文摘
目标。确定氧化应激炎症/行为/没有急性移植物功能障碍患者与他克莫司(AGD)。方法。横断面研究,肾移植(RT)接受者(1年随访)。患者比较,没有比较被包括在内。血清il - 6、TNF -α8-isoprostanes (8-IP)和一氧化氮(NO) ELISA测定;c反应蛋白(CRP)是由浊度测定法;脂质过氧化作用的产品和超氧化物歧化酶(SOD)比色法测定。结果。AGD短表示在5.09±3.07和8.27±3.78个月();CRP > 3.19 mg / L被发现在21日和19日N-AGD集团();肿瘤坏死因子-α145.53±18.87 pg / mL和125.54±15.92 pg / mL N-AGD ();il - 6 2110.69±350.97 pg / mL和1933.42±235.38 pg / mL N-AGD ()。法律流程外包是在比较高的():4.10±0.69µM和2.41±0.29µM;还8-IP更高水平比较27.47±9.28 pg / mL和8.64±1.54 pg / mL ()。血清水平的AGD低138.44±19.20µmol / L和190.57±22.04µ在N-AGD mol / L ();在比较抗氧化酶SOD活性显著降低9.75±0.52 U /毫升和11.69±0.55 U N-AGD /毫升()。讨论。RT目前患者促炎细胞因子的一个类似的状态是否有比较。患者的AGD显示氧化状态的放松管制与法律流程外包8-IP和不降低SOD。
1。介绍
慢性终末期肾病(ESRD)的特点是严重的,不可逆转的肾脏损害的蛋白尿和肾小球滤过率(GFR)[减少1,2]。
根据注册表的透析和移植在哈利斯科州(Registro de Dialisis y Trasplante del Estado de哈利斯科:REDTJAL)和莫雷洛斯州,新病人的数量需要肾脏替代治疗(RRT)不断增加(1,2]。固有的年度报告的成本每ESRD患者在墨西哥卫生部在2012年是$ 8966 .00美元,墨西哥社会保障研究所(皇家研究院Mexicano del原本社会:IMSS)这是$ 9091 .00美元3]。ESRD的管理选择腹膜透析(PD)、血液透析(HD),肾移植(RT) (4]。肾移植被认为是最好的治疗选择ESRD患者(5]。美国肾脏数据系统(USRDS)报道,RT的发生率在哈利斯科是世界上最高的之一,基于最新的USRDS报告台湾,哈利斯科(墨西哥),和美国是ESRD表示作为治疗的发生率最高(458、421和363每百万人口(pmp),职责。)(5]。
引入环孢霉素(CsA)其次是快速连续的他克莫司(TAC)与霉酚酸酯(MMF)与低得多的移植肾的损失,实现移植存活率> 90% (6]。最常见的和担心TAC是肾毒性的不利影响7]。RT的管理最大的挑战之一是急性排斥反应(AR),尽管新的免疫抑制剂策略基于“增大化现实”技术的频率已经减少了在过去的几十年,重大的长期改善移植物和患者的生存8,9]。在墨西哥,移植物的生存和生存的病人都是与所报道的其他国家(10,11]。然而,尽管实际的效果免疫抑制机制预防AR,肾毒性和感染会影响肾移植的出现功能障碍(12]。只有在同卵双胞胎之间的移植免疫抑制治疗不可能要求:所有RT接受者需要免疫抑制,以避免被拒绝。因此,基础之间找到一个平衡的免疫抑制剂影响药物和宿主的免疫反应,以防止出现的机会性感染的炎症状态和急性功能障碍导致移植物(AGD) [13]。炎症状态与氧化应激在相互关系中扮演了重要的角色(OS)在ESRD和RT接受者(14,15]。操作系统的特征是一代的氧化剂和抗氧化剂之间的不平衡系统。代的活性氧的主要来源(ROS) RT在缺血再灌注后和免疫抑制。再灌注损伤是一种常见的现象在移植肾和可能导致功能障碍的同种异体移植物在第一周(具有重要的意义16]。
水平的促炎细胞因子如白介素6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、c反应蛋白(CRP)和操作系统已报告的标记是ESRD显著升高,显著降低RT(后两个月17]。
AGD短的定义是缓慢和渐进恶化肾功能习惯性地伴随着不同程度的蛋白尿和高血压。功能障碍最常见的原因是拒绝由抗体,间质纤维化、肾小管萎缩不具体的来源。比较需要肾活检的诊断的原因(18]。自TAC可引起急性tubule-interstitial肾病和因为肾损害的机制与免疫抑制并不是完全理解,我们提出的目标确定标记的行为患者的氧化应激和炎症的比较,没有比较(N-AGD), TAC对待。
2。患者和方法
2.1。研究设计
一个分析横断面研究。两个研究小组的RT接受者在第一年的随访。第一组包括所有患者AGD(海拔肌酐≥30%)活检证明(由相同的病理学家和所有活检评估诊断记录),在2015年1月- 2014年12月;对照组包括病人没有AGD (N-AGD);这些患者被随机从池中获得对protocolized移植患者的活检(这是一种常见的行为在我们的设置);他们当时rejection-free活检。所有患者在三重免疫抑制方案基于TAC, MMF,强的松(视为最有效的方案)。两组人首次接受rt,确定样本容量的计算使用公式比较方法和考虑,作为一个变量的决心,酶超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,获得55病人每个学习小组。患者参加了在美国肾脏学,移植部门Sub-Specialties医疗单位在国家的西方医学中心墨西哥社会保障研究所(IMSS在西班牙语)。TAC的摄入免疫抑制剂治疗被认为是一种包含两组标准。排除患者> 55岁,面对肾并发症,接受第二次移植,和那些接受治疗与非甾体类抗炎药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和血管紧张素ⅱ受体拮抗剂(arb),以及死亡捐赠者移植的接受者。血清il - 6、TNF -α8-isoprostanes (8-IP)和一氧化氮(NO)与ELISA测定。浊度测定法是用于确定CRP和比色法用于确定水平的脂质过氧化作用的产品(法律流程外包)(丙二醛(MDA)和4-hydroxy-alkenals)和SOD酶是一种抗氧化剂的水平。
2.2。生物化学分析
一旦收集血液样本在两个单独的管道(有0.1%的ethylenediaminetetraacetic (EDTA)和其他干燥管),血浆和血清被离心分离2000 rpm在室温下10分钟。然后,样本存储在−80°C到处理。所有的技术数据的光密度是协同HT (BIOTEK®)微型板块读者。
2.3。肿瘤坏死因子-α和il - 6
肿瘤坏死因子-αELISA测定水平,以下的指示设备制造商(Peprotech,落基山,新泽西州08553,美国)。首先,100μL的捕获抗体稀释了,其次是孵化在室温下过夜。然后,300年μL块缓冲区是添加到井和在室温下培养1小时。添加了血清和标准,其次是孵化在室温下2小时。在100年一些洗液μL(稀释检测抗体添加和孵化在室温下2小时。100年μL稀释Avidin-HRP共轭是补充说,其次是在室温下孵化30分钟。最后,100年μL衬底的解决方案是添加到每个。板是读的波长与校正设定在650 nm和405 nm报道pg / mL。
2.4。人类灵敏度高c反应蛋白(hsCRP)
水平的血清hsCRP与免疫浊度测定法进行评估,使用BN II系统(西门子、美国)。试剂,控制SL / 1和SL / 2, CardioPhase hsCRP(聚苯乙烯颗粒涂层与鼠单克隆抗体CRP),和N风湿病学标准准备根据制造商的指示。参考曲线,和样品稀释1:20和混合CardioPhase hsCRP。hsCRP水平由浊度测定法自动测量的BN II。自动报告的水平在mg / L。
2.5。脂质过氧化作用的产品
血浆法律外包水平测量使用FR22分析工具包(牛津大学生物医学研究公司,牛津,MI,美国)根据制造商的指示。在这种测定显色试剂与MDA和4-hydroxy-alkenals反应生成稳定的发色团。首先,140μL与455年的血清μL N-methyl-2-phenylindole的乙腈(试剂1)与三价铁在甲醇稀释。样本激动,之后105年μL 37%盐酸是补充说,其次是孵化在45°C为60分钟,在12791转离心10分钟。接下来,150年μL上层清液的添加和吸光度测量586海里。用已知浓度曲线模式1,1,3,3-tetramethoxypropane Tris-HCl使用。
2.6。8-Isoprostane (8-IP)评估
开曼群岛的免疫测定试剂包化学公司®(美国密歇根州)根据制造商的指示。8-IP分析是基于竞争的原则之间的绑定示例8-IP, 8-IP乙酰胆碱酯酶(疼痛)共轭和8-IP示踪剂。50μL(样品或标准被添加到每个50μL 8-IP疼痛示踪剂的添加到所有井除总活动和空白的井。50μL 8-IP酶免疫测定抗血清的添加到所有井除总活动和空白的井。同时,50μL (8-IP抗血清添加所有井除了总活动,非特异性结合,空白的井。板上覆盖和孵化在4°C 18 h与缓冲,然后洗了5次。吸光度是阅读在420海里。
2.7。一氧化氮(NO)
的水平没有评估血清中夹心ELISA使用商用设备(人类总一氧化氮酶联免疫试剂盒,MyBioSource®,圣地亚哥,美国)。之前执行试验样品,试剂在室温下保持30分钟。一氧化氮和血清(50μL)是用移液器吸取到一个与100年antibody-coated 96孔板μL HRP-conjugate试剂和孵化37°C 1 h。井被洗了四次缓冲洗;50μ和50 L的发色体解决方案μL色原方案B是补充道。样本孵化15分钟37°C;然后50μ停止的解决方案是添加,L和吸光度是阅读在450海里。
2.8。超氧化物歧化酶
血清总SOD活性(U /毫升)从开曼化学公司决定使用工具®,(美国、706002号),制造商的协议后,检测O2−黄嘌呤氧化酶产生的和次黄嘌呤酶通过四唑盐的反应。血清样本稀释1:5样本缓冲区,200μL激进分子的检测器(稀释1:400),和10μL的样本。缓慢搅拌后,20µ黄嘌呤氧化酶的L是添加到井中。微型板块是孵化20分钟在室温下,吸收能力是阅读的波长440 nm。水平在U /毫升。
2.9。道德的考虑
按照执行的研究是人类医学研究的伦理原则规定的赫尔辛基宣言64大会,福塔雷萨、巴西(2013年10月)。签署了知情同意的形式,因为它是一个三级的研究中,在墨西哥与一般卫生法律协议。项目提交和批准的当地科研和健康的道德委员会IMSS(注册号r - 2015 - 1301 - 83)和国家研究注册(59 / E-JAL / 2015)提出的公众健康管理局(Direccion de Salud上市墨西哥哈利斯科)。
2.10。统计分析
连续变量表示为平均值±标准偏差(SD)或平均数标准误差(SEM)进行了分析和非参数测试的结果显示Kolmogorov-Smirnov测试。在Mann-Whitney组之间的比较测试使用。分类变量的频率和百分比和分析了气2测试。的值被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。人口和代谢特征
开发的比较移植后()与个月N-AGD(这是时间的后续协议活检)。患者的年龄比较年,年N-AGD。两组的男性明显成为主流():有48例(87%)的男性比较组和34 N-AGD组(62%)。高度和重量之间的比较和N-AGD组没有显著不同。吸烟(吸烟)出现在15比较患者和8 N-AGD。酒精中毒患者出现在14 AGD N-AGD和9。空腹血糖水平的差异没有统计学意义。比较组发现尿毒症的显著增加mg / dL ()与N-AGDmg / dL,同样的行为被发现在血清肌酐水平显著高于在比较毫克/毫升()与在N-AGD毫克/毫升。供体的年龄明显高于比较组年()与年N-AGD。甘油三酯和胆固醇组之间没有显著差异(表1)。
3.2。促炎细胞因子
灵敏度高水平CRP≤3.19 mg / L被发现在34个比较患者和21患者> 3.19 mg / L。N-AGD接受者,36例≤3.19 mg / L, 19 > 3.19 mg / L,没有显著差异()。平均血清TNF水平α在比较pg / mL和pg / mL N-AGD,没有显著差异()。比较患者的血清il - 6水平pg / mL和N-AGD pg / mL,这不是明显不同()(表1)。
3.3。氧化应激的标记
血清水平的法律流程外包比较显著升高(,Mann-Whitney测试)μ米和μ在N-AGD M。类似的行为被发现以来8-IP比较患者的平均血浆水平也显著升高pg / mL和pg / mL N-AGD (,Mann-Whitney测试)。
然而,值得注意的是没有发现比较组的血清水平明显下降μmol / L和μ在N-AGD mol / L (,Mann-Whitney测试)。SOD酶的活性比较组明显减少U /毫升与在N-AGD U /毫升(,Mann-Whitney测试)(表1)。
3.4。组织病理学结果
从每个AGD病人记录组织病理学诊断:13%是正常的;有45%的急性排斥反应;毒性被发现在30%;和13%的其他诊断:急性肾小管坏死,和边缘的变化(19]。
4所示。讨论
肾移植是首选的RRT ESRD患者,为他们提供更好的生活质量和最好的生存与透析相比,除了最合算的20.]。除了来自生活捐赠人的肾脏功能比那些来自个人丧生。捐赠者的AGD组明显老(年);尽管他们被发现在一个完美的健康状况,年龄可以比较的外观的一个独立因素。在这方面,之前报道,住肾脏捐赠者的可接受的年龄仍然是有争议的因为更高的并发症发生率和术后并发症的风险(21,22]。
在我们的研究中,在我们的环境中,女性相比男性受体3:1 (10,23];这是由于社会和流行病学条件;也许我们的结果表明,AGD是男性最常呈现;所有AGD短时间内包括;然而性别有关它的存在;因为所有的病人有相同的免疫抑制方案是可能的,这一发现是性别。其他研究显示显著相关操作系统在男性相比,女性虽然性别不是一个条件来区分操作系统级别(AGD短更频繁的男性)。另一方面,有临床证据表明,男性从女性捐赠者可能失去移植受体功能(24,众所周知,男性慢性肾病的危险因素;然而,有必要测试假说可能的性别之间的联系和比较25]。在这项研究中,大多数的患者受到RT是男:87%的AGD和62%的N-AGD。
后损失的主要原因之一的同种异体移植物慢性移植物肾病,其特征是,在某种程度上,肾功能的恶化。注册数据证明是肾功能在移植后第一年内是一个重要的长期预测结果在RT行为,如何启动周期因素的肾单位的损失发挥主导作用。在这方面,发达的时代,男性性别,或糖尿病被认为是其他因素(21,26]。
据报道,血清肌酐浓度≤1.5 mg / dL在6 - 12个月与更大的移植物的存活5年。这些血清肌酐结果就可以生存的预测移植后1个月(27]。患者纳入本研究比较发现5至8个月后移植,这表明后续应该经常在第一年。认为通过RT恢复肾脏功能改善的慢性炎症状态与尿毒症相关操作系统,有助于改善患者和移植器官的生存。
促炎细胞因子TNF -α是一种函数式transmembranal homotrimeric 26-kDa的解放在循环功能17-kDa可溶性的形式。在血浆肿瘤坏死因子-α是免费的或结合其循环受体(28]。肿瘤坏死因子-α总的来说,并不存在于肾脏。由脂多糖刺激后,interleukin-1α,在炎症、肿瘤坏死因子-α及其受体表达的肾小球簇(内皮细胞、系膜和上皮)和管状细胞(29日]。在患者的AGD肿瘤坏死因子的水平α没有显著升高(N-AGD相比)。
il - 6的AGD表现同样不显著的增加相比N-AGD组()。il - 6是一个多功能的多向性的26-kD分子量的促炎细胞因子,能够调节局部和全身免疫(30.]。il - 6的生产过剩导致细胞外基质蛋白的沉积,炎症病变的发展,和急性期蛋白质的合成。然而,我们不能假设这些促炎细胞因子的生产过剩的影响,因为在目前的研究他们的团体之间的系统性表现不显著(31日]。关于CRP的结果,我们认为他们模棱两可的,数据的价值与CRP的诊断精度是有限的(32]。虽然il - 6、TNF -α,c反应蛋白是广泛的研究对于炎症的临床研究,他们所有人都预测在RT患者死亡率和其他心血管结果;据我们所知这是第一个评估可能的协会AGD炎症和操作系统;然而,有必要评估其他炎症标记物,可以在比较中发挥作用。
氧化状态后RT并不完全清楚。是很重要的考虑,氧气是生命所必需的需氧生物的减少单价的氧气导致活性氧的形成,如O2−。从自由基的细胞损伤的机制涉及蛋白质、脂质、酶、受体,并且,在膜层,脂质过氧化反应的起始与法律流程外包的增加。脂质过氧化是由于发挥细胞和组织中自由基的形成。这是第一个方面的异常氧化。不利影响的机制研究的法律流程外包4-hydroxy-alkenal类的标识为醛(33,34)的特点是高反应活性的细胞成分。在目前的研究中,比较法律外包明显升高,这可能表明,患者的AGD中发现一个异常氧化的过程。
于1990年,是表明,生产一系列的F2前列腺素的化合物(称为F2 isoprostanes)形式在活的有机体内和在体外通过自由基催化花生四烯酸的磷脂过氧化反应,通过一个独立的环氧酶的途径。虽然isoprostanes并不比其他产品的过氧化反应,他们被解放到循环,这意味着F2-isoprostanes测定血清或血浆中可能被视为值得信赖的标记系统通过脂质过氧化作用,评估氧化状态在不同人的病态。相关的F2 isoprostanes和羰基蛋白ESRD升高和下降后RT (17),但没有任何证据的AGD设置(14]。在我们的研究中,比较8-IP显著升高,这表明8-IP可能导致肾血管收缩效应,使肾功能改变的方法(35]。
内皮没有合酶(以挪士)被确定为肾功能的一个非常重要的保护性因素(36]。
在我们的研究中,没有水平的AGD N-AGD组相比均有显著降低(),在RT的内皮功能损害,以及病理生理学与操作系统无影响。没有生产的精氨酸的一种NOS酶催化反应。不可以控制血压等生理过程一样重要,动脉平滑肌放松,血小板聚集和粘附,神经传递、神经内分泌分泌。它还参与破坏病原微生物和肿瘤细胞的白细胞和巨噬细胞。这些函数可以被减少的比较(37]。物质的相对稀缺性和辅因子进行诱导NOS的解偶联,导致生产O2−和转录因子的激活后增加诱导NOS的表达(38]。
抗氧化酶SOD的活性减弱的AGD可能意味着ROS的持久性,正如以前报道的一项研究中发现降低SOD在早期阶段的RT表明ROS的持续来源的生产和操作系统。一个可能的原因是TAC-based治疗,因为它已经被报道,环孢霉素(另一个钙调磷酸酶抑制剂如TAC)增加活性氧的肾小球合成39]。
重要的是要考虑到TAC仍然是主要的免疫抑制药物,及其常见的副作用包括动脉高血压、高脂血症和高血糖。药理作用的TAC前所述;唯一已知的TAC促炎的炎症,由于海拔ICAM-1和VCAM-1剂量依赖40]。这就是为什么TAC造成毒性。没有证据的可能影响TAC在其他炎症通路,尽管这TAC已经知道减少操作系统(41]。我们的研究结果表明,比较是一个状态,操作系统高架,不一定是因为TAC不足或炎症。结果表明,钙调磷酸酶抑制剂暴露诱导热休克蛋白表达,培养肾小管上皮细胞中没有生产,减少和改变钙流入和免费的胞质钙离子浓度,进一步说明钙调磷酸酶抑制管功能的直接毒性作用[42]。几项研究表明,血管功能障碍的钙调磷酸酶抑制剂的结果增加血管收缩的因素包括内皮素和血栓素和激活肾素-血管紧张素系统,以及减少内皮血管扩张的因素,例如,前列腺素E2,没有(43]。此外,钙调磷酸酶抑制剂诱导的血管舒张血管收缩剂比失衡花生四烯酸代谢物(类花生酸),最终促进肾血管收缩。肾血管收缩会导致肾低灌注和hypoxia-reoxygenation受伤,随后活性氧和自由基的形成,导致细胞损伤(44]。
心血管疾病是最常见的死亡原因后RT;他汀类药物显示保护脂质降低效应,但没有证据有关他汀类药物可能的抗氧化作用的(45在RT环境中。我们的目的不是评价其他药物(而不是TAC)的影响,也就是说,他汀类药物;有必要设计一个研究profeso交货,但没有证据关于可能的药理作用在TAC和他汀类药物在操作系统(46,47]。我们也必须考虑到比较是一种多因子的病理状态;操作系统只有一个发展途径。我们所知,没有证据关于使用抗氧化剂药物预防/治疗AGD短RT;由于观测结果的性质,我们不能保证如果AGD是操作系统的原因的结果;然而重要的协会,可以视为预测显示,指标的比较。这项研究显示了一个机会来治疗这些患者。我们的发现表明有可能考虑的有效性的评价抗氧化剂治疗预防和/或治疗AGD病人。应该执行临床研究来证明这一假设;也许抗氧化剂的选择代理的主要挑战之一,由于药理作用,免疫抑制治疗,和其他药物的风险。
总之,我们发现了类似的患者促炎细胞因子的表达,没有比较和放松管制的OS患者比较。
本研究的局限性包括一个小样本大小和横断面研究。我们意识到它是方便修改后提供密切的随访的病人剂量的TAC在第一年和周期性的长期随访。
相互竞争的利益
作者没有利益冲突的报告。