文摘

南极植物Deschampsia南极洲(DA)能够在极端条件下由于其特殊的生存机制,保护环境侵略。在这项工作中,我们研究了一个植物水提物(EDA)是否保留它的一些防御属性,可以保护我们的皮肤免受共同外部氧化剂。我们评估了EDA年轻人类成纤维细胞和暴露于H₂O₂,我们测量细胞增殖、生存能力和senescence-associatedβ牛乳糖(SA -β加)。我们还测试了几个senescence-associated蛋白质的表达包括sirtuin1、核纤层蛋白A / C,增殖细胞核抗原,复制的蛋白质和氧化还原蛋白质硫氧还蛋白2。我们发现EDA晋升本身细胞增殖和生存能力,增加anti-senescence-related标记物的表达。然后,我们选择了一个剂量的H₂O₂作为一个感应人类成纤维细胞的衰老,我们发现EDA治疗24小时之前h₂O₂暴露增加纤维母细胞增殖。EDA显著抑制的增加SA -β加水平引起的H₂O₂和推广sirtuin蛋白1和核纤层蛋白A / C的表达蛋白。总之,这些结果表明EDA保护人类成纤维细胞免受细胞衰老引起的H₂O₂,指出这种化合物作为一个潜在的治疗代理治疗或防止皮肤衰老。

1。介绍

老化是一个复杂的生物过程,涉及内在遗传变异和外部因素,如营养、疾病、或环境条件1]。过氧化氢(H₂O₂)是一种氧化剂代理诱发典型衰老称为“压力诱导过早衰老”(sip)当体内应用体外。口与自然共享一些功能或复制衰老2- - - - - -4),包括细胞形态的变化,减少细胞增殖、DNA合成和SA -增加β加水平(5,6]。先前的研究表明,人类二倍体成纤维细胞细胞衰老伴随着减少增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,一种蛋白质参与复制和细胞周期(7,8]。这种效应在PCNA与细胞增殖减少以及低水平的几个蛋白质参与新陈代谢。其中一些是sirtuins蛋白(Sirt),烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺-)相关的组蛋白去乙酰酶抑制剂。西尔特家族包括几个成员在不同的亚细胞隔间:局部细胞核(Sirt1, Sirt2 Sirt6, Sirt7),细胞质融合(Sirt1和Sirt2)和线粒体(Sirt3, Sirt4和Sirt5) [9,10]。压力会使Sirt1,促进乙酰化作用的p53和收购过早senescence-like表型(11- - - - - -16]。相反,过度的Sirt1阻止细胞对衰老生理变化(13]。

衰老也促进哺乳动物细胞的细胞核结构的变化。核纤层蛋白nucleoskeletal蛋白质定义细胞核的结构。一些报告显示,内容的核纤层蛋白A / C (LmnA / C)表达的变化以及生物生活(17,18]。减少LmnA / C的成骨细胞中观察到的老鼠比那些年轻的老鼠(17]。

在衰老,增加自由基引发氧化损伤在几乎每一个隔室(19]。氧化还原蛋白质如硫氧还蛋白(硫氧还蛋白)减少免费radical-promoted损伤应激过早衰老细胞(20.- - - - - -22)通过p16和p53肿瘤抑制通路的激活(17,22)或减少间接ROS水平(23]。哺乳动物细胞表达两个硫氧还蛋白亚型,cytosolic-nuclear Trx1和线粒体Trx2。线粒体活性氧的主要来源在衰老,Trx2是最重要的一个protein-regulating氧化应激在这种细胞器(24]。

研究的天然物质,可以延缓皮肤衰老的对象过去几年[越来越浓的兴趣4,25,26]。在这方面,Deschampsia南极洲南极(DA)是一种植物能活在太阳照射下,高盐分,高氧浓度,低的温度,和极端干燥。一些DA防御属性已报告在活的有机体内在人类细胞中,从植物中提取(EDA)防止UV-induced人类光老化(专利我们8.357.407 B2)。为了得到更多信息的潜在好处EDA在外部氧化剂代理引起的皮肤老化,我们评估不同治疗方法的效果的EDA年轻从人包皮成纤维细胞诱导的衰老过程由几个H₂O₂浓度。细胞增殖和形态测量和量化的PCNA标记的DNA复制的水平;衰老的标志β牛乳糖,核纤层蛋白A / C, Sirt1;和氧化还原蛋白质Trx2透露EDA的保护作用,用它作为一种治疗候选人抵消oxidation-dependent细胞衰老引起的H₂O₂曝光。

2。材料和方法

2.1。试剂

Deschampsia南极洲提取(EDAFENCE®以下简称EDA)是获得国际金融公司,马德里,西班牙。简单地说,从培养干绿叶,收获Deschampsia南极洲植物在定义的条件下,研磨并提取了渗流与水在40 -°C,在4 - 6小时。提取过滤是1μ过滤和冻干。

2.2。细胞培养和治疗

衰老人包皮成纤维细胞原代人包皮成纤维细胞(SHFF)来自(高频电炉)重复的段落。应激过早衰老成纤维细胞(SIPSF)通过暴露在H₂O₂。主要年轻成纤维细胞被认为是小于20人口倍增(PD), 21到29之间presenescent PD,衰老文化30 PD或更高版本。F-25烧瓶内的细胞被传播。所有的实验都是用年轻(PD) 13日,presenescent (PD) 26日,和衰老(45 PD)成纤维细胞。使用的介质是杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)补充葡萄糖4.5 g / L, 10% (v/v胎牛血清(FCS), 50μ青霉素g / mL, 0.2谷酰胺。细胞培养在37°C的大气中含有5%的股份有限公司₂。当细胞达到confluency,亚文化使用一个包含0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA溶液。

EDA的治疗,这种化合物溶解在无菌水搅拌在30分钟25°C和消毒过滤通过0.22μm注射器过滤器,最后10毫克/毫升的浓度。EDA的治疗是在0.3毫克/毫升,0.5毫克/毫升,1毫克/毫升。高频电炉文化治疗在不同时间:24小时期间播种后24 h(条件1)和48 h(条件3)48 h后播种在24小时(条件2),(补充图网上S1https://doi.org/10.1155/2017/2694945)。对H₂O₂全身的过早衰老,细胞48 h后播种处理不同h₂O₂浓度(100μ米、150μ米,200μM)不同时间(30分钟、1 h和2 h)。在这些化验,细胞被孵化为0.3,0.5,1毫克/毫升EDA在24小时前h₂O₂(预处理),治疗后H₂O₂治疗(治疗),治疗前后(PRE-POST-treatment),(见附加图S2)。在所有情况下,治疗H₂O₂是只有玄武岩中、H₂O₂。EDA是立即从介质中删除之前H₂O₂博览会。

2.3。细胞生存和增殖化验

MTT还原试验和细胞生存能力测定细胞增殖是化验用结晶紫染色。在96孔板细胞被播种密度为3.5×10³细胞/。在衡量点,MTT添加在0.5毫克/毫升为2 h 37°C。结果甲瓒产品是随着在DMSO溶液搅拌30分钟期间,和吸光度测量在570 nm和690 nm(背景)。结晶紫是准备为0.1%w/v在2%的乙醇。此前,细胞被固定在不同染色(甲醇:乙酸3:1 (v/v比例)在5分钟,完全干后,他们孵化与结晶紫溶液在30分钟37°C。细胞被用水洗了几次(直到漂洗很清楚)。结晶紫与40%(从细胞中提取v/v在30分钟)甲醇搅拌下,吸光度测量在570海里。

2.4。SAβ牛乳糖水平

的β加水平确定所述其他地方(27]。简而言之,subconfluent文化以前固定为0.2%(5分钟v/v戊二醛和2% (v/v与PBS)甲醛,然后冲洗。荧光测定,细胞被孵化与反应的解决方案包含0.2柠檬酸钠₂HPO₄MgCl pH值5.0,6.4毫米₂三水,100 mM亚铁氰化钾(II), 100毫米亚铁氰化钾(III), 5 M氯化钠,荧光素di - 2毫米β随着在DMSO -galactopyranoside (FDG)。固定成纤维细胞孵化期间与反应的解决方案- h在37°C。485/525 nm激发/发射波长的荧光测定。比色测定,前100年被替换下场μ半乳糖苷(5-bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranoside)。阳性细胞被发现为蓝染色,在一个标准的光学显微镜。总共有1000个细胞数在5个随机领域文化板块,以确定的百分比β-Gal-positive细胞(27]。

2.5。免疫印迹分析

Subconfluent文化与PBS 1×然后洗细胞溶解里帕缓冲区包含磷酸酶鸡尾酒2和蛋白酶抑制剂(MIσ,圣路易斯,美国)。样品蛋白质含量调整到相同的蛋白质浓度测量由BCA测定试剂(美国皮尔斯,罗克福德,IL),混合着Laemmli样本缓冲区包含50 mM德勤和煮5分钟。80年之后,μg的每个样本受到在6 - 12% sds - page电泳分离。凝胶被转移到硝酸纤维素(0.2μ米孔,微孔,贝德福德,妈,美国)10分钟使用Trans-Blot涡轮增压传输系统(美国加州Bio-Rad)。膜与朱红色年代彩色染色溶液(0.1% (w/v)朱红色年代的5% (v/v)乙酸)来控制加载和漂白后,膜被封锁与1% BSA Tris-buffered盐水(TBS: 25毫米Tris-HCl pH值7.5,150毫米氯化钠)。包含0.1%的膜在TBS孵化Tween-20和1% BSA (TBST)和以下特定抗体:山羊多克隆Actin-C(1: 1000),增殖细胞核抗原(1:3000),鼠标单克隆山羊多克隆Trx2(1: 1000),山羊多克隆Sirt1(1: 1000),和山羊多克隆LmnA / C (1: 1000)。作为二级抗体,我们使用合单克隆抗体anti-mouse Ig G(1: 6000)和合多克隆抗体免疫球蛋白(1:1000)。膜是孵化主要抗体在一夜之间在4°C,并与TBST清洗后,二次抗体被用来孵化膜在室温下1 h。执行检测乐队使用ECL +免疫印迹检测系统(通用电气医疗集团,赫特福德郡,英国)。量化的乐队,我们应用一个软件数量分析(Bio-Rad)。使用的所有抗体来自圣克鲁斯生物技术。

2.6。显微观察和统计分析

显微观察和照片进行尼康Mod。Diaphot-TMD显微照相机配备了HBO 100 W汞灯和相应的滤波器组荧光显微镜:绿色(545 nm,激动人心的过滤器BP 545)。数据表示为均值±S.E.使用方差分析的统计显著性决定(方差分析)显示邓肯事后测试( 使用SPSS软件(IBM)^RSPSS^R统计19)。

3所示。结果

3.1。EDA高频电炉细胞的影响细胞增殖和生存能力

测试EDA是否影响高频电炉的增殖细胞(PD) 13日,我们孕育的文化从播种24 h和/或48 h后与不同浓度的EDA(0、0.3、0.5和1毫克/毫升),因为它是补充图所示S1。在所有情况下,我们评估了72 h postseeding后不同的参数。在条件1,只有0.5毫克/毫升EDA增加细胞增殖而在条件3,0.3毫克/毫升和0.5毫克/毫升增加此参数。EDA浓度也增加了存活率在条件1和3和0.5毫克/毫升也增加条件2。更高浓度的EDA(1毫克/毫升)减少生存状况条件2和3,但增加1(数字1(一)和1 (b))。

我们也评估细胞增殖间接通过测量PCNA的水平,细胞复制的一个重要标志。我们发现,在条件1和3,0.3和0.5毫克/毫升EDA诱导显著增加PCNA水平相比,在控制条件。然而,更高的EDA(1毫克/毫升)浓度降低PCNA水平条件1和2,但增加条件3(图1 (c))。

存活率,这些结果表明,细胞增殖和PCNA水平一致,高频电炉细胞的细胞增殖与EDA增加0.3和0.5毫克/毫升的治疗条件1和3。

3.2。EDA治疗促进表达Sirt1和LmnC减小SA -β加

我们评估了EDA的影响几个衰老标记物的水平在高频电炉细胞(PD) 13日。在这方面,衰老的过程的特点是增加了SA -β-Gal-positive细胞和已知的衰老标记物的表达的变化如Sirt1和LmnA / C。

EDA的高频电炉SA -减少引起的β加水平。在条件1中,EDA的浓度降低了SA -β加水平;然而,所有EDA浓度能够减小SA -β加的条件(图2和32(一个))。我们下一个测试是否EDA Sirt1的治疗能够诱导表达,代谢状态和衰老的标志。免疫印迹显示只有Sirt1的增加蛋白质含量为0.3毫克/毫升EDA在条件1(数字2 (b)和2 (c))。另一方面,nucleoskeleton蛋白LmnA / C的EDA剂量增加1毫克/毫升在条件1,但增加EDA浓度测试条件(图2和32 (d))。

这些结果表明,不同的EDA治疗诱导减少基底衰老的标志包括更高水平的LmnA / C和Sirt1在减少SA -β加水平(图2)。

3.3。H₂O₂减少细胞增殖和生存

为了建立外在衰老的一个条件,我们评估的影响不同的H₂O₂浓度对细胞增殖、生存能力和衰老相关的标记在前一节中描述。细胞培养(13 PD)治疗后48 h播种confluency(50%)与不同剂量的h₂O₂(100年和200年μM)不同时间(30分钟、1 h和2 h)。我们在24小时进行分析,48 h,和72 h后h₂O₂曝光。观察细胞增殖减少在H₂O₂申请1 h和2 h浓度治疗。这种效应是明显的24 h后h₂O₂在72 h复苏,越来越明显。数据获得的存活率与这些结果(数据一致3(一个),3 (b),3 (c))。正如所料,PCNA水平相比显著降低的控制(C13),但只有在200细胞治疗μM H₂O₂2 h和24小时后的h₂O₂恢复(图3 (d))。

总之,这些结果表明,100 - 200μM H₂O₂应用在1 - 2 h减少细胞增殖和生存在人类成纤维细胞以持续的方式从24 h - 72 h的复苏从h₂O₂治疗。

3.4。H₂O₂伴随老化蛋白的表达增加

我们下一个分析H的效果₂O₂在高频电炉外在衰老的开始。不同H₂O₂使用剂量,我们测量了SA -β加水平比色和荧光化验。过氧化氢诱导的百分比的增加积极的SA -β加细胞(蓝色)在每一个剂量化验,特别是在最高(200μM H₂O₂)(图4(一)),但是我们可以发现这只增加48 h后h₂O₂复苏。作为替代方法,我们量化SA -β使用荧光试剂FDG加。经过24小时的h₂O₂复苏,(见材料和方法)过氧化氢浓度化验显示增加SA -β加水平(图4 (b))。这种方法使我们检测的敏感性SA -β加在过氧化氢文化中,24小时之前,与比色法比。然而,不同的SA -β加H之间的水平₂O₂治疗后48 h更明显恢复,因为它显示在比色测定。

我们下一个测试是否H₂O₂接触调制在高频电炉Sirt1细胞的表达。我们发现,150年和200年μM H₂O₂Sirt1蛋白质含量下降而控制细胞来自13个PD (C13,图4 (d))。关于核纤层蛋白,我们发现细胞培养暴露于150年和200年μM的过氧化氢减少两个褶皱LmnA / C水平相比高频电炉的控制(图4 (e))。

总之,我们的结果是一致的₂O₂诱导衰老表型和他们允许我们确定一个最佳剂量和时间(200μ米2 h)。

3.5。治疗H₂O₂诱发Trx2表达式

Trx2是一个重要的线粒体氧化还原蛋白质参与不同的过程包括细胞凋亡、细胞周期、活性氧反应。平行于之前的分析,我们还检测了Trx2蛋白质含量在高频电炉(13 PD, C13) SHFF (45 PD, C45),和H₂O₂接触高频电炉文化(SIPSF)(图5)。结果显示减少的Trx2 SHFF虽然水平显著增加( )高频电炉博览会后至100年,150年和200年μM H₂O₂2 h相比未曝光的高频电炉细胞。

3.6。EDA防止损失的细胞生存能力在H₂O₂暴露的细胞

评估EDA的能力来防止氧化伴随老化损坏或修复其有害影响,我们评估了不同浓度的EDA(0、0.3、0.5和1毫克/毫升)和高频电炉不同孵化时间,测量扩散和存活率。高频电炉细胞与不同浓度的EDA之前治疗H₂O₂暴露(前提)和/或后H₂O₂博览会(张后条件和后置条件、职责)。不同参数的评估进行了24小时恢复后的h₂O₂治疗(见附加图S2)。因为它可以看到数据6(一)和6 (b)EDA治疗(0.3、0.5和1毫克/毫升)之前H₂O₂曝光和之前和之后的H₂O₂暴露(PRE-POST-treatment)细胞增殖和存活率增加,即使有价值发现控制条件(C)(大约10 - 20%的增长)。

我们还发现,PCNA与相关数据的水平生存和增殖。我们注意到预处理增加0.3毫克/毫升EDA SIPSF细胞PCNA水平和控制相比,H₂O₂暴露的细胞。此外,治疗前后增加PCNA水平在所有EDA剂量(0.3、0.5和1毫克/毫升)。相比之下,添加EDA(0.3, 0.5毫克/毫升)只有在H₂O₂治疗诱导细胞增殖的变化和改善他们的存活率(图6 (b))。此外,EDA剂量越高(1毫克/毫升)细胞增殖减少,存活率和PCNA蛋白含量(图6)。

3.7。EDA调节衰老蛋白的表达在H₂O₂暴露的细胞

衰老原因深刻的变化在细胞形态。因此,我们测试了形态变化是否由H₂O₂由EDA治疗可以预防或恢复。结晶紫染色后光镜形态学观察表明,控制SIPSF细胞(C + H₂O₂)提出了一个更明显的多面形态和较大的比控制高频电炉细胞(C13),显示轴形状(图特征7(一))。细胞的形态学处理0.3毫克/毫升EDA之前H₂O₂接触类似于H₂O₂未暴露的细胞(控制C13)。然而,在高剂量治疗(0.5和1毫克/毫升EDA)相比没有造成实质性的变化控制SIPSF细胞(图7(一))。

同时,预处理与0.3和0.5毫克/毫升EDA之前H₂O₂博览会显著降低H₂O₂全身的SA -β加( )24小时和48 h后h₂O₂恢复(图7 (b))。此外,EDA后处理SA -下降β加( ),但是只有在0.3毫克/毫升EDA剂量。值得注意,PRE-POST-treatment没有减少SA -β分别加水平超过预处理和后处理条件。

关于Sirt1,我们观察到在H水平显著下降₂O₂暴露的细胞,与对照组相比。然而,EDA治疗增加了Sirt1表达式(图8(一个))。具体来说,0.3毫克/毫升的应用EDA之前H₂O₂博览会Sirt1表达而增加0.5和1毫克/毫升Sirt1同样增加帖子和张后条件。

LmnA / C,它可以观察到,如图8 (b)预处理和后处理,0.3毫克/毫升EDA诱导LmnC水平的增加,但不是LmnA保持稳定在每一个治疗与SIPSF细胞(C + H₂O₂)。引人注目的是,PRE-POST-treatment与EDA蛋白LmnA / C内容没有影响。

这些结果表明,不同的EDA剂量有不同的影响在SIPSF细胞衰老的开始标记。形态学,SA -β加,Sirt1的内容和LmnA / C建议治疗0.3毫克/毫升EDA有保护作用对H₂O₂压力。

3.8。EDA的表达减少Trx2 H₂O₂暴露的细胞

最后,我们研究了在未曝光的EDA治疗的效果与H₂O₂接触细胞以前描述的条件(见附加图S2)。我们确认0.5和1毫克/毫升EDA Trx2内容减少高频电炉细胞条件1,但增加条件2(图9(一个))。Trx2水平是高于EDA-treated细胞控制的条件2和0.3毫克/毫升。在条件3,只有EDA治疗0.5毫克/毫升Trx2水平上升。

此外,我们观察到博览会200μM H₂O₂在高频电炉细胞增加Trx2表达式。预处理和后处理与0.3、0.5和1毫克/毫升EDA显著下降( )Trx2蛋白质含量比H₂O₂暴露的细胞,而PRE-POST-treatment没有影响(图9 (b))。这些实验表明EDA的保护作用可能是无关的角色Trx2抑制ROS的生成和/或有害的影响。

4所示。讨论

皮肤老化是一个复杂的过程受到内在和外在因素的影响。内在因素,如遗传和代谢方面带来不可避免的生理变化。相比之下,外部代理如紫外线照射、极端温度、污染、或饮食,等等,可以加速衰老的内在过程(4,28,29日]。在衰老,增加生产的细胞活性氧(ROS)的结果在不同的细胞组件有害的损害。抗氧化剂提供防御活性氧,消耗在这些化合物的水平被发现在衰老细胞在体外以及在活的有机体内(30.,31日]。在这种背景下,寻找产品和主要是天然产品,可以减少氧化应激和,因此,衰老引起的压力正在增加兴趣近年来的对象。

许多天然产物具有再生能力以及抗氧化活性。在过去,他们中的一些人已确定在几个产品,如软体动物的分泌物Cryptomphalus aspersa(SCA) (32),提取从蕨类植物的叶子33),姜黄素(34[],绿茶35),或白藜芦醇36]。在这项研究中,我们测试了antisenescence南极植物的提取的影响Deschampsia南极洲(EDA),一个极端微生物植物具有较高的抗氧化能力和抗氧化剂测试压力如紫外线辐射(37]。开展这项工作,我们选择了人类包皮成纤维细胞作为模型由于其重要性在皮肤再生4,26),触发压力诱导的衰老,我们使用了H₂O₂,这是众所周知的ROS发生器早衰(38,39]。

过早衰老与复制或按时间顺序的衰老有着很多共同点,如典型的细胞形态,细胞增殖下降到不可逆转的SA -增长逮捕或增加β加的水平。形态变化参与衰老是细胞骨架重组的结果4,26]。在体外SHFF更大,显示圆形和扁平的外表而高频电炉。此外,H₂O₂也类似于SHFF暴露的细胞,而EDA预处理预防衰老相关的形态学变化。事实上,EDA预处理的H₂O₂接触高频电炉细胞保持相似的形态特征(纺锤体的形状和尺寸小一点的)未经处理的高频电炉的细胞。这种效应是一致的与其他证明天然抗氧化剂4]。

正如前面指出的,衰老是细胞增殖减少直到增长逮捕。在这方面,PCNA标记的细胞增殖,减少其表达与年龄(40]。染料木素等抗氧化剂增加PCNA内容,保护皮肤的扩散(7]。同样,其他抗氧化剂代理,例如,SCA,白藜芦醇,或抗坏血酸,咖啡酸,描述增加细胞增殖,这种效应似乎与每个化合物的修复能力(26,32,41,42]。在这里,我们表明,EDA促进高频电炉增殖和生存能力略有增加,这表明这种化合物的增殖效应。

H的影响₂O₂在细胞增殖的电感在几个细胞氧化损伤已被广泛研究[28,43- - - - - -45]。我们报告,EDA预处理防止H的抗增殖作用₂O₂此外,增加细胞增殖non-H控制权₂O₂暴露的细胞。这种行为是类似于其他抗氧化化合物发现20.,33,46]。事实上,EDA提取物富含酚类物质包括芹黄素和木樨草素等黄酮类化合物,这表明EDA的保护作用可能是其抗氧化能力有关。然而,这个角色需要进一步的研究。额外的机制可能包括对DNA-modifying酶的细胞水平产生影响,例如,Sirt1。Sirt1是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺-)依赖脱乙酰酶和ADP-ribosyltransferase参与线粒体生物起源和DNA修改。重要的是,转基因小鼠Sirt1显示一个大大延长寿命和衰老的延迟性,包括改进的物理参数(47]。在分子水平上,Sirt1的促进细胞增殖及其表达水平降低与细胞衰老48,49]。此外,脱乙酰作用FOXO, p53、p73 Ku70, Smad7蛋白质Sirt1诱导耐氧化应激,抑制细胞凋亡50,51]。不同剂量的EDA否定Sirt1表达式的抑制引起的H₂O₂的积极的影响,这在一定程度上解释了EDA防止衰老通过增加抗氧化应激(52]。在这方面,EDA也是有效预防其他压力诱导衰老的标志,例如,增加了SA -β加,这是一个常用的细胞衰老的标志(53,54]。

它已经显示,衰老细胞的比例之间存在显著的负相关,增殖细胞的百分比在人类椎间盘组织变性(55]。然而,这种关系并不总是如此;在某些情况下,过度刺激促有丝分裂的可能诱发衰老(56]。这些报告强调EDA减少衰老标记,但这一事实并不完全平行的增加细胞增殖。

我们发现增加Trx2博览会后高频电炉H₂O₂由EDA中和治疗,表明EDA可以促进保护H₂O₂premature-induced衰老减少氧化应激的水平。最近的研究表明,Trx2超表达在体外可以保护哺乳动物细胞对叔丁基氢过氧化物和etoposide-induced细胞凋亡,以及增加了线粒体膜电位(57,58]。此外,人类心肌细胞缺乏Trx2显示细胞ROS增加和细胞凋亡23]。另一方面,过度的Trx1或Trx2已被证明影响寿命的实验模型(24,59]。Trx1的增加、Trx2和硫氧还蛋白还原酶蛋白已被建议作为补偿响应来抵消增加氧化应激在衰老过程中(60]。

EDA也阻止了应激减少蛋白质控制核架构,例如,核纤层蛋白A和c,这些蛋白质是细胞衰老的关键球员,说明了他们的基因损耗,导致衰老的早期开始,由一群集体称为laminopathies罕见遗传疾病。在自然衰老,LmnA似乎随着时间的推移保持不变而LmnC显著降低(17,18),尽管这可能是程控依赖,因为其他研究报告相应减少的亚型(17]。在我们的实验中,H₂O₂减少LmnC LmnA,这种减少抵消了EDA的预处理,即符合H antisenescence EDA的效果₂O₂接触高频电炉细胞。

总之,我们的数据证明了提取物的积极影响Deschampsia南极洲为了抵消H₂O₂压力诱导人类二倍体包皮成纤维细胞过早衰老暗示其潜力作为治疗剂治疗皮肤老化。

缩写

SA -β加:	Senescence-associated苷
DMEM:	杜尔贝科修改鹰的媒介
EDA:	从Deschampsia南极洲
EDTA:	乙二胺四乙酸
配合:	di -荧光素β-galactopyranoside
高频电炉:	人包皮成纤维细胞
LmnA / C:	核纤层蛋白A / C
麻省理工:	(3)- 4 5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyltetrazolium溴离子
PCNA:	增殖细胞核抗原
帕金森病:	人口增加了一倍
SHFF:	衰老人包皮成纤维细胞
口:	压力诱导过早衰老
SIPSF:	压力诱导过早衰老成纤维细胞
衬衫:	Sirtuin蛋白。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的“工业Farmaceutica坎塔布里亚”(国际金融公司,奥特:20159760),西班牙经济和竞争力(MICINN Ref。费德bfu2014 - 52452 p共同投资)和塞内加基金会从穆尔西亚,西班牙(卓越集团:19876 /生殖/ 15)。萨尔瓦多·冈萨雷斯IFC扮演顾问的角色,部分支持这项研究工作。以斯帖龙葵和洛杉矶Juarranz PI15/00974提供资助,从Instituto de Salud卡洛斯三世MINECO和菲德尔基金。作者感谢博士f . Pallardo(瓦伦西亚大学)的礼物Trx2抗体。

补充材料