CD36 / Sirtuin蛋白1轴损伤导致ACE2-Deficient小鼠肝脂肪变性

文摘

背景和目的。血管紧张素转换酶2 (ACE2)是肾素-血管紧张素系统的一个重要组成部分。因为血管紧张素肽已被证明参与肝脂肪变性,我们旨在评估肝血脂ACE2-deficient(王牌老鼠)。方法。雄性C57BL / 6和王牌分析了老鼠3和6个月时在等离子体的血脂水平,改变粪便,肝脏和肝脂肪变性。结果。王牌老鼠低体重和所有年龄段的白色脂肪组织调查。此外,这些小鼠低水平的胆固醇,甘油三酯,nonesterified脂肪酸在等离子体。引人注目的是,王牌小鼠高脂质在肝脏沉积。CD36的表达,一种蛋白质参与甘油三酯在肝脏的吸收,增加的王牌老鼠。同时,这些小鼠肝脏氧化应激增加展出,增加脂质过氧化和描写就是解偶联蛋白2的表达的差别,对这些sirtuin蛋白1。王牌老鼠还显示损伤肝脏中葡萄糖代谢和胰岛素信号。结论。删除ACE2原因CD36 / sirtuin蛋白1轴损伤,从而干扰脂质体内平衡,导致脂肪代谢障碍和脂肪变性。

1。介绍

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代谢紊乱的临床重要性不同的病理报告不同的从最初的肝脂肪变性,通过非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化、肝硬化,被认为是代谢综合征的小说组件(大都会)[1,2]。大都会的特点是一个集群的心血管和代谢紊乱,包括中央肥胖、胰岛素抵抗,葡萄糖耐受不良,血脂异常和高血压1,2]。新兴的证据表明,肾素-血管紧张素系统(RAS)中扮演一个重要的角色在大都会和非酒精性脂肪肝的发病机制3- - - - - -6]。“古典臂”(血管紧张素转换酶血管紧张素ⅱ/ AT1受体[ACE / AngII / AT1])促进疾病(4- - - - - -6),而“保护手臂”(血管紧张素转换酶2 /血管紧张素- (1 - 7)/ Mas受体(ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas))抵消它(3,7,8]。

我形成AngII ACE作用于血管紧张素,一个分子所拍摄在小动脉血管AT1受体绑定后,9,10]。除此之外,AngII心血管系统的其他功能,促进高血压,如增加醛固酮和抗利尿激素的释放,增加钠和水的重吸收,分别在肾远端小管(11]。因此,ACE2负调节RAS是一种重要的酶,通过减少AngII和增加Ang -(1 - 7),血管舒张药分子,赋予ACE2在心血管疾病的保护作用10,11]。

代谢的研究证明了一个重要的角色ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas途径在体内平衡的维护3,8,12,13]。老鼠缺乏对Mas提出了血脂异常和高血糖12]。此外,老鼠overexpressing Ang -(1 - 7)显示改善葡萄糖耐量和胰岛素敏感性和也表现出降低甘油三酯,胆固醇,和腹部脂肪量(8]。治疗糖尿病大鼠口服配方的Ang -(1 - 7)导致大幅降低血糖和胰岛素敏感性的增加,也意味着胰岛素抵抗高脂肪的条件下(14]。有趣的是,ACE2不仅是一个代谢肽蛋白酶,如AngII、组织apelin, des-Arg⁹缓激肽(15),但也参与了从肠道吸收的氨基酸16,17]。在这方面,ACE2删除导致缺陷氨基酸吸收和肠道炎症,但对脂质代谢的影响还没有被报道。

AngII已被证明导致非酒精性脂肪肝(18),而Ang -(1 - 7)引出相反的效果3]。因此,血管紧张素转换酶抑制剂和AT1拮抗剂保护脂肪肝和肝纤维化18),重组ACE2对小鼠肝纤维化(有很大好处19),在准备这个手稿,曹和合作者20.]表明,ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas轴可能会降低肝脏脂质积累。另一方面,底层的机制还不清楚,但许多因素的刺激这个过程,氧化还原平衡似乎是最重要的一个在肝脏21,22]。

活性氧(ROS),如一氧化氮(没有)超氧化物阴离子()和过氧化氢(H₂O₂),是至关重要的介质血管紧张素肽的行为(10),由于AngII促进他们的代23]和Ang -(1 - 7)减少氧化应激(10]。ROS在NAFLD长期过高,导致疾病的发病机理(21,22]。然而,它仍然是未知是否ACE2在这种肝脏疾病中发挥作用还是ACE2删除干扰调控脂类代谢的关键因素,如脂肪酸移位酶,也称为集群分化36 (CD36)、过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR),脂肪细胞蛋白2 (aP2),脂肪酸合酶(FAS)和sirtuin蛋白1,以及关键的活性氧产量的版主在肝脏代谢,如解偶联蛋白2 (UCP2)类型。考虑在血管紧张素的重要作用和ROS在非酒精性脂肪肝的发展21,22),我们旨在探讨肝ACE2-deficient小鼠血脂的相对丰度AngII和Ang -(1 - 7)是扭曲的。的确,我们发现ACE2的缺失导致肝脂肪变性伴有CD36的损伤/ sirtuin蛋白1轴,胰岛素信号,并在肝脏葡萄糖代谢。这些结果揭示脂质稳态ACE2的核心作用,防止脂肪代谢障碍可能通过减少AngII的水平和/或增加Ang -(1 - 7)在肝脏。

2。方法

2.1。动物和实验过程

C57BL / 6 (WT)和ACE2-deficient (ACE2))男性在C57BL / 6小鼠遗传背景9]在3和6个月大的时候被用于这项研究在标准饮食(千卡从脂肪10%)从SSNIFF®(所以,德国)。老鼠在12小时光/暗周期,控制湿度和温度环境和美联储随意。所有的实验都是批准的“Landesamt毛皮和Soziales一厢情愿”(LAGeSo;柏林)和执行按照“指导护理和使用实验动物”(NIH出版86 - 23,1996)。

2.2。安乐死和器官收集

后腹腔内(i.p)使用甲苯噻嗪/氯胺酮麻醉解决方案(10/110,mg·公斤⁻¹),12 h-fasted动物安乐死通过心脏右心室穿刺放血。整个血液收集和离心10分钟(4000 rpm),血浆分离和储存在−80°C。肝素化的动物被灌注生理盐水,在序列,肝脏和白色脂肪组织(窟)小心地删除,重,立即在干冰冷冻和储存在−80°C到定量PCR,免疫印迹和其他分析。窟指数计算使用以下公式:窟指数(%)=(附睾的脂肪+ perirenal) /(体重)。

2.3。生化分析

Nonesterified脂肪酸(NEFA)工具是用来测量血浆和肝脏NEFA浓度(Wako化学品GmbH®,诺伊斯,德国)。总胆固醇(TCOL)和甘油三酯(TG)含量化验广告用品(Labtest®,贝洛奥里藏特、巴西),按照制造商的说明微型板块的适应性。所有测量数据进行TECAN®无限200 PRO板读者(Mannedorf、瑞士)。

2.4。评价肝损伤

肝损伤的肝细胞损害程度)是评估通过测量酶活动的丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)等离子体与商业套件(Labtest、贝洛奥里藏特、巴西)。

2.5。肝脏和粪脂质分析

总肝和粪脂质提取根据重量标准方法(24]。总脂质被称量的样品分析天平测量提取后,被粪便用于提取质量的规范化。之后,总脂质在异丙醇稀释和衡量商业套件TCOL, TG (Labtest、贝洛奥里藏特、巴西),和NEFA (Wako化学品GmbH,诺伊斯,德国)。

2.6。肝脏和窟组织学分析

肝脏的碎片和窟缓冲甲醛固定在4%,嵌入在石蜡和分段3μ米和10μm,分别。窟是沾着他走时为了确定脂肪细胞直径。分析了脂质在肝脏沉积adipophilin间接免疫荧光染色。deparaffinized,总之,部分患者,煮在柠檬酸缓冲,pH值7,在蔬菜蒸20分钟。部分被孵化的抗体adipophilin(1: 500年,菲茨杰拉德,阿克顿,美国)一夜之间在4°C。部分被孵化与二次抗体共轭Cy3(1: 300)和盖玻片使用安装介质“Vectashild DAPI-Hard组”(向量实验室)。下的部分观察日本基恩士®显微镜(BZ 9000年日本大阪)。从每个部分数码照片拍摄;脂肪细胞直径和adipophilin表达量化使用“BZ II分析仪”图像处理软件(日本基恩士BZ 9000软件,大阪,日本)。

2.7。脂质过氧化反应、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性测定在肝脏

肝脂质过氧化是量化通过测量硫代巴比土Acid-Reactive物质(TBARS),氧化应激的标记化验的丙二醛(MDA)在肝匀浆(描述25]。总超氧化物歧化酶(SOD)活性与商业评估比色箱(Sigma-Aldrich, Seelze,德国)。过氧化氢酶活性测定根据徐et al。26]。所有结果归一化蛋白质浓度(27]。

2.8。糖质新生

糖质新生由丙酮酸测试评估。这是16小时后一夜之间迅速执行。动物体重和血液收集从尾部静脉测量葡萄糖注射前2 g丙酮酸钠·公斤⁻¹(i.p)(丙酮酸钠,Sigma-Aldrich Seelze,德国)。注射后,血糖水平测定在15日30、60、90和120分钟。

2.9。实时定量聚合酶链反应

总RNA从肝脏孤立使用试剂盒(试剂盒®试剂、表达载体,达姆施塔特,德国),随后清洗使用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)。RNA浓度是量化使用分光光度法(NanoDrop®,慕尼黑,德国)和1μg是使用M-MLV逆转录酶的合成cDNA表达载体。反应产物是放大使用GoTaq qPCR大师混合(Promega®;德国曼海姆)实时定量PCR (ABI 7900 ht实时PCR系统生物系统,达姆施塔特,德国)与gene-specific引物(表1中列出的序列;补充数据在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2016/6487509)。信使rna表达水平的量化是规范化的内部参考,GAPDH,使用2方法(28]。

2.10。西方墨点法

为西方墨点法、蛋白质分离使用裂解缓冲(细胞信号技术®,贝弗利,MA)含有哺乳动物蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(罗氏®,曼海姆,德国)和由布拉德福德量化分析(27]。蛋白质电泳分离,转移到聚偏二氟乙烯膜,被孵化的奥德赛®阻断缓冲区(美国Li-COR,生物科学,林肯)在室温下1 h (RT)。,探讨了膜之后,一夜之间,4°C)的以下主要抗体:UCP2 (1: 500), sirtuin蛋白1 (1:1000),α-IRS-1 (1: 1000), PI3-K(1: 500),一种蛋白激酶(1:1000),phospho-GSK 3β(1:1000)和葛兰素史克3β(1:1000)其次是孵化与二次抗体1 h rt,带强度被收购,量化使用奥德赛红外成像系统(Li-COR,生物科学,林肯,美国)。膜被剥夺和reprobedβ肌动蛋白(1:1000)抗体蛋白质获得内生控制量化。

2.11。统计分析

数据表示为平均值±标准平均误差(SEM)。学生的t群体间的比较以及执行(图垫棱镜®5.0,圣地亚哥,美国)。肝醣类测试分析了双向方差分析紧随其后Bonferroni的测试后。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。ACE2缺乏降低体重和血浆血脂变化

揭示ACE2在脂肪代谢的作用,我们评估的身体(BW)和白色脂肪组织(窟)重量和等离子体在ACE2血脂老鼠。这些动物显示低BW和窟指数在3和6个月的年龄相比WT老鼠(数字1(一)和1 (b))和减少白色脂肪细胞直径(图1 (c))。这些参数的降低伴随着减少脂质在等离子体。在3 - 6个月大的老鼠,等离子体的NEFA水平显著降低,并在6个月的年龄也在ACE2 TCOL和TG减少老鼠相比WT动物(数字1 (d)- - - - - -1 (f))。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(我)

(j)

图1

体重,窟ACE2指数和血脂老鼠。(一)体重(g);(b)窟WT和ACE2的指数(%)老鼠3岁和6个月;(c)白色脂肪细胞直径(μ米);(d)总胆固醇(mg⋅dL⁻¹)、(e)甘油三酯(mg⋅dL⁻¹),(f) nonesterified脂肪酸(NEFA)(更易⋅L⁻¹)WT和ACE2的等离子体老鼠3岁和6个月;总脂质(g⋅g (g)⁻¹粪便)、总胆固醇(mg⋅g (h)⁻¹粪便),(我)甘油三酯(mg⋅克粪便⁻¹),(j) NEFA(更易⋅克粪便⁻¹)在WT和ACE2的粪便老鼠在6个月的年龄。每个条形图表示均值±SEM。学生的t测试:;;。

3.2。ACE2不足导致肝脂肪变性和氧化应激

作为ACE2老鼠患肠道功能障碍(16,17),我们调查是否丢失的血浆脂质被释放,6个月大的老鼠的粪便。结果表明,在总脂质没有明显差异,TCOL, TG, NEFA WT和ACE2之间的水平老鼠(图1 (g)- - - - - -1 (j))。然而,当我们研究了异位脂肪沉积,我们确定了脂质积累在肝脏。免疫荧光染色adipophilin,脂质droplet-associated蛋白质,显示ACE2的高脂肪沉积老鼠在6个月的年龄相比WT(数据2(一个)和2 (b))。这些数据表明ACE2小鼠脂肪变性状态。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

图2

肝脂肪变性和ACE2的肝功能老鼠。(一)免疫荧光染色adipophilin肝脏;(b) adipophilin量化(%面积/视图字段);(c)肝脏相对重量(%);(d)在肝脏总胆固醇(mg⋅g⁻¹肝);(e)在肝脏中甘油三酯(mg⋅g⁻¹肝);(f) nonesterified脂肪酸在肝脏(NEFA)(更易⋅g⁻¹肝);(g)丙氨酸转氨酶(ALT)等离子体(U⋅L⁻¹);(h)天冬氨酸转氨酶(AST)等离子体(U⋅L⁻¹WT和ACE2的)老鼠3岁和6个月。每个条形图表示均值±SEM。学生的t测试:;;。

尽管这些动物肝脏相对重量(图显示没有区别2 (c)),他们存储TCOL水平上升,在肝脏TG, NEFA岁3个月的TG和NEFA岁6个月相比WT(数据2 (d)- - - - - -2 (f))。血浆ALT在ACE2显著增加老鼠在年龄(图2 (g)),和等离子AST是在6个月大的ACE2也显著增加老鼠(图2 (h)),确认在这些动物肝损伤。

基因的表达分析,参与了肝脏的脂质代谢,表明ACE2CD36老鼠更信使rna,但是PPAR的mRNA水平γ在肝脏,aP2 FAS ACE2没有差异和WT老鼠(图3)。

图3

相对分解脂肪的途径中相关基因的表达在肝脏。信使rna表达水平(任意单位)的脂肪酸移位酶(CD36)、过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARγγ)、脂肪细胞蛋白2 (aP2)和脂肪酸合酶(FAS)和ACE2那样老鼠在6个月的年龄。每个条形图表示均值±SEM。学生的t测试:。

ACE2老鼠肝脂质过氧化增加3岁,但不是6个月(图4(一))。接下来,我们分析了抗氧化酶在肝匀浆。ACE2 SOD活性没有区别和WT岁6个月。然而,过氧化氢酶活性明显高于ACE2老鼠相比WT(数据4 (b)和4 (c))。此外,UCP2的表达明显高于ACE2老鼠相比WT mRNA(图4 (d))和蛋白质含量在两个年龄段(图4 (e)),这表明脂肪变性是伴随着氧化应激。sirtuin蛋白1的水平明显降低6 -但不是三个ACE2的肝脏老鼠而WT(图4 (f))。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

图4

标记的氧化还原状态,抗氧化酶,sirtuin蛋白1蛋白表达在肝脏。(一)丙二醛(MDA) WT和ACE2的肝脏老鼠3岁和6个月(nM⋅毫克的蛋白质⁻¹);(b)在肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性蛋白质(UI⋅mg⋅毫升⁻¹);(c)在肝脏过氧化氢酶活性(nmol /分钟/毫升⋅蛋白质mg⋅毫升⁻¹WT和ACE2的)老鼠岁6个月;(d)相对mRNA和(e)蛋白表达的解偶联蛋白2 (UCP2)在肝脏(任意单位);1 (f) sirtuin蛋白表达在肝脏(WT和ACE2的任意单位)老鼠3岁和6个月。每个条形图表示均值±SEM。学生的t测试:;。

3.3。ACE2不足导致胰岛素信号在肝脏受损

脂肪变性是通常与胰岛素抵抗相关(2),我们研究了葡萄糖代谢和胰岛素信号ACE2的肝脏老鼠。在这个器官,ACE2老鼠严重损伤和葡萄糖胰岛素信号处理。而肝葡萄糖生产能力从丙酮酸没有改变在这些老鼠(图5(一个)),多个基因参与葡萄糖代谢提供。ACE2老鼠提出减少的相对表达葡糖激酶(GCK)和2型(GLUT2)和葡萄糖转运体的表达水平上升葡萄糖6-phosphatase (G6Pase)和磷酸烯醇丙酮酸carboxykinase亚型2 (PCK2)。其他亚型,PCK1,胰岛素受体然而不是组(图之间的差异表达5 (b))。此外,ACE2小鼠呈现显著降低蛋白质参与糖酵解,如胰岛素受体底物(αIRS-1),磷脂酰inositol-3激酶(PI3-K)和AKT WT(数据5 (c)- - - - - -5 (e))。此外,葛兰素史克3β和磷酸化GSK 3β减少在ACE2老鼠(图5 (f)和5 (g))。然而,葛兰素史克3β/磷酸化GSK 3β比没有不同的群体之间(图5 (h))。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

图5

肝葡萄糖代谢。(一)评估肝醣类刺激腹腔内注射的丙酮酸和测试的曲线下的面积(AUC);(b)相对肝脏中糖酵解基因的mRNA表达(GCK葡糖激酶;葡萄糖6-phosphatase G6Pase;磷酸烯醇丙酮酸carboxykinase 1和2,PCK;胰岛素受体,红外;和葡萄糖转运蛋白2型,GLUT2)(任意单位);(c)α胰岛素受体底物(αIRS)蛋白表达在肝脏(任意单位);(d) inositol-3激酶磷脂(PI3-K)蛋白表达在肝脏(任意单位);(e) AKT蛋白表达在肝脏(任意单位);(f)糖原合酶激酶(GSK) 3β在肝脏(任意单位);(g) phospho-GSK 3β在肝脏(任意单位);葛兰素史克(h) 3β/ phospho-GSK 3β在肝脏(WT和ACE2的任意单位)老鼠在6个月的年龄。数据意味着±SEM。学生的测试:;;。

4所示。讨论

本研究的主要发现是,ACE2的删除会导致矛盾的代谢影响:一方面,它导致一个明显减少BW和窟。另一方面,它会导致在肝脏脂肪变性和胰岛素抵抗的发展。这种疾病的证据包括增加adipophilin-containing囊泡在肝细胞(数字2(一个)和2 (b)),增强肝脏中脂质(数字2 (d)- - - - - -2 (f)),肝酶的积累在等离子体显示肝损伤(数字2 (g)和2 (h))。窟指数的减少,脂肪细胞直径(数字1 (b)和1 (c))和血浆脂质(数字1 (d)- - - - - -1 (f))与正常粪便脂类排泄(相关数据1 (g)- - - - - -1 (j))建议由肝脏脂肪酸的吸收增加的主要原因非酒精性脂肪肝ACE2中观察到老鼠。事实上,CD36脂肪酸移位酶,调节小鼠缺乏ACE2(图3)。它已经表明,upregulation CD36的非酒精性脂肪肝患者的肝脏脂肪变性增加有关(29日,30.)和CD36^−−/老鼠是耐酒精和高carbohydrate-induced肝脂肪变性(31日]。此外,在小鼠和人类老化的肝脏中表达增加CD36膜(29日),导致脂肪吸收,促进NAFLD随着年龄的增加。CD36的增加可能是由于ACE2的sirtuin蛋白1表达降低老鼠(图4 (f)),因为这是杂合的sirtuin 1中观察到缺乏动物(32]。此外,曹和合作者33)表明,删除hepatocyte-specific menin导致衰老小鼠通过减少脂肪变性的水平sirtuin蛋白1在肝脏和upregulation CD36,演示了一个代谢CD36 sirtuin蛋白1之间的联系。AngII可以下调sirtuin蛋白1在其他细胞类型(34]和Ang -(1 - 7)在肝细胞表现出相反的效果(35]。因此,这种移位酶可以预期的差别一个对这些ACE2的两个肽之间的不平衡老鼠。有趣的是,它最近表明sirtuin蛋白1反之亦然调节ACE2表达(36]。

胞质脂肪酸增加导致线粒体损伤和活性氧(ROS)的生产(21]。此外,肝sirtuin蛋白1缺乏诱发小鼠肝脏氧化损伤(37]。事实上,我们观察脂质过氧化增加,UCP2表达ACE2氧化标记也在肝脏老鼠说脂肪变性是伴随着高氧化应激在这些动物。高脂质过氧化ACE2观察老鼠岁3个月可能是由于高生产的H₂O₂在这些老鼠38]。这可以解释高过氧化氢酶活性,降低H₂O_2,为了对抗这个ROS的海拔(38]。UCP2,线粒体离子载体蛋白(39),起着关键作用的主持人在肝脏代谢(ROS生产40,41]。因此,UCP2^−−/老鼠增加活性氧的形成(42]。在ACE2老鼠,增加细胞内脂质在肝脏线粒体可能导致过载,其次是ROS增加生产中β脂类物质的氧化,进而刺激UCP2的表达来对抗这种不平衡。这些数据表明,这种解偶联蛋白的表达增加可能是一种防御机制的不足在ACE2试图阻止脂肪变性的发展老鼠(43]。我们不能排除AngII-induced氧化应激可能是肝脏脂肪变性ACE2的主要原因老鼠,这不是补偿Ang -(1 - 7)在这些动物。实验证据表明,RAS信号起着至关重要的作用在肝脏中脂肪的新陈代谢(3,4,7,18,19,44]。此外,曹和合作者20.最近证实,ACE2小鼠肝脂肪变性,氧化应激和炎症。这份报告还显示,Ang -(1 - 7)和ACE2改善所有这些参数在一个肝细胞系。作者属性降低肝脏脂质积累,引起ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas轴,部分lipid-metabolizing基因的调控。

已经在其他小鼠模型和描述病人(45),ACE2的高脂质在肝脏沉积老鼠导致受损的胰岛素信号和葡萄糖代谢。尽管这些动物显示正常葡萄糖生产从丙酮酸,葡萄糖代谢的重要基因的表达变化,如GCK、G6Pase, PCK2, GLUT2,表明由于脂肪变性,糖酵解可能受损。此外,减少IRS-1 PI3-K, AKT, GSK3β途径证实胰岛素信号是ACE2在肝脏受损老鼠。因此,曹和合作者46)表明,ACE2的激活/ Ang - (1 - 7) / Mas轴在肝脏对胰岛素抵抗有有益的影响通过减少肝细胞氧化应激和调制的一种蛋白激酶/ PI3K / IRS-1 /物胰岛素信号通路。

ACE-deficient小鼠表现出明显的相关关键基因的表达增加肝脏中脂类分解和脂肪酸氧化,如脂蛋白脂肪酶、肉毒碱棕榈酰转移酶,和长链乙酰辅酶a脱氢酶。这表明脂肪酸水解和增加β氧化,防止脂质在肝脏的积累,可能是因为缺乏AngII在这些基因敲除动物6]。另一方面,ACE2-deficient老鼠AngII水平上升,是导致脂肪变性和胰岛素抵抗的发展45]。通过减少AT1受体激活导致脂肪变性UCP2在鼠模型与代谢综合征(47),和AT1受体的缺失降低肝脂肪变性44]。此外,它已被证明,口服治疗Ang -(1 - 7)防止HFD-induced脂肪变性(7)和删除的Mas ApoE-deficient导致小鼠肝脏脂质含量增加(3]。综上所述,这大量的实验证据和我们的研究结果表明,平衡活动两个轴的RAS, ACE / AngII AT1和ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas,是至关重要的代谢脂肪的能量维护在没有诱导的肝脏脂肪变性。观察到的BW减少ACE2-deficient老鼠证实的发现歌手et al。17),链接到缺陷在这些动物的肠道氨基酸吸收。然而,减少窟,在我们的研究中所描述的机制也可能造成这一表型。未来的研究需要验证拟议的机制血管紧张素肽调节脂质代谢和肝氧化应激。

总之,ACE2删除原因CD36 / sirtuin蛋白1轴损伤,从而导致脂肪沉积在肝脏导致非酒精性脂肪肝,氧化应激和受损的胰岛素信号(总结在图6)。因此,ACE2-deficient老鼠提供一个合适的模型来评估非酒精性脂肪肝的病理生理意义,代表了一个很好的工具来研究新的治疗策略大都会以及联系障碍。

图6

提出了ACE2肝脂肪变性的机制老鼠。ACE2删除造成失衡Ang -(1 - 7)和AngII水平较高的后者。自Ang -(1 - 7)通过Mas刺激和AngII通过AT1受体抑制sirtuin蛋白1表达,这种调节因子表达下调。这导致upregulation脂肪酸移位酶,CD36, nonesterified脂肪酸摄入的增加(NEFA)肝细胞造成异位脂肪沉积在肝脏氧化应激。氧化应激增强的直接影响是减少sirtuin蛋白1和AT1-signalling增加活性氧的形成。在血液中,NEFAs下降导致脂肪细胞和脂肪垫萎缩,以及体重下降。

缩写

王牌:	血管紧张素转换酶
ACE2:	血管紧张素转换酶2
ALT:	丙氨酸转氨酶
Ang -:	血管紧张素-
AngII:	血管紧张素ⅱ
aP2:	脂肪细胞蛋白2(脂肪酸结合蛋白)
AST:	天冬氨酸转氨酶
AT1:	AT1受体
BW:	体重
CD36:	集群分化36(脂肪酸移位酶)
FAS:	脂肪酸合酶
G6Pase:	葡萄糖6-phosphatase
GAPDH:	甘油醛3磷酸脱氢酶
GCK:	葡糖激酶
GLUT2:	葡萄糖转运蛋白2型
葛兰素史克公司:	糖原合酶激酶
H₂O₂:	过氧化氢
):	苏木精和伊红
HFD:	高脂肪饮食
红外光谱:	胰岛素受体
国税局:	胰岛素受体底物
MDA:	丙二醛
大都会:	代谢综合征
非酒精性脂肪肝:	非酒精性脂肪肝病
NEFA:	Nonesterified脂肪酸
PCK1:	磷酸烯醇丙酮酸carboxykinase 1
PCK2:	磷酸烯醇丙酮酸carboxykinase 2
PI3-K:	inositol-3激酶磷脂
PPARγ:	过氧物酶体proliferator-activated受体
拉:	肾素-血管紧张素系统
ROS:	活性氧
SOD:	超氧化物歧化酶
TBARS:	硫代巴比土Acid-Reactive物质
TCOL:	总胆固醇
TG:	甘油三酸酯
UCP2:	解偶联蛋白2
窟:	白色脂肪组织。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突的存在。

作者的贡献

瓦Nunes-Souza娜塔莉亚Alenina迈克尔·巴德和Luiza Rabelo构思和设计实验。瓦Nunes-Souza娜塔莉亚Alenina, Fatimunnisa卡,Luiza Rabelo进行实验。瓦Nunes-Souza, Fatimunnisa卡,Luiza a Rabelo分析数据。Fatimunnisa瓦Nunes-Souza莉娅•卡迈克尔·贝德和Luiza Rabelo解释实验的结果。约瑟夫·m·彭宁迈克尔•贝德纳塔莉亚Alenina,罗布森奥古斯托·s·桑托斯,Luiza a Rabelo贡献与试剂/材料/动物/分析工具。瓦Nunes-Souza和Luiza Rabelo写道。瓦Nunes-Souza, Fatimunnisa卡,Luiza a Rabelo准备数据。Luiza a . Rabelo迈克尔•贝德Natalia Alenina,罗布森奥古斯托·s·桑托斯编辑和修改了手稿。

确认

作者感谢Sabine Grueger和Susanne da Costa Goncalves动物保健技术援助,Mihail Todiras有益的讨论,和卢卡斯何塞Sa塞卡和虹膜Apostel-Krause的支持组织的手稿。瓦Nunes-Souza得到了奖学金德意志/ CNPq CAPES-Brazil(格兰特246794/2012-7)。Luiza a Rabelo收到CNPq-Brazil博士后奖学金(格兰特202139/2010-7)。纳塔莉亚Alenina被CNPq支持(格兰特是407352),罗布森奥古斯托·s·桑托斯和纳塔莉亚Alenina被PROBRAL DAAD-CAPES交流计划的支持。约瑟夫·m·彭宁支持由一个先进的伦理委员会拨款和奥地利科学院。

补充材料

使用的引物序列(正向和反向)实时定量PCR是表1所示。

补充材料

引用

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