文摘

发酵木瓜提取物(fp)是通过发酵的木瓜米曲霉和酵母。在这项研究中,我们调查了fp的保护作用在乳腺增生引起的雌激素和孕激素。大鼠随机分为6组,包括一个对照组,FPE-alone组,模型组,三个消防工程治疗组(每个收到30日15日或5毫升/公斤fp)。严重的乳腺增生是诱导苯甲酸雌二醇和孕酮。fp可以改善动物模型的病理特征,降低血清雌激素水平。氧化剂指数分析表明,fp可能增加超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(氧化酶)活动,降低丙二醛(MDA)水平在乳腺和动物模型血清,并减少细胞阳性DNA氧化损伤的比例在乳腺8-oxo-dG标志。此外,苯甲酸雌二醇和孕酮水平改变了血清生化成分如天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(治疗组)和丙氨酸转氨酶(ALT),以及肝SOD等氧化剂指数氧化酶,MDA, 8-oxo-2′脱氧鸟苷(8-oxo-dG)。这些指标恢复到正常水平高剂量的fp口服。综上所述,我们的研究结果表明,fp可以保护乳腺和其他内脏器官免受氧化损伤。

1。介绍

发酵的水果和蔬菜果汁功能食品在中国很受欢迎。它们含有大量的益生菌,氨基酸,碳水化合物,和功能的酶,它可以很容易消化。此外,发酵的水果和蔬菜汁展品抗氧化,抗肿瘤,治疗糖尿病药和抗炎活动1,2]。木瓜中使用传统药物由于其抗氧化,抗肿瘤,免疫调节作用[3- - - - - -6];这些影响可能是由于高的内容α生育酚类黄酮,异硫氰酸苄酯、番茄红素和木瓜蛋白酶在木瓜7- - - - - -10]。发酵木瓜用于医疗和已经作为一种商业开发功能性食品在日本,美国和一些欧洲国家11]。研究表明,木瓜发酵产品(FPP)保护通过姬氏免受氧化损伤,防止老化,并发症和治疗阿尔茨海默病(AD) [12- - - - - -14]。由于其抗氧化活性,FPP展品潜在的肿瘤治疗,免疫调节,在糖尿病患者伤口愈合4,6,15]。发酵木瓜提取物(fp)是通过长期发酵发酵白酒从木瓜中提取曲霉属真菌和酵母;他们是商用平板电脑和粉末的形式。临床上,fp作为功能性食品,应用于调节内分泌失调和抗氧化活性,以及提高免疫和抗炎反应。

检测不到发炎乳腺增生是一种常见的迹象和nontumor疾病发生在育龄妇女。这种情况占75%的乳房疾病(16,17]。女性患上乳腺增生展品两到三倍的患乳腺癌的风险高于一般人群。风险是5至8倍患者非典型增生(18,19]。乳腺增生的发生直接相关的内分泌疾病,它主要是由不平衡引起的雌激素和黄体酮(20.]。增生的乳腺上皮细胞也可以引起胆固醇和胆固醇氧化产品环氧化物(21,22]。在目前的研究中,动物模型建立了乳腺增生用苯甲酸雌二醇和孕酮基于乳腺增生的潜在机制。使用这些模型,保护作用、功能和机制的fp雌激素使乳腺增生。

2。材料和方法

2.1。fp和毒品

未成熟的木瓜成熟(半个月)去皮后,切成2毫米片移除种子。准备的木瓜发酵3个月通过米曲霉(从小米番茄酱分离和储存在我们实验室),然后使用酵母发酵3个月(酿酒酵母夫生物科技有限公司提供的,浙江,中国)与5%葡萄糖在24 - 28°C。fp是通过挤压和过滤后发酵。总黄酮类化合物,其中一个重要的功能成分在《外交政策》,几乎是11.65 mg / ml检测到紫外线的方法。雌二醇(2毫克/毫升)和孕酮(10毫克/毫升)从杭州买动物制药工厂,中国。

2.2。动物和治疗

三十六岁女性SPF Sprague-Dawley (SD)大鼠(180 - 200克,7 - 8周大,性成熟)从上海购买松弛实验动物有限公司所有的动物屏障系统用干净的环境中培养20°C-25°C下50 - 60%湿度和12 h光和12 h暗周期。动物实验在实验室通过了AAALAC(评估和认证实验动物保健协会国际)身份验证。大鼠随机分为6组,每组包含六大鼠。

第1组,空白对照组,收到每日0.5毫升/公斤的肌内注射生理盐水,口头管理30毫升蒸馏水/公斤体重。组2、消防工程对照组口服接种30毫升的fp /公斤体重在实验的开始。组,模型组,肌内注射苯甲酸雌二醇0.5毫克(0.5毫升)/公斤从1到25天(0.5毫升)和4毫克/公斤黄体酮从30天26天。作为治疗组,组4组5,和组6收到苯甲酸雌二醇和孕酮与模型组和口服治疗fp从第一天到30天。4组,治疗组,服用口服剂量的30毫升的fp /公斤。5组,治疗组II,服用口服剂量的15毫升的fp + 15毫升蒸馏水/公斤。第三组,治疗组,服用口服剂量的5毫升的fp + 25毫升蒸馏水/公斤。

2.3。乳头测量

31天,右边第三个乳头的老鼠在每组是剃。直径和高度的乳头是使用游标卡尺测量的。

2.4。样品收集

31日,所有实验老鼠与2.5%戊巴比妥麻醉了人道的解决方案。乳腺的血液和组织样本收集,心、肝、脾、肺、肾、卵巢和子宫。为了避免干扰血液细胞,血液在肝脏清除通过门静脉注射生理盐水。一旦血液凝结的室温下,血清被离心分离在10分钟3000×g。血清的一部分立即被用于生化检测、存储,其余−70°C的荷尔蒙和氧化剂指数分析。一半的收集组织样本存储在10%甲醛病理和免疫组织化学(包含IHC)测试,剩下的一半是储存在−70°C测试氧化剂指数和8-oxo-2′脱氧鸟苷(8-oxo-dG)。

2.5。性激素浓度

血清中的每个性激素的浓度进行了测试按照标准规范使用雌二醇(E2)、孕酮(P)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)检测试剂盒(北京木质生物技术有限公司)。

2.6。氧化指数检测

丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(氧化酶)活动在血清中,乳腺,肝脏被发现使用商用后检测试剂盒制造商的指令(Sigma-Aldrich)。

2.7。血液生化

血清生化参数包括天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(治疗组)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、血尿素氮(BUN)测定,肌酐(克雷亚)、总蛋白(TP)、白蛋白(铝青铜)、血糖(GLU)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、钾(K⁺)、血清钠(Na⁺)、氯(Cl⁻),和总钙(TCa)使用日立7020全自动生化分析仪进行了分析。

2.8。检测8-Oxo-2′脱氧鸟苷(8-oxo-dG)通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和包含IHC

的生物标志物发现8-oxo-dG乳腺和肝脏组织通过ELISA和包含IHC分析。ELISA, 50毫克的组织收集。使用基因组总DNA提取的萃取设备通过比色法(Sigma-Aldrich)和量化。大约300 ng从每个样本的DNA提取。8-oxo-dG的内容总DNA决定使用EpiQuik™8-OHdG DNA损伤量化直接工具包(比色)(EpiGentek)。结果8-oxo-dG-positive细胞的比例。

对于包含IHC,乳腺在10%甲醛固定至少24 h和切成4μ米后部分嵌入蜡。后脱蜡、水化、抗原检索DNA杂交,和密封处理,一夜之间,片被孵化anti-8-oxo-dG单克隆抗体(1:250年,Trevigen)在4°C。接下来,片在DyLight孵化594 -标签山羊anti-mouse免疫球蛋白g(1: 250年,杰克逊)30分钟。洗后,片使用荧光显微镜进行评估。

2.9。病理机制检测

每个主要内脏器官在10%甲醛固定至少24小时,切成4μ米部分嵌入后用蜡、染色标准他染色程序。每一个内脏器官的病理状态由光学显微镜观察。病理损伤的迹象,如小叶增加,腺泡的增加,乳腺管腔扩张,和乳腺导管腔分泌物,进行了分析。

2.10。统计分析

结果报告为均值±SEM(均值的标准误差),使用SPSS 22.0进行分析。单向方差分析进行比较以上两组数据。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。保护fp对血清性激素的影响指数的老鼠

fp的监管作用在模型大鼠性激素浓度决定通过检测血清E2、P, LH和FSH水平。后管理模型大鼠与苯甲酸雌二醇和孕酮,这些激素的血清水平增加(与对照组相比, )。治疗后与fp, E2、FSH水平被发现明显下降(与模型组相比, ),并存在剂量依赖的相关性。此外,P明显减少稍大剂量水平(30毫升的fp /公斤)集团和LH水平明显降低稍大剂量组和中(15毫升的fp /公斤)组(与模型组相比, )(表1)。

3.2。老鼠的fp对乳头大小的影响

老鼠的乳头直径和高度的增加对苯甲酸雌二醇和孕酮管理局(与对照组相比, )。然而,在治疗与fp,乳头直径和高度的提高。稍大剂量组,乳头的直径和高度有显著减弱(与模型组相比, )。此外,中组明显减轻乳头的直径。然而,吃一点(5毫升的fp /公斤)组没有表现出明显的乳头直径和高度的调节作用(表1)。

3.3。保护作用的fp乳腺病理模型动物

在这项研究中,乳腺增生是由注射苯甲酸雌二醇和孕酮诱导与fp和治疗。组织病理学分析表明,小叶及腺泡的对照组和组管理与fp仅显示无明显增生,腺泡的,没有明显的分泌泌乳导管和流明。相比之下,严重的病变,包括乳腺增生,小叶增加,腺泡的增加,乳腺管腔扩张,和乳腺导管内腔分泌增加,观察模型组。表2显示了几个病理特性的统计与乳腺增生在学习小组。乳腺的病理模型大鼠给予大剂量和中剂量的fp改善,小叶数显著变化观察,腺泡的号码,和乳腺导管腔分泌。乳腺导管和腔分泌治疗组服用高剂量的fp几乎回到了正常水平。此外,病理改善乳腺增生被发现与消防工程用量呈正相关(图1)。

3.4。fp改善乳腺增生模型大鼠通过其抗氧化作用

乳腺增生引起的苯甲酸雌二醇和孕酮导致氧化损伤。氧化剂氧化酶活动和指标如SOD和MDA水平的血清和乳腺后第二天发现乳腺增生引起的。因此,我们试图评估fp对抗氧化损伤的保护作用在乳腺。如图2、氧化酶活动和SOD和MDA水平模型大鼠的乳腺和血清明显改变的价格相比对照组( )。这些氧化指数模型大鼠的乳腺和血清也显著提高治疗后与fp稍大剂量组和中组与模型组相比, )。在模型大鼠的血清SOD和氧化酶活动接受高剂量的fp恢复到水平在对照组观察。此外,在大鼠的血清SOD活性处理仅fp(组2)高于对照组( )。尽管吃一点集团并未显示出明显的抗氧化作用,这些结果表明,fp可以增加抗氧化水平和抗氧化剂抑制乳腺增生。

3.5。血液生化

每个血清生化指标确定调查苯甲酸雌二醇和孕酮诱导的损害身体和fp的保护作用。AST和治疗指数模型大鼠明显增加,而ALT指数明显降低了模型大鼠(与对照组相比, )。与模型组相比,AST,治疗,和ALT指数稍大剂量消防工程治疗组明显改善和恢复到对照组水平( )。此外,《外交政策》对AST指数显示存在剂量依赖的相关性影响。治疗组指数也在中组明显减少。然而,吃一点组治疗组和ALT指数没有显著改变(与模型组相比, )(图3)。

3.6。fp抑制肝损伤模型大鼠中通过他们的抗氧化效果

苯甲酸雌二醇和孕酮可以诱发乳腺增生和改变AST,治疗,和ALT,建议苯甲酸雌二醇和孕酮可能诱发其他内脏器官损伤。病理检查的主要内脏器官并没有透露任何明显的脏器病变,除了肝脏接受炎性浸润。乳腺增生抑制了fp主要通过抗氧化剂。氧化酶活动和SOD和MDA含量在肝脏检查确定苯甲酸雌二醇和孕酮引起的肝损伤是由于氧化应激和肝脏是否保护fp通过抗氧化剂。肝脏是完全从血与生理盐水清洗,以避免干扰。结果表明,SOD和氧化酶活动明显减少,并在模型组MDA水平增加(与对照组相比, )。这些氧化指数模型大鼠的肝组织对待fp明显恢复稍大剂量组和中。中的SOD和氧化酶活动稍大剂量组增加到同一水平对照组(与模型组相比, ,与对照组相比, )。然而,吃一点组没有表现出显著的保护作用。此外,SOD活性在大鼠口服接种fp仅高于对照组( )。因此,我们的研究结果表明,fp也通过它们的抗氧化特性(图预防肝损伤3)。

3.7。用fp治疗减少了氧化应激标记8-oxo-dG

乳腺增生的一部分是乳腺癌的早期病变。氧化应激中起着至关重要的作用在乳腺癌雌激素引起的。8-oxo-dG的生物标志物是自由radical-induced氧化损伤的主要形式之一,因此被广泛应用于氧化DNA损伤的评价和致癌作用23]。

包含IHC和ELISA分析的结果表明,细胞表达8-oxo-dG在乳腺组织的数量是增加了苯甲酸雌二醇和孕酮。相比之下,8-oxo-dG-positive细胞的数量显著降低稍大剂量和中消防工程治疗(与模型组相比, )(图4)。

ELISA检测8-oxo-dG内容进行肝脏组织。同样,内容8-oxo-dG动物模型肝组织的减少稍大剂量和中消防工程治疗(与模型组相比, )。在老鼠的肝脏8-oxo-dG内容管理与这两个剂量的fp恢复到对照组水平(图5)。

4所示。讨论

乳腺增生的发病机制尚不清楚,研究表明,这种情况可能是由于内分泌失调(24]。增加体内雌激素水平是促进乳腺细胞的增殖,破坏的平衡和长期高雌激素刺激乳腺组织增生和恢复月经周期期间。这些现象导致腺管扩张,腺上皮增生,腺泡增加,进一步导致病态的乳腺增生(20.]。大量的活性氧(ROS)被发现由高雌激素的长期刺激,进而引起氧化应激损伤乳腺组织(25- - - - - -27]。鉴于上述机理,乳腺增生,雌激素和黄体酮可以利用诱发乳腺增生模型大鼠(18,28]。在目前的研究中,模型大鼠乳腺增生引起的苯甲酸雌二醇和孕酮表现出明显的海拔血清雌激素水平。伴随的雌激素水平上升,严重的病理变化观察。氧化应激也是乳腺增生的一个至关重要的因素。在乳腺增生引起的雌激素和黄体酮,SOD和氧化酶活动,这是主要的抗氧化酶,捕捉有害活性氧,在大鼠的血清和乳腺,发现明显减少。

FPPs作为功能食品广泛应用在各种疾病的治疗和缓解29日,30.]。尽管其疗效机制仍然不清楚,抗氧化活性是其主要功能之一(12,31日]。抗氧化活性已被证明是有效的治疗和缓解与年龄相关的并发症(32),红细胞氧化损伤(13),在糖尿病患者伤口愈合11,33,34),和广告(14]。在这项研究中,《外交政策》不仅可以提高氧化指数在动物模型中,但是也可以增加SOD活性在正常的动物。这表明,fp表现出很强的抗氧化活性,及其对乳腺增生的保护作用可能与此相关的财产。

雌激素可以诱导细胞增殖和抑制DNA修复(35,36]。先前的研究表明,雌激素引起的乳腺肿瘤是通过氧化DNA损伤(25,37,38]。生物标志物8-oxo-dG ROS的产物,诱发DNA氧化损伤,这被认为是一种细胞氧化应激和氧化DNA损伤的标志,是最常见的产品雌激素诱导的氧化应激损害(39,40]。长期雌激素诱导后,8-oxo-dG-positive乳腺细胞明显增加,但当fp的动物模型有改进。这一发现表明,除了它的抗氧化活性,fp还能够抑制氧化DNA损伤。这是符合一个以前的报告,FPP可以减少DNA氧化损伤,提高细胞因子平衡(41]。

在这项研究中,一组实验动物血液生化指标的检测。AST、ALT和治疗指数在动物的血清雌激素引起的乳腺增生有显著增加。与此同时,这些生化指标在动物模型治疗fp已经恢复到对照组水平。这一结果表明,雌激素会导致乳腺增生和其他内脏器官损伤。然而,《外交政策》可以防止这些器官受伤。AST和ALT标记的心脏和肝脏损伤,而治疗组肝损伤的一个标志。主要脏器病理检测后,没有明显的病理改变的心,脾、肺、肾、卵巢和子宫。然而,在肝脏病理变化,主要包括炎症细胞浸润,还诱导。然而,大剂量fp完全保护肝脏免受受伤。氧化剂氧化DNA损伤指数和标记表明消防工程作为一种抗氧化剂保护肝脏免受损害。 Previous studies showed that FPP can protect liver activity and inhibit liver cancer, which is mainly achieved via its antioxidant activity [42,43]。氧化应激中起着重要的作用在调节肝毒性与许多疾病有关44,45]。fp改善和保护器官,从而改善血液生化指标,通过他们的抗氧化效果。

FPP木瓜后可以在市场上以粉末形式与食用菌发酵。fp,发酵提取液通过协作的木瓜答:oryzae六个月和酵母,可以很容易地准备和消费。临床上,fp主要用于改善消化和免疫调节,改善内分泌失调,减肥。在这项研究中,三个消防工程治疗组(每个收到30日15日或5毫升/公斤fp)被用于评估乳腺增生的保护作用。结果提供了令人信服的证据表明,fp高等和中等剂量能明显改善激素水平,临床体征,氧化指数、生化指标、和病理变化模型动物的乳腺增生,与小剂量没有显著的调节作用。此外,高剂量的最佳剂量,转化为一个成人剂量大约70毫升/公斤根据身体表面积。一般来说,成年女性的临床剂量是100毫升/ d。一个月安全性评价的fp SD大鼠。结果表明,血液生物化学、血液学、组织病理学、摄取和水摄入的老鼠管理临床推荐剂量的fp四次没有明显变化。然而,一个明显的体重下降记录,也可能观察到的体型变化的原因。

研究表明,乳腺增生引起的雌激素可以有效地抑制fp通过抗氧化效果。此外,《外交政策》也可以改善和修复肝脏氧化损伤。《外交政策》含有丰富的营养物质,如α-生育酚(8),类黄酮(9),谷氨酸,胱氨酸,胞嘧啶,烟酸,pipecolic酸,高丝氨酸,奎尼酸、葡萄糖醛酸,具有抗氧化和抗肿瘤的功能。近年来,酒获得通过水果发酵在中国已经成为流行,通常作为商业出售的食物。每个活动元素fp应该进一步分析。未来的研究应该关注外交政策的功能和机制发展中fp各种疾病和功能食品。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。

确认

支持的项目是浙江省科学技术厅(2016 f30009)和浙江省自然科学基金(LQY18H160001 LY17H310009)。