文摘
丙烯醛是参与急性肺损伤等肺部疾病。大量的研究表明,acrolein-induced毒性作用与损耗的抗氧化剂,如减少谷胱甘肽和蛋白质硫醇和活性氧的生产。线粒体辅酶ii+端依赖异柠檬酸脱氢酶(idh2)调节线粒体氧化还原平衡,减少氧化应激通过代NADPH的细胞损伤。因此,我们评估的作用idh2在acrolein-induced肺损伤idh2短发卡RNA(成分)转染Lewis肺癌细胞和(LLC)idh2不足(idh2−−/老鼠)。Downregulation的idh2表达了对丙烯醛通过诱导凋亡细胞死亡由于升高线粒体氧化应激。Idh2也缺乏提升acrolein-induced肺损伤idh2基因敲除小鼠通过破坏线粒体氧化还原状态。此外,acrolein-induced毒性idh2shRNA-transfected LLC细胞idh2基因敲除小鼠改善了抗氧化剂,n -乙酰半胱氨酸常通过衰减造成的氧化应激idh2缺乏。总之,idh2缺乏会导致线粒体氧化还原环境恶化,导致acrolein-mediated LLC的凋亡细胞和acrolein-induced肺损伤idh2−−/老鼠。本研究支持的核心作用idh2缺乏诱导氧化应激造成acrolein-induced破坏线粒体氧化还原状态的肺。
1。介绍
丙烯醛是一个无处不在的环境污染物来自香烟,不完全燃烧的塑料材料,和正交动植物;它也是从内部产生炎症或不饱和脂质氧化1]。丙烯醛吸入诱导的基因调控结果,炎症和肺细胞凋亡和坏死1]。据报道,暴露于丙烯醛导致急性肺损伤,破坏肺泡毛细血管屏障的完整性,肺水肿,慢性阻塞性肺疾病(2,3]。
据报道,丙烯醛引起氧化应激诱导,直接或间接的生产过量的活性氧(ROS),促进细胞凋亡(4,5]。ROS acrolein-induced细胞损伤中起到特别重要的作用,因为丙烯醛是一种最活泼α,β不饱和醛脂质过氧化的产物(6,7]。作为一个α,β不饱和醛,丙烯醛含有高活性羰基和一个亲电α碳是细胞高活性的亲核试剂,如蛋白质、DNA和RNA (7]。丙烯醛容易目标和与半胱氨酸的巯基反应生成硫醚加合物通过迈克尔加成机制(8]。损耗的细胞减少谷胱甘肽(GSH)的形成GS-acrolein配合导致增加氧化应激(9- - - - - -11]。丙烯醛也可以消耗蛋白质硫醇、硫氧还蛋白和glutaredoxin等,是重要的抗氧化蛋白(12,13]。
线粒体毒物丙烯醛也被报道,这表明它参与线粒体功能障碍(14]。线粒体是其中最重要的细胞器参与活性氧的生产,因为线粒体呼吸链是活性氧的主要来源之一的生产(15]。此外,这些也是活性氧的主要目标和氧化应激损伤,观察到在各种病理状态(16,17]。在正常生理条件下,细胞生存和功能是非常依赖于持续平衡线粒体活性氧的形成和删除(18]。活性氧可以消除抗氧化酶,如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶,抗氧化蛋白(插件可以)19]。在这方面,击倒或抑制抗氧化酶可以破坏氧化还原平衡,加剧ROS-induced细胞死亡。保持GSH-dependent线粒体的抗氧化防御系统,线粒体NADPH池的可用性是至关重要的(20.]。此外,线粒体硫氧还蛋白系统,其中包括硫氧还蛋白2 (TRX2)和硫氧还蛋白还原酶2 (TRXR2),需要提供一个二硫还原酶活性,维持线粒体蛋白减少的状态。线粒体硫氧还蛋白系统可以与Prx3交互,只在线粒体中发现。减少TRX2由TRXR2再生的NADPH [18]。主要的酶产生线粒体NADPH的线粒体同工酶辅酶ii+端依赖异柠檬酸脱氢酶(IDH2) [21,22]。因此,抑制IDH2活动可能引起线粒体氧化还原状态的失衡,随后增加肺细胞和组织的脆弱性acrolein-based调制的氧化还原状态。
目前的研究表明丙烯醛促进抑制的敞口idh2表达,降低了细胞的还原电位,增加活性氧的水平。抑制idh2线粒体氧化还原状态的表达导致中断,诱导细胞凋亡,急性损伤的肺idh2不足(idh2−−/)老鼠和idh2短发卡RNA(成分)转染细胞。这些结果表明,衰减或不足之处的idh2导致线粒体ROS水平增加,导致acrolein-mediated Lewis肺癌的细胞凋亡(LLC)细胞和acrolein-induced肺损伤idh2−−/老鼠。本研究的结果支持中断产生的ROS增加一个重要的角色通过抑制线粒体的抗氧化防御IDH2表达acrolein-induced急性肺损伤。
2。材料和方法
2.1。材料
Propidium碘(PI)、5、5 ,-dithio-bis (2-nitrobenzoic酸)、3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-di-phenyltetrazolium溴化(MTT) anti-rabbit免疫球蛋白tetramethylrhodamine异硫氰酸酯(TRITC)共轭二次抗体,二甲酚橙,N-acetyl-L-cysteine (NAC)和罗丹明123 (rh - 123)从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州),而2 ,7二乙酸-dichloro-fluorescin (DCFH-DA) diphenyl-1-pyrenylphosphine (DPPP) 3-tetraethylbenzimidazolocarbocyanine碘(JC-1) 5-chloromethylfluorescein二乙酸(CMFDA)和MitoSox从英杰公司购买(尤金,或者)。本研究中使用的抗体如下:β肌动蛋白和细胞p53肿瘤抗原(圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯,CA);p-JNK、cleaved-PARP caspase-3裂解,裂解caspase-9,和辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体(细胞信号技术,贝弗利,MA);细胞凋亡调节伯灵顿(Calbiochem,圣地亚哥,CA);丙烯醛加合物(Abcam、剑桥、马);和氧化插件可以(Prx-SO3)(Abfrontier,首尔,韩国)。包含16 n端氨基酸的肽的小鼠IDH2 (ADKRIKVAKPVVEMPG)被用来制备多克隆抗体anti-IDH2。
2.2。细胞培养
LLC细胞系是购买从日本收集的研究生物细胞库(JCRB细胞库,大阪,日本)。细胞培养用杜尔贝科的修改鹰中补充10%胎牛血清和1%青霉素和链霉素在湿润的气氛中在37°C和5%的公司2。48小时后,盘子洗了磷酸盐(PBS)和孵化与含有丙烯醛的新媒介,而同样数量的PBS是用作控制。细胞培养在湿润的气氛中在37°C和5%的公司2和丙烯醛曝光后收获。MTT分析是用来确定细胞细胞毒性(如前所述)(23]。
2.3。Idh2shRNA击倒
Idh2成分和不属预定目标的shRNA使命®慢病毒转导粒子从Sigma-Aldrich购买。LLC细胞转导,最终浓度的8μg / mL hexadimethrine溴化,根据制造商的协议。转导细胞被选为单一的殖民地中包含5μg / mL嘌呤霉素(Clontech山景,CA)中包含1和维护μ克/毫升嘌呤霉素。
2.4。RNA隔离和逆转录聚合酶链反应(rt - pcr)
从LLC细胞RNA提取使用RNeasy工具包(试剂盒、希尔登,德国)按照制造商的指示。RNA是反向转录cDNA使用合成第一链cDNA工具包(表达载体),根据制造商的协议。互补脱氧核糖核酸是扩增。菌进行使用的引物序列如下:β肌动蛋白转发:5-TCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 ,反向:5-ATCTCCTTCTGCATCCT-GTC-3和idh2转发:5-ATCAAGGAGAAGC-TCATCCTGC-3 ,反向:5-TCTGTGGCCTTGTACTGGTCG-3 。β肌动蛋白是作为内部控制。放大DNA产品解决1%的琼脂糖凝胶和溴化乙锭染色。
2.5。流仪结果
细胞被收集在2000年5分钟,洗两次冷PBS。膜联蛋白V和π与Alexa染色进行萤石488膜联蛋白V /死亡细胞凋亡装备,根据制造商的协议。染色细胞分析流式细胞术(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西)。
2.6。细胞氧化还原状态的评估
细胞内过氧化水平测量使用ferric-sensitive染料二甲酚橙和DCFH-DA如前所述[21]。蛋白质氧化被使用anti-Prx-SO免疫印迹分析评估3抗体。细胞内谷胱甘肽水平测量使用GSH-sensitive荧光染料,CMFDA。细胞被沾染了5μM CMFDA为30分钟37°C。
2.7。细胞的氧化损伤
硫代巴比土acid-reactive物质(TBARS)用于测量脂质过氧化作用。细胞提取物混合1毫升稍后通知解决方案[0.25 N HCl含有15%(0.375%的硫代巴比土酸w/w)三氯乙酸][21]。脂质过氧化作用也被使用荧光DPPP探测器(24]。8-hydroxy-2的水平脱氧鸟苷(8-OH-dG) LLC细胞荧光结合分析法测定了如前所述[25]。细胞被固定和permeabilized冰冷的甲醇,持续15分钟。DNA损伤与avidin-conjugated可视化TRITC(1: 200稀释)使用荧光显微镜。彗星试验也使用彗星试验执行工具包(细胞生物学实验室Inc .,圣地亚哥,CA)。细胞提取物与冷洗PBS和离心机。细胞颗粒与彗星琼脂糖混合在1:10比(v/v),用移液器吸取到彗星试验。幻灯片在4°C干在黑暗中15分钟和孵化冷冻溶解溶液在4°C在黑暗中15分钟。洗后用此种缓冲(50毫米三、50 mM硼酸和0.2毫米EDTA),样品受到DNA电泳和染色Vista绿色染料。图像是用显微镜获得的。尾部DNA的细胞的比例在每个幻灯片测量和量化。
2.8。线粒体氧化还原状态和损伤的测量
健康的线粒体膜电位检测使用荧光探针JC-1(表达载体)。细胞培养与5 37°CμM JC-1 30分钟。绿色/红色荧光强度的比值成正比的线粒体膜电位26]。线粒体膜通透性转换(MPT)可视化使用荧光探针rh - 123,并使用MitoSox线粒体ROS水平测定。细胞生长在100毫米板包含一个载玻片上涂上一层poly-L-lysine并接受丙烯醛或PBS和治疗的30分钟5μrh - 123和MitoSox M。幻灯片与细胞上被洗在温暖的PBS和覆盖着一个玻璃盖片。rh - 123荧光(激发/发射:500/536 nm)和氧化MitoSox红色荧光(激发/发射:510/580 nm)成像在蔡司Axiovert 200倒置显微镜和蔡司LSM700共焦激光扫描显微镜,分别。
2.9。免疫印迹分析
总蛋白提取分离在10 - 15%十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶和转移到硝化纤维膜。膜被孵化与特定的主要抗体在一夜之间在4°C,和使用HRP-conjugated二级抗体和免疫反应性的抗原是公认的一种增强化学发光检测设备(通用电气医疗集团,白金汉郡,英国)。
2.10。动物
综述了所有动物实验和庆北国立大学机构批准的动物保健和使用委员会。实验用8-week-old雄性C57BL / 6小鼠不同的基因型,包括野生型(WT)idh2+ / +和基因敲除idh2−−/老鼠繁殖和产生的由PCR基因分型,如前所述[27]。microisolator啮齿动物的笼子里的老鼠被安置在22°C 12 h光/暗周期,允许自由进入水和标准鼠标周润发。老鼠被分为五组,每组6 - 10只老鼠(WT、WT +丙烯醛KO, KO +丙烯醛,和KO +丙烯醛+ NAC)。老鼠受到急性吸入丙烯醛(10 ppm 12 h),南汽在腹腔内注射(500毫克/公斤)丙烯醛暴露前2 h。
2.11。组织学分析
组织学分析,分离出小鼠的肺组织丙烯醛治疗后,福尔马林固定在4%。石蜡肺部分(5μm)染色与苏木精和伊红染色())。幻灯片包含肺部分与苏木精染色顺序吉尔3号、发蓝处理解决方案,在室温下和伊红Y轻轻摇晃。确定领空肺部肿大(28),空域使用ImageJ软件测量领域。肺损伤评分从0(正常)到4(严重)四类:间质性炎症、嗜中性粒细胞浸润充血,水肿,29日]。肺损伤评分计算通过添加个人得分为每个类别。评分是由观察者不知道治疗组。
2.12。终端原位dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色
评估细胞凋亡,肺组织部分被用于TUNEL染色使用原位细胞死亡侦测套件(罗氏、巴塞尔、瑞士),根据制造商的推荐协议。TUNEL-stained幻灯片和4轻复染色 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)之前最后的安装。分析了彩色幻灯片下Axiovert 40节能灯显微镜(卡尔蔡司AG);从德国)。
2.13。统计分析
结果显示平均±标准差。分析使用双尾t以及。值<0.05被认为是具有统计学意义。
3所示。结果与讨论
3.1。击倒的idh2使细胞凋亡在丙烯醛的侮辱
调查在acrolein-induced IDH2毒性的作用,我们沉默的表达idh2shRNA。LLC细胞转染与shRNA-encoding lv针对小鼠的成绩单idh2,想要从内部产生小RNA介导的沉默idh2。rt - pcr分析显示明显降低idh2信使rna水平idh2shRNA-transfected细胞而不属预定目标的shRNA-transfected细胞,免疫印迹分析显示减少IDH2 vector-infected细胞蛋白表达水平(图1(一))。检查的影响idh2击倒在丙烯醛处理后细胞存活率,LLC细胞治疗25μ丙烯醛1 h。丙烯醛治疗导致大幅下降的可行性不属预定目标的shRNA-transfected细胞(图1 (b))。的影响idh2击倒在细胞凋亡的细胞特性也被检查。图1 (c)显示了一个典型的细胞周期的情节LLC与控制或转染的细胞idh2成分。凋亡细胞的数量是估计的数量通过计算subdiploid细胞细胞周期直方图。中凋亡细胞的数量明显增加idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞暴露于丙烯醛。细胞凋亡是否负责的脆弱性idh2沉默LLC细胞acrolein-induced细胞损伤、凋亡细胞被量化使用流式细胞仪和π/膜联蛋白V双染色。量化结果在图1 (d)表明大部分acrolein-treated细胞凋亡的早期阶段(右下象限中描述)。类似的结果也观察到使用Annexin-V-FLUOS染色工具包(罗氏)fluorescence-activated细胞排序(流式细胞仪)(图1 (e))。Idh2沉默LLC细胞更容易acrolein-induced凋亡细胞死亡比WT同行。的影响idh2击倒的调制在LLC细胞凋亡标记蛋白质也检查了。如图1 (f),caspase-3和caspase-9分裂更加明显idh2shRNA-transfected细胞。碎片的形成表明蛋白水解PARP乳沟,proapoptotic标记,显著增加idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞。为了确定IDH2的角色在线粒体凋亡通路acrolein-induced毒性,细胞色素c的表达水平是评估。在接触丙烯醛,细胞色素c的水平是显著增加细胞转染idh2成分(图1 (f))。proapoptotic蛋白质如伯灵顿的水平也显著增加idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞。为了进一步评估的影响idh2downregulation proapoptotic信号通路的激活p53和物检查免疫印迹分析。phospho-p53的水平和phospho-JNK增加细胞转染idh2成分和丙烯醛处理(图1 (f))。p38的激活参与细胞凋亡的诱导30.]。如图1 (f)phospho-p38增加LLC的水平,细胞转染idh2在接触丙烯醛成分。这些发现揭示首次IDH2在有限责任公司中起着至关重要的作用对丙烯醛毒性细胞功能和生存。
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3.2。调制的氧化还原状态idh2击倒在丙烯醛毒性
过多的活性氧是有害的因为他们导致非特异性氧化损伤细胞组件、DNA、蛋白质、脂质等大分子(31日,32]。此外,ROS调节体内平衡和redox-regulated氧化还原信号级联,从而进一步损害组织和细胞的隔间(33]。以确定是否对丙烯醛毒性的易感性差异和控制idh2shRNA-transfected细胞活性氧的形成,细胞内过氧化物的水平测量细胞的流式细胞仪使用oxidant-sensitive探针,DCFH-DA。如图2(一个),显著增加了活性氧水平被观察到idh2shRNA-transfected细胞暴露于丙烯醛。此外,idh2击倒伴随着大幅升高细胞内H2O2水平,以二甲酚橙当细胞暴露于丙烯醛(图2 (b))。水平的提高Prx-SO3的氧化损伤的标志(抗氧化酶插件可以34),也被发现idh2shRNA-transfected细胞暴露于丙烯醛相比,控制细胞(图2 (c))。发生氧化DNA损伤、脂质过氧化反应和蛋白质氧化被评估为标记的细胞氧化损伤。接下来,整个DNA碎片用彗星试验测量评估氧化应激引起的DNA链断裂。如图2 (d)丙烯醛后诱导的DNA损伤治疗被击倒的增强idh2。在这个试验,破坏DNA展品的彗星尾巴的形状长度与DNA链断裂的数量。为了进一步证实DNA损伤,8-OH-dG,氧化DNA损伤的指标在体内和体外都(25),确定。丙烯醛的治疗后,8-OH-dG内生DNA水平的显著增加idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞(图2 (e))。与ROS的高度一致,有一个相当大的增加水平的丙二醛(MDA)、脂质过氧化指标,idh2可拆卸的细胞暴露于丙烯醛(图2 (f))。已经表明,DPPP是一个合适的探针监测脂质过氧化作用,特别在细胞膜(24]。暴露在丙烯醛,DPPP荧光强度显著增加idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞(图2 (g))。以确定是否idh2击倒对蛋白质损伤的敏感性增加,羰基含量测定来评估蛋白质氧化。的羰基含量idh2shRNA-transfected细胞显著高于控制细胞(图2 (h))。监测细胞内氧化应激的一种备选方法包括测量细胞谷胱甘肽的水平,这是与许多丙烯醛对细胞死亡的影响密切相关(35,36),使用GSH-sensitive荧光染料CFMDA [37]。使用这种技术,谷胱甘肽的水平idh2shRNA-transfected细胞暴露于丙烯醛是显著降低相比,在控制细胞(图2(我))。期间有许多氧化应激条件下的氧化还原状态及谷胱甘肽(GSSG比摄动(38]。蛋白质S-glutathionylation转译后修饰的蛋白质巯基组下发生氧化应激(39]。的氧化还原状态idh2shRNA-transfected细胞受损超过控制的细胞,所反映的增加glutathionylated蛋白质(图2 (j))。NADPH,谷胱甘肽所需代谷胱甘肽还原酶,细胞抵御氧化损伤是一个重要的因素。正如所料,击倒idh2LLC细胞水平显著降低NADPH,进一步减少暴露于丙烯醛(图2 (k))。综上所述,这些研究结果表明组合idh2击倒和丙烯醛暴露明显升高活性氧生成和随后在LLC细胞诱导氧化损伤。
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3.3。的作用idh2在线粒体丙烯醛引起的状态
除了线粒体在能量代谢的重要作用,调节细胞死亡,这可能与线粒体ROS生产,已成为这些细胞器的另一个主要功能40]。ROS MPT调制中发挥着重要作用,细胞凋亡的一个重要事件(41]。亲脂性的阳离子染料rh - 123是用于确定变化MPT LLC细胞暴露于丙烯醛。Acrolein-induced MPT的变更,由下降反映了rh - 123荧光,是更大的idh2可拆卸的细胞相比,控制细胞(图3(一个))。JC-1是一种荧光染料表现出potential-dependent积累在线粒体中,这通常被用来检测MPT变化(26]。绿色/红色荧光的比率也表明,治疗与丙烯醛导致减少了MPT LLC的细胞,这影响是加剧了击倒idh2表达式(图3 (b))。评估是否改变MPT是伴随着细胞内ROS浓度的改变,线粒体的细胞内过氧化物水平进行评估使用共焦显微镜和线粒体MitoSox oxidant-sensitive探测器。如图3 (c)后,idh2沉默,治疗后MitoSox荧光强度显著增加idh2可拆卸的细胞与丙烯醛。在控制细胞中,这种荧光强度的增加并不明显,说明idh2缺乏促进acrolein-treated细胞线粒体活性氧的生产。线粒体能量代谢障碍是由测量ATP合成(42]。暴露在丙烯醛后,观察ATP产量显著下降idh2shRNA-transfected细胞相比,控制细胞(图3 (d))。综上所述,这些研究结果表明idh2击倒与线粒体氧化还原环境的破坏和诱导的线粒体功能障碍时细胞暴露于丙烯醛。
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3.4。Idh2缺乏促进体内丙烯醛毒性
测试的生理相关性idh2缺乏丙烯醛毒性、WT (idh2+ / +老鼠和老鼠缺乏idh2(idh2−−/)被暴露于10 ppm丙烯醛2 h或过滤空气(控制)。正如所料,蛋白质的表达IDH2没有收获的肺组织中发现idh2−−/老鼠(图4(一))。肺组织的组织学分析表明,丙烯醛引起肺泡的扩张和免疫细胞渗透,和这些组织学特征显著增强idh2−−/小鼠相比idh2+ / +老鼠(图4 (b))。磁化率的显著增加idh2−−/老鼠acrolein-induced肺损伤也反映了显著增加肺泡领空区域(图4 (c)(图)和肺损伤分数4 (d))。获得进一步洞察acrolein-treated IDH2对肺损伤的影响的老鼠,的影响idh2缺乏对细胞凋亡的过程进行了研究。如图4 (e),更TUNEL-stained地点观察肺组织的idh2−−/老鼠与WT老鼠。免疫印迹分析表明caspase-3裂解,caspase-9裂解,裂解PARP,代表凋亡指数,增加的肺组织idh2−−/小鼠暴露于丙烯醛比控制。细胞色素c的表达增加,线粒体凋亡的代表,也是确定的肺组织idh2−−/老鼠在丙烯醛曝光(图4 (f))。这些结果表明,acrolein-induced肺损伤的严重程度的差异取决于的存在idh2,影响细胞凋亡水平。主要的酶产生线粒体NADPH线粒体同工酶,IDH2 [21]。因此,缺乏idh2可能引起的不平衡在线粒体氧化还原状态,随后增加肺细胞丙烯醛的脆弱性。确定的差异acrolein-induced肺细胞死亡和WT之间观察到idh2−−/老鼠与活性氧的形成,肺组织的细胞内过氧化氢含量测定用二甲酚橙。如图4 (g),更高水平的细胞间过氧化氢在acrolein-treated的肺组织idh2−−/老鼠相比,在WT老鼠。增加Prx-SO的表达水平3氧化应激的标记,也观察到acrolein-treated的肺组织idh2−−/老鼠(图4 (h))。此外,MDA的水平(脂质过氧化作用的指标)和acrolein-adducted蛋白质,蛋白质氧化损伤的程度,是衡量确定的数量derivatized羰基化合物氧化蛋白质免疫印迹,明显高于在acrolein-treated的肺组织idh2−−/老鼠相比在控制老鼠(数字4(我)和4 (k))。暴露在丙烯醛的氧化还原状态idh2−−/老鼠是受损的idh2+ / +老鼠,反映在增加glutathionylated蛋白在肺组织(图4(左))。此外,硝基酪氨酸免疫反应性被发现相对强acrolein-treated的肺组织idh2−−/老鼠的价格相比idh2+ / +老鼠,间接反映出更高层次的活性氮物种idh2−−/老鼠(图4(米))。总的来说,这些结果支持的观点idh2缺乏线粒体氧化还原状态恶化,加剧acrolein-induced结肠炎通过细胞凋亡。
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3.5。NAC对丙烯醛毒性的保护作用在体外和体内
确认增加acrolein-induced氧化应激损伤的影响,硫醇氧化的影响NAC对丙烯醛毒性评价在体外和在活的有机体内。之前显示,南汽减少氧化应激通过改善硫醇氧化还原状态(43]。预处理的idh2shRNA-transfected LLC细胞1毫米NAC(图有效地抑制细胞生存能力损失5(一个)(图)和凋亡细胞死亡5 (b)暴露在丙烯醛后)。细胞氧化应激,反映在增加光纤荧光(图5 (c))和Prx-SO3水平(图5 (d)),在acrolein-treated明显减弱idh2使用NAC可拆卸的细胞。预处理的idh2击倒细胞与南汽显著抑制acrolein-induced MPT的中断,反映在JC-1荧光比率(图5 (f))和线粒体ROS水平作为评价增加了MitoSox(图5 (f))。调查南汽在acrolein-induced肺损伤的保护作用在体内,NAC(500毫克/公斤)是腹腔内丙烯醛暴露前接种小鼠2 h。acrolein-administered的组织学特征idh2−−/老鼠使用NAC相比idh2−−/小鼠丙烯醛处理。相比之下,acrolein-administeredidh2−−/老鼠用NAC预处理,idh2−−/小鼠丙烯醛处理仅显示对肺损伤的易感性增加,反映在他们的组织学特征(图6(一)(图),领空区域6 (b)(图),肺损伤分数6 (c))。与细胞凋亡,凋亡标记蛋白在肺组织评估。裂解的水平caspase-3, caspase-9, PARP,细胞色素c和p38的活化形式,p53,物acrolein-administered NAC-pretreatedidh2−−/老鼠相比减毒活疫苗idh2−−/小鼠丙烯醛处理(图6 (d))。暴露在丙烯醛,Prx-SO水平3在NAC-pretreated显著降低小鼠比未经处理的小鼠(图6 (e))。这些结果表明,丙烯醛毒性体外和体内改善南汽通过防止氧化应激的结果idh2缺乏。
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4所示。结论
目前的研究表明idh2缺乏导致对acrolein-induced毒性的易感性增加有限责任公司通过破坏细胞和小鼠的肺组织线粒体的氧化还原状态。建立的重要性IDH2氧化还原状态的规定和肺组织的功能,我们在此提出的差别,对这些基因idh2在体外和体内系统可能是一个有效的模型对未来肺部疾病的研究。此外,我们的研究提供了一个有用的模型来调查的潜在应用NAC治疗或预防的丙烯醛毒性。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
这项工作是由韩国国家研究基金会(NRF)授予由韩国政府资助(MSIP)(批准号nrf - 2015 r1a4a1042271)。