癫痫发作后一氧化氮调控海马的神经发生

文摘

海马神经发生改变的脑损伤。当神经炎症伴随损伤,居民小胶质细胞的激活促进炎性细胞因子的释放和反应性氧/氮物种如一氧化氮(NO)。在这种情况下,没有促进扩散在海马神经干细胞(NSC)。然而,是知之甚少的角色没有新生细胞的存活和分化中受伤的齿状回。在这里,我们调查的角色没有发作后扩散的规定,NSC迁移、分化、和生存的海马体使用海人酸(KA)诱导小鼠模型。我们表明,没有NSC增殖和成神经细胞的数量增加后发作,但不利于新生神经元的生存。不需要也长期存在炎症的维护。综上所述,我们的数据显示,没有积极有助于神经发生的初始阶段后癫痫发作但妥协新生神经元的生存。

1。介绍

神经发生,一个多步过程,产生功能和集成新的神经细胞自我更新和多功能神经干细胞(NSC) [1,2在成年期),发生在许多动物物种,包括人类[3,4]。成年神经发生包括增殖、迁移、分化和命运的决心,新生细胞的生存,成熟和集成到现有的神经网络。两个主要区域是公认的神经性壁龛在成年哺乳动物的大脑:subventricular区(SVZ)的侧脑室和subgranular区(SGZ)海马齿状回的。尤其是在齿状回,新的神经细胞形成局部在颗粒层和门之间的边界(SGZ),沿内颗粒迁移短距离区(IGZ)和扩展长轴突预测海马CA3锥体细胞层(5,6]。它已经表明,可以调节神经发生不同的生理和环境因素。激素,生长因子,学习,锻炼,和抗抑郁药似乎激活和刺激NSC的扩散7- - - - - -9),而老化或炎症有相反的效果10- - - - - -12]。神经性病变涉及神经炎症反应的激活居民小神经胶质细胞。在这些条件下,小神经胶质细胞释放炎性细胞因子和活性氧和氮物种像不13]。

没有是一个自由基从精氨酸转化为气态分子,结果L-citrulline,一氧化氮合酶催化的酶的家庭。尤其是在炎症条件下,诱导一氧化氮合酶的表达(间接宾语)是参与生产高水平的不。没有与不同的细胞是一个重要的细胞信使目标,参与许多生理机制在心血管,免疫,神经系统(14]。在神经发生,特别是在早期阶段,如扩散、神经性反应由不取决于组织的病理生理状态,没有来源,和曝光时间15]。尽管密集的调查没有在NSC增殖的影响,缺乏信息的角色没有迁移,分化和生存在新生儿脑损伤后细胞。

在这个工作我们调查的角色没有从炎症的起源在大脑海马神经发生后的规定的侮辱。我们分析了NSC增殖,新生细胞的迁移、分化、和生存使用KA-induced发作小鼠模型(16,17]。我们表明,没有增加early-born细胞的增殖,特别是SGZ,和成神经细胞的数量,之后癫痫持续状态(SE)。此外,没有对长期存在的维护很重要,这可能是导致其有害影响齿状回新生细胞的生存。综上所述,我们的数据显示,没有是一种很有前途的目标促进NSC增殖和迁移的癫痫发作后,尽管它的存在可能妥协新生细胞的长期生存。

2。材料和方法

2.1。材料

5-Bromo-2′脱氧尿苷(BrdU),正常山羊血清(门店),多聚甲醛(PFA)和特里同x - 100买来σ化学(圣路易斯,密苏里州,美国)。鼠标anti-neuronal核(NeuN)和鼠标anti-glial原纤维酸性蛋白(GFAP)购买了从微孔(Billerica, MA)。从DakoCytomation DAKO荧光安装介质得到(斯特鲁普、丹麦)。鼠anti-BrdU得到来自牛津生物技术和doublecortin (C-18)(克莱斯勒)圣克鲁斯生物技术(美国德克萨斯州达拉斯)。兔子anti-cleaved caspase-3得到从细胞信号(丹弗斯、马、美国)。Anti-rat和anti-rabbit免疫球蛋白共轭Alexa萤石488和Anti-rat anti-mouse免疫球蛋白和Alexa萤石594二级抗体购自共轭分子探针(表达载体,佩斯利,英国)。从海洋红藻氨酸得到生产(加拿大)和硫喷妥钠从b·布劳恩Melsungen(德国)。

2.2。动物

两个月的C57BL / 6 j(进气阀打开^{+ / +})小鼠或B6.129P2 -Nos2^tm1Lau/ J(进气阀打开^−−/)雄性老鼠从查尔斯河(西班牙巴塞罗那)或获得杰克逊实验室(美国我巴尔港),分别。动物被关在动物设施提供食物和水随意在一个12:12光暗周期。动物的体重变化在18岁和26 g。按照国家卫生研究院和欧洲的所有实验指南(86/609 / EEC)的护理和使用实验动物。此外,动物被安置在我们的许可动物设施(国际动物福利保证520.000.000.2006数量)。此外,所有工作的人与动物得到适当的教育(FELASA课程)葡萄牙当局的要求。这项研究包括在两个项目的批准和资助的基础科学和技术(FCT,葡萄牙,PTDC / SAU-NEU / 102612/2008和PTDC / NEU-OSD / 0473/2012)批准所描述的动物实验。动物实验委员会中心的神经科学和细胞生物学也批准了在这项研究中使用的动物。

2.3。红藻氨酸在老鼠身上

KA溶解在一个无菌生理盐水(0.9%氯化钠在水中)和皮下注射(25毫克/公斤),正如前面所描述的我们组(15]。所有动物接受KA发达五年级癫痫或更高版本根据1972年代拉辛的老鼠(六点量表修改18]。仅在动物注射生理盐水,没有观察到和被用作控制癫痫发作。至少有三个在每个实验组动物幸存下来。

2.4。评估的NSC增殖5-Bromo-2′脱氧尿苷掺入

评估NSC增殖,所有动物对待KA或生理盐水处理BrdU(腹腔内注射(i.p) 4剂量,50毫克/公斤)2小时,在200毫克/公斤,之前12小时牺牲动物在不同的时间点(图1(一))。为了分析分布NSC在齿状回,所有动物都接受BrdU (ip注射4剂量50毫克/公斤)每12小时,三到七天KA或生理盐水后管理。三周后,小鼠牺牲(数字1 (b)和1 (c))。在实验老鼠transcardially灌注0.9%氯化钠其次是4% PFA在0.01磷酸缓冲盐(PBS, 7.8毫米Na₂HPO₄h·2₂不啊,2.7毫米₂阿宝₄·H₂啊,154毫米氯化钠,pH值7.2),与Eutasil深麻醉后(20%戊巴比妥钠)。大脑被删除并保持在4% PFA进一步固定,然后脱水20%蔗糖/ 0.2 M磷酸盐缓冲剂(铅、48毫米不₂阿宝₄·H₂啊,152毫米Na₂HPO₄h·2₂O, pH值7.2),在4°C。日冕部分从海马区域cryosectioned (30μ米厚,8系列)和存储在一个防冻剂的解决方案(乙二醇0.05 PB, 30%, 30%甘油),在4°C。

2.5。免疫组织化学

自由浮动的日冕海马部分处理对克莱斯勒免疫组织化学或BrdU NeuN, BrdU, GFAP和BrdU caspase-3分开。大脑部分1 M盐酸处理20分钟在65°C, DNA变性,然后用5%的门店阻塞1小时0.25% Triton x - 100 0.01 PBS。片被初级抗体孵育,山羊anti-DCX(1: 400)或鼠anti-BrdU(1: 50)和鼠标anti-NeuN(1: 200)或鼠标anti-GFAP(1: 7000)或兔子anti-cleaved caspase-3(1: 600), 48小时在4°C。冲洗后与PBS Triton x - 100 0.25%和2%块解决方案(门店),部分被记者二级抗体孵育(1:200),在2%块解决方案(门店),2 h在黑暗中,在室温下。冲洗后PBS Triton x - 100 0.25%,部分被保存在PBS 0.1解决方案,在4°C,直到设定在2% gelatin-coated幻灯片DAKO荧光安装介质。

2.6。分析BrdU合并

齿状回的新生细胞的分布进行了分析在SGZ IGZ和外颗粒区(OGZ)(图2)和BrdU +细胞数的数量在每个区使用荧光显微镜数字化(蔡司20 x客观,Axiovert 200年,耶拿,德国)。

图像(0.73μ米两天)从50 BrdU +细胞中每个大脑获得的激光扫描显微镜LSM 510元或LSM 710(蔡司,耶拿,德国)与氩/ 2 (488 nm)和离散长561 - 10(561海里)激光(63 x油浸物镜)。正交投影在设在进行和清点的数量BrdU + / NeuN + BrdU + / GFAP +或BrdU + / Casp3 +细胞数。细胞的百分比显示colocalization标记获得总数除以BrdU + / NeuN +或BrdU + / GFAP + BrdU + / Casp3 50 BrdU + +细胞的细胞。

2.7。克莱斯勒和GFAP免疫反应性

克莱斯勒和GFAP免疫反应性的地区使用ImageJ软件进行了分析。抓拍图像在蔡司Axioimager(蔡司,耶拿,德国)20 x目标。阈值被设定为每个染色和暗背景的比例面积测量,排除更多的前部和后部齿状脑回。

2.8。统计分析

数据表示为±SEM手段。统计学意义是由使用双因素方差分析(方差分析),紧随其后的是事后Bonferroni GraphPad棱镜5的测试软件。差异被认为是重要的时候。

3所示。结果与讨论

3.1。没有参与的NSC增殖后的齿状回

3.1.1。海马神经干细胞的增殖后癫痫包括一氧化氮和没有独立阶段

为了研究没有在细胞增殖的作用,我们使用了一个在活的有机体内KA-induced发作小鼠模型,描述部分2。新生细胞的增殖是评估公司的BrdU,胸苷类似物。齿状回BrdU +细胞的数量进行免疫组织化学(图3)。

在伊诺^{+ / +}老鼠,治疗KA显著增加的BrdU SGZ从3天治疗14天后,相比saline-treated老鼠(表1双因素方差分析;治疗:31.95,,;时间:29.71,,;治疗时间×(互动):33.70,,),在治疗后5天峰与KA(82.70±5.87细胞/部分,)。在伊诺^{+ / +}老鼠用生理盐水治疗,BrdU +细胞的数量分析期间没有明显变化的时间(所有时间点)。这些结果与以往发现小鼠癫痫引发的SGZ神经炎症和刺激细胞增殖的齿状回11,17,19,20.]。海马的细胞增殖也增加不同的急性injured-animal模型,比如中风(21,22和创伤性脑损伤23,24]。

在伊诺^−−/老鼠,BrdU公司持平KA治疗癫痫发作后5天(7.73±1.43细胞/ SE后在1天(),13.35±3.87细胞/部分癫痫发作后2天(),25.64±0.53细胞/ SE(部分3天后),18.36±1.99细胞/ SE(部分5天后))。有趣的是,BrdU +细胞的数量在伊诺的齿状回^−−/小鼠癫痫发作后显著增加7天(87.08±8.40细胞/部分,),而saline-treated伊诺^−−/老鼠(20.08±0.61细胞/部分)。最后,整合BrdU回到了基底的水平与KA癫痫治疗后14天(27.33±2.17细胞/部分,)。在saline-treated伊诺^−−/老鼠BrdU相似的公司所有的时间点()。在这些动物中,扩散似乎是由两个不同的机制:一个摘要发作后5天,另一个是由一个没有独立监管机制,在癫痫发作后7天。

生产小胶质细胞的炎性因子,如没有,已经被报道在海马体(NSC增殖所必需的25]。我们组之前描述的机制没有触发初始扩散SVZ细胞(15,26]。在这些研究中,我们报告说,没有可以直接绕过表皮生长因子受体,激活ERK / MAPK信号通路,1/2的上游组件导致的细胞增殖增加NSC在早期阶段15]。

此外,晚期扩散取决于cGMP的激活和包裹,表明两相的扩散机制三角没有(9]。有趣的是,我们观察到的增加扩散NSC在伊诺发作后7天^−−/老鼠,这表明扩散是不独立的。还有其他一些潜在的信号通路可能参与在这个时间点NSC增殖。例如,NO-cGMP通路是一个重要的调停人的神经肽Y的增殖的影响海马体(27- - - - - -29日]。还在模型中,活化的小胶质细胞诱导胰岛素样生长因子- 1 (igf - 1)的表达和刺激祖细胞的增殖在SGZ MAPK-dependent机制(30.]。小神经胶质细胞表达的有几个因素可以调节神经发生和安全委员会也可以调节小胶质细胞的活化细胞,这可能是交互microglia-NSC可能作为某种代偿机制调节NSC增殖,独立的。

3.2。参与的新生细胞的迁移和分布在癫痫发作后的齿状回

3.2.1之上。新生细胞的分布形成3天后发作在齿状回是不独立的

我们下一个调查的角色没有新生细胞的分布在齿状回后21天增殖依赖于没有(发生在3天post-seizure),评估细胞留在subgranular区或是否分配给齿状回的外层。伊诺^{+ / +}或间接宾语^−−/老鼠接受生理盐水或KA和BrdU在所有动物注射3天后。新细胞形成的分布在这个时间点评估SGZ, IGZ OGZ齿状回,21天后BrdU管理。BrdU +细胞增加了伊诺的KA治疗^{+ / +}和进气阀打开^−−/老鼠(图4(一))。BrdU +细胞的总数显著增加伊诺KA治疗^{+ / +}和进气阀打开^−−/老鼠(图4 (b)双因素方差分析;基因型:5.68,,,;治疗:49.79,,,;基因型×治疗(互动):0.76,,,)。对伊诺^{+ / +}老鼠,治疗KA复制BrdU +细胞(29.24±2.91 BrdU +细胞/部分,)相比,saline-treated老鼠(12.59±1.66 BrdU +细胞/部分)。对伊诺^−−/老鼠,KA治疗也BrdU +细胞的数量翻了一倍(37.99±7.75 BrdU +细胞/部分,)相比,saline-treatment (16.66±2.89 BrdU +细胞/部分)。

在伊诺^{+ / +}老鼠,KA治疗显著增加SGZ BrdU +细胞(16.68±1.56 BrdU +细胞/部分,(9.49±1.18)相对saline-treated老鼠BrdU +细胞/部分)(图4 (c)双因素方差分析;治疗:25.52,,,;区域:41.85,,,;治疗×地区(互动):1.62,,,)。这些老鼠,BrdU +细胞也增加了KA治疗IGZ (9.35±1.97 BrdU +细胞/部分,)相比,saline-treated老鼠(2.48±0.47 BrdU +细胞/部分)。BrdU +细胞与KA OGZ治疗没有明显变化。同样,在进气阀打开^−−/老鼠(图4 (c)癫痫发作后),BrdU +细胞显著增加SGZ (17.98±2.82 BrdU +细胞/部分,)和IGZ (12.37±3.78 BrdU +细胞/部分,),而saline-treated伊诺^−−/老鼠。这些结果表明,NSC出生3天后侮辱的分布是没有独立的监管机制。

3.2.2。废除不不影响新生细胞的分布形成后21天在齿状回癫痫发作

我们下一个调查的角色没有新生细胞的分布在齿状回后21天增殖阶段期间,不依赖于没有在7天post-seizure(发生)。伊诺^{+ / +}或间接宾语^−−/老鼠用生理盐水或KA, BrdU注射在所有动物7天后,和灌注后28天BrdU注入(7天后发作之后21天)。

癫痫治疗KA细胞形成7天后BrdU +细胞的数量没有明显变化沿齿状回(21天后细胞用BrdU标记在第七天)没有的基因型(数字5(一个)和5 (b)双因素方差分析,治疗:10.61,,,;基因型:15.95,,,;治疗基因型×(互动):0.45,,,)。在伊诺^{+ / +}和进气阀打开^−−/老鼠,老鼠KA-treated BrdU +细胞的数量是类似在齿状回的所有区域,各自的生理盐水相比控制(图5 (c)双因素方差分析;治疗:11.25,,,;区域:48.07,,,;治疗×地区(互动):3.95,,,)。

根据我们的研究,在KA治疗后7天新生细胞的增殖是没有独立的监管机制。如之前所述,还有一些其他的因素会导致激活的信号通路可能参与调节的NSC增殖海马的神经发生在这个阶段。例如,igf - 1活化的小胶质细胞产生的细胞可以增加在SGZ NSC的扩散机制的依赖MAPK信号(30.]。也有代偿机制的可能性受到国家安全委员会,由小神经胶质细胞产生独立于任何其他因素。因此,新生细胞的分布在伊诺齿状回是相似的^{+ / +}和进气阀打开^−−/小鼠癫痫发作后,表明没有没有参与细胞是如何分布在齿状回癫痫发作后7天,但是其他因素可能参与其中。

3.3。没有在神经元和星形分化有不同的影响

3.3.1。早期癫痫发作后神经元分化依赖

在这里,我们发现在伊诺未成熟神经元^{+ / +}和进气阀打开^−−/老鼠用生理盐水或KA,节中描述2。克莱斯勒是一种特定的标志成神经细胞和未成熟神经元(31日)出生在前两周的神经源性的过程。因此,我们选择分析DCX-immunoreactive区域KA治疗后7天、14天。

伊诺DCX-immunoreactive面积增加^{+ / +}老鼠,14天后发作saline-treated老鼠相比,但不是在KA-treated伊诺^−−/相比saline-treated老鼠(图6(一))。在癫痫发作后7天,DCX-immunoreactive面积的比例往往会增加伊诺KA治疗^{+ / +}(169.01±33.50%的控制,)和间接宾语^−−/(145.64±32.75%的控制,),虽然这增加saline-treated老鼠(图相比并不重要6 (b)双因素方差分析;基因型:0.79,,,;治疗:18.90,,,;基因型×治疗(互动):0.78,,,)。癫痫发作后,在14天之后,克莱斯勒+伊诺面积翻了一番^{+ / +}老鼠(209.32±4.07%的控制,),相比saline-treated老鼠相同的基因型(100.00±24.75%的控制)。在伊诺^−−/老鼠,治疗KA改变不了DCX-immunoreactive区(87.57±5.48%的控制,),在癫痫发作后14天,相比与saline-treated老鼠(100.00±39.13)。(图6 (c)双因素方差分析;基因型:23.01,,,;治疗:14.57,,,;基因型×治疗(互动):23.01,,,)。

我们的结果表明,没有从炎症起源增加成神经细胞的数量/不成熟在齿状回神经元,至少在2周后癫痫发作。它已经表明,克莱斯勒+成神经细胞的数量显著增加L-NAME治疗后,NOS抑制剂,KA在一起(32]。此外,在相同的研究中,抑制NOS单独增加的数量BrdU +门新生细胞,这表明一个角色在他们没有正确迁移到齿状回的颗粒区。

3.3.2。没有限制的生存的细胞增殖早期(3天),但不迟(7天)后发作

探讨生存在21天的细胞形成发作3和7天后,colocalization BrdU + / NeuN +肽被免疫组织化学评估。NeuN是成熟的神经元标记神经元和colocalization BrdU允许新的神经元形成的调查与BrdU治疗的时间点。50 BrdU +细胞的每个动物的图像获取和正交投影设在每个图像(图进行7(一))。

在与BrdU 21天治疗后,新的神经元的百分比在伊诺出生3天后发作减少^{+ / +}老鼠接受KA(53.50±7.04%的BrdU + / NeuN +肽,),而saline-treated老鼠(72.29±3.48%的BrdU + / NeuN +肽),但不是在进气阀打开^−−/老鼠(43.50±6.95%的BrdU + / NeuN +肽生理盐水和43.20±5.68% KA-treated BrdU + / NeuN +肽的小鼠,)(图7 (b)双因素方差分析:基因型:7.79,,,;治疗:32.65,,,;基因型×治疗(互动):7.30,,,)。这些结果表明,新生细胞的生存后癫痫发作是由一氧化氮调控机制,类似于扩散NSC在这些条件。但是,没有似乎导致癫痫发作后形成的新的神经元。

没有可能有毒的神经元和神经细胞凋亡明显后政府的捐助在发热性癫痫大鼠模型(33]。也没有提出的抑制剂细胞循环发展在许多细胞类型,通过激活p53和Rb信号通路(34,35]。这种关系没有和程序性细胞死亡可能会影响新生细胞的存活率。此外,没有不一定需要新生神经元直接有毒但可能参与炎症的维护,新细胞的生存条件。

癫痫神经元出生7天后,在进气阀打开新的神经元的数量^{+ / +}老鼠非常相似的治疗,为55.6±7.22%的BrdU + / NeuN +肽()在KA-treated老鼠和62.00±5.03%的BrdU + / NeuN +肽saline-treated老鼠。在伊诺^−−/老鼠,治疗KA(69.50±5.85%的BrdU + / NeuN +肽)也没有改变神经元的数目,而saline-treated老鼠(58.80±8.31%的BrdU + / NeuN +肽)(图7 (c)双因素方差分析;基因型:3.15,,,;治疗:0.53,,,;基因型×治疗(互动):8.07,,,)。这些结果表明,细胞增殖没有独立阶段成为神经元生存比细胞增殖早期癫痫的发病后(3天)。

为了证实的影响没有生存的细胞扩散发作后3天,我们评估了colocalization细胞死亡的BrdU标记,caspase-3裂解,通过免疫组织化学。代表每个动物获得的图像(图8)。Colocalization BrdU与裂解caspase-3没有观察到,这表明减少新的神经元的存活3天在伊诺发作后形成的^{+ / +}动物不会导致增殖细胞的凋亡在这个时间点(21天治疗后BrdU)。有可能是细胞死亡发生之前或由其他机制。

3.3.3。Astrogliogenesis发作后不受废除没有影响

我们有兴趣了解是否可以区分为星形胶质细胞增殖细胞。为了分析这个,我们评估GFAP +细胞形成通过免疫组织化学方法3和7天后发作BrdU注入后21天。GFAP星形胶质细胞表达的是一种蛋白质,和colocalization BrdU允许新生星形胶质细胞的识别与BrdU治疗的时间点(图9(一个))。

在伊诺^{+ / +}或间接宾语^−−/老鼠,癫痫发作并没有改变新星形胶质细胞的数量(BrdU-GFAP colocalizing细胞)后3天SE (3.50±0.34%,),而saline-treated老鼠(2.71±0.61%)(图9 (b)双因素方差分析,基因型:36.46,,,;治疗:3.39,,,;基因型×治疗(互动):0.00,,,)。

此外,癫痫发作的数量并没有改变BrdU-GFAP colocalizing细胞在两种基因型,7天后SE(3.60±0.51%或2.75±1.11%的BrdU-GFAP colocalizing细胞间接宾语^{+ / +}老鼠或间接宾语^−−/小鼠,分别地。)。细胞的百分比BrdU-GFAP硝唑saline-treated老鼠伊诺之间非常相似^{+ / +}和进气阀打开^−−/老鼠(2.00±0.71%和1.20±0.37%,resp。)(图9 (c)双因素方差分析;基因型:7.07,,,;治疗:25.76,,,;基因型×治疗(互动):0.01,,,)。

在体外研究报道,暴露在病理水平的24小时(0.1毫米)促进astroglial命运决定在NSC神经元承诺或选择性耗尽早期神经祖细胞(36]。在这个模型中,astrogliogenesis似乎被暴露在没有积极的监管。在这里,我们表明,暴露在没有没有参与起源于伊诺astroglial从脑损伤后神经干细胞分化,这并没有改变本身新生儿GFAP +细胞的数量。

3.4。在伊诺没有对Astrogliosis很重要^{+ / +}老鼠在治疗后28天

接下来,我们评估了可能没有参与神经炎症,发作后28天。为此,GFAP免疫反应性是评估通过免疫组织化学和GFAP染色强度作为衡量astrogliosis(图10 ())。在伊诺^{+ / +}老鼠,KA治疗增加GFAP免疫反应性(170.45±15.74%的控制,)相比,saline-treated老鼠(100.00±23.87%的控制),在治疗后28天(图10 (b)双因素方差分析,基因型:28.27,,,;治疗:6.41,,,;基因型×治疗(互动):6.42,,,)。在这里,我们表明,GFAP-immunoreactive地区增加后28天发作,一氧化氮的方式,表明神经炎症仍然存在。

5天以前,我们小组研究神经炎症发作后,反应性星形胶质细胞的数量增加进气阀打开^{+ / +}或间接宾语^−−/处理卡;因此,过程是独立于生产(15]。在这里,我们表明,星形胶质细胞的激活是维持癫痫发作后28天。然而,astrogliosis没有观察到这个时间点的老鼠缺乏伊诺,表明astrogliosis后期,但不是astrogliosis早期,一氧化氮。这个长期存在炎症可能在伊诺新生神经元的生存条件^{+ / +}KA-treated小鼠,观察。

3.5。没有调节生理和病理生理学神经发生

没有监管的神经发生的作用尚不清楚。总的来说,似乎没有负调控神经发生在生理条件下,而在病理生理情况下显示行动基础上更上一层楼。几项研究报告NSC增殖(降低37- - - - - -39和新生的细胞生存36]。没有也可以调节通过增加神经元分化的体细胞(38,39]或星形细胞分化[36]。

大脑的侮辱后,没有被报道为基础上更上一层的因素,从提高NSC增殖的报道大部分的创伤性模型,包括中风、癫痫(22,40]。虽然分化后积极的监管没有大脑的侮辱(38),新生细胞的生存似乎减少了没有(41]。

我们的研究结果与之前的结果,表明不仅NSC增殖受到损伤后一氧化氮机制,而且新生神经元的分化和生存受到的存在没有发作。的事实,不重要的是维持神经炎症发作后28天可能影响生存的新生细胞和可能导致新的神经元未能有效地在这样的条件下生存。

4所示。结论

这个工作我们旨在理解的参与在海马神经发生在一个没有从进气阀打开癫痫持续状态小鼠模型。我们的结果表明,生产没有在炎症情况下增加扩散early-born NSC后大脑的侮辱。早期分化成神经细胞和未成熟神经元发作后增加了一氧化氮机制。我们还表明,新生细胞的分布沿齿状回修改了癫痫,但没有并没有参与这一现象。此外,形成新的神经元的生存在早期癫痫(3天后)下降了没有。事实上,没有显示在维护重要的神经炎症发作后28天,这可能为新生细胞提供一个积极的环境,而无法生存。

,这些发现有助于更好地理解的参与没有由伊诺成年神经发生损伤后的不同阶段和开放的可能性探索新的NO-based治疗方法对脑修复侮辱后,知道什么时候没有基础上更上一层楼,它损害新生神经元的生存。

缩写

BrdU:	5-Bromo-2′脱氧尿苷
GFAP:	胶质原纤维酸性蛋白
IGZ:	内部颗粒状区
伊诺:	诱导一氧化氮合酶
卡:	红藻氨酸
NeuN:	神经核
门店:	正常山羊血清
没有:	一氧化氮
国家安全委员会:	神经干细胞
OGZ:	外颗粒区
PFA:	多聚甲醛
PBS:	磷酸盐
SGZ:	Subgranular区
SE:	癫痫持续状态
SVZ:	Subventricular区
克莱斯勒:	Doublecortin。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

布鲁诺p Carreira和丹妮拉·桑托斯同样这项工作。

确认

这项工作是支持的基础科学和技术(FCT,葡萄牙),竞争,菲德尔(赠款PTDC SAU-NEU / 102612/2008, PTDC NEU-OSD / 0473/2012, PEst-C /分/ la0001/2013 - 2014和PEst-OE / EQB / la0023/2013 - 2014)。布鲁诺p Carreira和安娜。桑托斯由FCT,葡萄牙(奖学金SFRH /桶/ 78901/2011和SFRH / BD / 77903/2011)。

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