammasomes在纳什,我们还研究了保税区是否阻止纳什发展目标的影响NLRP3 inflammasome激活炎症反应和肝脏脂肪变性。
2。材料和方法
2.1。动物
C57BL / 6 j小鼠(8周的年龄,男性或女性)喂养正常饮食(ND)或高脂肪的饮食(HFD D12492数量,研究饮食,新泽西,美国)4周,然后保税区提取物(100毫克/公斤/天)由填喂法和HFD都过去4周。保税区提取物的制备小鼠符合先前描述的协议(14]。所有的老鼠被随机分配到不同的实验组,每组。端点的实验时间,血液样本收集和收获的这些老鼠被牺牲了肝组织,用于油红O染色、免疫荧光染色法和生化分析。所有协议都是机构批准的弗吉尼亚联邦大学动物保健和使用委员会。
2.2。细胞培养和治疗
小鼠肝星状细胞(hsc)是由不连续密度梯度离心分离技术如前所述,又做了一些小的修改增加成功率,我们前面描述的4]。收集细胞在DMEM培养(美国Gibco,卡尔斯巴德,CA)含有10%的边后卫(Gibco)有限公司在空气湿润95%和5%2混合物在37°C。细胞生存能力,以台盼蓝排斥试验,大约是90%。肝星状细胞治疗与棕榈酸(PA, 200μ米/毫升)表示小时。肝星状细胞的特点,证实了如前所述[15]。我们选择在肝星状细胞,因为它们是一个主要的细胞类型负责肝纤维化的进展。我们以前的研究已经表明NLRP3 inflammasome激活主要负责肝纤维化的发展(3,4]。我们的初步实验表明,最优响应inflammasome激活发生在24小时PA治疗在HSC文化中,因此所有实验在我们的细胞研究协议使用相同的时间治疗前后PA的保税区提取(50μg / ml,由DMSO和稀释介质在1:1000)或管理inflammasome抑制剂或阻滞剂如活性氧清除剂N-acetyl-L-cysteine (NAC 10μ米,σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。
2.3。油红O染色
油红O染色,幻灯片和肝组织肝星状细胞生长室上盖玻片被用作前面描述的(16与一些细微的修改。肝星状细胞(104细胞/)培养与玻璃盖玻片室被视为表示和加载PA 24小时。冷冻肝组织幻灯片和HSC盖玻片被沾油红O在异丙醇(0.1%)测定脂质积累。油红O染色由光学显微镜检查,和图片是通过MetaMorph 6.0。数据所代表的地区的每一个细胞阳性比例油红O染色,计算在图像专业+ 6.0软件(美国媒体控制论,马里兰州贝塞斯达)。对于每一个样品,至少200个细胞进行了分析和总结油红O阳性细胞计数被用于统计分析。
2.4。共焦显微镜分析
共焦分析inflammasome分子colocalization或聚合,肝脏组织幻灯片和肝星状细胞生长室上盖玻片。他们首次在4%多聚甲醛固定在磷酸盐(PFA / PBS) 15分钟。permeabilized 0.1%后特里同x - 100 / PBS和PBS冲洗,一夜之间,幻灯片被孵化在4°C anti-NLRP3(美国Abcam 1: 200年,MA)和anti-ASC(1: 50,恩佐,宾夕法尼亚州,美国)或anti-caspase-1(1: 100年,Abcam)。洗后,这些幻灯片孵化与初级抗体被孵化alexa - 488或alexa - 555标记辅助抗体在室温下1 h。幻灯片是安装和受到考试使用共焦激光扫描显微镜(Fluoview FV1000,奥林巴斯,日本)的照片被和colocalization NLRP3 ASC或caspase-1分析Image-Pro + 6.0软件(美国媒体控制论,马里兰州贝塞斯达)。分子colocalization效率的总结数据被表示为相关系数为我们前面描述的17- - - - - -19]。
FLICA染色。在孵化的最后一小时,细胞被贴上FAM-YVAD-fmk caspase-1 FLICA™工具(美国免疫化学,布卢明顿)根据制造商的指导方针,结合caspase-1激活。用共焦显微镜观察染色细胞的活跃caspase-1齐聚反应,这与纤维化标志物与波形蛋白(抗体染色在1:200)和α光滑的肌肉肌动蛋白(αsma,抗体在1:200)。
Immunofluorescent显微分析膜筏(MR)集群。肝星状细胞生长在玻璃盖玻片。与4% PFA固定后,细胞被孵化与Alexa萤石488 -共轭霍乱毒素B (Alexa488-CTXB 2μg / ml, 2 h、分子探针、钙、美国),结合MR-enriched神经节苷脂gM1。dual-staining检测的colocalization gp91夫人phox和p47phox,细胞首先与anti-gp91 Alexa488-CTXB然后孵化phox和p47phox(1:200年,BD生物科学、钙、美国),分别由相应的跟着Alexa555-conjugated二级抗体(1:500年,表达载体,纽约,美国)。然后,colocalization可视化了共焦显微镜(20.,21]。
2.5。免疫组织化学
肝组织固定在4% (v/v多聚甲醛(PFA)与石蜡PBS和嵌入式,然后切成组织部分(4μ米)和安装在玻璃幻灯片。这些组织的幻灯片是沾染了山羊anti-IL-1β抗体(1:100年,研发系统)在一夜之间在4°C 20分钟后用3%的H2O2和30分钟屏蔽10%血清抗体,然后探讨了Ig-G第二抗体标记,根据前面描述的协议(合18,22]。负控制准备没有主要的抗体。阳性染色的面积百分比计算在图像专业+ 6.0软件。
2.6。免疫印迹分析
蛋白质从细胞溶解产物变性与SDS缓冲区和煮5分钟。样本运行在sds - page凝胶,转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)和屏蔽5%的牛奶。然后,探讨了膜具有以下主要抗体在一夜之间在4°C:兔子anti-caspase-1(1: 500年,圣克鲁斯、钙、美国),兔抗β肌动蛋白(1:10000年,圣克鲁斯)。他们孵化与山羊anti-rabbit-HRP Ig-G(1: 5000年,圣克鲁斯)在室温下1小时。免疫反应性的乐队是由化学发光检测技术后洗涤三次,然后可视化柯达Omat x射线胶片。特定的乐队的强度计算使用ImageJ软件版本1.44便士。
2.7。il - 1βElisa
抑制剂PA或没有治疗方法后,细胞上清液也收集测量il - 1β生产鼠标IL-1β酶联免疫试剂盒(Bender MedSystems、钙、美国)根据协议所描述的制造商。数据被表示为褶皱变化而控制细胞。
2.8。电磁自旋共振(ESR)谱分析
检测NADPH oxidase-dependent O2•−生产、蛋白质轻轻孤立的从1106(细胞和resuspended修改Krebs-4) - 2-hydroxyethyl 1-piperazineethanesulfonic酸缓冲包含deferoximine (100μ米,σ)和二乙基二硫代氨基甲酸(5μM;σ)。旋转陷阱,1-hydroxy-3 methoxycarbonyl-2, 2, 5, 5-tetramethylpyrrolidine(不啻,NOXygen Elzach,德国)(1毫米的最终浓度)被添加到混合manganese-dependent存在与否的超氧化物歧化酶(SOD), 200 U /毫升;σ)。混合物被加载到玻璃毛细血管和立即分析O2•−10分钟的形成动力学微型示波器MS200 ESR谱仪(Magnettech,柏林,德国)。ESR谱仪是根据以下参数:biofield, 3350;场扫描,60克;微波频率,9.78 GHz;微波功率,20兆瓦;调制振幅,3 G;4096点的分辨率;和接收机增益,50。ESR光谱信号被记录在任意单位,最后结果的褶皱变化表示为治疗组相比,控制我们前面描述的23]。
2.9。统计数据
数据提出了意味着±标准错误的意思。之间的显著差异,在多个组检查使用单向或双向方差分析,其次是邓肯的多个测试。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。NLRP3 Inflammasome形成和激活小鼠的肝脏中,没有治疗的HFD保税区
通过共焦显微镜,我们发现有显著提升colocalization NLRP3 ASC或在小鼠的肝脏caspase-1 HFD ND与小鼠相比,表明增强形成NLRP3 inflammasomes。在小鼠接受保税区,HFD-induced增加colocalization NLRP3 inflammasome组件大大受阻(图1(一))。定量的NLRP3 colocalization测量的相关系数呈现在图1 (b),这表明NLRP3 inflammasome形成明显增强小鼠HFD饮食相比,老鼠ND和这种增强NLRP3 inflammasome形成在小鼠的肝脏HFD被那些明显减弱。
(一)
(b)
(c)
(d)
免疫组织化学分析表明,il - 1β和地震(图1 (c))水平显著增加小鼠的脂肪在肝脏肝细胞周围HFD,暗示inflammasome的激活这些细胞。那些治疗显著降低这HFD-induced增加肝il - 1β和地震。如图1 (d)肝il - 1的阳性染色领域β和地震显著增加小鼠HFD没有治疗的保税区。在小鼠接受保税区,增加il - 1β在小鼠的肝脏和地震-染色HFD显著抑制。很明显,保税区可以抑制激活NLRP3 inflammasomes在肝脏。
3.2。在小鼠的肝脏脂肪变性和纳什HFD与非保税区治疗
脂肪变性的重要病理改变HFD纳什在老鼠身上进行了分析。油红O染色,发现HFD导致显著增加小鼠的肝脏脂质沉积在没有治疗的保税区。这种增强油红O染色在肝脏明显下降时,老鼠接受保税区(图2(一个))。组织区域的定量油红O染色显示,超过40%的小鼠肝脏HFD脂质沉积。治疗小鼠保税区显著减毒这HFD-induced脂质在肝脏沉积(图2 (b))。很明显,保税区显著预防脂肪变性和HFD老鼠。
(一)
(b)
(c)
(d)
)染色,我们还研究了老鼠的肝脏形态学变化从不同实验小组。如图2 (c),除了从小鼠肝脏脂质沉积HFD表现出明显的炎性细胞浸润和增加蛋白质渗漏到间隙空间。然而,从小鼠肝脏接受保税区几乎缺乏这些炎症变化。图2 (d)描述了非酒精性脂肪肝活动评分的结果分析,表明非酒精性脂肪肝的增加活动得分是非常重要的老鼠的肝脏HFD,保税区治疗显著地抑制非酒精性脂肪肝活动等增加分数。
3.3。纤维化的变化与NLRP3 Inflammasome激活小鼠的肝脏中HFD与非保税区的治疗
除了脂肪变性和炎症反应中发现,我们也在肝纤维化病理检查是否有不同的实验组,每组的老鼠。发现肝间质,尤其是在肝窦组织,有水平的提高αsma和波形蛋白免疫组织化学染色(图所示3(一个))。众所周知,增加αsma和波形蛋白表明表型变化的细胞从静止到激活状态,发生在肝星状细胞更显著。这些结果被测量semiquantitatedαsma和波形蛋白染色区域在肝脏。结果表明,αsma在肝脏和波形蛋白水平明显升高小鼠HFD,这HFD-induced肝纤维化的变化明显被保税区治疗(图3 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
由于以前的研究已经表明的形成和活化NLRP3 inflammasomes在成纤维细胞包括肝星状细胞可能导致肝纤维化的发展(4),我们决定是否这些inflammasome-triggered fibrogenetic效应发生在非酒精性脂肪肝。通过共焦显微镜,FLICA表明激活caspase-1(绿色)被发现colocalize与增加αsma或波形蛋白(红色)在肝窦和门户的小鼠的肝小静脉HFD黄色斑点(图如图所示3 (c))。从小鼠肝脏处理保税区,增强colocalization FLICAαsma或波形蛋白显著减少。这colocalization FLICA的定量分析αsma或波形蛋白,我们发现与inflammasome区域或细胞激活的水平要高得多αsma或波形蛋白,表明纤维发生在非酒精性脂肪肝模型。那些明显阻塞这个HFD-induced纤维发生的效果(图3 (d))。
3.4。PA-Induced NLRP3 Inflammasomes肝星状细胞的形成和Caspase-1活动增加
探索机制NLRP3 inflammasome形成和肝星状细胞激活,我们用棕榈酸(PA),饱和脂肪酸的主要组件之一,诱导脂质沉积研究的角色NLRP3 inflammasome激活和相关NASH-like这些细胞的变化。共焦显微镜分析发现colocalization NLRP3 caspase-1或ASC增加肝星状细胞在PA刺激,这表明这些inflammasome分子的聚合或组装确实发生在宾夕法尼亚州的刺激。在肝星状细胞使用保税区提取物,没有colocalization NLRP3 caspase-1或ASC在肝星状细胞刺激PA(图4(一))。NLRP3的相关系数与ASC或caspase-1表明colocalization NLRP3分子在肝星状细胞显著增加刺激的PA,完全被保税区,这表明那些能够阻止NLRP3 inflammasome形成的PA诱导肝星状细胞(图4 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
我们也决定NLRP3 inflammasome激活活跃caspase-1和il - 1的分析β生产在肝星状细胞,与那些没有预处理。如数据所示4 (c)和4 (d),显著提高裂解或活动的水平caspase-1 (15 kDa)和那些完全封锁这活跃caspase-1 PA-induced增长水平。相应地,生化分析表明,PA诱导il - 1的显著增加β从肝星状细胞生产,这也完全被那些治疗。PA-induced的抑制il - 1β生产由保税区与南汽的影响类似,一个常用抗氧化剂抑制NLRP3 inflammasome激活(图4 (e))。
3.5。影响鼠标Nlrp3基因沉默在PA-Induced Nlrp3 Inflammasome激活有或没有保税区
击倒的鼠标Nlrp3 mRNA水平在肝星状细胞显著抑制Nlrp3 siRNA PA-induced colocalization的ASC caspase-1(数字5(一个)和5 (b)水平)和减毒PA-increased裂解caspase-1(图5 (c)),都被保税区。与这些研究结果一致,Nlrp3基因沉默有或没有保税区挡住了il - 1β在肝星状细胞(图生产6(一)和6 (b))和PA-induced脂肪变性(图6 (c))。这些结果从NLRP3基因沉默进一步支持是NLRP3 inflammasome,导致炎症反应在纳什的这个模型和有效治疗的保税区的可能是由于抑制NLRP3 inflammasome激活。
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
3.6。氧化还原信号参与PA-Induced NLRP3 Inflammasome活化肝星状细胞和保税区的影响
从先前的研究表明,氧化还原信号平台先生和氧化还原信号参与inflammasome激活(24- - - - - -26),我们决定是否PA-induced NLRP3 inflammasome激活与这个氧化还原调控通路有关。以ESR, O2•−产量显著增加肝星状细胞是由PA刺激时,在很大程度上增强活性显示在ESR色谱信号。那些没有影响基底O2•−生产,但抑制PA-induced增加ESR信号(图7(一))。通过计算和提名SOD-sensitive组件ESR信号,PA-induced O2•−在肝星状细胞被发现生产完全被保税区。这对PA-induced O FTZ-mediated抑制性影响2•−生产类似于NAC(图7 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
我们接下来用Alexa萤石488 -标记CTXB先生(标记)和anti-gp91或anti-p47抗体(NADPH氧化酶(NOX)子单元)来衡量聚类与氮氧化物夫人的子单元,这表明氧化还原信号平台形成生产O先生2•−。PA刺激先生被发现显著增加集群gp91或p47 NOX子单元,如图所示的黄色斑块在HSC膜(图7 (c))。众所周知,这个氧化还原先生平台形成激活了氮氧化物和随后的一代啊2•−。这些结果总结在图7 (d)先生清楚地表明PA刺激,氧化还原信号平台形成HSC膜和保税区封锁这PA效应。
3.7。贡献的HMGB1 NLRP3 Inflammasome激活PA-Induced脂质沉积和保税区的有利影响
如上所述,我们的动物研究发现,NLRP3 inflammasome激活不仅参与HFD-induced肝炎和肝纤维化,也导致肝脏脂肪变性。保税区的发展可能会阻止脂肪变性和无菌肝炎肝脏。看来NLRP3 inflammasome激活也uncanonical效应在纳什发展超出炎症。为了验证这个假设,我们解决HMGB1的角色,一个NLRP3 inflammasome产品,已报道增加脂质沉积(8]。如图8(一个),代表油红O染色显示,PA导致强烈的染色肝星状细胞的脂质被保税区预处理。爸爸可以模仿HMGB1的影响但抑制HMGB1抑制剂,甘草甜素(g)。油红O染色区域的定量测定是总结在图8 (b),这表明PA增加脂质沉积,这被保税区。PA-induced脂质沉积明显增强的HMGB1但被通用电气,即使在HMGB1的存在。
(一)
(b)
4所示。讨论
目前的研究提供了一些重要的发现。首先,它表明NLRP3形成和活化增强纳什的开发过程中,这是证实了在两种在活的有机体内动物和在体外细胞的研究。其次,我们验证了保税区影响NLRP3 inflammasome用siRNA推倒NLRP3基因。第三,它是发现NLRP3 inflammasome激活抑制了保税区,是伴随着减少肝脏脂质沉积和纤维发生的表型变化。指出保税区发挥其有益的行动,不仅防止炎症反应,而且在HFD抑制脂肪变性。最后,它表明,氧化还原信号平台形成和相关NADPH氧化酶激活参与NLRP3 inflammasome激活,从而导致了纳什的发展。这个氧化还原信号机制先生负责肝脏inflammasome激活和纳什参与对脂质沉积的有利影响保税区,在肝脏炎症和纤维化。结果表明NLRP3 inflammasome形成和活化筏先生通过氧化还原信号平台发挥重要作用在纳什的发生和发展,保税区施加有益的行动通过抑制NLRP3 inflammasome激活在肝脏。
我们首先确定NLRP3 inflammasome形成和激活发生在纳什的发展使用HFD引起的脂肪变性的小鼠模型。NAFLD活动8周HFD组的得分是3到4,认为边缘型或阳性纳什也认为纳什的早期阶段。发现这个inflammasome成立和激活在肝脏,是陪着的无菌炎症和纤维发生,说明纳什的典型病理变化。在分离和培养的肝星状细胞,我们进一步表明PA显著增强NLRP3 inflammasome形成和活化,这也与脂质沉积在肝星状细胞和纤维发生的表型改变。这些结果告诉我们,NLRP3 inflammasome活化肝星状细胞在肝脏或可能是一个重要的早期发病机理的炎症反应,从而煽动肝纤维化在纳什。这与先前的报道是一致的表明NLRP3 inflammasome激活在纳什的发展起着根本性的作用[3]。在其他肝纤维化动物模型如酒精性脂肪变性和肝硬化(2),病毒hepatitis-induced肝硬化(27]和肝纤维化在血吸虫感染(4),NLRP3 inflammasome激活也被报道触发或调节肝脏炎症导致纤维化(28]。小天狼星红染色显示在肝脏组织学部分没有明显的肝纤维化和肝硬化HFD 8周后小鼠模型。然而,一些染色窦地区可以看到更多的肝星状细胞。可能一些肝星状细胞成为纤维化甚至在周HFD当NLRP3 inflammasomes被激活(补充图3)。综上所述,很明显,NLRP3 inflammasome胞内炎症机械是必不可少的纳什和其他肝纤维化疾病的发展。
虽然慢性炎症是纳什的一个特点,经典的抗炎药物,如常用的吲哚和arylpropionic酸衍生品不是很有效的预防或治疗纳什(29日]。这可能主要是因为这些经典抗炎策略可能不目标检测不到发炎的迹象或不在经典里的影响在NLRP3 inflammasome激活在纳什的发展6),因此他们可能只有有限的治疗效果。这使我们认为NLRP3 inflammasome及其监管途径可能是一个理想的目标治疗慢性退化性疾病像纳什与多种病理过程。鉴于我们长期兴趣保税区,一种广泛使用的草药治疗代谢综合征在中国和高脂血症及相关并发症,我们测试是否保税区施加其行动通过抑制NLRP3 inflammasome形成和激活。在我们研究的动物模型纳什HFD和培养的肝星状细胞刺激引起的PA,我们证明了保税区显著抑制的形成和活化NLRP3 inflammasomes。这种抑制效应的保税区NLRP3 inflammasome激活肝脏炎症和降低脂肪变性。此外,还发现这个NLRP3抑制废除在纳什在肝脏纤维化的过程。看来保税区确实施加有益的行动阻止纳什通过抑制NLRP3 inflammasome激活在肝脏。据我们所知,目前的研究结果首次链接的疗效保税区NLRP3 inflammasome激活,是保税区作用的分子机制。
那些已经被规定在过去的15年里用于治疗高脂血症和代谢综合征及相关并发症如动脉粥样硬化和纳什(11,12]。先前的研究已经表明,保税区减毒代谢综合征——(女士)相关的症状和病理变化在组织或细胞中,这是由于减少血浆葡萄糖和脂类水平(30.]。此外,一些研究已经表明,保税区减毒的差别,对这些PI3K p85 mRNA和IRS1蛋白质胰岛素抵抗HepG2细胞和老鼠女士(30.]。在最近的一项研究中,发现了一些组件的保税区,防止脂肪肝的发展大鼠(13]。然而,这些研究并没有阐明保税区如何运作的精确机制抑制肝脏炎症和纤维化表型变化。在目前的研究中,我们不仅证明了抑制NLRP3 inflammasome作为胞内炎症机械在纳什是一个潜在的机制负责保税区的抗炎作用,但也有趣的证实,保税区抑制脂质沉积在肝细胞的封锁NLRP3 inflammasome-mediated HMGB1生产。相信通过抑制NLRP3 inflammasome激活保税区可能干扰脂质沉积过程的早期和晚期诱导肝脏炎症和纤维化在纳什的进展。在以前的研究中,胆固醇、游离脂肪酸和甘油三酯储存在肝星状细胞,发现这可能激活这些细胞变成纤维发生的启动或促进肝纤维化。激活肝星状细胞可以使细胞损伤进一步增强脂质积累胆固醇摄入量的增加,在纳什可能导致一个恶性循环,即脂质积累激活肝星状细胞,后者导致更多的脂质积累这些细胞(31日]。本研究的结果提供了第一个试验证据,HMGB1释放来自NLRP3 inflammasome-dependent caspase-1活动可能参与脂质沉积过程如图所示在其他一些研究[5,32,33]。这个动作可以被保税区HMGB1的治疗。
我们也探讨了机制保税区抑制NLRP3 inflammasome形成和活化,从而阻止纳什发展。先生这是证明保税区抑制氧化还原信号平台形成生产O2•−。这一行动进一步阻塞NLRP3 inflammasome形成和激活HFD-induced纳什在小鼠或PA-stimulated肝星状细胞。尽管有报道称,在慢性肝病氧化应激在HSC激活触发纤维化的过程有一个明确的角色(34),从目前的研究结果首次澄清,当地氧化应激可以诱导肝星状细胞的活化起和肝纤维化NLRP3 inflammasomes。那些可能的目标纳什的早期事件,防止肝脏疾病的退化的结果。所有这些角色NLRP3 inflammasomes在纳什和保税区的有利影响是概略地总结在图9。
总之,目前的研究表明,增加NLRP3 inflammasome形成和激活是一个重要的致病机制启动和促进纳什的发展。保税区镇压这NLRP3 inflammasome激活,防止脂肪变性,肝脏炎症和纤维发生的表型变化。通过抑制这种有益的行动的保税区NLRP3 inflammasome激活不仅与抑制肝脏炎症和肝星状细胞激活导致纤维发生也与脂质沉积的早期事件引发脂肪变性。此外,我们表明,抑制作用的保税区NLRP3 inflammasome激活是由于封锁先生的氧化还原信号平台的形成和随后的O2•−生产。
5。结论
目前的研究表明保税区提取物抑制纳什的行动在炎症反应和脂质代谢与NLRP3 inflammasome激活在肝脏。针对NLRP3 inflammasome减少脂肪变性,无菌肝脏炎症和顺向纤维化可能是一个潜在的治疗作用机制保税区在纳什和可能引起代谢综合征其他终末器官损害。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突的披露。
确认
这项研究得到了国家自然科学基金委(批准号郭娇81530102)和NIH(批准号。HL057244和HL075316 Pin-Lan Li)。
补充材料
Inflammasome激活是炎症的早期发病机理中的重要作用。我们关注的机理NLRP3 inflammasome这是一种胞内炎症早期的机械纳什。NAS的细节信息补充图1 (b)所示。它表明,NAS HFD 8周后显著增加。NAS HFD组3到4之间,认为边缘型或阳性纳什也认为纳什的早期阶段。结果约HFD老鼠的体重增加而ND老鼠但没有增加那些治疗后(补充图1 (a))。AST活性测定和血糖的结果没有统计每组之间的不同,表明没有肝功能异常和代谢综合征早期HFD-induced纳什(补充图2)模型。同时,没有明显的肝纤维化和肝硬化HFD 8周后小鼠模型由天狼星红染色(补充图3)。(补充材料)